Способ оценки степени тяжести атопического дерматита

Способ оценки степени тяжести атопического дерматита

Реферат

Изобретение относится к области медицины, конкретно к аллергологии, и касается способов оценки степени тяжести атопического дерматита.

Известен способ оценки степени тяжести атопического дерматита у детей [1], основанный на биохимическом исследовании липидных фракций кожи - фосфолипидов (ФЛ), холестерина (ХС), жирных кислот (ЖК), триацилглицеридов (ТАГ) и эфиров холестерина (ЭХС). Способ включает смыв с пораженного участка кожи поверхностной липидной пленки (ПЛП), выделение нейтральных липидов, определение их фракций методом тонкослойной хроматографии и оценку степени тяжести атопического дерматита по процентному содержанию отдельных фракций липидов.

Недостатком способа является оценка степени тяжести заболевания только по локальным проявлениям в коже, тогда как заболевание атопическим дерматитом касается всего организма, и для объективности оценки требуется сочетание параметров как местного (липидов кожи), так и интегрального характера (липидов плазмы крови).

Задача изобретения - повышение информативности и точности способа оценки степени тяжести атопического дерматита.

Задача решается тем, что в способе оценки степени тяжести атопического дерматита, включающем определение состава липидов поверхностной липидной пленки кожи, согласно изобретению дополнительно определяют состав липидов плазмы крови. Полученные показатели липидов в коже и плазме крови оценивают в баллах, причем значение показателя ФЛ крови 31-45% оценивают как 1 балл, 22-30% - 2 балла; значение ФЛ кожи 7-10% - 1 балл, 11-18% - 2 балла; значение ХС крови 5-15% - 1 балл, 16-35% - 2 балла; значение ХС кожи 18-21% - 1 балл, 22-35% - 2 балла; значение ЖК крови 11-15% - 1 балл, 8-10% - 2 балла; значение ЖК кожи 11-13% - 1 балл, 14-18% - 2 балла; значение ТАГ крови 7-9% - 1 балл, 10-13% - 2 балла; значение ТАГ кожи 15-19% - 1 балл, 8-14% - 2 балла; значение ЭХС крови 30-43% - 1 балл, 20-29% - 2 балла; значение ЭХС кожи 35-42% - 1 балл, 24-34% - 2 балла. О тяжести атонического дерматита судят по полученной сумме баллов: при сумме баллов от 10 до 14 диагностируют легкую степень, а при сумме баллов от 15 до 20 - тяжелую степень атопического дерматита.

Способ осуществляют следующим образом.

1. Определение состава липидов плазмы крови. Проводят экстракцию липидов плазмы крови: 150 мкл плазмы помещают в пробирку с резиновой пробкой, обернутой фольгой; добавляют 2,4 мл хлороформметаноловой смеси в соотношении 2:1 и интенсивно встряхивают 30 секунд. Через 5 минут добавляют 0,5 мл подкисленной воды (0,5 мл концентрированной серной кислоты на 1 л дистиллированной воды). Пробирку 20 раз переводят из вертикального положения в горизонтальное без встряхивания. Пробу оставляют на 12 часов до полного расслоения на две фазы. Нижнюю хлороформенную фазу, содержащую липидный экстракт, отбирают и 750 мкл экстракта переносят в пробирку, добавляют 800 мкл изопропанола и интенсивно встряхивают в течение 20 минут, после чего пробу отстаивают 20 минут, добавляют 1600 мкл хлороформа и снова интенсивно встряхивают в течение 5 минут. Непосредственно перед нанесением на пластины липидный экстракт упаривают на водяной бане под вытяжной системой при температуре 70°С до полного испарения хлороформа. Подготовка пластин для хроматографии: используют промышленно изготовленные пластины с нанесенным на них слоем силикагеля («Silufol»). Перед нанесением образца их активируют в сухожаровом шкафу при температуре 100°С в течение 1 часа. Подготовка элюентных камер: за 5 часов до помещения пластины в камеру их заполняют системами элюентов: гексан - диэтиловый эфир - ледяная уксусная кислота в соотношении 90:30:0.6. Хроматографирование в системе элюентов: пластины помещают в насыщенные соответствующим элюентом камеры вертикально с минимальным углом наклона. Фракции выявляют путем мелкодисперсного опрыскивания высушенных под вытяжной системой пластин 5%-ным раствором фосфорно-молибденовой кислоты в 96%-ным растворе этанола с последующим нагреванием при 100°С в течение 5 минут. Хроматограммы денситометрируют в отраженном свете на денситометре "Chromoscan-200" (Германия). Определяют состав нейтральных липидов - общие фосфолипиды (ФЛ), свободный холестерин (СХ), свободные жирные кислоты (ЖК), триацилглицериды (ТАГ), эфиры холестерина (ЭХС). Расчет относительного содержания фракций проводят, исходя из суммы площадей всех пиков на денситограммах. Результат выражают в процентах от общего количества липидов, которое берут за 100%.

2. Определение состава липидов в ПЛП кожи проводят по известному способу [1].

