Применение cd25-связывающих молекул для лечения пациентов, устойчивых к стероидам

Применение cd25-связывающих молекул для лечения пациентов, устойчивых к стероидам

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Настоящее изобретение относится к применению СD25-связывающих молекул для лечения заболевания, выбранного из группы, включающей аутоиммунный гепатит, астму, экзему, васкулит, темпоральный артериит, системную красную волчанку, лейкоз, гломерулонефрит, рассеянный склероз, неспецифический язвенный колит, саркоид и болезнь Крона, у устойчивых к стероидам пациентов.

Неспецифический язвенный колит

Стероиды являются эффективным средством лечения большинства пациентов, страдающих неспецифическим язвенным колитом. Однако от 30 до 50% пациентов, страдающих неспецифическим язвенным колитом, нечувствительны к стероидной терапии, и лечение этих пациентов с помощью общепринятых методов терапии не дает удовлетворительных результатов и во многих случаях требуется хирургическое вмешательство. До начала применения стероидов для лечения серьезных случаев неспецифического язвенного колита уровень смертности от заболевания составлял порядка 50% (Truelove S.C. и Witts L.J., BMJ, 1955, сс.1041-1048). В современной практике пациентов, страдающих серьезным неспецифическим язвенным колитом, у которых не обнаружено облегчение состояния после применения стероидной терапии в течение 5-7 дней, подвергают экстренной операции (Jewell D.P. и др., Gastroenterol Int; 4, 1991, сс.161-164). Хирургическое вмешательство, хотя оно и приводит к исцелению, включает илеостомию подвздошной кишки, по крайней временно, и поэтому пациенты часто отказываются от хирургического вмешательства. Однако задержка в проведении операции у пациентов, не чувствительных к общепринятой терапии, является опасной из-за возможного возникновения предоперационного прободения, что повышает смертность (Ritchie J.KL., BMJ, 1974, сс.264-268). В качестве альтернативы хирургическому вмешательству для лечения некоторых устойчивых к стероидам пациентов, страдающих неспецифическим язвенным колитом, используют иммуносупрессант циклоспорин (Lichtiger S. и др. N Engi J Med, 330, 1994, сс.1841-1845). Однако для многих пациентов, которые первоначально нуждались в хирургическом вмешательстве, лечение в течение 6 месяцев дало неутешительные результаты и у многих пациентов обнаружены побочные действия, включая смертельную инфекционную пневмонию, вызываемую условно-патогенным видом, таким как Pnemocystis carinii, что является результатом иммуносупрессии, почечную недостаточность и гипертензию (Smith М.В., N Engi J Med; 327, 1992, сс.497-498; Sandborn W.J,. Inflamm Bowel Dis; 1, 1995, сс.48-63). Азатиоприн является эффективным терапевтическим средством для хронически активного устойчивого к стероидам или зависящего от стероидов неспецифического язвенного колита. Однако его действие наступает через продолжительный период времени (3-4 месяца) и поэтому он непригоден для пациентов, страдающих серьезным неспецифическим язвенным колитом, которые нуждаются в экстренном лечении (Ardixxone S. и др., J Clin Gastroenterol; 25, 1997, сс.330-333.). Таким образом, лечение устойчивого к стероидам неспецифического язвенного колита остается трудной проблемой и, как правило, для его лечения требуется операция, приводящая к стоме. Существует потребность в создании альтернативного консервативного пути лечения устойчивого к стероидам неспецифического язвенного колита, и одним из путей решения является понимание причин, по которым некоторые пациенты, страдающие неспецифическим язвенным колитом, теряют чувствительность к стероидной терапии. Для каждого отдельного пациента трудно предсказать чувствительность к стероидной терапии и, как следствие, необходимость в хирургическом вмешательстве или в применении другого пути лечения. При серьезном неспецифическом язвенном колите первоначальные признаки серьезности заболевания слабо коррелируют с конечным результатом (чувствительность к стероидной терапии) (Lindgren S.C. и др., Eur J.Gastrenterol Hepatol; 10, 1998, сс.831-835). Так, пациенты, нечувствительные к стероидной терапии, не обязательно являются пациентами с наиболее тяжелой формой болезни.

