Способ индукционной гипертермии плотных опухолей в эксперименте

Изобретение относится к медицине и предназначено для индукционной гипертермии в эксперименте Магнитоуправляемый препарат смешивают с цитостатическим средством алкераном. Полученную смесь вводят в зону локализации плотных опухолей. Одновременно с нагревом тела млекопитающего, преимущественно нагревают опухоль. Способ позволяет уменьшить объем плотных опухолей при отсутствии токсических проявлений. 3 табл.

Реферат

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано в онкологии для лечения плотных опухолей различной локализации в эксперименте.

Известен способ индукционной гипертермии злокачественных опухолей животных в переменном магнитном поле: после внутриопухолевого введения магниговосприимчивых частиц млекопитающее, покрытое электроизолирующим материалом, индукционно нагревают, мыши выдерживают 9 минутные процедуры лечения, после 15 минутных процедур они гибнут [1].

Недостатки:

- животные страдают от токсикоза, вызванного искровыми электрическими разрядами и перегревом, неконцентрированный и нефиксированный в опухоли (рассеянный в организме) магнитоуправляемый препарат концентрируется в печени от 12 до 14%, в селезенке, почках и других органах ретикулоэндотелиальной системы, что ведет к токсикозу и понижению терапевтического эффекта, после недельной ремиссии наступает рецидив.

Известен также способ индукционной гипертермии в эксперименте, включающий регионарное введение магнитной жидкости в зону локализации опухоли, при котором мышь помещают в болюс (кювета с двумя створками), болюс с мышью располагают между полюсами сердечника (частота 500 кГц, напряженность от 1 до 10 кА/м) и индукционно нагревают. Температура среды, окружающей млекопитающее, поддерживается на уровне +35°С, температура опухоли 42-45°С [2].

Недостатки:

- неконцентрированное и нефиксированное в опухоли (рассеянное в организме) состояние магнитной жидкости ведет к токсикозу и понижению терапевтического эффекта, после недельной ремиссии наступает рецидив.

Известны способы терапии опухолей с применением цитостатических средств, в частности, сарколизина и алкерана. Алкеран является оптически активным аналогом (L-изомером) сарколизина. Параллельно с сарколизином алкеран применяется при терапии большинства сарком и асцитических форм других опухолей. По противоопухолевой активности эти препараты практически неразличимы [3, 4].

Однако алкеран слабо влияет на плотные формы опухолей: карциномы, меланомы, гепатомы, лейкозы [3, 4]. Неконцентрированный и нефиксированный в опухоли (рассеянный в организме) алкеран концентрируется в печени от 20 до 40%, в селезенке, костном мозге, почках и других органах ретикулоэндотелиальной системы. Это ведет к токсикозу и понижению терапевтического эффекта. При применении алкерана для терапии плотных форм карциномы Эрлиха, существует опасность развития острой и хронической форм миелодепрессии, приводящей к ранней гибели экспериментальных животных.

Наиболее близким к предлагаемому способу (прототип), является способ индукционной гипертермии опухолей в эксперименте [5], при котором мышь, после внутриопухолевого введения магнитной жидкости размещают в постоянном магнитном поле для концентрирования и фиксации магнитной жидкости. После этого млекопитающее ориентируют так, чтобы опухоль находилась в пространстве максимальной напряженности переменного магнитного поля, прошедшего через слой воды с постоянной температурой, и выдерживают заданное время с последующими повторениями процедуры от 3 до 12 сеансов с 3-6 дневными перерывами. Температура среды, окружающей млекопитающее, поддерживается на уровне +36°С, температура опухоли 42-45°С.

При этом способе терапии карциномы Эрлиха полная регрессия опухолей наблюдается у 11% мышей, удлинение продолжительности жизни (УПЖ) 120%; при терапии саркомы МХ11 полная регрессия опухолей наблюдается у 40% мышей, УПЖ 150%; при терапии саркомы S180 полная регрессия опухолей наблюдается у 36% мышей, УПЖ 163% [5].

