Фармацевтическая композиция, содержащая полипептиды фактора vii и полипептиды pai-1

Фармацевтическая композиция, содержащая полипептиды фактора vii и полипептиды pai-1

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей фактор VII или родственный фактору VII полипептид и PAI-1 или PAI-1-родственный полипептид. Изобретение также относится к применению комбинации фактора VII или полипептида, родственного фактору VII, и PAI-1 или полипептида, родственного PAI-1, для производства лекарственного средства для лечения пациентов, страдающих кровотечениями, или профилактики случаев кровотечения. Изобретение также относится к способу лечения кровотечений у пациентов и к способу, улучшающему образование сгустка у пациента. Настоящее изобретение также относится к наборам, содержащим указанные соединения.

Предпосылки к созданию изобретения

Гемостаз инициируется посредством образования комплекса между тканевым фактором (TF), который экспонируется в кровотоке после повреждения стенки сосуда, и фактором FVIIa, который находится в кровотоке в количестве, соответствующем приблизительно 1% от общей массы белка FVII. Указанный комплекс прочно прикрепляется к TF-несущей клетке и активирует FX (фактор X) и превращает его в FXa (фактор Xa) и активирует FIX (фактор IX) и превращает его в FIXa (фактор IXa) на поверхности клетки. FXa активирует протромбин и превращает его в тромбин, который в свою очередь активирует FVIII, FV, FXI и FXIII. Кроме того, ограниченное количество тромбина, образованного на этой первоначальной стадии гемостаза, также активирует тромбоциты. После воздействия тромбина на тромбоциты последние изменяют форму и экспонируют на поверхность заряженные фосфолипиды. Активированная поверхность тромбоцита образует матрицу для дальнейшей активации FX и полного образования тромбина. Дальнейшая активация FX на активированной поверхности тромбоцита происходит посредством комплекса FIXa-FVIIIa, образованного на поверхности активированного тромбоцита, и затем FXa превращает протромбин в тромбин, все еще оставаясь на поверхности. Затем тромбин превращает фибриноген в фибрин, который является нерастворимым и который стабилизирует первоначальную «пробку» из тромбоцитов. Этот процесс является обособленным, т.е. локализируется на участке экспрессии или местоположения TF, тем самым снижается риск системной активации свертывающей системы крови. Нерастворимый фибрин, образующий «пробку», кроме того, стабилизируется посредством поперечного связывания фибриновых волокон, катализируемого фактором FXIII.

Фактор FVII существует в плазме, главным образом, в виде одноцепочечного зимогена, который расщепляется посредством фактора FXa на двухцепочечную активированную форму, FVIIa. Рекомбинантный активированный фактор VIIa (rFVIIa) был разработан в качестве прогемостатического агента. Введение rFVIIa приводит к быстрому и высокоэффективному прогемостатическому ответу у больных гемофилией с кровотечениями, которых нельзя лечить с помощью факторов свертывающей системы вследствие образования антител. Кроме того, пациентов, которые страдают от кровотечений, с недостаточностью фактора VII или пациентов, у которых свертывающая система крови находится в норме, но испытывающих чрезмерное кровотечение, можно успешно лечить с помощью фактора FVIIa. При изучении данной проблемы исследователи не сталкивались с неблагоприятными побочными эффектами, обусловленными введением rFVIIa (в частности, возможность возникновения тромбоэмболии).

Дополнительно введенный фактор FVIIa улучшает образование тромбина на активированной поверхности тромбоцита. Такое явление имеет место у больных гемофилией, у которых отсутствует фактор FIX или FVIII и поэтому не осуществляется самый эффективный путь полного образования тромбина. Также в присутствии пониженного количества тромбоцитов или тромбоцитов с нарушением функции добавочный фактор FVIIa увеличивает образование тромбина.

Промышленные препараты рекомбинантного человеческого фактора FVIIa выпускаются под маркой NovoSeven^®(Novo Nordisk A/S, Denmark). Novoseven^® показан для лечения случаев кровотечений у больных гемофилией А и В. Novoseven^® является единственным рекомбинантным фактором FVIIa, доступным на рынке, для эффективного и надежного лечения случаев кровотечения.

