Способ получения богатой тромбоцитами аутоплазмы крови

Способ получения богатой тромбоцитами аутоплазмы крови

Реферат

Изобретение относится к медицине, в частности к хирургии, травматологии, ортопедии.

Известен способ получения плазмы крови путем введения в кровь стабилизатора с последующим отделением плазмы, где в кровь после стабилизации вводят смесь метиловых эфиров 15-фтор-15-дезоксипростагландина E₂ и 15-фтор-15-дезокси-11-эпи-простагландина E₂ до конечной концентрации каждого из них 5-10 г/мл (прототип). Описание изобретения к а.с. №902355, МПК A61K 35/16, приоритет 26.06.80 г., опубл. в Бюл. №39, от 23.10.82 г., авт. К.М.Лакин, В.А.Макаров, В.В.Безуглов, Л.Д.Бергельсон.

Недостатки: использование дорогостоящих химически активных чужеродных веществ, что приводит к значительному удорожанию процесса и к ухудшению местных тканевых реакций репарации. Полученная обогащенная тромбоцитами плазма, ввиду наличия в ней химически активных веществ, малопригодна для оптимизации процессов регенерации трубчатой кости.

Наиболее близким решением из известных является описание, взятое из Интернета: http://www.dental-azbuca.ru/articles/prp_last/.

Богатую тромбоцитами плазму (БоТП) получали с помощью клеточного сепаратора Electro Medics 500 (Medtronics) непосредственно в операционной при заборе кости. При использовании данного клеточного сепаратора проводили забор 450-500 мл аутогенной крови через центральный венозный катетер, который устанавливали во время операции. Кровь забирали со скоростью 50 мл/мин. Скорость вращения центрифуги равна 5600 об/мин. При заборе крови для предупреждения свертывания к ней автоматически добавляли консервант (цитро-глюкофосфат) в соотношении 1 мл консерванта на 5 мл крови. В центрифуге кровь разделяется на три основные составляющие: эритроциты, БоТП и обедненную тромбоцитами плазму. Это возможно благодаря их различной плотности. Сепаратор отделяет составляющее в порядке от наименее плотных к наиболее плотным. Так, первой отделяется обедненная тромбоцитами плазма (около 200 мл), затем БоТП (около 180 мл). После того как отделяется обедненная тромбоцитами плазма, скорость вращения, центрифуги снижается до 2400 об/мин для более точного разделения БоТП и эритроцитов. По данным авторов, которые подтверждают Reeder и соавтор /4/, самые молодые и наиболее активные тромбоциты тяжелее старых и поэтому смешиваются с наиболее легкими эритроцитами. Благодаря наличию в этой фракции эритроцитов БоТП приобретает красноватую окраску, иначе она была бы соломенно-желтой. Вся процедура длится 20-30 мин и обычно проходит во время забора аутогенной кости или подготовки принимающего ложа, а потому не влияет на общее время операции. Клеточный сепаратор компании Medtronics есть в большинстве операционных США, где проводятся обширные ортопедические и кардиохирургические вмешательства, поэтому дополнительные расходы включали в себя только одноразовые трубки, венозный катетер и камеру для крови, что в сумме составило около 300$.

Перед применением БоТП в ней необходимо инициировать процесс коагуляции смесью из 10 мл 10%-ного раствора хлорида кальция (CaCl2) и 10000 единиц бычьего тромбина (Gentrac) (здесь и далее по тексту эта смесь будет называться прокоагулянтом), для активации каждой новой порции БоТП необходимо использовать новый шприц. Это необходимо для предотвращения попадания остатков прокоагулянта из шприца в камеру для БоТП, поскольку даже незначительное его количество может привести к преждевременной коагуляции всего объема БоТП. В шприц набирают 6 мл БоТП, 1 мл прокоагулянта и 1 мл воздуха. Воздух необходим для перемешивания в шприце БоТП и прокоагулянта. Шприц прокачивают 6-10 сек до начала свертывания, а затем его содержимое смешивают с костным материалом. При смешивании БоТП с костным материалом фибрин склеивает его частички, что предотвращает их миграцию. Кроме того, полученный конгломерант пластичен - ему можно легко придать нужную форму. Известно также, что фибриновая сеть улучшает остеондуктивные свойства костного материала. Количество тромбоцитов в крови пациентов в среднем составило 232 тыс./мкл и находилась в пределах от 3 до 523 тыс./мкл.

