Антибактериальный наполнитель для женской гигиенической прокладки или тампона, способ его получения и использования

Антибактериальный наполнитель для женской гигиенической прокладки или тампона, способ его получения и использования

Реферат

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии, в частности к средствам гигиены, используемым для лечения воспалительных заболеваний женских половых органов, и может быть применено в качестве антибактериального наполнителя для женской гигиенической прокладки или тампона.

Известен антибактериальный состав для местного лечения бактериального вагиноза на основе 3,5% гелевой формы аскорбата хитозана, содержащий метронидазол в дозе 2 мг в 1 мл [1]. Гелевая основа хитозана в виде 3,5% концентрации удобна для введения во влагалище на тампоне при лечении воспалительных заболеваний внутренних половых органов женщины. Однако высокая вязкость раствора технически затрудняет быстрое впрыскивание его малого объема в повязку (прокладку) с целью равномерного пропитывания изделия. В составе известного геля не предусмотрены средства, снижающие обсемененность микробной флорой, относящейся к различным классам микробов (как анаэробов, так и аэробов, как грамположительной, так и грамотрицательной микрофлоры).

Известны способы применения 2-8% хитозанового геля в качестве противовоспалительного средства в области стоматологии при лечении глубокого кариеса в качестве лечебной прокладки [2] и при лечении деструктивных форм периодонтита в качестве хитозансодержащей пасты при введении ее в заапикальную область зуба [3].

Известен способ мембранного диализа гнойно-воспалительных заболеваний мягких тканей, где в качестве наполнителя мембраной капсулы использовался низкомолекулярный 15% раствор аскорбата хитозана [4]. Как при стоматологических заболеваниях, так и при лечении гнойно-воспалительных заболеваний мягких тканей хитозан или его производное органической кислоты в высоких концентрациях вводился авторами либо в раневую полость, либо заключался в ацетат целлюлозную мембрану с диаметром пор 2,5-2,8 нм, пропускающую вещества с молекулярной массой меньше 10000 дальтон [5]. Задача получения антибактериального наполнителя для женской гигиенической прокладки, содержащего средства в субтерапевтических дозировках, авторами не ставилась.

Известен состав на свечной или гелевой основе для нормализации внутренней микрофлоры организма с антимикробным и противовоспалительным действием, включающий сухую лиофилизированную массу живых лактобактерий, мирамистин и воду [6]. Однако хитозан, обладающий нетоксичностью, высокой биосовместимостью, биодеградабельностью, свойствами системы переноса лекарств через агрессивные биологические среды, сорбционной способностью, в качестве гелевой основы для женской гигиенической прокладки или тампона авторами не применялся. Кроме того, состав не включает средства, обеспечивающие антимикробный эффект на те патогенные виды микробов, которые диссеминируют в области женских наружных половых органов.

В качестве полимеров, используемых для лечения заболеваний женских половых органов, применяется коллагеновая губка "Сангвикол" после обработки тканей (псевдоэрозия шейки матки) газовым потоком плазмохимического оксида азота [7]. В составе наполнителя для женской гигиенической прокладки полимер коллаген не применялся. Кроме того, использование в составе наполнителя белковых препаратов проблематично, поскольку технология изготовления гигиенических прокладок предусматривает использование сушильных печей с температурным режимом свыше 100°С.

Наиболее близкими к заявляемому техническому решению по совокупности признаков являются:

1) биологическая композиция для лечения ран "Коллахит", содержащая, так же, как и заявляемое изобретение, хитозан и антисептические препараты синтетического происхождения, которая может быть выполнена в виде пленки или губки, являющихся биодеградируемыми средствами [8];

2) повязка для лечения ран в виде пленки, содержащая, так же, как и заявляемое изобретение, хитозан, органическую кислоту, антимикробный или антисептический препарат [9];

3) гидроколлоидное аппликационное покрытие, содержащее, так же, как и заявляемое изобретение, хитозан, органическую кислоту и воду [10].

