Моногидрат 7-карбоксиметилокси-3',4' 5-триметоксифлавона, способ его получения и применения

Моногидрат 7-карбоксиметилокси-3',4' 5-триметоксифлавона, способ его получения и применения

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Настоящее изобретение относится к моногидрату 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона, к способу его получения и применению, точнее к моногидрату 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона, который представляет собой негигроскопический продукт, подходящий с получением отмеренной дозы 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона, обладающего защитной активностью в отношении слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта, включая толстую кишку, и к способу его получения и применению.

Известно, что 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавон формулы 2 обладает защитной активностью в отношении слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта, включая толстую кишку (WO 98/04541, патент Кореи № 96-30494). Указанный флавон проявлял терапевтические эффекты в отношении желудочно-кишечных заболеваний, таких как гастрит или язва желудка, и воспалительных кишечных заболеваний, таких как язвенный колит или болезнь Крона.

Формула 1

Авторы обнаружили, что 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавон указанной выше формулы 2 является гигроскопичным. Каждая доза лекарственного средства должна включать определенное количество активного соединения. Однако в случае, если активное соединение является гигроскопичным, что означает тенденцию к поглощению влаги из атмосферы, нелегко достичь того, чтобы отмеренная доза последовательно соответствовала определенному количеству активного соединения. Гигроскопичный материал также создает трудность манипулирования и создания условий хранения. То есть такая характеристика, как гигроскопичный материал, представляет собой большой недостаток для изготовления в виде лекарственного средства. Таким образом, авторы предприняли упорные попытки поиска устойчивой формы активного ингредиента без гигроскопичности.

Способ синтеза 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона был описан в WO 98/04541 (патент Кореи № 96-30494), как показано на схеме 1, состоящей из синтеза, включающего в общем 9 стадий, начиная с 2,4,6-тригидроксиацетофенона.

Схема 1

Этот способ синтеза используется с получением производных с разнообразными различными заместителями. Но 2,4,6-тригидроксиацетофенон, используемый в качестве исходного материала, настолько дорог, что он неэкономичен для промышленного производства, кроме того, принимая во внимание длительность реакции в 9 стадий и низкий выход, что ухудшает ситуацию. Для удаления бензильной группы, используемой для защитной группы гидроксила, по схеме 1 дважды использовался газообразный водород под давлением в присутствии палладиевого катализатора (Pd/C). Для этой реакции гидрирования необходимо специальное устройство для манипулирования сжатым газом и палладиевый катализатор, который также очень дорог, что делает способы сложными и неэкономичными. Промышленное использование газообразного водорода и катализатора также является также опасным.

Другой способ получения 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона описан в патенте Кореи № 99-41205, как показано на схеме 2.

Схема 2

В указанных выше способах соединение формулы 3 подвергали взаимодействию с метилирующим агентом в основных условиях. Превращение гидроксильных групп в углероде-3' и углероде-5 формулы 3 в метоксигруппы с последующей обработкой кислотой давало соединение формулы 3а. Смесь 3',5,7-тригидрокси-4'-метоксифлавон-7-рутинозида формулы 3 с диметилформамидом, карбонатом калия и йодметаном перемешивали в закрытом сосуде при 60°С в течение 48 ч, что приводило к преобразованию гидроксильных групп углерода-3' и углерода-5 формулы 3 в метоксигруппы. После обработки полученного соединения кислотой получали соединение формулы 3а.

Затем гидроксильную группу углерода-7 соединения формулы 3а превращали в алкилоксикарбонилметилоксигруппу с получением соединения формулы 3b. Снятие защиты карбоксильной группы давало соединение формулы 2.

Приведенное выше метилирование требует специального устройства и представляет опасность, потому что реакция должна проводиться в закрытом сосуде, вызывая очень высокое давление. Поэтому массовое получение соединение становится неэффективным. С получением соединения формулы 3b из соединения формулы 3а неизбежна колоночная хроматография. Поэтому описанный выше способ получения связан с опасностью и высокими затратами.

Таким образом, авторы обнаружили, что моногидрат 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона представляет собой негигроскопичное соединение, которое больше подходит с получением отмеренной дозы, чем ангидрид 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона, и создали способ его синтеза, который является более экономичным, удобным и пригодным для массового производства, а также лишен дорогостоящей процедуры очистки колоночной хроматографией.

Целью настоящего изобретения является предоставление моногидрата 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона, негигроскопичного соединения, которое характеризуется как химически устойчивое в условиях обычной или повышенной влажности помещения, способа его получения и применению.

Фиг.1 представляет собой график, показывающий результат термогравиметрического анализа моногидрата 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона, полученного в примере 1 настоящего изобретения.