Результаты исследований показали, что ингибитор активатора плазминогена (PAI-1) играет важную роль в регуляции протеолиза, опосредованного плазмином. PAI-1, также называемый как ингибитор активатора плазминогена эндотелиального типа (e-PAI), ингибирует активатор плазминогена урокиназного типа (u-PA) и активатор плазминогена тканевого типа (t-PA), и его обычно выделяют из эндотелиальных клеток человека, тромбоцитов человека и клеток гепатомы крысы (НТС). Ингибитор PAI-1 может быть очищен из клеток фибросаркомы человека линии НТ-1080, как описано в патенте США № 6271352, или из эндотелиальных клеток крупного рогатого скота, как описано в публикации van Mourik, J.A. et al. (1984) J. Biol. Chem. 259, 14914-14921. PAI-1 представляет собой одноцепочечный гликопротеин с молекулярным весом 50 кДа (Van Mourik, J.A. et al., J. Biol. Chem. (1984) 259:14914-14921) и является самым эффективным ингибитором, известным из одноцепочечных и двухцепочечных форм tPA и uPA (Lawrence D et al., Eur. J. Biochem. (1989) 186:523-533). PAI-1 также ингибирует плазмин и трипсин (Hekman C.M. et al., Biochemistry (1988) 27:2911-2918) и также ингибирует тромбин и активированный белок С, хотя с намного меньшей эффективностью.

Хорошо известно, что у пациентов, у которых вследствие операции или значительной травмы происходит чрезмерное кровотечение и которые нуждаются в переливании крови, развивается больше осложнений, чем у пациентов, не испытывающих каких-либо кровотечений. Однако умеренные кровотечения, требующие восполнения крови путем введения крови человека или элементов крови (тромбоциты, лейкоциты, произведенные из плазмы концентраты для лечения нарушений свертывания крови и т.д.), могут привести к осложнениям, связанным с риском передачи с кровью вирусов человека (вируса гепатита, ВИЧ, парвовируса и других до сих пор не известных вирусов). Обширные кровотечения, требующие восполнения крови путем значительных переливаний крови, могут привести к развитию множественных органных поражений, включая нарушение функции легких и почек. Как только у пациента начинают развиваться указанные серьезные осложнения, «запускается» каскад реакций, в которые вовлекается ряд цитокинов, а также воспалительные реакции, делая любое лечение крайне затруднительным и, к сожалению, часто неэффективным. Поэтому основной задачей в хирургии, а также в лечении значительных повреждений ткани является предупреждение кровотечений или снижение их до минимума. Для того чтобы избежать кровотечений или снизить их до минимума, важно добиться образования стабильных и твердых гемостатических «пробок», которые с трудом растворяются под действием фибринолитических ферментов. Кроме того, важно достичь быстрого и эффективного образования таких «пробок» или сгустков.

На сегодняшний день в случаях кровотечений у пациентов, включая жертв различных травм и тех, у кого кровотечения связаны с операцией, лечение часто осуществляют посредством нескольких инъекций или инфузий фактора FVIIa, поскольку из-за короткого полупериода существования FVIIa (2,5 часа) может потребоваться более одного введения для поддержания определенного уровня гемостатической способности. Более быстрая остановка кровотечений принесет больше пользы таким пациентам. Поэтому в таких случаях следует снизить количество введений, чтобы остановить кровотечение и поддержать гемостаз.

Европейский патент № 225160 (Novo Nordisk) касается композиций FVIIa и способов лечения расстройств, сопровождающихся кровотечением, которые не вызваны дефектами факторов свертывающей системы крови или ингибиторами факторов свертывающей системы крови.

Европейский патент № 82182 (Baxter Travenol Lab.) касается композиции фактора VIIa, которую используют для восполнения недостаточности факторов свертывающей системы крови или противодействия ингибиторам факторов свертывающей системы крови у пациента.

Международная патентная публикация № WO 93/06855 (Novo Nordisk) касается местного применения FVIIa.

До сих пор в данной области существует необходимость улучшенного лечения пациентов, испытывающих кровотечения, включая пациентов, у которых случаи кровотечения вызваны операцией, травмой или другими видами повреждений ткани; коагулопатией, включая коагулопатию у пациентов, претерпевших многократные переливания крови; обусловлены врожденными или приобретенными расстройствами в системе свертывания крови или расстройствами, сопровождающимися кровотечением, включая гипофункцию печени («заболевание печени»); обусловлены нарушением функции тромбоцитов или снижением количества тромбоцитов; отсутствием существенных «соединений» свертывания крови или наличием аномальных «соединений» свертывания крови (например, тромбоциты или белковый фактор Виллебранда); связаны с повышенным фибринолизом; обусловлены терапией антикоагулянтными средствами или терапией тромболитическими средствами; или трансплантацией стволовой клетки.