Все указанные технические решения связаны с закрытием и лечением раневых дефектов, выполнены в виде губки или пленки и не предлагались в качестве наполнителя для женской гигиенической прокладки или тампона. Кроме того, техническое (механическое) введение указанных составов в виде пленки или губки в тканый или нетканый материал с равномерным его распределением затруднено. Содержание сшивающих агентов в предлагаемых составах в виде эпихлоргидрина или глутаральдегида нежелательно в виду их высокой токсичности (тканевой, клеточный яд). Для лечения ран авторы патентов [9, 10] добиваются снижения силы адгезии к раневой поверхности и силы адсорбции менее 400%, в то время как при использования наполнителя к гигиенической прокладке или тампону требуются высокая адгезия и сорбционная способность к слизистой оболочке и коже наружных половых органов.

Наполнитель для гигиенической прокладки или тампона должен быть легкотекучей консистенции, высоко адгезивен к слизистой оболочке или коже, обладать высокой сорбционной емкостью, быть прозрачным и не ухудшать эстетические характеристики изделия, обладать антибактериальными свойствами в отношении патогенной резидуальной микрофлоры влагалища и наружных половых органов, содержать субтерапевтические концентрации антибактериальных средств, сохранять лактобациллярную микрофлору влагалища, вызывать быстрый обезболивающий и противовоспалительный эффекты, быть нетоксичным составом, легко дозироваться в малых дозах при включении в состав прокладки или тампона.

Заявляемое изобретение направлено на решение задачи создания эффективного наполнителя для женской гигиенической прокладки или тампона с целью лечения воспалительных заболеваний женских половых органов и должен обладать следующими преимуществами:

- абсолютная нетоксичность;

- пролонгированный противовоспалительный и антибактериальный эффекты;

- избирательное действие на микрофлору женских половых органов с сохранением числа жизнеспособных полезных лактобацилл;

- быстрый обезболивающий эффект;

- равномерное лечебное действие на слизистые и кожные покровы женских половых органов;

- формоустойчивость гелевого состава;

- прозрачность и отсутствие запаха состава;

- высокая доступность антибактериальных средств через слизистые и кожные барьеры.

Задачу достигают за счет того, что антибактериальный наполнитель для женской гигиенической прокладки или тампона содержит 1% гидрогель хлоргидрата хитозана молекулярной массой 300-700 kDa и степенью дезацетилирования не менее 89%, в который входит метронидазол и диоксидин, и в 1 л его состава включают сухой хлоргидрат хитозан - 10 г, метронидазол - 1,250-1,665 г, диоксидин - 2,5 г, дистиллированная вода - остальное, причем в способ получения наполнителя включают перемешивание 10 г сухого хлоргидрата хитозана в 300 мл подогретой до 50°С дистиллированной воды с помощью быстроходной мешалки в течение 20-30 мин до полного растворения, затем постепенно при интенсивном перемешивании добавляют 250-333 мл метронидазола для внутривенных инъекций, тщательно перемешивают в течение 5 мин, после чего постепенно при интенсивном перемешивании добавляют 250 мл 1% раствора диоксидина, перемешивают 5 мин, объем полученного геля доводят до 1 л дистиллированной водой, тщательно перемешивают в течение 10 мин, помещают для длительного хранения в тару из темного стекла или пластика, а при использовании наполнителя для лечения воспалительных заболеваний женских половых органов включают введение во влагалище на тампоне и/или гигиенической прокладке по 5 мл 1% геля хлоргидрата хитозана, содержащего метронидазол и диоксидин, оставляют на 12 часов, процедуры в течение 7 дней.

Способ получения наполнителя заключается в следующем.

При получении 1 литра гелевого наполнителя 10 г сухого хлоргидрата хитозана молекулярной массы 300-700 kDa и степени деацетилирования 89-98% полностью растворяют при интенсивном перемешивании с помощью быстроходной мешалки в течение 20-30 минут в 300 мл подогретой до 50°С дистиллированной воды. Далее в полученный таким образом гель хлоргидрата хитозана постепенно при интенсивном перемешивании вносят 250-333 мл метронидазола для внутривенных инъекций (в 1 мл - 5 мг препарата) (1250-1665 мг), тщательно перемешивают в течение 5 минут, в полученный раствор постепенно при интенсивном перемешивании вносят 250 мл 1% раствора диоксидина. Продолжают перемешивать в течение 5 минут. Объем полученного хитозанового геля доводят дистиллированной водой до 1 литра при интенсивном перемешивании в течение 10 минут. Гель помещают для длительного хранения в тару из темного стекла или пластика.