Фиг.2 представляет собой график, показывающий результат термогравиметрического анализа моногидрата 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона, полученного при использовании водного раствора этанола в примере 2 настоящего изобретения.

Фиг.3 представляет собой график, показывающий результат термогравиметрического анализа моногидрата 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона, полученного при использовании водного раствора ацетона в примере 2 настоящего изобретения.

Фиг.4 представляет собой график, показывающий результат термогравиметрического анализа этанолсольвата 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона, полученного в примере 3 настоящего изобретения.

Фиг.5 представляет собой график, показывающий результат термогравиметрического анализа ангидрида 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона, полученного в сравнительном примере настоящего изобретения.

Настоящее изобретение предоставляет моногидрат 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона, представленный следующей формулой 1

Формула 1

Настоящее изобретение также предоставляет сольват 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона, представленный следующей формулой 1а

Формула 1а

Моногидрат 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона указанной выше формулы 1 в соответствии с настоящим изобретением представляет собой моногидрат ангидрида 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона указанной выше формулы 2 и оказывает аналогичные ему фармацевтические эффекты. В частности, в WO 98/04541 (патент Кореи № 96-30494) описано, что ангидрид 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона обладает активностью, защищающей слизистые оболочки желудочно-кишенчого тракта, включая толстую кишку. Оказалось также, что и соединение формулы 1 по настоящему изобретению обладает активностью, защищающей слизистые оболочки желудочно-кишечного тракта, включая толстую кишку. Например, соединение по настоящему изобретению проявило эффект против колита при пероральном или ректальном введении на модели воспалительного заболевания кишечника, вызванного тринитробензолсульфоновой кислотой. Соединение по настоящему изобретению также проявило защитный эффект на поврежденную слизистую оболочку желудка.

Соединение указанной выше формулы 1 в соответствии с настоящим изобретением не проявило гигроскопичности в отличие от ангидрида 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона, который проявил гигроскопичность. Как объяснено в экспериментальном примере 1, когда моногидрат 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона и его соответствующий ангидрид помещали в одинаковые условия (25°С, относительная влажность 75%), масса ангидрида увеличилась на 4,6%, указывая на то, что ангидрид поглощал влагу для преобразования в моногидрат. Наблюдалось также, что сольват, в частности этанолсольват, превращался в моногидрат в тех же условиях (25°С, относительная влажность 75%). Однако моногидрат настоящего изобретения не проявил изменения массы, указывая на то, что моногидрат по настоящему изобретению представляет собой очень устойчивое вещество, не обладающее гигроскопичностью.

Поэтому соединения моногидрата по настоящему изобретению обеспечивает возможность отмеренной дозе последовательно удерживать определенное количество активного соединения, что представляет собой большое преимущество с получением композиции лекарственного средства, содержащей в качестве активного ингредиента 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона. Другое преимущество соединения по настоящему изобретению состоит в содействии манипулированию и хранению лекарственного средства, содержащего это соединение.

Настоящее изобретение также предоставляет способ синтеза 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона указанной ниже формулы 2 с использованием 3',5,7-тригидрокси-4'-метоксифлавон-7-рутинозида указанной ниже формулы 3 в качестве исходного вещества, как показано на схеме 3.

Схема 3

(где R' представляет собой карбоксил-защитную группу, выбранную из группы, состоящей из этила, метила, трет-бутила, бензила, трихлорэтила и силила).

Настоящее изобретение также предоставляет способ получения моногидрата 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона формулы 1, который характеризуется процессом перемешивания соединения формулы 2, полученного на стадии 4 схемы 3, в среде, содержащей воду, как показано на схеме 4.

Схема 4

Настоящее изобретение также предоставляет способ получения моногидрата 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона формулы 1, в котором соединение формулы 2, полученное на стадии 4 схемы 3, просто помещают в увлажненную атмосферу, как показано на схеме 5.

Схема 5

Настоящее изобретение также предоставляет способ получения моногидрата 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона формулы 1, который включает стадию перемешивания соединения формулы 2, полученного на стадии 4 указанной выше схемы 3, в безводном спирте с получением сольвата 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона формулы 1а, и стадию, на которой полученный сольват формулы 1а оставляют в условиях увлажненной атмосферы, как показано на схеме 6.

