Гепатопротектор и фармакологическая композиция на его основе

Гепатопротектор и фармакологическая композиция на его основе

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Изобретение относится к фармации и может быть использовано для производства лекарственных средств и биологически активных добавок гепатопротекторного действия. Токсические поражения печени характеризуются многообразием этиологических факторов и сложностью патогенетических механизмов. Развивающаяся при этом печеночная недостаточность влечет за собой тяжелые последствия для обмена веществ, процессов детоксикации, иммунологической реактивности и противоинфекционной резистентности организма.

Патогенез токсических поражений печени обычно включает в себя участие токсических интерметаболитов, которые либо запускают ответные иммунологические реакции, либо оказывают прямые повреждающие воздействия на биохимию клетки. Продукты метаболических превращений лекарств и токсинов участвуют в различных химических реакциях ковалентного связывания, снижения содержания или истощения глютатиона, оксидативного стресса с соответствующими эффектами на белки, жиры и ДНК. Исходами таких биохимических событий могут быть два процесса: сенсибилизация к летальному действию цитокинов против печени или триггерные реакции в процессе клеточной гибели (некроз, апоптоз). Клинические признаки развивающегося гепатита являются следствием клеточной гибели в форме апоптоза или некроза в зависимости от степени вовлеченности митохондрий, баланса факторов активации и ингибирования семейства белков Всl2, а также от активности каспаз - ведущих ферментных систем апоптоза (Lee, 1993; Losser, Payen, 1996; Zimmerman,1999; Kaplowitz, 2002).

Около 1000 лекарственных препаратов, производимых во всем мире, могут вызывать клинически значимые гепатотоксические реакции. Среди них есть как хорошо зарекомендовавшие себя терапевтические средства, использующиеся уже десятки лет, так и вновь созданные препараты, число которых неуклонно растет. Спектр патологии печени, вызываемой применением лекарств, очень широк, но наиболее частым синдромом выступает острый токсический гепатит. Специфический терапевтический подход по предупреждению токсического поражения печени ограничивается только ситуацией по передозировке парацетамолом, когда используют N-ацетилцистеин. В ряде случаев и для небольшого числа препаратов, вызывающих лекарственные поражения печени вследствие длительного курсового применения, полезной может оказаться терапия урсодеоксихолевой кислотой или стероидами. В случаях тяжелой патологии, сопровождающейся развитием печеночной недостаточности, методом выбора является трансплантация печени. Но, несмотря на перечисленные возможности, известно более 40 лекарственных средств, вызывающих летальные формы токсического поражения печени (Larrey, 2002; Kawahara, Takase, 2002; Teschke, 2002).

К разряду тяжелых форм заболеваний печени, связанных с алкоголем, относится острый алкогольный гепатит, который характеризуется быстрым течением и смертностью, достигающей 50%. По результатам 33 рандомизированных протокольных исследований самых разнообразных терапевтических стратегий, наиболее эффективной схемой лечения острого алкогольного гепатита признана схема гормонотерапии с использованием преднизолона. Однако и в этом случае смертность оставалась высокой и составляла 30% (Naveau,2001).

Средства, повышающие устойчивость (способствующие восстановлению) печени к патологическим воздействиям и различным повреждениям (в том числе при алкогольной интоксикации), усиливающие ее обезвреживающие функции путем повышения активности ферментных систем - монооксигеназной (цитохрома Р450 и других микросомальных энзимов) и др., относят к гепатопротекторам.

Гепатопротекторными свойствами в той или иной степени обладают различные вещества, улучшающие метаболические процессы в организме, например, витамины, ингибиторы перекисного окисления липидов, а также антигипоксанты (препараты - ксенциалс, дипромоний и др.). В качестве селективных гепатопротекторов в медицинской практике применяют некоторые препараты флавоноидной структуры (силибинин, силибор и др.), близкие по структуре к витаминам группы Р и растительные средства (лив-52, валилив и др.). Регистр лекарственных средств России - www.rlsnet.ru содержит сведения о достаточно большом числе гепатопротекторов различного состава.

Все известные препараты характеризуются недостаточной эффективностью при острых токсических поражениях печени.