Использовались питательные среды для культивирования микроорганизмов: мясо-пептонный агар (МПА) и 0,7% питательный агар, 2% и 0,7% бифидум-агар, образцы хитозановых гелей, клинические штаммы микроорганизмов: Escherichia coli, Enterococcus faecalis, Candida albicans и референтный штамм Staphylococcus aureus 209 Р, лактобациллы, входящие в состав официнального препарата "Лактобактерин сухой", красители, этиловый спирт 96%.

Антимикробные свойства были испытаны на следующих образцах хитозановых гелей:

- Образец №1 - 0,5% водный раствор хлоргидрата хитозана (молекулярная масса 70 kDa, степень деацетилирования 87%)+0,25% раствор диоксидина

- Образец №2 - 0,625% раствор аскорбиновой кислоты

- Образец №3 - 0,25% раствор диоксидина

- Образец №4 - 0,5% водный раствор хлоргидрата хитозана (молекулярная масса 300 kDa, степень деацетилирования 89%)+0,25% раствор диоксидина

- Образец №5 - 1% водный раствор хлоргидрата хитозана (молекулярная масса 300 kDa, степень деацетилирования 89%)+0,25% раствор диоксидина

- Образец №6 - 0,5% водный раствор аскорбата хитозана (молекулярная масса 700 kDa, степень деацетилирования 98%)+0,25% раствор диоксидина

- Образец №7 - 1% водный раствор аскорбата хитозана (молекулярная масса 700 kDa, степень деацетилирования 98%)+0,25% раствор диоксидина

- Образец №8 - 0,5% водный раствор хлоргидрата хитозана (молекулярная масса 700 kDa, степень деацетилирования 98%)+0,25% диоксидин

- Образец №9 - 1% водный раствор хлоргидрата хитозана (молекулярная масса 700 kDa, степень деацетилирования 98%)+0,25% диоксидин

- Образец №10 - 0,5% водный раствор хлоргидрата хитозана (молекулярная масса 700 kDa, степень деацетилирования 98%)+1,665 мг/мл метронидазол

- Образец №11 - 1% водный раствор хлоргидрата хитозана (молекулярная масса 700 kDa, степень деацетилирования 98%)+1,665 мг/мл метронидазол

- Образец №12 - 0,5% водный раствор хлоргидрата хитозана (молекулярная масса 700 kDa, степень деацетилирования 98%)+1,665 мг/мл метронидазол+0,25% диоксидин

- Образец №13 - 1% водный раствор хлоргидрата хитозана (молекулярная масса 700 kDa, степень деацетилирования 98%)+1,665 мг/мл метронидазол+0,25% диоксидин

- Образец №14 - 0,5% водный раствор аскорбата хитозана (молекулярная масса 700 kDa, степень деацетилирования 98%)+1,665 мг/мл метронидазол

- Образец №15 - 1% водный раствор аскорбата хитозана (молекулярная масса 700 kDa, степень деацетилирования 98%)+1,665 мг/мл метронидазол

- Образец №16 - 0,5% водный раствор аскорбата хитозана (молекулярная масса 700 kDa, степень деацетилирования 98%)+1,665 мг/мл метронидазол +0,25% диоксидин

- Образец №17 - 1% водный раствор аскорбата хитозана (молекулярная масса 700 kDa, степень деацетилирования 98%)+1,665 мг/мл метронидазол +0,25% диоксидин

- Образец №18 - раствор метронидазола 1,665 мг/мл

- Образец №19 - раствор метронидазола 1,250 мг/мл

Антимикробный анализ осуществляют следующим образом.

В стерильные чашки Петри в асептических условиях разливают МПА в объеме 15 мл. После застывания среды вторым слоем разливают 0,7% питательный агар в объеме 4 мл с 0,1 мл взвеси одной из взятых в эксперимент культур микроорганизмов в концентрации, соответствующей стандарту мутности 10⁹. Для культивирования лактобацилл был выбран бифидум-агар, соответственно 2% 15 мл и 0,7% 4 мл. В первой серии опытов стерильным пробойником в двухслойном агаре пробивают лунки диаметром 1 см, в которые автоматической микропипеткой вносят образцы гелей в объеме 0,1 мл в лунку. Во второй серии опытов на поверхность двухслойного агара автоматической микропипеткой наносят образцы гелей в виде капель объемом 0,01 мл. Для контроля стерильности образцов гелей используют двухслойный агар без взвеси микроорганизмов. Результаты оценивают через 24 и 48 часов культивирования в термостате при температуре 37°С. Результаты опытов с лактобактериями оценивают через 72 часа культивирования в эксикаторах при температуре 37°С.

