Способ моделирования аутоиммунного заболевания слюнных желез

Способ моделирования аутоиммунного заболевания слюнных желез

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к созданию модели аутоиммунного заболевания с поражением слюнных желез, и может быть использовано для создания новых методов лечения и изучения патогенеза воспалительных заболеваний слюнных желез.

Известны способы моделирования различных заболеваний у лабораторных (экспериментальных) животных, по клинической патологии приближенные к аналогичным заболеваниям человека. Эти способы помогают исследователям изучать течение конкретного заболевания и находить новые методики лечения с разработкой различных фармакологических препаратов.

Известен способ моделирования хронического иммунного воспаления у крыс с субплантарным введением в правую заднюю лапку 0,1 мл адьюванта Фрейда (2,5 мг/мл вакцины БЦЖ на вазелиновом масле) [см. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ, М., 2000, с.237].

Недостатки описанного известного способа заключаются в:

- использовании вазелинового масла - синтетического производного очищенной фракции нефти после отгонки керосина;

- увеличении токсичности препарата при использовании достаточно высоких концентраций вакцины БЦЖ;

- проявлении иммунной реакции только в местах введения смеси;

- отсутствии возможности получения лимфоцитарной инфильтрации слюнных желез, характерной для аутоиммунного процесса.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату к заявляемому изобретению является способ моделирования аутоиммунного заболевания слюнных желез у экспериментальных животных, включающий приготовление дозы химико-фармацевтического препарата, выбор области воздействия с последующим инъекционным введением в нее приготовленной дозы. В качестве области воздействия выбрана околоушная слюнная железа, в которую инъекционно вводят предварительно приготовленную дозу химико-фармацевтического препарата - раствора гомологичной ткани. В полученной модели наблюдалось повреждение паренхимы и мононуклеарная инфильтрация - проявления аутоиммунного паротита [см. White S.C. - Archiv. Pathological Anatomy, Abt В., Zellpath., Bd.17, s.70-84, 1974].

Недостатками способа-прототипа являются сложность приготовления вводимого препарата и локальный характер полученных изменений без генерализованных проявлений, характерных для аутоиммунного заболевания слюнных желез.

Задачей настоящего изобретения является создание достоверного способа моделирования аутоиммунного заболевания слюнных желез у экспериментальных животных, по клиническим, морфологическим и иммунологическим признакам приближенного к аналогичным изменениям при заболевании человека.

Поставленная задача решается тем, что в известном способе моделирования аутоиммунного заболевания слюнных желез у экспериментальных животных, включающем приготовление дозы химико-фармацевтического препарата, выбор области воздействия с последующим инъекционным введением в нее приготовленной дозы, СОГЛАСНО ИЗОБРЕТЕНИЮ дозу химико-фармацевтического препарата готовят в виде смеси из 0,25 мг вакцины БЦЖ в 0,25 мл воды для инъекций с добавлением 0,25 мл глицерина; в качестве области воздействия используют проекцию околоушных слюнных желез, в которую осуществляют разовую подкожную инъекцию приготовленной дозы препарата с завершением формирования аутоиммунного процесса через 14 суток.

Условия и параметры заявляемого способа необходимы и достаточны для решения поставленной задачи, а именно формирования аутоиммунного процесса с характерными генерализованными проявлениями в слюнных железах. При этом использование в инъекционной смеси глицерина - природного соединения, находящегося в тканях животных и являющегося источником жиров и масел, а также идеальным проводящим вектором через мембраны клеток, позволило уменьшить количество вакцины БЦЖ по сравнению с известным аналогом [см. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ, М., 2000, с.237] и значительно снизить токсичность смеси.

Анализ известных технических решений позволяет сделать вывод о том, что предлагаемое изобретение не известно из уровня исследуемой техники, что свидетельствует о его соответствии критерию «новизна».

Сущность настоящего изобретения для специалиста не следует явным образом из уровня техники, что позволяет сделать вывод о его соответствии критерию «изобретательский уровень».

