Способ выделения натриевой соли днк из тканей животного происхождения

Способ выделения натриевой соли днк из тканей животного происхождения

Реферат

Изобретение относится к получению биологически активных веществ и может быть использовано в медицинской и пищевой промышленности.

Наиболее близким техническим решением к предлагаемому способу является способ выделения натриевой соли ДНК из тканей животного происхождения, включающий размораживание сырья, экстракцию, фильтрацию экстракта, отделение и сушку осадка, при этом используется стерилизующая установка с фильтрами «Миллипор», ультрафильтрационная установка на полых волокнах. (Патент РФ №2139068 опубл. 10.10.99.)

Стерилизующая фильтрация требует использования дорогих стерилизующих и фильтрующих импортных пластин. Концентрация стерильного фильтрата в 6 раз по объему требует использования полуволоконных разделительных аппаратов, ультрафильтрационной установки. По этой технологии при добавлении спирта в соотношении 1:2 не обеспечивается полное осаждение целевого продукта в связи с его большой концентрацией.

Недостатком его является трудоемкость, длительность процесса, низкая производительность, необходимость использовать дорогостоящее оборудование и материалы, большие потери.

Предлагаемым изобретением решается задача снижение трудоемкости, упрощение технологии, увеличение выхода продукта.

Для решения поставленной задачи производят размораживание сырья, экстракцию, фильтрацию экстракта, отделение и сушку осадка, при этом размораживание ведут при температуре 25±5°С в асептических условиях, экстракцию проводят в 10% растворе натрия хлорида, взятого из расчета 3 л раствора на 1,5±0,1 кг сырья, в реакторе при температуре 95-98°С при перемешивании и сохранении постоянного объема жидкости, фильтрацию экстракта проводят со скоростью не более 0,5 л/мин, осадок, содержащий натриевую соль ДНК, получают путем добавления к экстракту этилового спирта из расчета 4 л на 1 кг сырья, смесь перемешивают и оставляют на 20-25 часов при температуре 2-10°С, надосадочную жидкость декантируют, осадок отделяют центрифугированием и высушивают.

Отличительными признаками предлагаемого решения от известного является то, что размораживание ведут при температуре 25±5°С в асептических условиях, экстракцию проводят в 10% растворе натрия хлорида, взятого из расчета 3 л раствора на 1,5±0,1 кг сырья в реакторе при температуре 95-98°С при перемешивании и сохранении постоянного объема жидкости, фильтрацию экстракта проводят со скоростью не более 0,5 л/мин, осадок, содержащий натриевую соль ДНК, получают путем добавления к экстракту этилового спирта из расчета 4 л на 1 кг сырья, смесь перемешивают и оставляют на 20-25 часов при температуре 2-10°С, надосадочную жидкость декантируют, осадок отделяют центрифугированием и высушивают.

Сущность предлагаемого способа заключается в следующем. Измельченное сырье (семенники крупного или мелкого рогатого скота, или жмых из него, или молоки лососевых), упакованное в чистые полиэтиленовые мешки (по 1 кг), хранят в морозильной камере при температуре (минус 18÷20°С) не более 6 месяцев. Перед экстракцией сырье вынимают из камеры и размораживают при температуре 25±5°С в асептических условиях (обеспечивающих микробиологическую чистоту продукта), чтобы не загрязнить исходное сырье на начальном этапе. Размораживание при температуре 25±5°С обеспечивает стабильность качества препарата от серии к серии и его свойств. Это является следствием условий осуществления этапа криодеструкции. Размороженное сырье переносят в реактор с 10% раствором натрия хлорида из расчета 3 л раствора на 1,5±0,1 кг сырья. Экстракцию проводят в реакторе при температуре 95÷98°С при перемешивании и сохранении постоянного объема жидкости путем добавления в реактор воды очищенной по мере ее испарения. Продолжительность экстракции 2÷2,5 часа. Использование температуры 95÷98°С позволяет ускорить процесс обменной реакции (соли с кислотой NaCl + ДНК) и увеличить количество прореагированных участков ДНК т.е. выход продукта Na - соль ДНК. При температуре 95÷98°С идет выкипание воды. Чтобы создать условия для стабильной реакции, воду подливают до постоянного уровня. Горячий экстракт из реактора сразу после окончания этапа экстракции подают по шлангам на тканевые стерильные хлопчатобумажные фильтры, например, миткалевые. Фильтрацию экстракта проводят со скоростью не более 0,5 л/мин. Фильтрация экстракта со скоростью не более 0,5 л/мин позволяет создать оптимальные условия отделения раствора, содержащего натриевую соль ДНК, от нерастворимых примесей (ткани семенников). Стерильные емкости с профильтрованным экстрактом герметично укупоривают и хранят до стадии осаждения (не более 20 часов) при температуре 2÷10°С в защищенном от света месте.