Результаты исследований показали:

Образец №1.

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста (32, 32 и 30 мм в диаметре, включая диаметр лунки) с нечетко определенными границами (бактерицидный эффект в центре зоны и бактериостатический на периферии).

Через 48 часов отмечалось статистически неразличимое увеличение диаметра зон (до 33, 33 и 32 мм, соответственно), границы их стали более четкими (т.е. наблюдается пролонгирование бактерицидного действия). При нанесении образца на поверхность агара через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста с нечетко определенными границами (23, 23 и 22 мм в диаметре при диаметре капли 7-8 мм). Через 48 часов отмечалось статистически неразличимое увеличение диаметра зон (до 24, 25 и 23 мм, соответственно), границы их стали более четкими (результат тот же, что и в опыте с внесением геля в лунки).

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста S.aureus 209 Р (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста (25, 25 и 26 мм в диаметре, включая диаметр лунки) с нечетко определенными границами (бактерицидный эффект в центре зоны и бактериостатический на периферии). Через 48 часов заметного увеличения диаметра зон не наблюдалось (26, 25 и 26 мм, соответственно), границы их стали более четкими, отмечался вторичный рост: 1-2 мелкие колонии в каждой зоне (сохранение бактериостатического действия геля). При нанесении образца на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность ++++) непосредственно под нанесенным гелем и на 2-3 мм по периферии отмечался скудный рост (интенсивность ++). Через 48 часов - картина без изменений (т.е. бактериостатический эффект сохраняется).

В опыте с Е.faecalis отмечался равномерный рост по всей поверхности агара (интенсивность +++) вне зависимости от способа внесения геля. В опытах с лактобациллами в обоих случаях отмечался сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью (++++).

Таким образом, данный образец геля за счет диоксидина оказывает выраженное бактерицидное действие на Е.coli, при этом через 48 часов отмечается пролонгация действия диоксидина. На S.aureus 209 Р образец оказывает менее выраженное действие, однако бактериостатический эффект сохраняется в течение 48 часов. Образец не оказывает ингибирующего действия на рост Е.faecalis и С.albicans, что связано с нечувствительностью данных культур к диоксидину и использованием хитозана с низкой молекулярной массой. Образец не оказывает видимого антимикробного действия на лактобациллы.

Образец №2.

Наблюдался сплошной равномерный рост S.aureus 209 Р, Е.faecalis и Е.coli (интенсивность ++++, +++ и ++++, соответственно) по всей поверхности агара независимо от способа внесения образца. Через 48 часов картина роста сохраняется. В опыте с С.albicans при внесении образца в лунки через 24 часа на фоне равномерного сплошного роста (интенсивность +++) отмечались зоны интенсификации роста (++++) с размытыми границами (приблизительно 33-34 мм в диаметре, включая диаметр лунки). Через 48 часов регистрировалось увеличение диаметра зон (до 37, 38 и 39 мм), границы их стали более четкими (пролонгирование стимулирующего влияния аскорбиновой кислоты). При нанесении образца на поверхность агара отмечалась нечеткая интенсификация роста (++++) в центре чашки и более скудный рост (+++) по периферии. В опытах с лактобациллами в обоих случаях отмечался сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью (++++).

Таким образом, аскорбиновая кислота стимулирует рост дрожжеподобных грибов рода Candida и не оказывает видимого влияния на другие исследуемые культуры.

Образец №3.

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста с четко определенными границами (34, 34 и 33 мм в диаметре, включая диаметр лунки) - выраженный бактерицидный эффект. Через 48 часов увеличения диаметра зон не отмечалось, границы стали менее четкими, наблюдался вторичный рост: 1-2 мелкие колонии в зоне (наблюдается ослабление антимикробного действия). При нанесении образца на поверхность агара через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста с четко определенными границами (24, 23 и 22 мм в диаметре при величине капли 7-8 мм). Через 48 часов увеличения диаметра зон не отмечалось, границы их стали размытыми, наблюдался вторичный рост до 10-20 мелких колоний в зоне (наблюдается выраженное ослабление антимикробного действия).

