Способ определения токсического действия оральной мукозальной интерферонотерапии

Способ определения токсического действия оральной мукозальной интерферонотерапии

Реферат

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при определении токсического действия оральной мукозальной интерферонотерапии.

Известен способ определения токсического действия рекомбинантного человеческого лейкоцитарного интерферона-α₂ на основе изучения его пирогенных свойств на лабораторных животных - в том числе на устойчивых к эндотоксину мышах С3Н/HeJ. Согласно известному способу мышам С3Н/HeJ вводили рекомбинантный человеческий лейкоцитарный интерферон-α₂ в хвостовую вену и измеряли ректальную температуру каждые 10-15 минут. Пик лихорадочной реакции наблюдали через 25-30 минут после инъекции. Минимальная пирогенная доза составляла 7,5×10³ U на мышь, оптимальная пирогенная доза - 75×10³ U на мышь (Dinarello Ch.A., Bemheim Н.А., Duff G.W., Le H.V., Nagabhushan T.L., Hamilton N.C., Coceanl F. Mechanisms of fever induced by recombinant human interferon // The Journal of clinical investigation. - 1984. - Vol.74, N 3. - P.906-913).

Основным недостатком известного способа является то, что он непригоден для проведения комплексной оценки токсичности орально вводимого препарата, предназначенного для локальной интерферонотерапии, в связи с неадекватным для оральной мукозальной интерферонотерапии способом введения препарата и неинформативным для локальной интерферонотерапии показателем контроля токсического действия рекомбинантного человеческого лейкоцитарного интерферона-α₂ - пирогенной реакции у мышей.

Известен способ исследования кожно-резорбтивного действия липосомальной формы интерферона в хроническом эксперименте на крысах линии Wistar. Согласно известному способу препарат наносили на выстриженный участок кожи животных в течение 10 дней, по 100 мкл (5×10³ ME). В качестве контроля использовали крыс, которым апплицировали липосомы либо физиологический раствор в эквивалентном объеме. Через сутки после последней аппликации проводили физиологическое обследование животных (регистрировали изменение массы и температуры тела, частоту сердечных сокращений, исследовательское поведение в тесте "открытое поле"), биохимический и гематологический анализ крови. В те же сроки умерщвляли крыс передозировкой диэтилового эфира для патоморфологического исследования внутренних органов, забирали образцы тканей на гистологическое исследование. В образцах крови определяли уровень гемоглобина, содержание эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, рассчитывали лейкограмму. Биохимические исследования включали оценку показателей интенсивности основных видов обмена, а также активности ферментов-маркеров функционального состояния печени, почек, сердца (Золин В.В., Агафонова О.А., Колокольцев А.А., Даниленко Е.Д., Федосова Л.К., Гамалей С.Г., Омигов В.В., Фадина В А., Масычева В.И. Изучение противовирусной активности, фармакокинетики и токсических свойств липосомальной формы рекомбинантного α_2b-интерферона человека при наружном применении // Вестник Российской академии медицинских наук. - 2001. - №5. - С.27-31).

Основным недостатком известного способа является то, что он непригоден для проведения комплексной оценки токсичности орально вводимого препарата, предназначенного для локальной интерферонотерапии, в связи с неадекватным для оральной мукозальной интерферонотерапии способом введения препарата и неинформативными для локальной интерферонотерапии системными показателями контроля токсического действия рекомбинантного человеческого интерферона-α₂.

В основу изобретения положена задача обеспечения адекватного введения препарата интерферона для оральной мукозальной интерферонотерапии при информативной регистрации его токсического действия.

Задача решена тем, что согласно заявляемому способу ежедневно в течение 3-5 дней в ротовую полость инбредной мыши BALB/c вводят оплавленный в виде оливы конец капроновой лески диаметром 0,5-2,0 мм, смоченный глицеринсодержащим препаратом рекомбинантного интерферона-α₂, содержащим 10⁴-10⁶ МЕ/мл рекомбинантного человеческого интерферона-α₂, затем у забитой мыши определяют в сравнении с интактной мышью морфофункциональное состояние гепатоцитов, энтероцитов, лимфоидной ткани региональных лимфатических узлов и оценивают:

отсутствие токсического действия оральной мукозальной интерферонотерапии при отсутствии у инбредной мыши BALB/c, подвергшейся оральной мукозальной интерферонотерапии, дегенеративных изменений гепатоцитов, энтероцитов и лимфоидной ткани региональных лимфатических узлов;

наличие токсического действия оральной мукозальной интерферонотерапии при наличии у инбредной мыши BALB/c, подвергшейся оральной мукозальной интерферонотерапии, дегенеративных изменений гепатоцитов и/или энтероцитов, и/или лимфоидной ткани региональных лимфатических узлов.

В результате проведенных нами исследований были выбраны наиболее чувствительные к действию оральной мукозальной интерферонотерапии животные - мыши линии BALB/c; определены у чувствительных животных наиболее реактивные органы и ткани для данного метода введения выбранного препарата рекомбинантного интерферона-α₂; впервые установлены информативные критерии токсического действия оральной мукозальной интерферонотерапии; разработано приспособление для осуществления оральной мукозальной интерферонотерапии у мышей; определены пределы варьирования доз глицеринсодержащего препарата рекомбинантного интерферона-α₂ для исследования на мышах линии BALB/c.

Заявляемый способ определения токсического действия оральной мукозальной интерферонотерапии является новым и в литературе не описан.