Схема 6

А именно получение моногидрата 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона в соответствии с настоящим изобретением, представленного формулой 1, состоит из следующих стадий: 1) гидроксильная группа углерода-3' 3',5,7-тригидрокси-4'-метоксифлавон-7-рутинозида формулы 3 преобразуют в метоксигруппу с последующей обработкой кислотой; 2) полученное соединение подвергают взаимодействию с альфа-галогенацетатом, в котором карбоксильную группу защищают; 3) гидроксильная группа углерода-5 7-алкилоксикарбонилметилокси-5-гидрокси-3',4'-диметиоксифлавона формулы 5 преобразуют в метоксигруппу; 4) снимают защиту карбоксильной группы с получением 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона и 5) полученное соединение подвергают контакту со средой, содержащей воду, или просто оставляют в увлажненной атмосфере.

Другой способ получения моногидрата 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона в соответствии с настоящим изобретением, представленного формулой 1, состоит из стадий взаимодействия 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона с безводным спиртом с получением сольвата 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона и помещения продукта в увлажненную атмосферу.

В частности, способ получения моногидрата 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона в соответствии с настоящим изобретением, представленного формулой 1, состоит из следующих стадий:

(1) взаимодействие соединения формулы 3 с метилирующим агентом в присутствии основания для преобразования гидроксильной группы углерода-3' в метоксигруппу с последующей обработкой кислотой с получением соединения формулы 4 (стадия 1);

(2) взаимодействие соединения формулы 4 в присутствии основания с альфа-галогенацетатом, у которого карбоксильная группа защищена, с получением соединения формулы 5 (Стадия 2);

(3) взаимодействие соединения формулы 5 с метилизрующим агентом для преобразования гидроксильной группы углерода-5 в метоксигруппу, с получением соединения формулы 6 (Стадия 3);

(4) снятие защиты соединения формулы 6 с получением 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона формулы 2 (Стадия 4); и

(5) перемешивание соединения формулы 2 в среде, содержащей воду, или помещения в условия влажности с получением моногидрата 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона формулы 1 (стадия 5).

На стадии 5 соединение формулы 2 может быть подвергнуто взаимодействию с безводным спиртом вместо перемешивания в среде, содержащей воду, с получением сольвата 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона, который затем помещают в условия увлажненной атмосферы.

Стадия 1

На стадии 1 3',5,7-тригидрокси-4'-метоксифлавон-7-рутинозид формулы 3 подвергают взаимодействию с метилирующим агентом в растворителе в присутствии основания, приводя к преобразованию гидроксильной группы углерода-3' в метоксигруппу, ведущему к получению 5,7-дигидрокси-4'-метоксифлавон-7-рутинозида.

При этом растворитель реакции должен представлять собой апротонный растворитель, который не может диссоциировать полярный протон, выбранный из группы, состоящей из диметилформамида, диметилсульфоксида и ацетона. Основание выбирают из группы, состоящей из карбоната калия, гидроксида натрия, гидроксида калия и карбоната натрия. Метилирующий реагент может быть выбран из группы, состоящей из метилйодида (CH₃I) и диметилсульфата ((CH₃)₂SO₄). Температура реакции составляет от 0°С до 90°С и более предпочтительно 0°С-90°С.

Продукт, полученный в результате указанного выше метилирования, можно использовать в том виде, как он есть, без дальнейшей очистки, такой как кристаллизация или хроматография на силикагеле.

В соответствии со способом получения по настоящему изобретению, более реакционноспособную гидроксильную группу углерода-3', чем гидроксильная группа углерода-5 формулы 2, преобразуют в метоксигруппу. Старый способ получения соединения формулы 1 требует специального оборудования для того, чтобы справиться с давлением, вызванным метилированием (выход: 76%), которое выполняется в закрытом сосуде в течение длительного времени, для преобразования обеих гидроксильных групп в метоксигруппу. Но способ получения по настоящему изобретению обеспечивает возможность метилирования в условиях атмосферного давления с высоким выходом (82%).

Во-вторых, неочищенное соединение, полученное выше, обрабатывают кислотой с получением 5,7-дигидрокси-3'-4'-диметоксифлавона формулы 4.

При этом реакционный растворитель может быть выбран из группы, состоящей из диметилформамида, тетрагидрофурана, водного спиртового раствора или воды. Для кислотной обработки можно использовать хлористоводородную кислоту или серную кислоту. Температура реакции составляет 0°С-100°С.

Стадия 2

На стадии 2 5,7-дигидрокси-3'-4'-диметоксифлавон формулы 4 подвергают взаимодействию с альфа-галогенацетатом, при этом карбоксильную группу защищают в растворителе в присутствии основания с получением 7-алкилоксикарбоксиметилокси-5-гидрокси-3',4'-диметоксифлавона формулы 5.