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста S.aureus 209 Р (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста с четко определенными границами (28, 29 и 28 мм в диаметре, включая диаметр лунки). Через 48 часов увеличения диаметра зон не наблюдалось, границы их стали менее четкими, отмечался вторичный рост 10-20 мелких колоний в каждой зоне (выраженное ослабление антимикробного действия). При нанесении образца на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность ++++) непосредственно под нанесенным гелем и на 2-3 мм по периферии отмечалось умеренное снижение интенсивности роста (++). Через 48 часов - небольшое снижение интенсивности роста (++), т.е. наблюдается уменьшение антимикробного действия.

В опыте с Е.faecalis отмечался равномерный рост (интенсивность +++) по всей поверхности агара вне зависимости от способа внесения геля. В опытах с лактобациллами в обоих случаях отмечался сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью (++++).

Таким образом, диоксидин оказывает более выраженное антимикробное действие на Е.coli и менее выраженное на S.aureus 209 Р, при этом эффект диоксидина заметно снижается с течением времени. Диоксидин не оказывает видимого влияния на Е.faecalis, С.albicans и лактобациллы.

Образец №4.

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста (34, 35 и 38 мм в диаметре, включая диаметр лунки) с нечетко определенными границами (бактерицидный эффект в центре зоны и бактериостатический на периферии). Через 48 часов отмечалось статистически неразличимое увеличение диаметра зон (до 35, 37 и 40 мм, соответственно), границы их стали более четкими (т.е. наблюдается пролонгация бактерицидного действия). При нанесении образца на поверхность агара через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста непосредственно под нанесенным гелем и снижение интенсивности роста до (+) на 3 мм по периферии капли; через 48 часов зона задержки роста до (+) по периферии капли увеличилась до 4-5 мм (отмечается пролонгация антимикробного действия геля).

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста S.aureus 209 Р (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста (21,23 и 22 мм в диаметре, включая диаметр лунки) с нечетко определенными границами: по периферии зоны бактерицидного действия снижение интенсивности роста до + на протяжении 5-6 мм (бактерицидный эффект в центре зоны и выраженный бактериостатический на периферии). Через 48 часов заметного увеличения диаметра зон не наблюдалось, границы их стали более четкими (сохранение антимикробного действия геля). При нанесении образца на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность ++++) непосредственно под нанесенным гелем и на 2-3 мм по периферии капли отмечалось отсутствие роста, границы зоны обозначены нечетко. Через 48 часов границы зоны отсутствия роста стали более четкими (т.е. антимикробный эффект сохраняется).

В опыте с Е.faecalis при внесении геля в лунки через 24 часа отмечался равномерный сплошной рост (интенсивность +++) по всей поверхности агара. При нанесении геля на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность +++) через 24 часа - отсутствие роста непосредственно под нанесенным гелем. Через 48 часов - картина без изменений (т.е. сохраняется бактерицидный эффект).

В опыте с С.albicans при внесении геля в лунки через 24 часа отмечался равномерный сплошной рост (интенсивность +++) по всей поверхности агара. При нанесении геля на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность +++) через 24 часа - снижение интенсивности роста непосредственно под нанесенным гелем до (++). Через 48 часов - картина без изменений (сохраняется бактериостатический эффект).

В опытах с лактобациллами в обоих случаях отмечался сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью (++++).

Таким образом, данный образец геля за счет диоксидина оказывает выраженное бактерицидное действие на Е.coli, при этом через 48 часов отмечается пролонгация действия диоксидина. На S.aureus 209 Р образец оказывает менее выраженное действие, однако отмечается пролонгация антимикробного эффекта. За счет увеличения молекулярной массы хитозана образец оказывает бактерицидное действие на рост Е.faecalis и бактериостатическое действие на дрожжеподобные грибы рода Candida аналогично образцу №8. Образец не оказывает видимого антимикробного действия на лактобациллы.

Образец №5.

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста (35, 35 и 37 мм в диаметре, включая диаметр лунки) с нечетко определенными границами (бактерицидный эффект в центре зоны и бактериостатический на периферии). Через 48 часов отмечалось статистически неразличимое увеличение диаметра зон (до 36, 37 и 38 мм, соответственно), границы их стали более четкими (т.е. наблюдается пролонгация бактерицидного действия). При нанесении образца на поверхность агара через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста непосредственно под нанесенным гелем и снижение интенсивности роста до (+) на 4 мм по периферии капли; через 48 часов - зона задержки роста до (+) по периферии капли 4-5 мм и далее - снижение интенсивности роста до (++) на 2-3 мм от границы предыдущей зоны (отмечается пролонгация антимикробного действия геля).