Известен также кисломолочный напиток "ЗДРАВИЕ", полученный по способу, опубликованному в патенте РФ 2129382 /А 23 С 9/12, 1999 г./, который содержит гомогенизированную смесь пектина, сахара или меда, а также цельного молока, сквашенного болгарской палочкой и термофильного стрептококка. Продукт недостаточно эффективен при острых токсических поражениях печени.

Наиболее близкой к заявленной является композиция, описанная в работе /COLLER, et al. Oral bacteriotherapy with Bifidobacterium bifidum and Lactobacillus acidophilus in cirrhotic patients, Clin Ter, 1989 Dec 31; 131(6): 397-402/. Данная композиция также недостаточно эффективна при острых токсических поражениях печени.

Задачей настоящего изобретения является создание гепатопротектора, лишенного указанного недостатка и предназначенного для профилактики и лечения острых токсических поражений печени, включая алкогольную интоксикацию. Для решения поставленной задачи предложена группа изобретений, объединенных общим изобретательским замыслом.

Предложено применение в качестве гепатопротектора биомассы лактобактерий Lactobacillus acidophilus и продуктов их метаболизма, полученной путем культивирования штаммов указанной культуры на обезжиренном молоке с последующим инактивированием и высушиванием.

На основе гепатопротектора создана фармацевтическая композиция, которая выполнена в форме таблетки, драже или иной дозированной формы и помимо биомассы лактобактерий и продуктов их метаболизма содержит микрокристаллическую целлюлозу, стеарат кальция или магния, аэросил и арабиногалактан.

Композиция содержит указанные ингредиенты в следующих соотношениях масс %:

Биомасса лактобактерий и продукты их метаболизма	5-50
Микрокристалличекая целлюлоза	не более 5
Стеарат	не более 3
Аэросил	не более 5
Арабиногалактан	все остальное.

Применение гепатопротектора, содержащего указанные вещества, позволяет защищать печень и нервные клетки от токсического воздействие алкоголя, активизировать деятельность иммунной системы, стимулировать цитотоксическую активность, ингибировать метастазирование опухолевых клеток в печень, нормализовать функциональную активность желудочно-кишечного тракта, а также улучшить микрофлору кишечника. Таким образом, достигается указанный результат.

Заявленный препарат получают следующим образом. Культуры трех производственных штаммов Lactobacillus acidophilus sp.Выращивают раздельно на обезжиренном молоке при температуре 37°С в течение 16-18 часов на протяжении трех последовательных пассажей. Из культур третьего пассажа готовят смесь, соединяя их в примерном соотношении 1:1:1. Полученную смесь засевают в среду культивирования и выращивают в течение 12-16 часов. Затем путем инактивирования (термообработкой и/или воздействием ультразвуком) ассоциации лактобактерий и высушиванием среды культивирования вместе с остатками питательной среды получают биомассу, которую расфасовывают в таблетки весом 250-500 мг.

Варианты составов таблетки (250 мг) приведены в таблице.

Таблица
Биомасса лактобактерий и продукты их метаболизма, мг	10	50	125
Микрокристаллическая целлюлоза, мг	12,5	12,5	12,5
Стеарат кальция, мг	2,5	-	2,5
Стеарат магния, мг	-	2,5	-
Аэросил, мг	5,0	5,0	5,0
Арабиногалактан, мг	220	180	105

Для доказательства достижения заявленного результата можно привести следующие результаты экспериментов на мышах-гибридах первого поколения (СВА × C57BL/6). На прилагаемых иллюстрациях представлены результаты экспериментов. На фигуре 1 - графики изменения активности сывороточной аланинаминотранферазы (АЛТ), где 1 - кривая изменения активности фермента у животных, которым вводили этанол, 2 - кривая изменения активности фермента у животных, которым вводили этанол и предложенный препарат. На фигуре 2 представлен график выживаемости мышей после введения им 1500 мкг токсиканта липополисахарида (ЛИС), где 3 - кривая выживаемости мышей, которым предварительно вводили заявляемый препарат, 4 - кривая выживаемости мышей, которым не оказывали профилактическую помощь. На фигуре 3 представлен график выживаемости мышей после введения им 2000 мкг ЛПС, где 5 - кривая выживаемости мышей, которым предварительно вводили заявляемый препарат, 6 - кривая выживаемости мышей, которым не оказывали профилактическую помощь.