Астма

Современный метод лечения астмы заключается во введении стероидов, таких как глюкокортикоиды. Однако несмотря на обычно удовлетворительную реакцию, существует группа пациентов, которые не обладают чувствительностью к стероидной терапии. Таких пациентов называют пациентами с ″устойчивой к стероидам астмой″ и они впервые были выявлены в 1968 году. Как следствие, при устойчивой к стероидам астме не удается повысить на 15% односекундный объем воздуха при форсированном выдохе (ОФВ₁; мера функции легкого, которая снижается при астме) после применения в течение 7 дней преднизолона в дозе 20 мг в день (Carmichael J. и др., BMJ; 282, 1981, сс.1419-1422). Было проведено сравнительное исследование пациентов, страдающих устойчивой к стероидам астмой и чувствительных к стероидам астматиков, и установлено, что основная функция легкого и реакция на бронхолитические средства у них существенно не различались, что свидетельствует о том, что устойчивые к стероидам астматики не страдают более серьезной формой заболевания. Оценивали чувствительность к стероидам лимфоцитов периферической крови пациентов, страдающих устойчивой к стероидам астмой, на основе данных об ингибировании глюкокортикоидами стимулированной фитогемагглютинином (ФГА) пролиферации (Poznansky M.C. и др., Clin Sci; 67, 1984, сс.639-645; Alvarez J. и др., J.Allergy Clin Immunol; 89, 1992, сс.714-721; Corrigan C.J. и др., Am Rev Respir Dis; 144, 1991, сс.1026-1032, Hackzu А. и др., J Allergy Clin Immunol; 93, 1994, сс.510-519, Spahn J.D. и др., J Allergy Clin Immunol; 98, 1996, сс.1073-1079). Во всех исследованиях установлено, что лимфоциты астматиков, страдающих устойчивой к стероидам астмой, в существенно меньшей степени игибировались стероидами, чем лимфоциты астматиков, чувствительных к стероидам, что свидетельствует о том, что у пациентов, страдающих устойчивой к стероидам астмой, присутствуют устойчивые к стероидам лимфоциты. В проведенном позднее исследовании было обнаружено, что у 8 пациентов, страдающих устойчивой к стероидам астмой, присутствуют устойчивые к стероидам лимфоциты, и их лечили метотрексатом (Vrugt В. и др., Eur Respir J; 15, 2000, сс.478-485). Через 8 недель воспаление слизистой оболочки легких понизилось и чувствительность лимфоцитов к стероидам повысилась. Было высказано предположение, что благоприятное действие метотрексата на слизистую оболочку бронхов пациентов, страдающих устойчивой к стероидам астмой, является результатом повышения чувствительности к стероидам. Это является примером лекарственного средства, действующего в качестве ″усилителя стероидов″ и обладающего как способностью повышать чувствительность лимфоцитов к стероидам, так и клинической эффективностью. Было установлено, что у примерно 25% пациентов, у которых астма ″плохо поддается лечению″, обследованных для сравнения в третьем центре, обнаружена устойчивость лимфоцитов к стероидам (Chan M.T.S и др., J Allergy Clin Immunol; 101, 1998, сс.594-601).

Аутоиммунный гепатит

Аутоиммунный гепатит представляет собой форму хронического заболевания печени, характеризующегося прогрессирующим воспалением гепатоцитов, который, как правило, чувствителен к лечению кортикостероидами. Однако 10% пациентов, страдающих аутоиммунным гепатитом, устойчивы к кортикостероидам и у них развивается прогрессирующее заболевание печени и цирроз. Лечение этой группы пациентов, страдающих устойчивым к стероидам заболеванием, затруднено, и для лечения может потребоваться трансплантация. Для лечения устойчивого к стероидам аутоиммунного гепатита применяли циклоспорин (Fernandes N.F. и др., Am J Gastroenterol; 94, 1999, сс.241-248). При исследовании, проведенном на группе из 5 пациентов, такое лечение оказалось эффективным для 4 из них. К сожалению, у этого одного пациента, который оказался нечувствительным к циклоспорину, развилась прогрессирующая почечная недостаточность, ему была проведена ортотопическая трансплантация печени, и впоследствии он умер от диссеминирующей инфекции, вызванной цитомегаловирусом. Циклоспорин, как правило, хорошо переносился и ни у одного из пациентов не развилась почечная недостаточность. Можно предположить, что пациенты, страдающие устойчивым к стероидам аутоиммунным гепатитом, имели устойчивые к стероидам лимфоциты.

Экзема

Экзема представляет собой определенный тип кожного воспаления, который может вызываться или поддерживаться различными связанными с окружающей средой или внутренними факторами, например контактом с аллергеном и раздражителем, инфекционными агентами и атопией. Большинство страдающих экземой пациентов имеют относительно слабую форму заболевания и нуждаются в периодической местной терапии. Однако некоторые пациенты страдают более серьезной формой заболевания и нуждаются в систематической стероидной терапии (Hoare С. и др., Health Technol Assess; 4, 2000, сс.1-191; Heddle R.J. и др., Br Med J, изд-во Clin Res; 289, 1984, сс.651-654). Отсутствие чувствительности к стероидной терапии требует альтернативного лечения с использованием иммуносупрессоров, таких как циклоспорин (Granlund H. И др., Acta Derm. Venereol. 1996; 76: сс.371-6). Предполагается, что указанное отсутствие реакции на стероидную терапию является следствием устойчивости к стероидам пациента, имеющего устойчивые к стероидам лимфоциты.