С помощью ватного тампона, смоченного этиловым спиртом (96%), забирают пробу с пораженного участка кожи путем смыва с кожи ПЛП. Нейтральные липиды экстрагируют хлороформметанольной смесью по Фолчу: к пробе добавляют 1 мл метанола и оставляют на 10 минут, после этого добавляют 2 мл хлороформа и оставляют также на 10 минут. Затем центрифугируют 10 минут при 3000 об/мин, после центрифугирования собирают 2,5 мл надосадка. В пробу добавляют 1/5 объема 50 мМ раствора хлорида кальция (CaCl₂). Через 15 минут эту смесь центрифугируют при 1500 об/мин в течение 5 минут.

Далее удаляют верхнюю фазу, а нижнюю выпаривают на водяной бане до образования липидной капли. Разделение нейтральных липидов (ФЛ, ХС, ЖК, ТАГ, ЭХС) проводят с помощью тонкослойной хроматографии в системе растворителей гексан/диэтиловый эфир/метанол/ледяная уксусная кислота в соотношении 90:20:3:2 соответственно. Разделение липидов проводят на пластинках "Silufol". Результат выражают в процентах от общего количества липидов, которое берут за 100%.

Оценку полученных показателей липидов в коже и крови проводят по оценочной шкале:

Исследуемый показатель	Величина показателя, %	Баллы тяжести
ФЛ крови	31-45	1
	22-30	2
ФЛ кожи	7-10	1
	11-18	2
ХС крови	5-15	1
	16-35	2
ХС кожи	18-21	1
	22-35	2
ЖК крови	11-15	1
	8-10	2
ЖК кожи	11-13	1
	14-18	2
ТАГ крови	7-9	1
	10-13	2
ТАГ кожи	15-19	1
	8-14	2
ЭХС крови	30-43	1
	20-29	2
ЭХС кожи	35-42	1
	24-34	2

При сумме баллов от 10 до 14 диагностируют легкую степень, а при сумме баллов от 15 до 20 - тяжелую степень атопического дерматита.

Предлагаемый способ был апробирован в I детском отделении клиники при ГУ НИИ медицинских проблем Севера СО РАМЫ.

Примеры использования метода.

Пример 1. Больной А., 10 лет. Диагноз: Атопический дерматит, локализованный, стадия обострения.

Показатели липидов в коже и крови
Исследуемый показатель	Величина показателя, %	Баллы тяжести
ФЛ крови	31,86	1
ФЛ кожи	7,58	1
ХС крови	12,40	1
ХС кожи	19,53	1
ЖК крови	11,75	1
ЖК кожи	16,74	2
ТАГ крови	8,80	1
ТАГ кожи	11,42	2
ЭХС крови	35,17	1
ЭХС кожи	35,72	1

При полученной сумме баллов 12 у данного больного диагностируют легкую степень атопического дерматита.

Пример 2. Больной Б., 8 лет. Диагноз: атопический дерматит, распространенный, стадия обострения.

Показатели липидов в коже и крови
Исследуемый показатель	Величина показателя, %	Баллы тяжести
ФЛ крови	30,11	2
ФЛ кожи	12,46	2
ХС крови	8,82	1
ХС кожи	31,64	2
ЖК крови	10,56	2
ЖК кожи	17,34	2
ТАГ крови	11,21	2
ТАГ кожи	10,82	2
ЭХС крови	27,20	2
ЭХС кожи	37,72	1

При полученной сумме баллов 18 у данного больного диагностируют тяжелую степень атопического дерматита.

Разработанный способ оценки степени тяжести атопического дерматита позволяет точно и объективно определить состояние больного и является основой для целенаправленного медикаментозного лечения и повышения его эффективности. Способ применим для больных всех возрастов.

Источник информации

1. «Способ оценки степени тяжести атопического дерматита» RU 2239837 С2. Опубл. 10.11.2004.

Способ оценки степени тяжести атопического дерматита, включающий определение состава липидов (ФЛ, ХС, ЖК, ТАГ, ЭХС) поверхностной липидной пленки кожи, отличающийся тем, что дополнительно определяют те же липиды в плазме крови, затем полученные показатели липидов в коже и плазме крови оценивают в баллах, причем значение показателя ФЛ крови 31-45%, оценивают как 1 балл, 22-30% - 2 балла; значение ФЛ кожи 7-10% - 1 балл, 11-18% - 2 балла; значение ХС крови 5-15% - 1 балл, 16-35% - 2 балла; значение ХС кожи 18-21% -1 балл, 22-35% - 2 балла; значение ЖК крови 11-15% - 1 балл, 8-10% - 2 балла; значение ЖК кожи 11-13% - 1 балл, 14-18% - 2 балла; значение ТАГ крови 7-9% - 1 балл, 10-13% - 2 балла; значение ТАГ кожи 15-19% - 1 балл, 8-14% - 2 балла; значение ЭХС крови 30-43% - 1 балл, 20-29% - 2 балла; значение ЭХС кожи 35-42% - 1 балл, 24-34% - 2 балла, суммируют полученные баллы и при сумме баллов от 10 до 14 диагностируют легкую степень, а при сумме баллов от 15 до 20 - тяжелую степень атопического дерматита.