В камере "фриго" или в помещении с температурой окружающей среды 2÷10°С экстракт из бутылей сливают в реактор или в бак, объем которого превышает общий объем экстракта в 4 раза. К экстракту приливают этиловый спирт или подвергнутый регенерации использованный спирт (декантат) из расчета 4 л на 1 кг сырья. Смесь тщательно перемешивают и оставляют на 20÷25 часов при температуре 2÷10°С для формирования осадка. Добавление к полученному экстракту этилового спирта из расчета 4 л на 1 кг сырья обеспечивает оптимальный выход продукта в виде осадка. Этого количества спирта достаточно для осаждения всех присутствующих молекул натриевой соли ДНК из неконцентрированного экстракта. Перемешивание смеси и отстаивание в течение 20÷25 часов при температуре 2÷10°С обеспечивает выпадение в осадок оптимального количества целевого продукта. Надосадочную жидкость (смесь этилового спирта с солевым раствором) декантируют. Осадок, содержащий натриевую соль ДНК, с небольшим количеством надо-садочной жидкости подвергают центрифугированию. Центрифугирование обеспечивает максимальное отделение осадка от центрифугата. После этого осадок, находящийся в центрифужных стаканах, промывают один раз этиловым спиртом в количестве 600 мл. Фильтрат, представляющий собой смесь этилового спирта, воды и натрия хлорида с небольшой примесью белков, подвергают регенерации для повторного использования. Промытый осадок в асептических условиях вынимают из центрифужных стаканов стерильной лопаткой и раскладывают тонким слоем (не более 0,5 см), закрывают стерильной салфеткой и высушивают при температуре 65±5°С. Высушивание при температуре 65±5°С обеспечивает получение асептического продукта. Продолжительность высушивания определяется влажностью осадка, которая не должна превышать 10%. Высушенный осадок в асептических условиях размалывают на мельнице до мелкодисперсного состояния. Размер частиц не должен превышать 0,3 мм. Порошок, содержащий натриевую соль ДНК, выгружают из мельницы в контейнеры и направляют на производство, например таблеток или драже. До использования субстанцию хранят при температуре 2÷10°С в сухом защищенном от света месте не более 6 месяцев.

Пример.

Взято 15 кг сырья (жмых семенников полученных при производстве препарата лидаза), 30 л 10% водного раствора натрия. Получено 34 л экстракта. Использовано 60 л этилового спирта. Получено 102 л центрифугата и декантата (смесь этилового спирта с раствором натрия хлорида) и сырой осадок содержащий натриевую соль ДНК. После сушки осадка получено 250 г сухого порошка, содержащего натриевую соль ДНК. Контроль качества показал, что по показателям микробиологической чистоты и содержанию натриевой соли ДНК полученный порошок соответствует ТУ 9370-002-04862997-03. Декантат и центрифугат, содержащий смесь этилового спирта с раствором натрия хлорида, подвергают регенерации для повторного использования в техпроцессе.

Таким образом, предлагаемый способ упрощает технологию, снижает трудоемкость, увеличивает выход продукта, снижает его стоимость.

1. Способ выделения натриевой соли ДНК из тканей животного происхождения, включающий размораживание сырья, экстракцию, фильтрацию экстракта, отделение и сушку осадка, отличающийся тем, что размораживание ведут при температуре 25±5°С в условиях, обеспечивающих микробиологическую чистоту продукта, экстракцию проводят 2-2,5 ч в растворе натрия хлорида взятого из расчета 3 л раствора на 1,5±0,1 кг сырья, в реакторе при температуре 95-98°С при перемешивании и сохранении постоянного объема жидкости, фильтрацию экстракта проводят со скоростью не более 0,5 л/мин, осадок, содержащий натриевую соль ДНК, получают путем добавления к экстракту этилового спирта из расчета 4 л на 1 кг сырья, смесь перемешивают и оставляют на 20-25 ч при температуре 2-10°С, надосадочную жидкость декантируют, осадок отделяют центрифугированием и высушивают при 65±5°С до достижения влажности не выше 10%, порошок измельчают до размера частиц не выше 0,3 мм.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что для повторного использования в качестве спирта используют регенерированный декантат.