Васкулит

Васкулиды представляют собой группу состояний, характеризующихся воспалением артерий. Некоторые из этих состояний вызывают также гломерулонефрит (включая грануломатоз Вегенера, синдром Гудпасчера и нодозный полиартрит). Стероиды остаются наиболее важным средством лечения всех указанных состояний (Bosch X. и др.. Lupus; 8, 1999, сс.258-262; Guillevin L. nephrol. Dial. Transplant 199;14: cc.2077-2079; Reinhold-Keller E. и др., Arthritis Rheum.; 43, 2000, 1021-1032). Как правило, совместно со стероидами применяют иммуносупрессорную терапию и нечувствительность к такой комбинированной терапии может иметь фатальные последствия. Предполагается, что основное большинство пациентов со сниженной чувствительностью к лечению несут устойчивые к стероидам лимфоциты.

Темпоральный артериит

Темпоральный артериит также является формой васкулита. Его осложнением является слепота, связанная с нарушением поставки крови в глаз, что вызвано воспалением артерии. Примерно 15% пациентов не чувствительны к основному пути лечения, основанного на использовании стероидов (Chevalet P. и др., J RheumatoL; 27, 2000, сс.1484-1491). Этих пациентов часто подвергают пролонгированному курсу лечения с помощью стероидов, которое оказывается неэффективным. Для лечения устойчивого к стероидам заболеванию применяли альтернативный подход, основанный на использовании метотрексата (Krall P.L. и др., Cleve Clin J Med; 56, 1989, сс.253-257). Указанное снижение чувствительности к стероидной терапии, вероятно, связано с устойчивостью к стероидам пациента, имеющего устойчивые к стероидам лимфоциты.

Саркоид

Саркоидоз представляет собой системное грануломатозное заболевание неизвестной природы. Саркоидоз является результатом избыточного опосредуемого Т-клетками иммунного ответа на неизвестный антиген. Стероиды остаются наиболее эффективным средством лечения (Barnard J. и др., Curr Opin RheumatoL; 13, 2001, сс.84-91). Альтернативу стероидной терапии часто используют либо в случае отсутствия чувствительности к стероидам либо с целью снижения дозы стероида и побочных действий.

Системная красная волчанка

Системная красная волчанка представляет собой аутоиммуное заболевание, которое включает аномалии Т-лимфоцитов, а также гиперреактивных В-клеток, которые продуцируют аутоантитела. Без лечения болезнь может привести к конечной стадии заболевания почек или смерти. Глюкокортикоиды представляют собой лекарственные средства, которые используют, в первую очередь, для лечения системной красной волчанки. Однако у некоторых пациентов отсутствует чувствительность к стероидной терапии.

У пациентов, страдающих системной красной волчанкой (СКВ), была изучена также корреляция между чувствительностью лимфоцитов к стероидам in vitro и клинической реакцией на стероидную терапию (Seki M. и др., Arthritis Rheum; 41, 1998, сс.823-830). В эксперименте принимали участие 27 японок, которых лечили в течение 1 месяца преднизолоном (пероральное введение, 50-60 мг в день). По клинической реакции на лечение стероидом 19 пациенток были классифицированы как чувствительные к стероидам, а 8 - как устойчивые к стероидам. Чувствительность к стероидам лимфоцитов оценивали in vitro no индуцированному стероидом апоптозу (гибель клеток) лимфоцитов периферической крови. При высоких концентрациях преднизолона лимфоциты страдающих СКВ пациентов в устойчивой к стероидам группе имели значительно более низкий процент апоптозных клеток по сравнению с чувствительной к стероидам группой (44,8% против 68,8%; р<0,05). Таким образом, хотя метод оценки чувствительности лимфоцитов к стероидам отличался от метода, с помощью которого оценивали уровень ингибирования глюкокортикоидами стимулированной ФГА пролиферацией лимфоцитов, установлено, что пациенты, нечувствительные к стероидной терапии, имели устойчивые к стероидам лимфоциты.