В данной области также сохраняется потребность в улучшенном, надежном и широко применяемом способе, повышающем свертывающую способность крови, улучшающем или обеспечивающем образование стабильных гемостатических «пробок», или увеличивающем возможности для благотворного лечения пациента, или приводящем к достижению полного гемостаза у пациентов, в частности, у пациентов со сниженным образованием тромбина. Также имеется потребность в способах, где время остановки кровотечения сокращено.

Краткое описание сущности изобретения

Одной целью настоящего изобретения является создание композиций, которые могут быть эффективно использованы для лечения или профилактики случаев кровотечения и нарушений свертывания крови.

Второй целью настоящего изобретения является создание композиций в виде однократной стандартной лекарственной формы, которая может быть эффективно использована для лечения или профилактики случаев кровотечения или в качестве прокоагулянта. Другой целью настоящего изобретения является создание композиций, создание способов лечения или наборов, применение которых способствует проявлению синергического эффекта.

Другой целью настоящего изобретения является создание композиций, способов лечения и наборов, не имеющих существенных побочных эффектов, таких как высокий уровень системной активации системы свертывания крови.

Другие цели настоящего изобретения будут очевидны при прочтении настоящего описания.

В первом аспекте изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей фактор VII или родственный фактору VII полипептид, и PAI-1 или PAI-1-родственный полипептид.

Во втором аспекте изобретение относится к набору компонентов, предназначенному для лечения случаев кровотечения, содержащему:

a) эффективное количество препарата фактора VII или родственного фактору VII полипептида и фармацевтически приемлемый носитель в первой стандартной лекарственной форме;

b) эффективное количество препарата PAI-1 или родственного PAI-1 полипептида и фармацевтически приемлемый носитель во второй стандартной лекарственной форме; и

с) емкости, вмещающие указанные первую и вторую лекарственную формы.

В третьем аспекте изобретение относится к применению фактора VII или родственного фактору VII полипептида в комбинации с PAI-1 или родственным PAI-1 полипептидом для производства лекарственного средства с целью лечения случаев кровотечения у пациента. В другом аспекте изобретение относится к применению композиции, как описано в любом из пунктов формулы изобретения 1-18, для производства лекарственного средства с целью лечения случаев кровотечения у пациента.

В разных аспектах изобретения лекарственные средства предназначены для снижения времени, необходимого для достижения полного гемостаза, для снижения времени, необходимого для сохранения гемостаза, снижения времени свертывания крови, увеличения времени фибринолиза и повышения прочности сгустка.

В различных аспектах лекарственные средства предназначены для лечения пациентов, испытывающих кровотечения вследствие операции, травмы или других типов повреждения ткани; коагулопатии, включающей коагулопатию у пациентов, претерпевших многократные переливания крови; врожденных или приобретенных расстройств в системе свертывания крови или расстройств, сопровождающихся кровотечением, включающих гипофункцию печени («заболевание печени»); нарушения функции тромбоцитов или снижения количества тромбоцитов; отсутствия существенных «соединений» системы свертывания крови или наличия аномальных «соединений» системы свертывания крови (например, тромбоциты или белковый фактор Виллебранда); повышенного фибринолиза; терапии антикоагулянтными средствами и терапии тромболитическими средствами; трансплантации стволовой клетки. В одной серии аспектов кровотечения происходят в органах, таких как мозг, область внутреннего уха, глаза, печень, легкие, опухолевая ткань, желудочно-кишечный тракт; в другой серии аспектов кровотечение является диффузным кровотечением, таким как при геморрагическом гастрите и профузное маточное кровотечение. В другой серии аспектов случаи кровотечения связаны с операцией или травмой у пациентов, у которых наблюдаются острые гемартрозы (кровоизлияния в суставы), хроническая гемофилическая артропатия, гематомы (например, мышечные, забрюшинные, подъязычные и заглоточные), кровотечения в другой ткани, гематурия (кровотечение из мочевыводящих путей), внутримозговое кровоизлияние, у пациентов, которые претерпели операцию (например, гепатэктомия), удаление зуба и желудочно-кишечные кровоизлияния (например, кровотечения в UGI). В одном аспекте лекарственное средство предназначено для лечения случаев кровотечения вследствие травмы, операции или пониженного числа тромбоцитов или сниженной активности тромбоцитов у пациента.