Прототип имеет следующие недостатки:

- наблюдается лишь частичная деструкция опухолевых клеток, это ведет к низкому терапевтическому эффекту, после 2-3 месячной ремиссии наступает рецидив, на поздних стадиях канцерогенеза у мышей наблюдаются рецидивы карциномы Эрлиха, как результат инвазии и метастазирования первичных опухолей.

Задачей изобретения является устранение указанных недостатков, обеспечение безопасности лечения млекопитающего и повышение терапевтического эффекта.

Указанная задача решается тем, что перед введением магнигоуправляемого препарата в опухоль его золь смешивают с золем цитостатического средства. После регионарного введения магнигоуправляемого препарата, содержащего цитостатаческое средство в зону локализации плотных опухолей, млекопитающее размещают в неоднородном постоянном магнитном поле таким образом, чтобы препарат концентрировался и фиксировался в опухоли по ходу силовых линий. После этого млекопитающее ориентируют так, чтобы опухоль находилась в пространстве максимальной напряженности переменного электромагнитного поля, чтобы одновременно с индукционным нагревом тела млекопитающего преимущественно нагревалась опухоль.

Способ осуществляется следующим образом: на 6-9 день после инокуляции опухолевых клеток под кожу правой лопатки мыши, когда объем опухоли достигает 30-50 мм3, вводят с четырех сторон в опухоль от 30 до 300 мкл раствора магнитоуправляемого противоопухолевого препарата: (содержание γ-Fe2О3 от 3,6 до 36 мг, содержание цитостатического средства от 1 до 4 мкг). Ориентируют опухоль в неоднородном постоянном магнитном поле индукцией 0,2-4 Тл, градиент 0,015-0,3 Тл/см так, чтобы она была коаксильна силовым линиям неоднородного постоянного магнитного поля, и выдерживают 3-6 мин для концентрации и фиксации феррита и цитостатического средства в опухоли. Далее опухоль ориентируют в переменном магнитном поле (частота 50-1000 кГц, напряженность 7,2 кА/м - 12 кА/м, мощность 0,15-15 кВт), пропущенном через слой воды толщиной 1,2-21 мм с постоянной температурой (магнитотермостатирование), введенный феррит индукционно нагревается, при этом одновременно активируется цитостатическое средство. Через 3-15 минут температура опухоли повышается до +42-+45°С, выдерживают 6-45 мин (в зависимости от мощности). Сразу после завершения нагрева измеряют температуру в прямой кишке (обычно не превышает +40°С). Через каждые 3-6 суток процедуру индукционной гипертермии повторяют, всего от 3 до 9 раз. Полученные результаты лечения представлены в примерах.

Все процедуры проводят в соответствии с рекомендациями по терапии злокачественных опухолей [3]. Все полученные данные обрабатывают статистически по рекомендованным критериям, за достоверные принимают различия при ρ<0,05 [3]. Температуру определяют с помощью спиртового и электрического термометров. В предварительных опытах in vitro определяют оптимальные параметры постоянного и переменного магнитных полей при концентрации, фиксации и индукционном нагреве магнитоуправляемого противоопухолевого препарата, содержащего цитостатическое средство в фантоме опухоли и in vivo на экспериментальных животных: мыши, крысы, кролики, собаки.

Предлагаемый способ иллюстрируется примером 1 и таблицей 1 "Противоопухолевый эффект разрабатываемого способа на подкожную форму карциномы Эрлиха, в зависимости от вида терапевтических процедур, включающих: внутриопухолевые инъекции в 1 группе - 0,9% NaCl; во 2 группе - алкеран; в 3 группе - декстранферрит; в 4 группе - декстранферрит + алкеран; фиксацию в неоднородном постоянном магнитном поле с последующим нагревом в переменном магнитном поле".

Пример 1. Определение зависимости противоопухолевого эффекта от качества и полноты исполнения процедуры лечения по заявленному способу. 40 Мышам под кожу правой лопатки вводят суспензию 106 клеток лимфоцитарной лейкемии Р388, делят мышей на 4 равные группы: 1, 2, 3 и 4. Лечение начинают на 3-4 сутки после прививки, когда средний объем опухоли достигает 45 мм3:

- мышам 1 группы в опухоль вводят с четырех сторон 300 мкл 0,9% раствора NaCl;

- мышам 2 группы в опухоль вводят 300 мкл золя цитостатического средства (содержание алкерана 4 мкг);

- мышам 3 группы в опухоль вводят с четырех сторон 300 мкл золя магнигоуправляемого противоопухолевого препарата (содержание γ-Fe2О3 36 мг);

- мышам 4 группы в опухоль вводят с четырех сторон 300 мкл золя магнигоуправляемого противоопухолевого препарата, содержащего цитостатическое средство (содержание γ-Fe2О3 36 мг, содержание алкерана 4 мкг).

