Способ и состав для обнаружения следов крови

Изобретение относится к составу для обнаружения следов крови человека или животных. Вышеупомянутый состав включает соединение люминола, окислитель и щелочь, которые растворены предпочтительно в водном растворителе. Указанный состав отличается тем, что соединение люминола присутствует в количестве, обеспечивающем концентрацию от 5 до 20 ммоль/л в окончательном составе, окислителем является перекись водорода, которая присутствует в концентрации приблизительно 50 ммоль/л в окончательном составе, а в качестве щелочи использована сода NaOH, которая присутствует при концентрации от 25 ммоль/л до 120 ммоль/л в окончательном составе. Изобретение также относится к комплекту для приготовления заявленного состава и к способу обнаружения и локализации следов крови человека и животных. Заявленный состав позволяет получить большую интенсивность свечения при использовании на концентрированных образцах свежей и сухой крови в сравнении с аналогичными составами. 3 н. и 20 з.п. ф-лы, 1 табл.

Реферат

Изобретение относится к составу, предназначенному для обнаружения следов крови человека или животного, а также к полевому комплекту и способу приготовления указанного состава. Изобретение относится также к способу обнаружения и локализации следов крови человека или животного.

Использование хемилюминесценции для поиска и локализации следов крови человека и животного известно.

Люминесценцией называется совокупность явлений эмиссии электромагнитного излучения как в ультрафиолетовом, так и в видимом или инфракрасном диапазоне, не связанной с тепловым эффектом.

Определенные молекулы, люминофоры, обладают свойством, заключающимся в том, что после того, как они были приведены в возбужденное состояние, эти молекулы испускают так называемую "люминесценцию" в процессе возвращения к их основному состоянию. Это явление может быть вызвано различными средствами и, в зависимости от природы источника энергии, который приводит молекулу в ее возбужденное состояние, различают тот или иной вид люминесценции.

Хемилюминесценция представляет собой эмиссию света, произведенного прямо или косвенно химической реакцией. Вообще, хемилюминесцентные реакции являются результатом процесса окисления.

Для обнаружения крови человека или животного обычно используется хемилюминесцентный состав люминол (5-амино-2,3-дигидро-1,4-фталазиндион), хотя используется также и люминол других составов.

Для хемилюминесцентной реакции люминола в водном растворе необходимо присутствие системы окисления и щелочной среды (White Е.Н. & Roswell, D.F. 1985, Luminol chemiluminescence. Chemi-and Bioluminescence (Burr, J.G., ed.). Marcel Dekker, New York, pp.215-244).

Окисление люминола приводит к образованию иона аминофталата в возбужденном состоянии, возврат которого к его основному состоянию сопровождается эмиссией света.

Значение эффективности реакции невысоко (приблизительно 0,01), а спектр излучения имеет максимум на 430 нм (голубой цвет) (White Е.Н. & Roswell, D.F. 1985, Luminol chemilummescence. Chemi- and Bioluminescence (Burr, J.G., ed.), Marcel Dekker, New York, pp.215-244).

Основными катализаторами в этой реакции светоизлучения могут быть переходные металлы (Cr3+, Mn4+, Fe2+, Fe3+, СО2+, Ni2+, Cu2+, Hg2+), свободные или связанные, гемин и пероксидаза (энзим, извлеченный, например, из хрена).

Гемин - специфическая биохимическая структура, которая образует неотъемлемую часть пероксидазы. Эта структура присутствует также и в гемоглобине, который является белком-носителем кислорода и части СО2 в крови.

Следовательно, присутствие гемоглобина - то есть, крови - можно обнаружить, если использовать способность гемина катализировать хемилюминесценцию люминола. Другими словами, смесь люминол/окислитель/щелочная (основная) среда, вступив в контакт с кровью, испустит свет.

Более 60 лет тому назад метод обнаружения присутствия крови посредством состава такого вида был предложен в качестве вспомогательного инструмента для обнаружения следов крови при криминалистических и судебных расследованиях.