Лейкоз

Лейкоз представляет собой злокачественное заболевание лейкоцитов, при котором происходит пролиферация клеток-предшественников лейкоцитов, но у них отсутствует способность к дифференцировке. Хотя лейкоз не является воспалительным состоянием, в химиотерапевтические схемы, применяемые для лечения этого состояния, включают глюкокортикоиды. Глюкокортикоиды индуцируют апоптоз лимфобластов, и это используют в качестве меры чувствительности к стероидам при остром лимфобластном лейкозе (ОЛЛ). Критерием хорошей клинической реакции является высокая скорость апоптоза in vitro. И наоборот, устойчивость к стероидам выявлена примерно в 30% вновь диагностированных случаев ОЛЛ и представляет собой важную клиническую проблему (Kaspers G.J.L и др. Leuk Lymphoma;13, 1994, сс.187-201). Проведены сравнительные исследования in vitro чувствительности лимфоцитов не только к стероидам (дексаметазон и преднизолон), но также и к L-аспаргиназе и винкристину (Kaspers G.L.J и др. Blood; 90, 1997, сс.2723-2729; Hongo T. и др., Blood; 89, 1997, сс.2959-2965). Используя в качестве критерия чувствительность лимфоцитов к указанным лекарственным средствам, пациенты были классифицированы как чувствительные к указанным лекарственным средствам (чувствительность ко всем лекарствам), обладающие средней чувствительностью (чувствительные к 2 или 3 лекарствам) или устойчивые (чувствительные к одному или вообще нечувствительные ни к одному из лекарств). Через 3 года наиболее высокий процент выживших и вылечившихся от болезни обнаружен в группе чувствительных пациентов (85-100%) и наиболее низкий - у устойчивых пациентов (43-55%). Таким образом, чувствительность лимфобластов in vitro и чувствительность к заболеванию in vivo у страдающих ОЛЛ пациентов коррелирует с чувствительностью не только к стероидам, но и к другим химиотерапевтическим агентам.

Гломерулонефрит

Гломерулонефрит характеризуется воспалением почек и, как правило, представляет собой аутоиммунное заболевание. Стероиды являются важным средством лечения (Austin Н.А. и др., N Engl J Med; 314, 1986, 614-619), и нечувствительность к стероидной терапии при этом состоянии может привести к почечной недостаточности. Неэффективность стероидной терапии для устойчивых к стероидам пациентам, страдающих болезнью почек, привело к использованию иммуносупрессоров (как и в случае неспецифического язвенного колита) (McCauley J и др., Nephrol Dial Transplant; 8, 1993, 1286-1290). Исследование позволило выявить диапазон устойчивости к стероидам лимфоцитов у 16 пациентов, страдающих гломерулонефритом (Briggs W.A. и др., J Clin Pharmacol; 36, 1996, сс.707-714). Было установлено, что диапазон чувствительности лимфоцитов к стероидам объясняет различную реакцию на стероидную терапию, однако в этом исследовании не проведено сравнение чувствительности лимфоцитов к стероидам и клинической реакции при заболевании. Фокальный (очаговый) сегментарный гломерусклероз (ФСКС) представляет собой форму гломерулонефрита, который лечится также с помощью стероидов, хотя некоторые пациенты нечувствительны к ним (Ingulli E. и др., J Am Soc Nephrol; 5, 1995, 1820-1825). Были проведены сравнительные исследования чувствительности лимфоцитов к стероидам при этом состоянии и клинических реакций и установлено, что можно предсказывать предполагаемое улучшение функции почек в ответ на лечение стероидами. Пациенты, у которых обнаружены наиболее чувствительные лимфоциты, оказались наиболее восприимчивыми к стероидной терапии, а пациенты, у которых обнаружены устойчивые к стероидам лимфоциты, были мало восприимчивы к стероидам.

Рассеянный склероз

Рассеянный склероз представляет собой воспалительное демиелинизирующее заболевание центральной нервной системы, в патогенезе которого Т-лимфоциты, реактивные в отношении миелиновых протеинов, играют важную патогенную роль. Глюкокортикоиды применяют для лечения рассеянного склероза (Brusaferri F. И др., J Neurol; 247, 2000, сс.435-442). Лечение стероидами является эффективным в отношении ускорения кратковременного облегчения состояния страдающих рассеянным склерозом пациентов и может также снижать риск рецидива. Однако клиническая реакция варьируется в широких пределах для различных пациентов. У страдающих рассеянным склерозом пациентов оценивали чувствительность лимфоцитов к стероидам (Wei Т. и др., Acta Neurologica Scandinavica; 96, 1997, сс.28-33) и было обнаружено, что чувствительность лимфоцитов варьируется в широком диапазоне. В этом эксперименте не проводили сравнение чувствительности лимфоцитов к стероидам и клинической реакции больных рассеянным склерозом на стероидную терапию, но высказано предположение о том, что чувствительность лимфоцитов к стероидам in vitro может частично объяснить вариабельность реакций на стероидную терапию.