При этом реакционный растворитель представляет собой апротонный растворитель, который не может диссоциировать полярный протон, такой как диметилформамид, диметилсульфоксид или ацетон. Основание выбирают из группы, состоящей из неорганического основания, такого как карбонат калия, гидроксид натрия, гидроксид калия и карбонат натрия; спиртовой соли металла, такой как метоксид натрия и этоксид натрия; гидрида щелочного металла, такого как гидрид натрия, и гидрида щелочноземельного металла, такого как гидрид кальция, и предпочтительно представляет собой один из карбоната калия, гидроксида натрия, гидроксида калия или карбоната натрия. В качестве альфа-галогенацетата, имеющего защитную группу карбоксильной группы (R'-OCOCH₂X, где R' представляет собой этильную, метильную, трет-бутильную, бензильную, трихлорэтильную или силильную группу, и Х представляет собой хлор, бром или йод), предпочтительно используют этилбромацетат, метилбромацетат или трет-бутилбромацетат.

Стадия 3

На стадии 3 соединение формулы 5 подвергают взаимодействию с метилирующим агентом для преобразования гидроксильной группы углерода-5 в метоксигруппу с получением 7-алкилоксикарбонилметилокси-3'.4',5-триметоксифлавона формулы 6.

Это метилирование выполняют по аналогичной методике, как описано на стадии 1.

Соединение, полученное на метилировании, можно использовать для следующей реакции в том виде, как он есть, без дальнейшей очистки, такой как кристаллизация или хроматография на силикагеле.

Стадия 4

На стадии 4 производят снятие защиты соединения формулы 6 с получением 7-карбоксиметилокси-3'.4',5-триметоксифлавона формулы 2.

Условия реакции снятия защиты различны в зависимости от значений R', которые представляют собой защитную группу для карбоксильной группы соединения формулы 6. Например, в случаях, когда защитная группа представляет собой этил или метил, соединение обрабатывают кислотой или щелочным водным раствором, и в случаях, когда защитная группа представляет собой бензильную группу, соединение обрабатывают в атмосфере водорода в присутствии палладиевого катализатора. Когда защитная группа представляет собой трет-бутильную, бензильную или силильную группу, соединение обрабатывают кислотой, и когда защитная группа представляет собой трихлорэтил, соединение обрабатывают цинком в присутствии кислоты.

Стадия 5

На стадии 5 соединение формулы 2 перемешивают в среде, содержащей воду, или оставляют в условиях влажности с получением моногидрата 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона формулы 1.

Также соединение формулы 2 подвергают взаимодействию с безводным спиртом с получением сольвата 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона, который затем помещают в увлажненную атмосферу с получением моногидрата 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона формулы 1.

Этанол или ацетон используют в качестве среды, содержащей воду. Кристаллы, полученные на стадии 4, перемешивают в водной среде, что приводит к получению моногидрата 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона.

В качестве безводного спирта предпочтительным является этанол. Можно также оставить ангидрид или сольват в увлажненной атмосфере для получения моногидрата 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона.

Способ получения моногидрата 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона по настоящему изобретению уменьшает длинные стадии общего синтеза с использованием 3',5,7-тригидрокси-4'-метоксифлавон-7-рутинозида формулы 3, который легко получить из природного в виде основного каркаса для целевого соединения. По способу получения в соответствии с настоящим изобретением, в отличие от способа, описанного в патенте Кореи № 99-41205, метилирование соединения формулы 3 проводят при нормальном давлении и без специальной процедуры очистки, такой как перекристаллизация или хроматография. Таким образом, способ получения в соответствии с настоящим изобретением не требует специального оборудования для регулирования давления и способствует массовой продукции в мягких условиях, так что он может найти широкое применение.

Настоящее изобретение также предоставляет фармацевтическую композицию, содержащую моногидрат 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона, представленного формулой 1, в качестве активного ингредиента. Поскольку фармацевтическая композиция, содержащая соединение по настоящему изобретению в качестве активного ингредиента, проявляет эффект, защищающий слизистую оболочку, и эффект против колита, его можно эффективно применять для защиты желудочно-кишечного тракта, включая толстую кишку, а также для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта. В частности, его можно применять в качестве защитного и профилактического средства при гастрите, язве желудка, язвенном колите и болезни Крона.