Мышей 1, 2, 3 и 4 групп помещают на 5 минут в постоянное магнитное поле индукцией 0,2 Тл, градиент 0,015 Тл/см. После этого каждую мышь 1, 2, 3 и 4 групп магнитотермостатируют и помещают в переменное магнитное поле. Температура опухоли у мышей 1 и 2 групп под действием переменного магнитного поля в течение 10 мин поднимается выше +38°С. Температура в прямой кишке и опухоли мышей 1 и 2 групп в течение 30 минут поддерживается между +38-+40°С.

Температура опухоли у мышей 3 и 4 групп под действием переменного магнитного поля в течение 10 мин поднимается выше +43°С. Далее у мышей 3 и 4 групп температура опухоли продолжает повышаться и через 15 мин достигает +44-+45°С, температура тела +40°С.

В 1 группе проводят до 5 процедур индукционной гипертермии (табл.1).

Во 2, 3 и 4 группах проводят по 9 процедур (табл.1).

В результате получают:

- в 1 группе мышей объем опухоли у каждой мыши устойчиво увеличивается без признаков регрессии, за это время все мыши гибнут от прогрессирования опухолей;

- во второй группе средний объем опухолей резко уменьшается, все мыши гибнут от развития миелодепрессии;

- в третьей группе средний объем опухолей значительно уменьшается, полная регрессия опухоли наблюдается у одной из 10 мышей, увеличение продолжительности жизни мышей 120%:

- в четвертой группе средний объем опухолей с первого дня лечения резко уменьшается, после завершения терапии полная регрессия опухолей наблюдается у 3 из 10 мышей, опухоли не обнаруживаются в течение 3 месяцев, увеличение продолжительности жизни мышей 170%, как следует из таблицы 1.

Таким образом, одновременное индукционное нагревание тела с преимущественным нагревом тканей опухоли, содержащих магнитоуправляемый препарат и цитостатическое средство, приводит к быстрому уменьшению объема опухолей, их полной регрессии и удлинению продолжительности жизни млекопитающих. Предпочтительна индукционная гипертермия опухоли при +45°С 9×30 мин с интервалом 3 суток, при которой получен максимальный терапевтический эффект.

Предлагаемый способ илюстрируется примером 2, и таблицей 2 "Противоопухолевый эффект заявленного способа на подкожную форму лимфоцитарной лейкемии Р388 в зависимости от числа терапевтических процедур, выраженный в полной регрессии опухолей и увеличении средней продолжительности жизни (УШК) мышей".

Пример 2. Определение зависимости противоопухолевого эффекта заявленного способа от числа сеансов. 60 Мышам под кожу правой лопатки вводят суспензию 106 клеток лимфоцигарной лейкемии Р388, делят мышей на 6 равных групп: 1, 2, 3, 4, 5 и 6. На 3-4 сутки после прививки, когда средний диаметр опухоли достигает 2,1 мм, мышам 1 группы в опухоль вводят с четырех сторон 300 мкл 0,9% раствора NaCl. Мышам 2, 3, 4, 5 и 6 групп в опухоль вводят с четырех сторон 100 мкл золя магнигоуправляемого противоопухолевого препарата, содержащего цитостатическое средство (содержание γ-Fe2O3 36 мг, содержание алкерана 4 мкг). Мышей 1, 2, 3, 4, 5 и 6 групп помещают на 5 минут в постоянное магнитное поле индукцией 0,2 Тл, градиент 0,015 Тл/см. Каждую мышь 2, 3, 4, 5 и 6 групп магнитотермостатируют и помещают в переменное магнитное поле. Температура опухоли у мышей 2, 3, 4, 5 и 6 групп под действием переменного магнитного поля в течение 10 мин поднимается выше +42°С. Температура в прямой кишке и опухоли мышей 1 группы (без магнитоуправляемого противоопухолевого препарата) остается между +38-+39°С. У мышей 2, 3, 4, 5 и 6 групп температура опухоли продолжает повышаться и через 15 мин достигает +44°С. Процедуру индукционной гипертермии у мышей 2 группы проводят 1 раз, 3 группы - 2 раза, 4 группы - 6 раз, 5 группы - 9 раз, 6 группы - 12 раз с интервалом 3 суток (табл.2).