Чувствительность лимфоцитов к стероидам

Как отмечалось выше, пролиферацию лимфоцитов можно стимулировать in vitro с помощью митогена ФГА (Lindahl Kiessling К,. Peterson R.D., Exp Cell Res 1969; cc.5585-5587). Добавление стероидов в культуральную среду ингибирует пролиферацию лимфоцитов (Walker K.B. и др., Transplant Proc; 17, 1985, cc.1676-1678). В некоторых случаях лимфоциты являются чувствительными к стероидам, при этом добавление небольшого количества стероида вызывает выраженное ингибирование пролиферации, а в других случаях лимфоциты являются устойчивыми к стероидам, при этом добавление даже больших количеств стероида лишь в незначительной степени ингибирует пролиферацию. Ранее заявители настоящего изобретения исследовали связь между ЛЧС (чувствительность лимфоцитов к стероидам) и клинической реакцией на стероидную терапию у группы пациентов, страдающих серьезным неспецифическим язвенным колитом (Hearing S.D. и др., Gut; 45, 1999, cc.382-388). Всех пациентов лечили путем внутривенного введения стандартной дозы стероидов, и чувствительность лимфоцитов пациентов к стероидам (ЛЧС) оценивали по ингибированию дексаметазоном вызванной ФГА пролиферации лимфоцитов периферической крови. Была продемонстрирована выраженная корреляция между клинической реакцией и ЛЧС. Все пациенты, лимфоциты которых были чувствительны к стероидам, давали полную реакцию на стероидную терапию, а все пациенты, лимфоциты которых были устойчивыми к стероидам, давали слабую реакцию на стероидную терапию. Таким образом, при неспецифическом язвенном колите существует корреляция между ЛЧС и клинической реакцией, при этом устойчивость лимфоцитов к стероидам позволяет предсказать слабую реакцию на стероидную терапию.

Интерлейкины представляют собой группу цитокинов, которые продуцируются активированными макрофагами и лимфоцитами в процессе иммунного ответа. Они оказывают воздействие на лимфоциты и другие лейкоциты, стимулируя их пролиферацию и дифференцировку. Представитель этой группы интерлейкин-2 (IL-2) является одним из основных цитокинов, продуцируемых активированными Т-клетками, и посредством аутокринного воздействия стимулирует пролиферацию и дифференцировку Т-клетки, продуцирующей его. IL-2, который продуцируется активированными Т-лимфоцитами при неспецифическом язвенном колите, может играть важную роль в возникновении постоянного воспаления в слизистой оболочке путем активации способности других воспалительных клеток продуцировать дополнительные цитокины, которые могут приводить к дополнительному рекрутменту и активации воспалительных клеток (Kirman I. И др., J. Dig Dis Sci; 40, 1995, сс.291-295). Если пациент чувствителен к стероидной терапии, то важным действием стероидов является ингибирование производства IL-2, что препятствует пролиферации лимфоцитов и связанному с этим воспалению (стероиды обладают различными действиями, при этом ингибирование IL-2 является только одним из них). Однако если пациент обладает устойчивостью к стероидам, то производство IL-2 не будет ингибироваться стероидами, и воспалительный процесс будет продолжаться без ограничения.

С учетом большого количества пациентов, страдающих аутоиммунным гепатитом, астмой, экземой, васкулитом, темпоральным артериитом, системной красной волчанкой, лейкозом, гломерулонефритом, рассеянным склерозом, неспецифическим язвенным колитом, саркоидом и болезнью Крона, для которых лечение стероидами является неэффективным, существует потребность в разработке эффективного лечения в качестве альтернативы экстренной и инвазивной хирургии.

Более конкретно первым объектом настоящего изобретения является применение СD25-связывающей молекулы, которая содержит по меньшей мере один антигенсвязывающий центр антитела, включающий по меньшей мере один домен, который содержит расположенные последовательно гипервариабельные участки CDR1, CDR2 и CDR3; где CDR1 имеет аминокислотную последовательность Arg-Tyr-Trp-Met-His, CDR2 имеет аминокислотную последовательность Ala-Ile-Tyr-Pro-Gly-Asn-Ser-Asp-Thr-Ser-Tyr-Asn-Gln-Lys-Phe-Glu-Gly и CDR3 имеет аминокислотную последовательность Asp-Tyr-Gly-Tyr-Tyr-Phe-Asp-Phe; или ее непосредственных эквивалентов для лечения аутоиммунного гепатита, астмы, экземы, васкулита, темпорального артериита, системной красной волчанки, лейкоза, гломерулонефрита, рассеянного склероза, неспецифического язвенного колита, саркоида и болезни Крона. Как продемонстрировано ниже в примерах 1 и 2, CD25-связывающие молекулы по изобретению модулируют чувствительность лимфоцитов к стероидам таким образом, что устойчивые к стероидам пациенты становятся чувствительными к стероидам. Так, CD25-связывающие молекулы по изобретению можно применять для лечения у устойчивых к стероидам пациентов аутоиммунного гепатита, астмы, экземы, васкулита, темпорального артериита, системной красной волчанки, лейкоза, гломерулонефрита, рассеянного склероза, неспецифического язвенного колита, саркоида и болезни Крона.