Пример 1. Острые токсические повреждения печени вызывали введением алкоголя - этанола 960 из расчета 5 г/кг массы тела, разведенного равным объемом воды. Препарат вводили двукратно с интервалом в 24 часа, внутрижелудочно.

Введение заявляемого препарата осуществляли через 1-24-48 г после введения алкоголя из расчета 5 г/кг массы тела и 50 г/кг массы тела.

Для оценки степени поражения печени использовали тест на определение активности сывороточной аланинаминотранферазы (АЛТ). Активность фермента в сыворотке крови определяли через 6, 24 и 72 ч после введения этанола. Одновременно исследовали образцы сывороток крови контрольных (не леченых) мышей после отравления алкоголем и интактных животных. Результаты исследования представлены на фиг.1, где видно, что через 6-24 часа после моделирования острого алкогольного отравления активность АЛТ в 2 раза выше, чем у интактных мышей. Спонтанная нормализация активности фермента отмечена к исходу третьих суток после введения этанола. Применение заявляемого препарата отменяет повышение активности АЛТ. Различия между контролем и опытом достоверны через 6 ч (р<0.05) и находятся на грани достоверности (0,1>р>0,05) через 24 часа после действия этанола.

Пример 2. Предложенный препарат на основе убитых прогреванием Lactobacillus acidophilus проявляет также и профилактические гепатопротекторные свойства. Опыты по оценке влияния препарата на выживаемость мышей, которым вводили возрастающие дозы токсиканта липополисахарида (ЛПС), выявили следующее. Введение внутривенно липополисахарида в дозах 500 и 1000 мкг/мышь не вызывает гибели животных. Введение его в дозе 1500 мкг через час после перорального введения препарата на основе убитых лактобактерий привело к гибели 3 из 15 мышей, тогда как в контроле (липополисахарид без предварительного введения Lactobacillus acidophilus) погибло 8 из 15 мышей (фиг.2).

На фиг.3 приведены результаты наблюдений за выживаемостью мышей, которым вводили еще большую дозу липополисахарида - 2000 мкг/мышь. Видно, что однократное предварительное (за 1 час до инъекции токсиканта) введение препарата убитых лактобактерий обеспечивает выживаемость 12 из 25 мышей, тогда как в контроле выжила лишь 1 мышь из 25.

По данным пробит-анализа, ЛД 50 для липолисахарида составляет 1400 мкг/мышь. Вследствие применения препарата LA значение среднелетальной дозы ЛПС возрастает до 2300 мкг/мышь.

Приведенные данные свидетельствуют о том, что препарат LA обладает антитоксической активностью: однократное введение препарата способствует повышению устойчивости организма к бактериальным эндотоксинам.

1. Применение биомассы лактобактерий Lactobacillus acidophilus и продуктов их метаболизма, полученной путем культивирования штаммов указанной культуры на обезжиренном молоке с последующим инактивированием и высушиванием их вместе со средой культивирования, в качестве гепатопротектора.

2. Фармацевтическая композиция гепатопротекторного действия, характеризующаяся тем, что она содержит биомассу лактобактерий Lactobacillus acidophilus по п.1, а также микрокристаллическую целлюлозу, стеарат кальция или магния, аэросил и арабиногалактан, при этом композиция выполнена в дозированной форме и содержит указанные ингредиенты в следующих соотношениях, мас.%:

Биомасса лактобактерий и продукты их метаболизма	5-50
Микрокристаллическая целлюлоза	Не более 5
Стеарат кальция или магния	Не более 3
Аэросил	Не более 5
Арабиногалактан	Все остальное

3. Композиция по п.2, которая может быть использована для профилактики и лечения острых токсических поражений печени, включая алкогольную интоксикацию.

4. Композиция по п.2, которая выполнена в дозируемой форме в виде таблетки.

5. Композиция по п.2, которая выполнена в дозируемой форме в виде драже.