Для эффективной дозировки моногидрат 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона по настоящему изобретению можно вводить различными путями. Композиция настоящего изобретения дополнительно включает фармацевтически приемлемые носители. Точнее для композиции можно использовать любой фармацевтически приемлемый носитель для известной композиции, такой как стерилизованный раствор, таблетка, гранула, капсула, суспензия, сироп, суппозиторий и раствор для введения в виде клизмы. В основном носители могут включать разбавители, такие как крахмал, молоко, сахар, определенная глина, желатин, стеариновая кислота, тальк, растительное масло, смола, гликоли или другие известные разбавители. Могут также включаться ароматизирующие агенты, красящие добавки и другие компоненты. Композицию, содержащую моногидрат 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона в качестве активного ингредиента, можно вводить в композициях в виде пероральных лекарственных форм, растворов для инъекций, суппозиторий и растворов для введения в виде клизм, но не всегда ограничиваются ими. В частности, композицию можно получить для перорального или внутривенного введения смешиванием с обычно используемыми наполнителями, агентами для увеличения объема, смачивающими агентами, разрыхлителями, разбавителями, такими как поверхностно-активное вещество, или эксципиентами. Твердые композиции для перорального введения представляют собой таблетки, пилюли, порошки и капсулы. Эти твердые композиции получают смешиванием одного или нескольких подходящих эксципиентов, таких как крахмал, карбонат кальция, сахароза или лактоза, желатин и т.д. Кроме простых эксципиентов, можно использовать смазывающие агенты, например стеарат магния, тальк и т.д. Жидкие композиции для перорального введения представляет собой суспензии, растворы, эмульсии и сиропы, и указанные выше композиции могут содержать различные эксципиенты, такие как смачивающие агенты, подслащивающие вещества и консерванты, в дополнение к обычно используемым простым разбавителям, таким как вода и жидкий парафин.

Композиции для внутривенного введения представляют собой стерильные водные растворы, нерастворимые в воде эксципиенты, суспензии, эмульсии, суппозитории или растворы для введения в виде клизмы. Нерастворимые в воде эксципиенты и суспензии могут содержать в дополнение к активному соединению или соединениям пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительное масло, подобное оливковому маслу, инъецируемый сложный эфир, подобный этилату, и т.д. Суппозитории могут содержать в дополнение к активному соединению или соединениям витепсол, макрогол, Tween 61, масло какао, лауриновое масло, глицерин, желатин и т.д.

Эффективную дозировку композиции по настоящему изобретению можно определить в соответствии с массой, возрастом, полом, состоянием здоровья, рационом пациента, частотой ведения, способом введения, выведения и тяжестью заболевания. В целом эффективная доза соединения составляет предпочтительно от 1 до 1000 мг/кг и вводится 1-3 раза в день. Точную дозировку, способ введения и частоту введения можно определить характеристиками фармацевтической формы.

Молекулярная структура соединения по настоящему изобретению подтверждается инфракрасной спектроскопией, УФ-спектроскопией, ядерной магнитнорезонансной спектроскопией, масс-спектрометрией, термогравиметрическим анализом (TGA) и сравнением теоретической величины элементного анализа соединения и его экспериментальной величины.

Практические и предпочтительные в настоящее время варианты осуществления настоящего изобретения являются иллюстративными, как показано в следующих примерах. Однако следует понимать, что специалисты в данной области после ознакомления с настоящим описанием могут внести модификации и усовершенствования в пределах сущности и объема настоящего изобретения.

Пример 1. Моногидрат 7-карбоксиметилокси-3',4',5 триметоксифлавона

Стадия 1. 5,7-Дигидрокси-4'-метоксифлавон

1 кг 3',5,7-Тригидрокси-4'-метоксифлавон-7-рутинозида и 454 г карбоната калия растворяют в диметилформамиде при 10°С и раствор нагревают и перемешивают при 90°С в течение 8 ч. Реакционный раствор охлаждают до комнатной температуры. К раствору добавляют 1 кг йодметана с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 12 ч. После завершения реакции к раствору добавляют 50 л смешанного раствора этилацетата и дихлорметана (3:2). Полученный раствор перемешивают в течение 30 мин и затем фильтруют. 5,2 л Метанола и 5 кг концентрированной хлористоводородной кислоты добавляют к отфильтрованному твердому веществу с последующим нагреванием при кипячении с обратным холодильником при 65°С в течение 8 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры. Осажденное твердое вещество собирают фильтрованием и промывают небольшим количеством метанола с получением требуемого соединения (твердое желтое вещество, 426 г, выход: 82%).

¹H ЯМР (DMSO-d₆, 400МГц): δ 3,833 (с, 3H), 3,862 (с, 3H), 6,18 (д, 1H), 6,49 (д, 1H), 6,93 (с, 1H), 7,08 (д, 1H), 7,52 (д, 1H), 7,63 (дд, 1H), 10,82 (с, 1H), 12,88 (с, 1Н).