Кроме того, CD25-связывающие молекулы по изобретению можно применять также для улучшения реакции на стероидную терапию у чувствительных к стероидам пациентов. Хотя следует ожидать, что чувствительные к стероидам пациенты определенным образом реагируют на стероидную терапию, применение CD25-связывающих молекул по изобретение, вероятно, может ускорить их реакцию или позволить применять более низкую дозу стероидов, снижая тем самым в значительной степени побочные действия, связанные с лечением стероидами. Таким образом, еще одним объектом изобретения является способ предупреждения, поддержания ремиссии/предупреждения рецидива и лечения аутоиммунного гепатита, астмы, экземы, васкулита, темпорального артериита, системной красной волчанки, лейкоза, гломерулонефрита, рассеянного склероза, неспецифического язвенного колита, саркоида и болезни Крона у чувствительного к стероидам пациента, который заключается во введении пациенту эффективного количества CD25-связывающих молекул по изобретению и при необходимости стероидов.

Под ″CD25-связывающей молекулой″ понимают любую молекулу, которая обладает способностью связываться с антигеном CD25 либо индивидуально либо в сочетании с другими молекулами, образуя обладающие высокой аффинностью IL-2-рецепторы.

Предпочтительно применяют СD25-связывающую молекулу, которая содержит по меньшей мере один антигенсвязывающий центр, включающий:

а) первый домен, который содержит последовательно расположенные последовательно гипервариабельные участки CDR1, CDR2 и CDR3; где CDR1 имеет аминокислотную последовательность Arg-Tyr-Trp-Met-His, CDR2 имеет аминокислотную последовательность Ala-Ile-Tyr-Pro-Gly-Asn-Ser-Asp-Thr-Ser-Tyr-Asn-Gln-Lys-Phe-Glu-Gly и CDR3 имеет аминокислотную последовательность Asp-Tyr-Gly-Tyr-Tyr-Phe-Asp-Phe, и

б) второй домен, который содержит последовательно расположенные гипервариабельные участки CDR1′, CDR2′ и CDR3′, где CDR1′ имеет аминокислотную последовательность Ser-Ala-Ser-Ser-Ser-Ile-Ser-Tyr-Met-Gln, CDR2′ имеет аминокислотную последовательность Asp-Thr-Ser-Lys-Leu-Ala-Ser и CDR3' имеет аминокислотную последовательность His-Gln-Arg-Ser-Ser-Tyr-Thr;

или ее непосредственные эквиваленты.

Если не указано иное, то подразумевается, что любая упомянутая в настоящем описании полипептидная цепь имеет аминокислотную последовательность, которая начинается на N-конце и заканчивается С-конце.

Когда антигенсвязывающий центр содержит и первый и второй домен, то они могут быть локализованы на одной и той же полипептидной молекуле, или предпочтительно каждый домен может находиться на различных цепях, причем первый домен представляет собой часть тяжелой цепи иммуноглобулина или ее фрагмент, а второй домен представляет собой часть легкой цепи иммуноглобулина или ее фрагмент.

Таким образом, изобретение относится также к применению CD25-связывающей молекулы, которая содержит по меньшей мере один антигенсвязывающий центр, включающий либо первый домен, который имеет аминокислотную последовательность, идентичную или практически идентичную последовательности, представленной в Seq. Id. No. 1 в ЕР 449769 В 1, которая начинается с аминокислоты в положении 1 и заканчивается аминокислотой в положении 117, или описанный выше первый домен, и второй домен, который имеет аминокислотную последовательность, идентичную или практически идентичную последовательности, представленной в Seq. Id. No. 2 в ЕР 449769В 1, которая начинается с аминокислоты в положении 1 и заканчивается аминокислотой в положении 104, содержание ЕР 449769В 1 включено в настоящее описание в качестве ссылки.

Более предпочтительная СD25-связывающая молекула, предназначенная для применения согласно изобретению, представляет собой антитело к CD25, которое содержит по меньшей мере

а) одну тяжелую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент, которые включают (I) вариабельную область, содержащую последовательно расположенные гипервариабельные участки CDR1, CDR2 и CDR3, и (II) константную область человеческой тяжелой цепи или ее фрагмент; где CDR1 имеет аминокислотную последовательность Arg-Tyr-Trp-Met-His, CDR2 имеет аминокислотную последовательность Ala-Ile-Tyr-Pro-Gly-Asn-Ser-Asp-Thr-Ser-Tyr-Asn-Gln-Lys-Phe-Glu-Gly и CDR3 имеет аминокислотную последовательность Asp-Tyr-Gly-Tyr-Tyr-Phe-Asp-Phe, и

б) одну легкую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент, которые включают (I) вариабельную область, содержащую последовательно расположенные гипервариабельные участки CDR1′, CDR2′ и CDR3′, и (II) константную область человеческой легкой цепи или ее фрагмент; где CDR1′ имеет аминокислотную последовательность Ser-Ala-Ser-Ser-Ser-Ile-Ser-Tyr-Met-GIn, CDR2′ имеет аминокислотную последовательность Asp-Thr-Ser-Lys-Leu-Ala-Ser и CDR3′ имеет аминокислотную последовательность His-Gln-Arg-Ser-Ser-Tyr-Thr; и его непосредственные эквиваленты.