В другом аспекте изобретение относится к способу лечения случаев кровотечения у пациента, способу, включающему в себя введение пациенту при необходимости некоторого количества первого препарата фактора VII или родственного фактору VII полипептида и некоторого количества второго препарата PAI-1 или родственного PAI-1 полипептида, где количества первого и второго препарата, вместе взятые, являются эффективными для лечения кровотечений.

В другом аспекте изобретение относится к способу снижения времени свертывания крови у пациента, способу, включающему в себя введение пациенту при необходимости некоторого количества первого препарата фактора VII или родственного фактору VII полипептида и некоторого количества второго препарата PAI-1 или родственного PAI-1 полипептида, где количества первого и второго препарата, вместе взятые, являются эффективными для снижения времени свертывания крови.

В другом аспекте изобретение относится к способу, способствующему повышению гемостаза, способу, включающему в себя введение пациенту при необходимости некоторого количества первого препарата фактора VII или родственного фактору VII полипептида и некоторого количества второго препарата PAI-1 или родственного PAI-1 полипептида, где количества первого и второго препарата, вместе взятые, являются эффективными для повышения гемостаза.

В другом аспекте изобретение относится к способу, позволяющему увеличить период времени фибринолиза у пациента, способу, включающему в себя введение пациенту при необходимости некоторого количества первого препарата фактора VII или родственного фактору VII полипептида и некоторого количества второго препарата PAI-1 или родственного PAI-1 полипептида, где количества первого и второго препарата, вместе взятые, являются эффективными для увеличения времени фибринолиза.

В другом аспекте изобретение относится к способу повышения прочности сгустка у пациента, способу, включающему в себя введение пациенту при необходимости некоторого количества первого препарата фактора VII или родственного фактору VII полипептида и некоторого количества второго препарата PAI-1 или родственного PAI-1 полипептида, где количества первого и второго препарата, вместе взятые, являются эффективными для повышения прочности сгустка.

В одной серии аспектов способов фактор VII или родственный фактору VII полипептид и PAI-1 или PAI-1-родственный полипептид вводят в виде однократной стандартной лекарственной формы.

В другой серии аспектов фактор VII или родственный фактору VII полипептид и PAI-1 или PAI-1-родственный полипептид вводят в виде первой стандартной лекарственной формы, содержащей препарат фактора VII или родственного фактору VII полипептида, и второй стандартной лекарственной формы, содержащей препарат PAI-1 или родственного PAI-1 полипептида. В серии аспектов изобретения первую стандартную лекарственную форму и вторую стандартную лекарственную форму вводят раздельно с интервалом времени не более 15 минут.

В другом аспекте изобретение относится к набору, предназначенному для лечения случаев кровотечения, включающему в себя:

d) эффективное количество фактора VII или родственного фактору VII полипептида и эффективное количество PAI-1 или родственного PAI-1 полипептида и фармацевтически приемлемый носитель в однократной стандартной лекарственной форме; и

е) емкости, вмещающие указанную однократную, стандартную лекарственную форму.

В одной серии аспектов изобретения фактором VII или родственным фактору VII полипептидом является родственный фактору VII полипептид. В одной серии аспектов изобретения родственный фактору VII полипептид представляет собой вариант аминокислотной последовательности фактора VII. В одном аспекте соотношение между активностью родственного фактору VII полипептида и активностью нативного фактора VIIa человека (FVIIa дикого типа) составляет, по крайней мере, приблизительно 1,25, причем приведенные данные получены в результате исследований с помощью «анализа посредством гидролиза in vitro», как описано в настоящем тексте.

В одной серии аспектов изобретения фактором VII или родственным фактору VII полипептидом является фактор VII. В одном аспекте указанным фактором VII является фактор VII человека. В одном аспекте фактор VII является фактором VII крупного рогатого скота, свиньи, собаки, лошади, мыши или лосося. В другом аспекте фактор VII является рекомбинантным фактором. В другом аспекте фактор VII получен из плазмы. В предпочтительном аспекте фактор VII является рекомбинантным фактором VII человека. В одной серии аспектов изобретения фактор VII или родственный фактору VII полипептид находится в его активированной форме. В одном предпочтительном аспекте изобретения фактор VII является рекомбинантным фактором VIIa человека.