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста S.aureus 209 Р (интенсивность ++++) отмечались зоны неполного отсутствия роста (сохранились по 2-4 колонии в пределах зоны 21, 22 и 22 мм в диаметре, включая диаметр лунки) с нечетко определенными границами (уменьшение бактерицидного эффекта). Через 48 часов по периферии зоны отмечалось снижение интенсивности роста до (+++) на протяжении 4-5 мм (пролонгация антимикробного действия геля). При нанесении образца на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность ++++) непосредственно под нанесенным гелем и на 2-3 мм по периферии капли отмечалось отсутствие роста, границы зоны обозначены нечетко. Через 48 часов границы зоны отсутствия роста стали более четкими (антимикробный эффект сохраняется).

В опыте с Е.faecalis при внесении геля в лунки через 24 часа отмечался равномерный сплошной рост (интенсивность +++) по всей поверхности агара за исключением 1-2 мм по периферии лунки. При нанесении геля на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность +++) через 24 часа - отсутствие роста непосредственно под нанесенным гелем. Через 48 часов - картина без изменений (сохраняется бактерицидный эффект).

В опыте с С.albicans при внесении геля в лунки через 24 часа отмечался равномерный сплошной рост (интенсивность +++) по всей поверхности агара за исключением 1-2 мм по периферии лунки. При нанесении геля на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность +++) через 24 часа - снижение интенсивности роста непосредственно под нанесенным гелем до (+). Через 48 часов - картина без изменений (сохраняется бактериостатический эффект).

В опытах с лактобациллами в обоих случаях отмечался сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью ++++.

Таким образом, данный образец геля по сравнению с предыдущим оказывает менее выраженное антимикробное действие на S.aureus 209 Р по периферии, что связано с уменьшением высвобождения диоксидина в агар. Однако при этом сохраняется пролонгация антимикробного действия, что особенно хорошо видно на примере Е.coli. На культуру Е.faecalis и на дрожжеподобные грибы рода Candida гель действует аналогично образцу №9, т.к. диоксидин не влияет на их рост. Образец не оказывает видимого антимикробного действия на лактобациллы.

Образец №6.

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста (33, 33 и 34 мм в диаметре, включая диаметр лунки) с нечетко определенными границами (бактерицидный эффект в центре зоны и бактериостатический на периферии). Через 48 часов не отмечалось увеличения диаметра зон (33, 33 и 34 мм, соответственно), по периферии - вторичный рост: по 2-3 колонии в зоне (т.е. отмечается уменьшение антимикробного действия по сравнению с образцами №10-11). При нанесении образца на поверхность агара через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) регистрировались зоны отсутствия роста непосредственно под нанесенным гелем и снижение интенсивности роста до (++) на 4-5 мм по периферии капли; через 48 часов непосредственно под нанесенным гелем рост отсутствовал, на 6-7 мм по периферии капли отмечалось снижение интенсивности роста до (++) и далее отмечалось увеличение зоны задержки роста (интенсивность +++) еще на 2-3 мм (наблюдается пролонгированное, но менее выраженное антимикробное действие, чем у образцов №10-11).

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста S.aureus 209 Р (интенсивность ++++) отмечались зоны снижения интенсивности роста до (+) на 3-4 мм по периферии лунки и далее на 4-5 мм - до (++). Через 48 часов - картина без изменений (бактериостатический эффект по периферии лунки). При нанесении образца на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность ++++) непосредственно под нанесенным гелем и на 2 мм по периферии капли отмечалось отсутствие роста, границы зоны обозначены нечетко. Через 48 часов непосредственно под нанесенным гелем рост отсутствовал, на 2 мм по периферии - снижение интенсивности роста до (++) (наблюдается бактерицидный эффект непосредственно под нанесенным гелем и слабый бактериостатический эффект по периферии).

В опыте с Е.faecalis при внесении геля в лунки через 24 часа отмечался равномерный сплошной рост (интенсивность +++) по всей поверхности агара за исключением 1-2 мм по периферии лунки. Через 48 часов - рост сплошь. При нанесении геля на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность +++) через 24 часа - отсутствие роста непосредственно под нанесенным гелем. Через 48 часов картина без изменений (т.е. сохраняется бактерицидный эффект).