Концентрация тромбоцитов в БоТП составила в среднем 785 тыс./мкл и находилась в пределах от 595 до 1100 тыс./мкл. Это означает, что использованный метод секвестрации тромбоцитов позволил увеличить их концентрацию на 338% относительно исходного уровня.

Недостатки: большая длительность процесса изготовления БоТП, необходимость использования дорогостоящего импортного оборудования.

Технический результат: повышение производительности изготовления БоТП за счет сокращения времени на изготовление его, снижение себестоимости способа за счет исключения дорогостоящего оборудования, что достигается посредством того, что в способе получения богатой тромбоцитами аутоплазмы крови, после введения в аутогенную кровь стабилизатора, ее центрифугируют и добавляют прокоагулянт, причем центрифугирование производят со скоростью, равной 1000-2300 об/мин, в течение 6-8 мин. Производительность по сравнению с прототипом увеличивается в два раза за счет того, что центрифугирование производят по времени за 6-8 мин, т.к. центрифугируют за один этап (в прототипе за два этапа), и более низкой скорости - за 1000-2300 об/мин (в прототипе за 2400-5600 об/мин).

Время 6-8мин выбрано опытным путем, так за 5 мин не происходит разделения клеточных фракций крови, а свыше 8 мин начинается выраженное разрушение клеточных элементов, что также приводит к ухудшению качества БоТП, снижение количества оборотов центрифугирования дает возможность применения способа на отечественном оборудовании, которое имеется во всех городских и районных медицинских учреждениях здравоохранения.

Выбор скорости 1000-2300 об/мин обусловлен тем, что, если взять заграничный предел скорости 900 об/мин, то при этой скорости невозможно получение качественной (пригодной) БоТП, а при скорости 2400 об/мин положительный результат возможно получить только на дорогостоящем оборудовании, но это очень дорого. Все данные получены и выбраны опытным путем.

Данный способ может быть применен в любом медицинском учреждении, имеющем обычную лабораторную центрифугу, а остальные манипуляции производятся вручную, т.о. исключается дорогостоящее импортное оборудование и уменьшается себестоимость в 60 раз (с 300$ до 5$).

Пример осуществления способа.

Больной К., ликвидатор аварии на ЧАЭС в 1986 г., прооперирован в травматологическом отделении спустя 10 дней после травмы с диагнозом: открытый оскольчатый внутрисуставный перелом нижней трети (н/з) правой голени со значительным смещением отломков и дефектом трубчатой кости.

После металлоостеосинтеза по AO/AsiF произведена пластика дефекта большеберцовой кости БоТП объемом ≈70 мл, получена интраоперационно, путем забора аутогенной крови из периферической вены в количестве ≈400 мл. После добавления к ней консерванта - 3.8% нитрата натрия в пропорции 1:10 аутогенная кровь была центрифугирована при скорости 1200 об/мин, при комнатной температуре в течение 7 мин. Нижний слой полученной аутоплазмы объемом ≈60 мл, извлеченный шприцем, был смешан с 5000 ЕД протромбина и 10% раствора CaCl₂ (хлорида кальция).

После экспозиции в течении 5 мин при комнатной температуре полученная БоТП в количестве 70 мл, была введена в зону дефекта большеберцовой кости. Рана промыта, послойно ушита. Асептическая повязка. Гипсовая лонгета наложена на 10 дней, до снятия швов. Ранняя функциональная нагрузка через 7 дней. Через шесть недель видимая рентгенологическая мозоль. Ограниченная нагрузка через восемь недель. Движение в голеностопном суставе практически в полном объеме.

Технико-экономические показатели.

Весь процесс получения богатой тромбоцитами аутоплазмы крови по сравнении с прототипом в два раза быстрее, а себестоимость его уменьшилась многократно.

Способ получения богатой тромбоцитами аутоплазмы крови для регенерации трубчатой кости, заключающийся во введении в аутогенную кровь стабилизатора, ее центрифугировании, добавлении прокоагулянта, содержащего 10%-ный раствор CaCl₂ и фактора свертывания крови, отличающийся тем, что центрифугирирование проводят при комнатной температуре в течение 6-8 мин со скоростью 1000-2300 об/мин, а затем в качестве фактора свертывания крови добавляют 5000 ЕД протромбина.