В другом варианте CD25-связывающая молекула, предназначенная для применения согласно изобретению, может представлять собой одноцепочечную связывающую молекулу, которая содержит антигенсвязывающий центр, включающий

а) первый домен, который содержит расположенные последовательно гипервариабельные участки CDR1, CDR2 и CDR3, где гипервариабельные участки имеют аминокислотные последовательности, представленные в Seq. Id. No. 1 ЕР 449769 В 1, содержание которого включено в настоящее описание в качестве ссылки,

б) второй домен, который содержит последовательно расположенные гипервариабельные участки CDR1′, CDR2′ и CDR3′, где гипервариабельные участки имеют аминокислотные последовательности, представленные в Seq. Id. No. 2 ЕР 449769 В 1, содержание которого включено в настоящее описание в качестве ссылки, и

в) пептидный линкер, который связан либо с N-концом первого домена и с С-концом второго домена или с С-концом первого домена и N-концом второго домена;

и ее непосредственные эквиваленты.

Еще в одном варианте СD25-связывающая молекула, предназначенная для применения согласно изобретению, представляет собой одноцепочечную связывающую молекулу, которая содержит антигенсвязывающий центр гуманизированных антител, например даклизумаба (daclizumab), описанный наряду с методом его получения в ЕР 451216 В1, содержание которого включено в настоящее описание в качестве ссылки.

Как хорошо известно, минорные замены в аминокислотной последовательности, такие как деления, добавление или замещение одной, небольшого количества или нескольких аминокислот, могут приводить к получению аллельной формы исходного протеина, которая обладает идентичными или практически идентичными свойствами, например антигенсвязывающими свойствами. Таким образом, понятие ″непосредственные эквиваленты″ обозначает либо любой один домен CD25-связывающей молекулы (молекула X)

(I) в котором гипервариабельные участки CDR1, CDR2 и CDR3, взятые в целом, гомологичны по меньшей мере на 80%, предпочтительно гомологичны по меньшей мере на 90%, более предпочтительно гомологичны по меньшей мере на 95% гипервариабельным участкам, представленным в Seq. Id. No. 1 ЕР 449769 В1 или на фиг.3 и 4 ЕР 451216 В1, содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылки, и,

(II) который обладает способностью ингибировать связывание интерлейкина 2 (IL-2) с его рецептором практически в такой же степени, что и молекула, с которой проводится сравнение, имеющая каркасные участки, идентичные каркасным участкам молекулы Х, но имеющая гипервариабельные участки CDR1, CDR2 и CDR3, идентичные гипервариабельным участкам, которые представлены в Seq. Id. No. 1 ЕР 449769 В1 или на фиг.3 и 4 ЕР 451216 В1, содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылки;

либо любую СD25-связывающую молекулу, которая несет по меньшей мере два домена в связывающем центре (молекула X′)

(I) в которой гипервариабельные участки CDR1, CDR2, CDR3, CDR1′, CDR2′ и CDR3′, взятые в целом, гомологичны по меньшей мере на 80%, предпочтительно гомологичны по меньшей мере на 90%, более предпочтительно гомологичны по меньшей мере на 95% гипервариабельным участкам, представленным в Seq. Id. No. 1 и 2 ЕР 449769 В1 или на фиг.3 и 4 ЕР 451216 В1, содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылки, и,

(II) которая обладает способностью ингибировать связывание IL-2 с его рецептором практически в такой же степени, что и молекула, с которой проводится сравнение, имеющая каркасные участки и константные области, идентичные каркасным участкам и константным областям молекулы X′, но имеющая гипервариабельные участки CDR1, CDR2, CDR3, CDR1′, CDR2′ и CDR3′, идентичные представленным в Seq. Id. No. 1 и 2 ЕР 44,769 В1 или фиг.3 и 4 ЕР 451216 В1, содержание которого включено в настоящее описание в качестве ссылки.

Последний критерий можно легко оценивать с помощью различных методов анализа, описанных в ЕР 449769 В1 или ЕР 451216 В1, содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылки.