В опыте с С.albicans при внесении геля в лунки через 24 часа отмечался равномерный сплошной рост (интенсивность +++) по всей поверхности агара за исключением 1-2 мм по периферии лунки, за пределами зоны задержки роста - зона интенсификации роста до (++++) протяженностью 3-4 мм. Через 48 часов зона задержки роста не видна, зона интенсификации роста определяется менее четко. При нанесении геля на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность +++) через 24 часа - снижение интенсивности роста непосредственно под нанесенным гелем до (+), по периферии - зона интенсификации роста до (++++) 2-3 мм. Через 48 часов - картина без изменений, зона интенсификации роста определяется менее четко (т.е. сохраняется бактериостатический эффект). В опытах с лактобациллами в обоих случаях отмечался сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью (++++).

Таким образом, данный образец геля, по сравнению с образцами №10-11, оказывает пролонгированное, но менее выраженное антимикробное действие на S.aureus 209 Р и Е.coli по периферии, что связано с уменьшением высвобождения диоксидина в агар при увеличении молекулярной массы хитозана. На дрожжеподобные грибы рода Candida гель действует бактериостатически. Образец не оказывает видимого антимикробного действия на лактобациллы.

Образец №7.

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста (32, 33 и 33 мм в диаметре, включая диаметр лунки) с нечетко определенными границами (бактерицидный эффект в центре зоны и бактериостатический на периферии). Через 48 часов практически не отмечалось увеличения диаметра зон (32, 33 и 34 мм, соответственно), по периферии - вторичный рост: по 2-4 колонии в зоне (т.е. отмечается уменьшение антимикробного действия по сравнению с образцами №10-12). При нанесении образца на поверхность агара через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста непосредственно под нанесенным гелем и снижение интенсивности роста до (++) на 4-5 мм по периферии капли; через 48 часов непосредственно под нанесенным гелем рост отсутствовал, на 6-7 мм по периферии капли отмечалось снижение интенсивности роста до (+++) (наблюдается явное уменьшение антимикробного действия).

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста S.aureus 209 Р (интенсивность ++++) отмечались зоны снижения интенсивности роста до (++) на 2-3 мм по периферии лунки и далее на 3-4 мм до (+++). Через 48 часов - картина без изменений (бактериостатический эффект по периферии лунки). При нанесении образца на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность ++++) непосредственно под нанесенным гелем отмечалось отсутствие роста. Через 48 часов - картина без изменений (бактерицидный эффект непосредственно под нанесенным гелем и слабый бактериостатический эффект по периферии).

В опыте с Е.faecalis при внесении геля в лунки через 24 часа отмечался равномерный сплошной рост (интенсивность +++) по всей поверхности агара. Через 48 часов - картина без изменений. При нанесении геля на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность +++) через 24 часа - отсутствие роста непосредственно под нанесенным гелем. Через 48 часов сохраняется бактерицидный эффект.

В опыте с С.albicans при внесении геля в лунки через 24 часа отмечался равномерный сплошной рост (интенсивность +++) по всей поверхности агара за исключением 1-2 мм по периферии лунки, за пределами зоны задержки роста - зона интенсификации роста до (++++) протяженностью 3-4 мм. Через 48 часов зона задержки роста не видна, зона интенсификации роста определяется менее четко (сохранение стимулирующего влияния данного образца на дрожжеподобные грибы). При нанесении геля на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность +++) через 24 часа - непосредственно под нанесенным гелем единичные колонии (по 2-3 в зоне), по периферии зона интенсификации роста до (++++) 2-3 мм. Через 48 часов - картина без изменений, зона интенсификации роста определяется менее четко (сохраняется выраженный бактериостатический эффект). В опытах с лактобациллами при внесении образца в лунки отмечался сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью (++++). При нанесении геля на поверхность бифидум-агара в виде капель непосредственно под нанесенным гелем отмечалось снижение интенсивности роста до (+++).