ИК (KBr): 1636, 1590 см^-1

Стадия 2. 7-Трет-бутилоксикарбонилметилокси-5-гидрокси-3',4'-диметоксифлавон

425 г Соединения, полученного на указанной выше стадии 1, растворяют в 4 л диметилформамида. К раствору добавляют 243 г карбоната калия и 258 г трет-бутилбромацетата при комнатной температуре. Полученный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 5 ч. После завершения реакции добавляют воду и экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают последовательно водой, рассолом и сушат над безводным сульфатом натрия. Растворитель удаляют выпариванием при пониженном давлении. Смешанный раствор этилацетата и гексана (объемное соотношение = 1:3) добавляют к остатку с последующим перемешиванием. Затем продукт собирают фильтрованием с получением требуемого соединения (567 г, выход: 98%).

¹H ЯМР (DMSO-d₆, 400МГц): δ 1,45 (с, 9H), 3,84 (с, 3H), 3,86 (с, 3H), 4,81 (с, 2H), 6,34 (д, 1H), 6,77 (д, 1H), 7,02 (с, 1H), 7,10 (д, 1H), 7,55 (д, 1H), 7,67 (дд, 1H).

Стадия 3. 7-Трет-бутилоксикарбонилметилокси-3',4',5-триметоксифлавон

330 г Соединения, полученного на указанной выше стадии 2, полностью растворяют в 6 л диметилформамида при 30°С. К раствору добавляют 426 г карбоната калия с последующим перемешиванием в течение 3 ч. Реакционный раствор охлаждают до комнатной температуры, медленно добавляют 330 г йодметана и перемешивают в течение 17 ч. После завершения реакции добавляют воду и экстрагируют избыточным количеством этилацетата. Органический слой промывают водой, рассолом и сушат над безводным сульфатом натрия. Растворитель удаляют при пониженном давлении. К полученному твердому веществу добавляют 3 л этилацетата с последующим перемешиванием при кипячении с обратным холодильником в течение 1 ч и охлаждают до комнатной температуры. Продукт собирают фильтрованием с получением требуемого соединения (324 г, выход: 95%).

¹H ЯМР (DMSO-d₆, 400МГц): δ 1,45 (с, 9H), 3,82 (с, 3H), 3,83 (с, 3H), 3,86 (с, 3H), 4,82 (с, 2H), 6,51 (д, 1Н), 6,76 (с, 1H), 6,81 (д, 1H), 7,08 (д, 1H), 7,49 (д, 1Н), 7,60 (дд, 1Н).

Стадия 4. 7-Карбонилметилокси-3',4',5-триметоксифлавон

266 г Соединения, полученного на указанной выше стадии 3, и 172 г п-толуолсульфоновой кислоты добавляют к 1 л смеси хлороформа и толуола (1:1 об/об), которую нагревают при кипячении с обратным холодильником в течение 3 ч и затем охлаждают до комнатной температуры. Продукт собирают фильтрованием, промывают водой и ацетоном и сушат. Высушенные кристаллы растирают в 8 л смешанного растворителя из хлороформа и метанола (3:1 об/об) для дальнейшего перемешивания при комнатной температуре в течение 2 ч. Процесс промывания повторяют еще один раз. Получают 220 г требуемого соединения (выход: 95%).

¹H ЯМР (DMSO-d₆, 400МГц): δ 3,82 (с, 3H), 3,83 (с, 3H), 3,86 (с, 3H), 4,85 (с, 2H), 6,52 (д, 1H), 6,77 (с, 1H), 6,85 (д, 1H), 7,08 (д, 1H), 7,50 (д, 1H), 7,65 (дд, 1H), 13,15 (уш.с, 1H).

Стадия 5. Моногидрат 7-карбонилметилокси-3',4',5-триметоксифлавона

220 г соединения, полученного на указанной выше стадии 4, добавляют к 4 л 95% этанола и перемешивают в течение 4 ч. Осажденный продукт фильтруют с получением целевого соединения (225 г, выход: 98%).

¹H ЯМР (DMSO-d₆, 400МГц): δ 3,82 (с, 3H), 3,83 (с, 3H), 3,86 (с, 3H), 4,85 (с, 2H), 6,52 (д, 1H), 6,77 (с, 1H), 6,85 (д, 1H), 7,08 (д, 1H), 7,50 (д, 1H), 7,65 (дд, 1H), 13,15 (уш.с, 1H).

Элементный анализ:

Вычислено: С 59,41%, Н 4,99%;

Найдено: С 59,46%, Н 4,85%

Термогравиметрический анализ (TGA) (см. фиг.1)

Пример 2. Моногидрат 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона

Стадия 1. 5,7-дигидрокси-3',4'-диметоксифлавон

Целевое соединение получают по аналогичной методике, как описано на указанной выше стадии 1 примера 1.