Возможность использования заявляемого способа для моделирования аутоиммунного заболевания слюнных желез у экспериментальных животных с применением промышленно выпускаемых доступных препаратов и химических веществ в условиях отечественных стоматологических клиник свидетельствует о соответствии изобретения критерию «промышленная применимость».

Предлагаемый способ прошел доклинические испытания в условиях Уральской государственной медицинской академии (г.Екатеринбург).

Эффективность практического использования заявляемого способа для моделирования аутоиммунного заболевания слюнных желез у экспериментальных животных иллюстрируется примером.

ПРИМЕР. Моделирование аутоиммунного заболевания слюнных желез.

В качестве лабораторных животных использовали крыс линии «Vistar» со средней массой 344,0±6,4 г (15 групп по 7 особей в каждой группе).

Для приготовления инъекционной смеси применяли промышленно выпускаемые химико-фармацевтические препараты:

- глицерин (ЧДА С₃H₈О₃, ГОСТ 6259-75, изм. - 1,2, партия 348, ЗАО НПО «Экрос», г.С.-Петербург, дата изготовления 04.04, срок годности 3 года);

- вакцина БЦЖ (вакцина туберкулиновая (БЦЖ)сухая, НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи, РАМН, Москва, ФСП 42-0180-2424 02, 03-73024, 30 ноября 2005 г., с. №529, к. №1954; дата изг. 09.04, срок годности до 10.06);

- вода для инъекций (Р №001280/ 01-2002 от 08.04.2002, ОАО «Новосибхимфарм»).

Дозу химико-фармацевтического препарата готовили в виде смеси из 0,25 мг вакцины БЦЖ в 0,25 мл воды для инъекций с добавлением 0,25 мл глицерина простым перемешиванием компонентов.

В выбранную область воздействия - проекцию околоушной слюнной железы крысы (область воздействия ограничивали путем наложения трафарета в виде квадратной рамки со стороной квадрата 20 мм) осуществляли разовую подкожную инъекцию приготовленной дозы препарата.

Одновременно моделировали аутоиммунное заболевание слюнных желез у экспериментальных животных по способу-прототипу [см. White S.C. - Archiv. Pathological Anatomy, Abt B., Zellpath., Bd.17, s.70-84, 1974].

После завершения процессов моделирования аутоиммунного заболевания проводили исследования в экспериментальных группах и в группе сравнения (здоровые животные) на 7, 14, 21, 28 сутки по следующим параметрам:

- морфологическое исследование слюнных желез;

- клиническое исследование крови;

- биохимическое исследование крови;

- иммунологическое исследование крови;

- реакции поведения.

В результате исследований с использованием статистического анализа установлено, что формирование аутоиммунного процесса в заявляемом способе завершилось через 14 суток.

Результаты исследований на 14-ые сутки (в заявляемом способе и способе-прототипе) приведены в таблице.

Как видно из приведенного примера и данных таблицы, использование заявляемого способа по сравнению с известным способом, взятым за прототип [см. White S.C. - Archiv Pathological Anotomy, AbtB., Zellpath.,Bd.17, s.70-84, 1974], обеспечивает следующие технические и общественно-полезные преимущества:

- достоверность способа моделирования, по клиническим, морфологическим и иммунологическим признакам приближенного к аналогичным изменениям при заболевании человека;

- нетоксичность и доступность применяемых химико-фармацевтических препаратов;

- простота приготовления используемой смеси;

-простота осуществления способа, не требующая специальной подготовки медицинского персонала.

Способ моделирования аутоиммунного заболевания слюнных желез у экспериментальных животных, включающий приготовление дозы химико-фармацевтического препарата, выбор области воздействия с последующим инъекционным введением в нее приготовленной дозы, отличающийся тем, что дозу химико-фармацевтического препарата готовят в виде смеси из 0,25 мг вакцины БЦЖ в 0,25 мл воды для инъекций с добавлением 0,25 мл глицерина; в качестве области воздействия используют проекцию околоушных слюнных желез, в которую осуществляют разовую подкожную инъекцию приготовленной дозы препарата с завершением формирования аутоиммунного процесса через 14 суток.