Техническим результатом заявляемого изобретения является обеспечение адекватного введения препарата интерферона для оральной мукозальной интерферонотерапии при информативной регистрации его токсического действия.

Сущность изобретения поясняется на следующих примерах, показывающих возможность обеспечения адекватного введения препарата интерферона для оральной мукозальной интерферонотерапии при информативной регистрации его токсического действия.

Пример 1. Инбредной мыши BALB/c ежедневно в течение 3 дней в ротовую полость водили оплавленный в виде оливы конец капроновой лески диаметром 0,5 мм, смоченный глицеринсодержащим препаратом рекомбинантного интерферона-α₂, содержащим 10⁴ МЕ/мл рекомбинантного человеческого интерферона-α₂, затем у забитой мыши определяли в сравнении с интактной мышью морфофункциональное состояние гепатоцитов, энтероцитов, лимфоидной ткани региональных лимфатических узлов. Установили, что у мыши, после интерферонотерапии отсутствовали дегенеративные изменения гепатоцитов, энтероцитов и лимфоидной ткани региональных лимфатических узлов. В соответствии с чем было установлено отсутствие токсического действия оральной мукозальной интерферонотерапии.

Пример 2. Инбредной мыши BALB/c ежедневно в течение 4 дней в ротовую полость водили оплавленный в виде оливы конец капроновой лески диаметром 1,5 мм, смоченный глицеринсодержащим препаратом рекомбинантного интерферона-α₂, содержащим 10⁵ МЕ/мл рекомбинантного человеческого интерферона-α₂, затем у забитой мыши определяли в сравнении с интактной мышью морфофункциональное состояние гепатоцитов, энтероцитов, лимфюидной ткани; региональных лимфатических узлов. У мыши после интерферонотерапии установлено наличие дегенеративных изменений энтероцитов. В соответствии с чем было установлено наличие токсического действия оральной мукозальной интерферонотерапии.

Пример 3. Инбредной мыши BALB/c ежедневно в течение 5 дней в ротовую полость водили оплавленный в виде оливы конец капроновой лески диаметром 1,5 мм, смоченный глицеринсодержащим препаратом рекомбинантного интерферона-α₂, содержащим 10⁵ МЕ/мл рекомбинантного человеческого интерферона-α₂, затем у забитой мыши определяли в сравнении с интактной мышью морфофункциональное состояние гепатоцитов, энтероцитов, лимфоидной ткани региональных лимфатических узлов. У мыши после интерферонотерапии установлено наличие дегенеративных изменений гепатоцитов. В соответствии с чем было установлено наличие токсического действия оральной мукозальной интерферонотерапии.

Пример 4. Инбредной мыши BALB/c ежедневно в течение 5 дней в ротовую полость водили оплавленный в виде оливы конец капроновой лески диаметром 2 мм, смоченный глицеринсодержащим препаратом рекомбинантного интерферона-α₂, содержащим 10⁵ МЕ/мл рекомбинантного человеческого интерферона-α₂, затем у забитой мыши определяли в сравнении с интактной мышью морфофункциональное состояние гепатоцитов, энтероцитов, лимфоидной ткани региональных лимфатических узлов. У мыши после интерферонотерапии установлено наличие дегенеративных изменений лимфоидной ткани региональных лимфатических узлов. В соответствии с чем было установлено наличие токсического действия оральной мукозальной интерферонотерапии.

Пример 5. Инбредной мыши BALB/c ежедневно в течение 5 дней в ротовую полость водили оплавленный в виде оливы конец капроновой лески диаметром 2 мм, смоченный глицеринсодержащим препаратом рекомбинантного интерферона-α₂, содержащим 10⁶ МЕ/мл рекомбинантного человеческого интерферона-α₂, затем у забитой мыши определяли в сравнении с интактной мышью морфофункциональное состояние гепатоцитов, энтероцитов, лимфоидной ткани региональных лимфатических узлов. У мыши после интерферонотерапии установлено наличие дегенеративных изменений гепатоцитов, энтероцитов и лимфоидной ткани региональных лимфатических узлов. В соответствии с чем было установлено наличие токсического действия оральной мукозальной интерферонотерапии.

Способ определения токсического действия оральной мукозальной интерферонотерапии, характеризующийся тем, что ежедневно в течение 3-5 дней в ротовую полость инбредной мыши BALB/c вводят оплавленный в виде оливы конец капроновой лески диаметром 0,5-2,0 мм, смоченный глицеринсодержащим препаратом рекомбинантного интерферона-α₂, содержащим 10⁴-10⁶ МЕ/мл рекомбинантного человеческого интерферона-α₂, затем у забитой мыши определяют в сравнении с интактной мышью морфофункциональное состояние гепатоцитов, энтероцитов, лимфоидной ткани региональных лимфатических узлов и оценивают: отсутствие токсического действия оральной мукозальной интерферонотерапии при отсутствии у инбредной мыши BALB/c, подвергшейся оральной мукозальной интерферонотерапии, дегенеративных изменений гепатоцитов, энтероцитов и лимфоидной ткани региональных лимфатических узлов, наличие токсического действия оральной мукозальной интерферонотерапии при наличии у инбредной мыши BALB/c, подвергшейся оральной мукозальной интерферонотерапии, дегенеративных изменений гепатоцитов, и/или энтероцитов, и/или лимфоидной ткани региональных лимфатических узлов.