Стадия 2. 7-этилоксикарбонилметилокси-5-гидрокси-3',4'-диметоксифлавон

325 г Соединения, полученного на указанной выше стадии 1, растворяют в 3,3 л диметилформамида. К раствору добавляют 171 г карбоната калия и 137,2 мл этилбромацетата при комнатной температуре, который перемешивают в течение 6 ч. После завершения реакции реакционную смесь добавляют к смешанному растворителю из этилацетата и гексана (1:1 об/об). Полученное твердое вещество собирают фильтрованием и затем помещают в 8,25 л дихлорметана и нагревают при кипячении с обратным холодильником в течение 30 мин. Раствор охлаждают до комнатной температуры, фильтруют через слой целлита и концентрируют при пониженном давлении. Остаток растирают в смешанном растворителе из этилацетата и гексана (1:1 об/об). Продукт фильтруют и сушат с получением требуемого соединения (401 г, выход: 97%).

¹H ЯМР (DMSO-d₆, 400МГц): δ 1,22 (т, 3H), 3,84 (с, 3H), 3,87 (с, 3H), 4,18 (кв, 2H), 4,93 (с, 2H), 6,39 (д, 1H), 6,83 (д, 1H), 7,04 (с, 1H), 7,12 (д, 1H), 7,57 (д, 1H), 7,69 (д, 1Н).

Стадия 3. 7-этилоксикарбонилметилокси-3',4',5-триметоксифлавон

210 г соединения, полученного на указанной выше стадии 2, и 575 г карбоната калия добавляют к 6 л ацетона с последующим перемешиванием в течение 3 ч. К смеси медленно добавляют 54,1 мл диметилсульфата и нагревают при кипячении с обратным холодильником при 56°С в течение 17 ч. После завершения реакции раствор охлаждают до комнатной температуры и к нему добавляют дихлорметан с последующим фильтрованием через слой целлита. Фильтрат промывают последовательно водой, рассолом, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении. Полученное твердое вещество помещают в 4 л этилацетата и перемешивают при кипячении с обратным холодильником в течение 2 ч. Раствор охлаждают до комнатной температуры, фильтруют и сушат. К полученному твердому веществу добавляют 2 л ацетона и раствор перемешивают при кипячении с обратным холодильником в течение 2 ч. Раствор охлаждают до комнатной температуры, фильтруют и сушат. Указанные процессы повторяют еще 1 раз с получением требуемого соединения (220 г, выход: 96%).

¹H ЯМР (DMSO-d₆, 400МГц): δ 1,32 (т, 3H), 3,93 (с, 3H), 3,94 (с, 3H), 3,96 (с, 3H), 4,31 (кв, 2H), 4,71 (с, 2H), 6,47 (д, 1H), 6,59 (д, 1H), 6,94 (д, 1H), 7,24 (с, 1Н), 7,28 (д, 1H), 7,47 (дд, 1H).

Стадия 4. 7-карбонилметилокси-3',4',5-триметоксифлавон

165 г соединения, полученного на указанной выше стадии 3, растворяют в 800 мл тетрагидрофурана. К реакционному раствору добавляют 800 мл 1н. раствора гидроксида натрия и нагревают при кипячении с обратным холодильником в течение 2 ч. Реакционный раствор охлаждают до комнатной температуры и затем к реакционному раствору добавляют этилацетат и органический слой удаляют. Полученный водный слой промывают этилацетатом и подкисляют водным раствором 1н. хлористоводородной кислоты при 0-5°С. Полученные кристаллы фильтруют и сушат с последующим промыванием водой и ацетоном. Промытые кристаллы снова сушат и добавляют к 8 л смешанного раствора хлороформа и метанола (3:1 об/об) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 3 ч. Процесс промывания повторяют еще один раз и сушат с получением требуемого соединения (152 г, выход: 99%).

¹H ЯМР (DMSO-d₆, 400МГц): δ 3,82 (с, 3H), 3,83 (с, 3H), 3,86 (с, 3H), 4,85 (с, 2H), 6,52 (д, 1H), 6,77 (с, 1H), 6,85 (д, 1H), 7,08 (д, 1H), 7,50 (д, 1H), 7,65 (дд, 1H), 13,15 (уш.с, 1H).

Стадия 5. (Способ А) Моногидрат 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона

2,5 л 95% этанола добавляют к 134 г кристаллов, полученных на указанной выше стадии 4-1, и перемешивают в течение 4 ч. После фильтрования кристаллы сушат при 60°С в течение 5 ч с получением целевого соединения (142,6 г, выход: 99%).