Более предпочтительная CD25-связывающая молекула, которую можно применять согласно изобретению, представляет собой химерное антитело к CD25, прежде всего химерное антитело к CD25, которое содержит по меньшей мере

а) одну тяжелую цепь, включающую вариабельную область, которая имеет аминокислотную последовательность, идентичную или практически идентичную последовательности, приведенной в Seq. Id. No. 1 в ЕР 449769, содержание которого включено в настоящее описание в качестве ссылки, начинающуюся с аминокислоты в положении 1 и заканчивающуюся на аминокислоте в положении 117, и константную область человеческой тяжелой цепи; и

б) одну легкую цепь, включающую вариабельную область, которая имеет аминокислотную последовательность, идентичную или практически идентичную последовательности, приведенной в Seq. Id. No. 2 в ЕР 449769 В1, начинающуюся с глутаминовой кислоты в положении 1 и заканчивающуюся глутаминовой кислотой в положении 104, и константную область человеческой легкой цепи, содержание ЕР 449769 В1 включено в настоящее описание в качестве ссылки.

Константная область человеческой тяжелой цепи может быть γ₁-, γ₂-, γ₃-, γ₄-, μ,-, α₁-, α₂-, δ- или ε-типа, предпочтительно γ-типа, более предпочтительно γ₁-типа, а константная область человеческой легкой цепи может быть κ- или λ-типа (включая подтипы λ₁, λ₂ и λ₃), но предпочтительно κ-типа. Аминокислотная последовательность всех этих константных областей представлена у Kabat и др., Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Department of Health and Human Services, Public Health Service, NIH.

Наиболее предпочтительные CD25-связывающие молекулы по изобретению представляют собой химерное антитело базиликсимаб (базиликсимаб), котрое поступает в продажу под товарным знаком SIMULECT^® фирмы Novartis AG, и гуманизированное антитело даклизумаб (daclizumab), которое поступает в продажу под товарным знаком ZENAPX^® фирмы Roche.

СD25-связывающие молекулы, которые можно применять согласно настоящему изобретению, можно получать с помощью методик, описанных, например, в ЕР 449769 В1 и ЕР 451216 В1, содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылки.

Как описано в ЕР-В-449769 В1 и ЕР 451216 В1, СD25-связывающие молекулы с учетом данных об их активности, установленной, например, с помощью анализа чувствительности лимфоцитов к стероидам, можно применять для предупреждения и лечения аутоиммунного гепатита, астмы, экземы, васкулита, темпорального артериита, системной красной волчанки, лейкоза, гломерулонефрита, рассеянного склероза, неспецифического язвенного колита, саркоида и болезни Крона у чувствительного к стероидам или устойчивого к стероидам пациента.

Таким образом, изобретение относится также к

(I) способу предупреждения и лечения аутоиммунного гепатита, астмы, экземы, васкулита, темпорального артериита, системной красной волчанки, лейкоза, гломерулонефрита, рассеянного склероза, неспецифического язвенного колита, саркоида и болезни Крона у чувствительных к стероидам или устойчивых к стероидам пациентов, который заключается в том, что пациенту вводят эффективное количество описанной выше СD25-связывающей молекулы;

(II) способу предупреждения и лечения аутоиммунного гепатита, астмы, экземы, васкулита, темпорального артериита, системной красной волчанки, лейкоза, гломерулонефрита, рассеянного склероза, неспецифического язвенного колита, саркоида и болезни Крона у чувствительных к стероидам или устойчивых к стероидам пациентов, который заключается в том, что пациенту вводят, например, одновременно или последовательно эффективное количество а) описанной выше СD25-связывающей молекулы и б) другого лекарственного средства, обладающего эффективностью в отношении предупреждения и лечения аутоиммунного гепатита, астмы, экземы, васкулита, темпорального артериита, системной красной волчанки, лейкоза, гломерулонефрита, рассеянного склероза, неспецифического язвенного колита, саркоида и болезни Крона;

(III) фармацевтической композиции, предназначенной для применения согласно способу, описанному в (I)-(II), которая содержит описанную выше СD25-связывающую молекулу и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель;

(IV) СD25-связывающей молекуле, как она описана выше, предназначенной для приготовления лекарственного средства, которое можно применять согласно способу, описанному в (I) или (II);

(V) терапевтической комбинации, например набору или упаковке, предназначенной для применения согласно любому из способов, описанных в (I) или (II), где комбинация включает фармацевтическую композицию, которая содержит описанную выше СD25-связывающую молекулу и дополнительно включает по меньшей мере одну фармацевтическую композицию другого лекарственного средства, эффективного в отношении предупреждения и лечения аутоиммунного гепатита, астмы, экземы, васкулита, темпорального артериита, системной красной волчанки, лейкоза, гломерулонефрита, рассеянного склероза, неспецифического язвенного колита, саркоида и болезни Крона у чувствительного к стероидам или устойчивого к стероидам пациента.

Для применения согласно изобретению соответствующая доза должна естественно зависеть, например, от конкретной применяемой CD25-связывающей молекулы, хозяина, пути введения и серьезности подле