В результате получают:

- в 1 (контрольной) группе мышей объем опухоли у каждой мыши устойчиво увеличивается без признаков регрессии;

- во второй группе средний объем опухолей уменьшается медленно, увеличение продолжительности жизни 117%;

- в третьей группе средний объем опухолей значительно уменьшается, полная регрессия опухоли наблюдается у одной из 10 мышей, увеличение продолжительности жизни мышей 120%;

- в четвертой группе средний объем опухолей с первого дня лечения уменьшается и, наконец, их признаки не проявляются в течение 3 месяцев, полная регрессия опухоли наблюдается у 3 из 10 мышей, увеличение продолжительности жизни мышей 140%;

- в пятой группе после 9 терапевтических воздействий значительно увеличивается продолжительность жизни мышей 180%;

- в шестой группе после 12 терапевтических воздействий наблюдается увеличение продолжительности жизни мышей до 120%.

Таким образом, в соответствие с таблицей 2 "Противоопухолевый эффект заявленного способа на подкожную форму лимфоцитарной лейкемии Р388 в зависимости от числа терапевтических процедур, выраженный в полной регрессии опухолей и увеличении средней продолжительности жизни (УПЖ) мышей", максимальный терапевтический эффект дает индукционная гипертермия опухоли при +45°С 9×30 мин с интервалом 3 суток.

Предлагаемый способ илюстрируется примером 3 и таблицей 3, "Противоопухолевый эффект заявленного способа на подкожную форму карциномы Эрлиха, в зависимости от числа терапевтических процедур, выраженный в полной регрессии опухолей и увеличение средней продолжительности жизни (УПЖ) мышей".

Пример 3. Определение увеличения средней продолжительности жизни мышей при заявленном способе терапии карциномы Эрлиха. 50 Мышам подкожно вводят суспензию 106 клеток карциномы Эрлиха Р388 и делят их на 5 равных групп. Когда средний диаметр опухоли достигает 3 мм (около 5 суток), у мышей измеряют температуру в прямой кишке. Мышам 1 (контрольной) группы в опухоль вводят 300 мкл 0,9% раствора NaCl. Мышам 2, 3, 4 и 5 групп в опухоль вводят 300 мкл золя магнитоуправляемого противоопухолевого препарата, содержащего цитостатическое средство, (содержание γ-Fe2О3 36 мг, содержание алкерана 4 мкг) и мышей помещают на 5 минут в постоянное магнитное поле индукцией 0,2 Тл, градиент 0,015 Тл/см. Мышей 1, 2, 3, 4, 5 и 6 групп помещают на 5 минут в постоянное магнитное поле индукцией 0,2 Тл, градиент 0,015 Тл/см. Каждую мышь 2, 3, 4, 5 и 6 групп магнитотермостатируют и помещают в переменное магнитное поле. Температура опухоли у мышей 2, 3, 4, 5 и 6 групп, под действием переменного магнитного поля в течение 10 мин поднимается выше +42°С. В то же время, температура в прямой кишке и опухоли мышей 1 группы (без магнитоуправляемого противоопухолевого препарата) остается между +38-+39°С. У мышей 2, 3, 4 и 5 групп температура опухоли продолжает повышаться и через 15 мин достигает +44°С. Процедуру индукционной гипертермии проводят:

- мышам 2 группы 1 раз;

- мышам 3 группы 5 раза;

- мышам 4 группы 9 раз;

- мышам 5 группы 15 раз с интервалом 3 суток (табл.3).