^lHЯМР (DMSO-d₆, 400МГЦ): δ 3,82 (с, 3H), 3,83 (с, 3H), 3,86 (с, 3H), 4,85 (с, 2H), 6,52 (д, 1H), 6,77 (с, 1H), 6,85 (д, 1H), 7,08 (д, 1H), 7,50 (д, 1H), 7,65 (дд, 1H), 13,15 (уш.с, 1H).

Элементный анализ:

Вычислено: С 59,41%, Н 4,99%;

Найдено: С 59,17%, Н 5,10%

Термогравиметрический анализ (TGA) (см. фиг.2)

Стадия 5. (Способ В) Моногидрат 7-карбонилметилокси-3',4',5-триметоксифлавона

400 мл смешанного раствора ацетона и воды добавляют к 14 г кристаллов, полученных на указанной выше стадии 4-1, и перемешивают в течение 4 ч. Твердое вещество собирают фильтрованием и сушат при 60°С в течение 5 ч с получением целевого соединения (14,5 г, выход: 99%).

¹H ЯМР (DMSO-d₆, 400МГц): δ 3,82 (с, 3H), 3,83 (с, 3H), 3,86 (с, 3H), 4,85 (с, 2H), 6,52 (д, 1H), 6,77 (с, 1Н), 6,85 (д, 1H), 7,08 (д, 1H), 7,50 (д, 1H), 7,65 (дд, 1Н), 13,15 (уш.с, 1H).

Элементный анализ:

Вычислено: С 59,41%, Н 4,99%;

Найдено: С 59,22%, Н 5,16%

Термогравиметрический анализ (TGA) (см. фиг.3)

Пример 3. Этанолсольват 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона

Этанолсольват 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона получают при использовании безводного этанола вместо 95% этанола и сушат при 60°С в течение 3 ч при пониженном давлении. Другие процессы аналогичны описанным выше в примере 1 или примере 2 (стадия 4-2).

¹H ЯМР (DMSO-d₆, 400МГц): δ 1,04 (т, 3H), 3,42 (кв, 2H), 3,82 (с, 3H), 3,83 (с, 3H), 3,86 (с, 3H), 4,85 (с, 2H), 6,52 (д, 1H), 6,77 (с, 1H), 6,85 (д, 1H), 7,08 (д, 1Н), 7,50 (д, 1H), 7,65 (дд, 1H), 13,15 (уш.с, 1H).

Элементный анализ:

Вычислено: С 61,11%, Н 5,59%;

Найдено: С 61,25%, Н 5,32%

Термогравиметрический анализ (TGA) (см. фиг.4)

Сравнительный пример. Ангидрид 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона

Этанолсольват 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона, полученный в приведенном выше примере 3, сушат при пониженном давлении при 80°С в течение 5 ч с получением ангидрида 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона.

Или моногидрат 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона, полученный в приведенном выше примере 1 или примере 2, сушат при пониженном давлении при 100°С в течение 3 ч с получением ангидрида 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона.

¹НЯМР (DMSO-d₆, 400МГц): δ 3,82 (с, 3H), 3,83 (с, 3H), 3,86 (с, 3H), 4,85 (с, 2H), 6,52 (д, 1H), 6,77 (с, 1Н), 6,85 (д, 1H), 7,08 (д, 1H), 7,50 (д, 1H), 7,65 (дд, 1Н), 13,15 (уш.с, 1H).

Элементный анализ:

Вычислено: С 62,18%, Н 4,70%;

Найдено: С 62,15%, Н 4,73%

Термогравиметрический анализ (TGA) (см. фиг.5)

Экспериментальный пример 1. Исследование изменений массы моногидрата, этанолсольвата и ангидрида 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона

1. Тест на гигроскопичность моногидрата и ангидрида 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона

Моногидрат 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона, полученный в приведенном выше примере 1 или примере 2, точно измеряют, используя колбу для взвешивания (диаметром 6 см). 1 г Моногидрата 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона получают в качестве образца. Образец выдерживают в сосуде, в котором температура установлена 25°С, и поддерживается относительная влажность 75%. Изменения массы образца измеряют через 2, 4 и 6 ч и на 1-й, 3-й и 6-й день. Величину изменения массы рассчитывают в виде процентной доли исходной массы образца, и результаты показаны в таблице 1.

Изменения массы ангидрида 7-карбоксиметилокси-3',4',5-триметоксифлавона, полученного в сравнительном примере, измеряют аналогичным способом, как указано выше, и результаты показаны в таблице 1.

Таблица 1Изменения массы в соответствии с прошедшим периодом времени (%)
Образец	0 ч	2 ч	4 ч