Таким образом, данный образец геля по сравнению с предыдущим оказывает менее выраженное антимикробное действие на S.aureus 209 Р и Е.coli по периферии, что связано с уменьшением высвобождения диоксидина в агар при увеличении концентрации хитозана. На культуру Е.faecalis данный образец при непосредственном контакте действует бактерицидно. На дрожжеподобные грибы рода Candida гель оказывает более выраженное бактериостатическое действие, чем предыдущий образец, стимулирующее влияние по периферии зоны бактериостатического действия геля сохраняется. Образец оказывает слабое бактериостатическое действие на лактобациллы.

Образец №8.

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста (37, 37 и 40 мм в диаметре, включая диаметр лунки) с нечетко определенными границами (бактерицидный эффект в центре зоны и бактериостатический на периферии). Через 48 часов отмечалось статистически неразличимое увеличение диаметра зон (38, 38 и 40 мм, соответственно). При нанесении образца на поверхность агара через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста непосредственно под нанесенным гелем и снижение интенсивности роста до (+) на 4-5 по периферии капли. Через 48 часов непосредственно под нанесенным гелем рост отсутствовал, на 5-6 мм по периферии капли отмечалось снижение интенсивности роста до (+) и далее отмечалось увеличение зоны задержки роста (интенсивность ++) еще на 2-3 мм (пролонгированное антимикробное действие).

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста S.aureus 209 Р (интенсивность ++++) отмечались зоны снижения интенсивности роста до (+) на 5-6 мм по периферии лунки с размытыми границами. Через 48 часов - снижение интенсивности роста до (+++) на 4-5 мм за пределами ранее обозначенных зон (пролонгация бактериостатического эффекта по периферии лунки). При нанесении образца на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность ++++) непосредственно под нанесенным гелем и на 2-3 мм по периферии капли - отсутствие роста, границы зоны обозначены нечетко. Через 48 часов за пределами обозначенных ранее зон - снижение интенсивности роста до (+++) на 2-3 мм (бактерицидный эффект непосредственно под нанесенным гелем и слабый пролонгированный бактериостатический эффект по периферии). В опыте с Е.faecalis при внесении геля в лунки через 24 часа отмечался равномерный сплошной рост (интенсивность +++) по всей поверхности агара за исключением 1-2 мм по периферии лунки. Через 48 часов - картина без изменений. При нанесении геля на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность +++) через 24 часа - отсутствие роста непосредственно под нанесенным гелем. Через 48 часов - картина без изменений (бактерицидный эффект).

В опыте с С.albicans при внесении геля в лунки через 24 часа отмечался равномерный сплошной рост (интенсивность +++) по всей поверхности агара за исключением 1-2 мм по периферии лунки, интенсификации роста нет. Через 48 часов - картина без изменений (нет стимулирующего влияния по периферии). При нанесении геля на поверхность агара на фоне сплошного равномерного роста (интенсивность +++) через 24 часа - снижение интенсивности роста непосредственно под нанесенным гелем до 3-5 мелких колоний. Через 48 часов - картина без изменений (бактериостатический эффект).

В опытах с лактобациллами в обоих случаях отмечался сплошной рост по всей поверхности с интенсивностью (++++).

Таким образом, данный образец геля по сравнению с образцами на основе аскорбата хитозана с такой же молекулярной массой и концентрацией оказывает более выраженное антимикробное действие на культуры, чувствительные к диоксидину. На дрожжеподобные грибы рода Candida гель действует бактериостатически, но стимулирующего влияния по периферии зоны бактериостатического действия не оказывает. Образец не оказывает видимого антимикробного действия на лактобациллы.

Образец №9.

При внесении образца в лунки через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) отмечались зоны отсутствия роста (32, 33 и 34 мм в диаметре, включая диаметр лунки) с нечетко определенными границами (бактерицидный эффект в центре зоны и бактериостатический на периферии). Через 48 часов не отмечалось увеличения диаметра зон, но границы стали более четкими. При нанесении образца на поверхность агара через 24 часа на фоне сплошного роста Е.coli (интенсивность ++++) регистрировались зоны отсутствия роста непосредственно под нанесенным гелем и снижение интенсивности роста до (++) на 3-4 мм по периферии капли. Через 48 часов непосредственно под нанесенным гелем рост отсутствовал, на 5-6 мм по периферии капли отмечалось снижение интенсивности роста до (++) и далее - увеличение зоны задержки роста (интенсивность +++) еще на 2-3 мм (пролонгированное антимикробное действие).

При внесении обра