В одной серии аспектов изобретения PAI-1 или родственным PAI-1 полипептидом является PAI-1-родственный полипептид. В одном аспекте PAI-1-родственный полипептид представляет собой вариант аминокислотной последовательности PAI-1. В одном аспекте соотношение между активностью указанного родственного PAI-1 полипептида и активностью нативного PAI-1 плазмы человека (PAI-1 дикого типа) составляет, по крайней мере, приблизительно 1,25, причем приведенные данные получены в результате исследований с помощью «анализа PAI-1», как описано в настоящем тексте. В одном аспекте PAI-1 или родственным PAI-1 полипептидом является полипептид PAI-1. В одном аспекте PAI-1 является PAI-1 человека. В одном аспекте PAI-1 является PAI-1 крупного рогатого скота, свиньи, собаки, лошади, мыши или крысы. В предпочтительном аспекте PAI-1 получают рекомбинантным способом. В одном аспекте PAI-1 получают из тромбоцитов; в другом аспекте его получают из эндотелиальных клеток. В предпочтительном аспекте PAI-1 является рекомбинантным PAI-1 человека. В одном аспекте PAI-1-родственный полипептид представляет собой фрагмент PAI-1. В одном аспекте PAI-1-родственный полипептид является гибридным полипептидом PAI-1, например гибридным полипептидом PAI-1, например гибридом свиньи/человека.

В одном аспекте фактор VII или родственный фактору VII полипептид и PAI-1 или PAI-1-родственный полипептид присутствуют в соотношении по массе приблизительно от 100:1 до 1:100 (мас./мас. фактор VII:PAI-1).

В одном аспекте родственные фактору VII полипептиды представляют собой варианты аминокислотной последовательности, в которой не более чем 20 аминокислот заменены, удалены или вставлены по сравнению с фактором VII дикого типа (т.е. полипептид с аминокислотной последовательностью, описанной в патенте США № 4784950). В другом аспекте варианты фактора VII имеют не более чем 15 аминокислот, которые заменены, удалены или вставлены; в других аспектах варианты фактора VII имеют не более чем 10 аминокислот, таких как 8, 6, 5 или 3 аминокислоты, которые заменены, удалены или вставлены по сравнению с фактором VII дикого типа. В одном аспекте варианты фактора VII выбирают из перечня L305V-FVIIa, L305V/M306D/D309S-FVIIa, L305I-FVIIa, L305T-FVIIa, F374P-FVIIa, V158T/M298Q-FVIIa, V158D/E296V/M298Q-FVIIa, K337A-FVIIa, M298Q-FVIIa, V158D/M298Q-FVIIa, L305V/K337A-FVIIa, V158D/E296V/M298Q/L305V-FVIIa, V158D/E296V/M298Q/K337A-FVIIa, V158D/E296V/M298Q/L305V/K337A-FVIIa, K157A-FVII, E296V-FVII, E296V/M298Q-FVII, V158D/E296V-FVII, V158D/M298K-FVII и S336G-FVII.

В другом аспекте родственные фактору VII полипептиды обладают повышенной активностью, независимой от тканевого фактора, по сравнению с активностью нативного фактора VIIa свертывания крови человека. В другом аспекте повышенная активность не сопровождается изменениями в субстратной специфичности. В другом аспекте изобретения связывание полипептидов, родственных фактору VII, с тканевым фактором не ухудшается, и родственные фактору VII полипептиды проявляют, по крайней мере, активность фактора VIIa дикого типа при связывании с тканевым фактором.

В предпочтительном аспекте фактор VII или родственный фактору VII полипептид и PAI-1 или PAI-1-родственный полипептид представляют собой рекомбинантный фактор VIIa человека и рекомбинантный PAI-1 человека.

В одном аспекте время свертывания крови у млекопитающих снижается. В другом аспекте гемостаз в крови млекопитающих усиливается. В другом аспекте время фибринолиза в крови млекопитающих увеличивается. В другом аспекте прочность сгустка в крови млекопитающих повышается. В одном аспекте кровью млекопитающих является кровь человека. В другом аспекте кровью млекопитающих является кровь человека в норме; в одном аспекте кровь представляет собой кровь пациента, укоторого образование тромбина снижено. В одном аспекте кровь представляет собой кровь пациента с недостаточностью одного или более факторов свертывающей системы; в другом аспекте кровь представляет собой кровь пациента, содержащую ингибиторы одного или более факторов свертывающей системы; в одном аспекте кровь представляет собой кровь пациента, содержащую сниженную концентрацию фибриногена; в одном аспекте кровь представляет собой кровь человека с недостаточностью PAI-1. В одной серии аспектов кровью является плазма.