В результате получают:

- в 1 (контрольной) группе мышей объем опухоли у каждой мыши устойчиво увеличивается без признаков регрессии;

- во второй группе средний объем опухолей уменьшается медленно, увеличение продолжительности жизни 102%;

- в третьей группе средний объем опухолей значительно уменьшается, полная регрессия опухоли наблюдается у одной из 10 мышей, увеличение продолжительности жизни мышей 110%:

- в четвертой группе средний объем опухолей, с первого дня лечения уменьшается и, наконец, их признаки не проявляются в течение 3 месяцев, полная регрессия опухоли наблюдается у 3 из 10 мышей, увеличение продолжительности жизни мышей 170%;

- в пятой группе после 15 терапевтических воздействий значительно увеличивается число мышей с полной регрессией опухолей, но снижается увеличение продолжительности жизни до 110%.

Таким образом, в соответствие с примером 3 и таблицей 3 "Противоопухолевый эффект заявленного способа на подкожную форму карциномы Эрлиха, в зависимости от числа терапевтических процедур, выраженный в полной регрессии опухолей, и увеличение средней продолжительности жизни (УПЖ) мышей", предпочтительна индукционная гипертермия опухоли при +45°С 9×30 мин с интервалом 3 суток, при которой получен максимальный терапевтический эффект.

Приведенные экспериментальные результаты подтверждают высокий противоопухолевый эффект индукционной гипертермии плотных опухолей, включающей регионарное введение магнитоуправляемого препарата, содержащего алкеран, при одновременном нагреве тела до 40°С с преимущественным по скорости нагревом опухоли до 45°С.

Технический результат.

Заявленный способ является новым и эффективным при лечении плотных опухолей в эксперименте. Способ позволяет усилить терапевтический эффект, который проявляется в быстром уменьшении объема плотных опухолей при отсутствии токсических проявлений. Применение заявленного способа приводит к полной регрессии опухолей с увеличением продолжительности жизни до 180% и обеспечивает безопасность млекопитающих.

Источники информации

1. Брусенцов Н.А., Порубова Г.М., Евелев Ю.К., Шумаков Л.И., Чулков А.В., Килимник И.В., Разумовский В.А. Индукционная радиочастотная гипертермия опухолей и тепловой эффект декстранферрита в переменных электромагнитных полях/ 4-я Всесоюзная конференция по применению магнитных жидкостей в биологии и медицине. Сухуми 1991, с.27-30.

2. A.Jordan, R.Scholz, P.Wust, H.Schirra, T.Schiestel, H.Schmidt and R.Felix., Endocytosis of dextran and silan-coated magnetite nanoparticles and the effect ofintracellular hyperthermia on human mammary carcinoma cells in vitro. J. Magn. Magn. Mat. 194 (1999), рр.185-196.

3. Ларионов Л.Ф. Химиотерапия злокачественных опухолей. Мед. лит. M., 1962.

4. Брусенцов Н.А. От сарколизина к алкерану // Ж. Всес. хим. о-ва им. Д.И.Менделеева. 1991, т.36, №3, с.353-355.

5. Н.А.Брусенцов, А.Ю.Барышников, Т.Н.Брусенцова и др. Способ индукционной гипертермии в эксперименте. Патент РФ №2203111, 27.04.(2003). Бюл. Изобр. №12.

Таблица 1.Противоопухолевый эффект разрабатываемого способа на подкожную форму карциномы Эрлиха, в зависимости от вида терапевтических процедур, включающих: внутриопухолевые инъекции в 1 группе - 0,9% NaCl; во 2 группе - алкеран; в 3 группе - декстранферрит; в 4 группе - декстранферрит + алкеран; фиксацию в неоднородном постоянном магнитном поле с последующим нагревом в переменном магнитном поле.
ГруппаЧисло процедурСредний объем опухоли до лечения (мм3)Средний объем опухоли после завершения лечения (мм3)Полная регрессия опухоли (%)УПЖ* (%)
1 (контроль)545,00±15130,00±43,200
2 (алкеран)945,00±151,6+0,500
3 (магнитоуправляемый препарат)945,00±154,00±1,310120
4 (магнитоуправляемый препарат с алкераном)945,00±150,30±0,130170
* средняя продолжительность жизни (СПЖ) и увеличение продолжительности жизни (УПЖ), вычисленное по формуле: УПЖ=[(СПЖопыт-СПЖконтр)/СПЖконтр]×100%.