В одном аспекте изобретения фактор VII или родственный фактору VII полипептид и PAI-1 или PAI-1-родственный полипептид являются единственными гемостатическими средствами, содержащимися в композиции. В другом аспекте фактор VII или родственный фактору VII полипептид и PAI-1 или PAI-1-родственный полипептид являются единственными активными гемостатическими средствами, содержащимися в композиции. В другом аспекте фактор VII или родственный фактору VII полипептид и PAI-1 или PAI-1-родственный полипептид являются единственными факторами свертывания крови, вводимыми пациенту. В одном аспекте изобретения фактор VII или родственный фактору VII полипептид и PAI-1 или PAI-1-родственный полипептид являются единственными активными средствами, вводимыми больному. В одном аспекте композиция, по существу, лишена тромбина или протромбина; в другом аспекте композиция, по существу, лишена FX; в другом аспекте композиция, по существу, лишена FXa.

В другом аспекте фармацевтическую композицию получают для внутривенного введения, предпочтительно в виде инъекции или инфузии, в частности, инъекции. В одном аспекте композиция содержит по крайней мере один фармацевтически приемлемый наполнитель или носитель.

В одном аспекте изобретения композиция находится в виде однократной стандартной лекарственной формы, где однократная стандартная лекарственная форма содержит оба фактора свертывания. В одном аспекте изобретения композиция находится в виде набора компонентов, содержащего препарат фактора VII или родственного фактору VII полипептида как первую стандартную лекарственную форму и препарат PAI-1 или родственного PAI-1 полипептида как вторую стандартную лекарственную форму, и содержащего емкости, вмещающие указанную первую и вторую стандартную лекарственную форму. В одном аспекте композиция или набор, по необходимости, также содержит инструкции для введения композиции или отдельных компонентов, соответственно.

В одном аспекте изобретения фактор VII или родственный фактору VII полипептид и PAI-1 или PAI-1-родственный полипептид вводят в виде однократной стандартной лекарственной формы. В одном аспекте изобретения фактор VII или родственный фактору VII полипептид и PAI-1 или PAI-1-родственный полипептид вводят в виде первой стандартной лекарственной формы, содержащей препарат фактора VII или родственного фактору VII полипептида, и второй стандартной лекарственной формы, содержащей препарат PAI-1 или родственного PAI-1 полипептида.

В одном аспекте изобретения фактор VII или родственный фактору VII полипептид и PAI-1 или PAI-1-родственный полипептид вводят одновременно. В другом аспекте фактор VII или родственный фактору VII полипептид и PAI-1 или PAI-1-родственный полипептид вводят последовательно. В одном аспекте фактор VII или родственный фактору VII полипептид и PAI-1 или PAI-1-родственный полипептид вводят раздельно с интервалом времени не более 15 минут, предпочтительно 10, более предпочтительно 5, наиболее предпочтительно 2 минуты. В одном аспекте фактор VII или родственный фактору VII полипептид и PAI-1 или PAI-1-родственный полипептид вводят раздельно с интервалом времени вплоть до 2 часов, предпочтительно от 1 до 2 часов, более предпочтительно вплоть до 1 часа, более предпочтительно от 30 минут до 1 часа, более предпочтительно вплоть до 30 минут, наиболее предпочтительно от 15 до 30 минут.

В одном аспекте эффективное количество фактора VII или родственного фактору VII полипептида составляет количество от приблизительно 0,05 мг/день до приблизительно 500 мг/день (пациент весом 70 кг). В одном аспекте эффективное количество препарата PAI-1 или родственного PAI-1 полипептида составляет приблизительно от 0,01 мг/день до приблизительно 500 мг/день (пациент весом 70 кг).

В одном аспекте фактор VII или родственный фактору VII полипептид и PAI-1 или PAI-1-родственный полипептид присутствуют в соотношении по массе приблизительно от 100:1 до 1:100 (мас./мас. фактор VII: PAI-1).

В одном аспекте настоящего изобретения фармацевтическая композиция представлена в виде однократной стандартной лекарственной формы и состоит в основном из препарата фактора VII или родственного фактору VII полипептида и препарата PAI-1 или родственного PAI-1 полипептида и одного или более компонентов, выбранных из перечня фармацевтически приемлемых носителей, стабилизаторов, детергентов, нейтральных солей, антиоксидантов, консервантов и ингибиторов протеаз.

В другом аспекте настоящего изобретения фармацевтическая композиция представлена в виде набора компонентов с первой стандартной лекарственной формой, состоящей в основном из препарата фактора VII или родственного фактору VII полипептида и одного или более компонентов, выбранных из перечня фармацевтически приемлемых носителей, стабилизаторов, детергентов, нейтральных солей, антиоксидантов, консервантов и ингибиторов протеаз; и со второй стандартной лекарственной формой, состоящей в основном из препарата PAI-1 или препарата родственного PAI-1 полипептида и одного или более компонентов, выбранных из перечня фармацевтически приемлемых носителей, стабилизаторов, детергентов, нейтральных солей, антиоксидантов, консервантов и ингибиторов протеаз.

В следующем аспекте пациентом является человек; в другом аспекте у пациента отмечается снижение образования тромбина; в одном аспекте у пациента наблюдается пониженная концентрация фибриногена в плазме (например, у пациента, претерпевшего многократные переливания крови); в одном аспекте у пациента наблюдается пониженная концентрация фактора VIII или FIX в плазме.

В другом аспекте изобретение касается способа, разработанного для повышения гемостаза у пациента с синдромом, связанным с фактором VII, сравненного со способом лечения пациента посредством фактора VII как единственного свертывающего белка, способа, включающего в себя введение пациенту при необходимости некоторого количества первого препарата фактора VII или родственного фактору VII полипептида и некоторого количества второго препарата PAI-1 или родственного PAI-1 полипептида, где количества первого и второго препарата, вместе взятые, способствуют эффективному повышению гемостаза.

В другом аспекте изобретение касается способа, разработанного для повышения образования тромбина у пациента, способа, включающего в себя введение пациенту при необходимости некоторого количества первого препарата фактора VII или родственного фактору VII препарата и некоторого количества второго препарата PAI-1 или родственного PAI-1 полипептида, где количества первого и второго препарата, вместе взятые, эффективно повышают образование тромбина.

В другом аспекте изобретение касается способа, разработанного для повышения образования тромбина у пациента, страдающего синдромом, связанным с фактором VII, сравненного со способом лечения пациента посредством фактора VII как единственного белка свертывания крови, способа, включающего в себя введение пациенту при необходимости некоторого количества первого препарата фактора VII или родственного фактору VII полипептида и некоторого количества второго препарата PAI-1 или родственного PAI-1 полипептида, где количества первого и второго препарата, вместе взятые, способствуют эффективному повышению образования тромбина.

В другом аспекте изобретение касается способа, разработанного с целью уменьшения числа введений белкового фактора свертывания, требуемых для достижения гемостаза у пациента, страдающего синдромом, связанным с фактором VII, по сравнению с количеством введений, требуемых в тех случаях, когда фактор VII вводят пациенту в качестве единственного белкового фактора свертывания, способа, включающего в себя введение пациенту при необходимости некоторого количества первого препарата фактора VII или родственного фактору VII полипептида и некоторого количества второго препарата PAI-1 или родственного PAI-1 полипептида, где первое и второе количество вместе способствуют эффективному снижению числа введений белкового фактора свертывания.

В другом аспекте изобретение касается способа лечения кровотечений у пациента, страдающего синдромом, связанным с фактором VII, способа, включающего в себя введение пациенту при необходимости некоторого количества первого препарата фактора VII или родственного фактору VII полипептида и некоторого количества второго препарата PAI-1 или родственного PAI-1 полипептида, где количества первого и второго препарата, вместе взятые, проявляют эффективность в лечении кровотечений.

В одном аспекте фактор VII является рекомбинантным фактором VIIa человека (rFVIIa). В другом аспекте rFVIIa является NovoSeven^® (Novo Nordisk A/S, Bagsvaerd, Denmark).

В другом аспекте изобретение относится к применению фактора VII или родственного фактору VII полипептида в комбинации с PAI-1 для производства лекарственного средства, способствующего повышению образования фибринового сгустка в плазме млекопитающих.