Таблица 1 показывает:

- в 1 группе мышей (контроль) после 5 процедур, имитирующих заявленный способ, средний объем опухоли увеличивается до 130±43,2 мм3, все мыши пали от прогрессирования опухолей;

- во 2 группе мышей после 9 процедур, имитирующих заявленный способ, средний объем опухоли уменьшается до 1,6±0,5 мм3, все мыши пали от развившейся в процессе терапии миелодепрессии;

- в 3 группе мышей после 9 процедур, имитирующих заявленный способ, средний объем опухоли уменьшается до 4±1,3 мм3, у 10% мышей наблюдается полная регрессия опухолей и увеличение средней продолжительности жизни (УПЖ) мышей возрастает до 120%.

- в 4 группе мышей после 9 процедур, проведенных по заявленному способу, средний объем опухоли уменьшается до 0,3±0,1 мм3, у 30% мышей наблюдается полная регрессия опухолей и увеличение средней продолжительности жизни (УПЖ), мышей возрастает до 170%.

Таблица 2Противоопухолевый эффект заявленного способа на подкожную форму лимфоцитарной лейкемии Р388; в зависимости от числа терапевтических процедур, выраженный в полной регрессии опухолей и увеличении средней продолжительности жизни (УПЖ) мышей.
ГруппаЧисло процедурСредний объем опухоли (мм3)Относительный* объем опухоли (MM3)Полная регрессия опухоли (%)УПЖ** (%)
1 (контроль)150,108±17,01,00000
2 (γ-Fe2О3 36 мг, алкерана 4 мкг).120,070±7,00,4000110
3 (γ-Fe2О3 36 мг, алкерана 4 мкг).210.242±3,20,20410120
4 (γ-Fe2О3 36 мг, алкерана 4 мкг).61,210±0,30,02420140
5 (γ-Fe2О3 36 мг, алкерана 4 мкг).90,300±0,100,00630180
6 (γ-Fe2О3 36 мг, алкерана 4 мкг).120,100±0,030,00260120
* Относительный объем опухоли = (средний объем опухоли в каждой группе)/(средний объем опухоли в 1 группе).** средняя продолжительность жизни (СПЖ) и увеличение продолжительности жизни (УПЖ), вычисленное по формуле: УПЖ=[(СПЖопыт-СПЖконтр)/СПЖконтр]×100%.

Таблица 3Противоопухолевый эффект заявленного способа на подкожную форму карциномы Эрлиха, в зависимости от числа терапевтических процедур, выраженный в полной регрессии опухолей и увеличение средней продолжительности жизни (УПЖ) мышей.
ГруппаЧисло процедурСредний объем опухоли (мм3)Относительный* объем опухоли (мм3)Полная регрессия опухоли (%)**УПЖ (%)
1 (контроль.)136,0001,00000
2 (γ-Fe2О3 36 мг, алкерана 4 мкг).118,3000,5100102
3 (γ-Fe2O3 36 мг, алкерана 4 мкг).51,3040,04010110
4 (γ-Fe2О3 36 мг, алкерана 4 мкг).100,2200,00630170
5 (γ-Fe2О3 36 мг, алкерана 4 мкг).150,1000,00360110
* Относительный объем опухоли = (средний объем опухоли в каждой группе)/(средний объем опухоли в 1 группе).** средняя продолжительность жизни (СПЖ) и увеличение продолжительности жизни (УПЖ), вычисленное по формуле: УПЖ=[(СПЖопыт-СПЖконтр)/СПЖконтр]×100%.

Способ индукционной гипертермии в эксперименте, включающий регионарное введение магнитоуправляемого препарата в зону локализации опухоли с его последующей концентрацией и фиксацией в постоянном магнитном поле и нагревом в переменном магнитном поле, отличающийся тем, что магнитоуправляемый препарат смешивают с цитостатическим средством алкераном, полученную смесь вводят в зону локализации плотных опухолей и одновременно с нагревом тела млекопитающего преимущественно нагревают опухоль.