В другом аспекте изобретение относится к способу, направленному на повышение образования фибринового сгустка у пациента, способу, который включает в себя введение пациенту при необходимости некоторого количества первого препарата фактора VII или родственного фактору VII полипептида и некоторого количества второго препарата PAI-1 или родственного PAI-1 полипептида, где количества первого и второго препарата, вместе взятые, проявляют эффективность в лечении кровотечений.

Перечень фигур

Фигура 1: Добавление FVIIa привело к дозо-зависимому увеличению периода времени фибринолиза. Указанный эффект был оптимальным при 10 нМ FVIIa.

Фигура 2: В присутствии 10 нМ FVIIa, добавление PAI-1 привело к дальнейшему увеличению периода времени фибринолиза. Эффект был дозозависимым и оптимальным при 10 нМ PAI-1.

Фигура 3: Тромбоэластографию (roTEG) применяли для анализа действия комбинации FVIIa и PAI-1 на максимальную прочность сгустка (MCF), а также анализа устойчивости сгустков к растворению, опосредованному t-PA. В плазме крови человека в норме добавление PAI-1 (30 нМ) не приводило к изменению MCF, но увеличивало полупериод растворения сгустка до 16,1 мин. Шкала времени дана в минутах.

Фигура 4: Тромбоэластографию (roTEG) применяли для анализа действия комбинации FVIIa и PAI-1 на максимальную прочность сгустка (MCF), а также анализа устойчивости сгустков к растворению, опосредованному t-PA. В плазме крови при гемофилии добавление PAI-1 только приводило к повышению MCF до 5 мм и увеличивало полупериод растворения сгустка до 32,4 мин. Шкала времени дана в минутах.

Подробное описание изобретения

У пациентов, которые претерпевают обильные кровотечения в связи с операцией или большой травмой и которым вследствие кровопотери требуются переливания крови, развиваются осложнения в большей степени, чем у пациентов, не имеющих кровотечения. Однако умеренные кровотечения могут привести к осложнениям, если в случаях таких кровотечений требуется введение крови человека или элементов крови (тромбоцитов, лейкоцитов, концентратов, полученных из плазмы крови, для лечения нарушений в системе свертывания крови), поскольку переливания крови связаны с риском передачи с кровью вирусов человека (например, вируса гепатита, ВИЧ, парвовируса или других не известных в настоящее время вирусов), а также невирусных патогенов. Чрезмерные кровотечения, требующие больших переливаний крови, могут привести к развитию многообразной органной недостаточности, включая нарушение функции легких и почек. Как только у пациента развиваются эти серьезные осложнения, «запускается» каскад реакций, вовлекающих ряд цитокинов и воспалительных реакций, крайне затрудняющих любое лечение и делающих его, к сожалению, часто неэффективным. Больной, претерпевший большую потерю крови, становится клинически неустойчивым. Такие больные находятся в зоне риска появления мерцательной аритмии, которая может привести к фатальной остановки сердечной деятельности; нарушению функции почек; или выходу жидкости в легкие (так называемый «отек легких» или ARDS). Поэтому основной задачей в хирургии, а также в лечении значительных повреждений ткани является предотвращение сильного кровотечения или снижение его до минимума. Для того чтобы избежать нежелательных кровотечений или снизить их до минимума, необходимо добиться образования стабильных и твердых гемостатических «пробок», которые с трудом растворяются при действии фибринолитических ферментов. Кроме того, важно достичь быстрого и эффективного образования таких «пробок» или сгустков.

У пациентов с тромбоцитопенией (пониженное число тромбоцитов или сниженная активность тромбоцитов) снижена способность к образованию тромбина, а также наблюдается недостаточная стабилизация фибриновых «пробок», что приводит к образованию гемостатических «пробок», подвергаемых преждевременному растворению. Кроме того, пациенты, перенесшие существенную травму или повреждение органа, и которые в результате претерпевают многократные переливания крови, часто имеют пониженное число тромбоцитов, а также пониженные уровни фибриногена, фактора VIII и других белков свертывающей системы. У таких пациентов наблюдается нарушение (или снижение) в образовании тромбина. Поэтому такие пациенты имеют несовершенный, или менее эффективный, гемостаз, приводящий к образованию фибриновых «пробок», которые легко и преждевременно растворяются под действием протеолитических ферментов, которые, кроме того, в значительной степени высвобождаются в случаях, характеризующихся существенной травмой и повреждением органа.

Кровотечения в тканях также могут привести к образованию гематом. Размеры (в частности, внутричерепных и спинальных) гематом тесно коррелируют со степ