Так, в 1937 году, Specht, W. в статье «The Chemoluminescence of hemin: an aid for finding and recording blood stains important for forensic purposes», Angemande Chemie, 10, 155-157, впервые предложил использовать выявление на месте преступления присутствия крови, как доказательство в криминалистических и судебных расследованиях, с использованием состава, содержащего 0,1 весовой части люминола, 3 весовых части щелочного агента, о именно карбоната натрия, и 15 весовых частей окислителя, а именно 30%-ной перекиси водорода, растворенных в 100 весовых частях дистиллированной воды.

В 1937, Specht, W. в статье «The Chemoluminescence of hemin: an aid for finding and recording blood stains important for forensic purposes», Angemande Chemie, 10, 155-157, изучил и показал чувствительность люминесцентной реакции с этим реактивом на следах сухой крови, разведенной в объемной пропорции 1:2000.

В 1939 году Proescher, F. & Moody, A.M. в статье «Detection of blood by means of chemiluminescence». Journal of Laboratory Clinical Medicine, 24, 1183-1189, упоминали, что Specht, W., в 1937 году в своей статье «The Chemoluminescence of hemin: an aid for finding and recording blood stains important for forensic purposes», Angemande Chemie, 10, 155-157, сообщал о проведенных в зарослях и кустарниках испытаниях на крови, подвергшейся воздействию солнца и дождю, и показал, что при этих различных условиях хемилюминес-центная реакция имела место.

Что касается их собственных исследований, то они проверили состав, предложенный в статье Specht, W., 1937, «The Chemoluminescence of hemin: an aid for finding and recording blood stains important for forensic purposes», Angemande Chemie, 10, 155-157, как на крови от животных, так и на крови человека, разведенной в пропорции 1:1000000, и показали, что хемилюминесцентная реакция имела место в обоих случаях.

В 1951, Grodsky, M., Wright, К. & Kirk, Р.L.,Мастер, К. и Кирк, P.L., в статье «Simplified preliminary blood testing. An improved technique and comparative study of methods», Journal of the America Institute of Criminal Law and Criminology, 42, 95-104, отмечали, что чувствительностью и реактивностью люминола очень трудно управлять, если в качестве окислителя используется перекись водорода, и предлагали использовать перборат как окислитель. Они также предложили полевой комплект, состоящий из различных сосудов, каждый из которых содержал по отдельности упомянутый люминол, окислитель - перборат, и щелочной агент - карбонат натрия. Этот полевой комплект также содержал принадлежности, такие как пластмассовые и стеклянные вапоризаторы, фильтровальная бумага, бутылка дистиллированной воды, фонарик, чтобы обеспечить возможность смешивания реактивных агентов в темноте, и, кроме того, пластмассовые сосуды, для сбора и транспортировки следов крови или других мелких вещественных доказательств.

Grodsky, M., Wright, К. & Kirk, P.L. в 1951 году в статье «Simplified preliminary blood testing. An improved technique and comparative study of methods», Journal of the America Institute of Criminal Law and Criminology, 42, 95-104, рассматривали оптимизирование хемилюминесцентной реакции люминола в присутствии сильно разведенной крови, а именно разведенной в объемной пропорции 1:5000000.

В 1939 году Proescher, F. & Moody, A.M. в статье «Detection of blood by means of chemiluminescence». Journal of Laboratory Clinical Medicine, 24, 1183-1189, так же, как и Grodsky, M., Wright, К. & Kirk, P.L. в 1951 году, в статье «Simplified preliminary blood testing. An improved technique and comparative study of methods», Journal of the America Institute of Criminal Law and Criminology, 42, 95-104, рекомендовали сначала распылять на местности соляную кислоту, чтобы разложить гемоглобин и повысить уровень чувствительности тестирования.

В 1966 году Weber, К. в статье «Die Anweldung der Chemiluminescenz des Luminols in der Gerichtlichen Medizin und Toxicologie. L Дер Nachweis von Blutspuren» Deutsche Zeitschrift fur die gesamte Gerichtliche Medizin, 57, 410-423, привел доказательства того факта, что использование щелочного карбоната действительно провоцировало медленную реакцию окисления гемоглобина и что, следовательно, люминесценция была намного слабее, когда использовался такой щелочной карбонат. Поэтому он настаивал на использовании гидроокиси натрия в качестве щелочного агента. В 1966 году Weber, К. в статье «Die Anweldung der Chemiluminescenz des Luminols in der Gerichtlichen Medizin und Toxicologie. I. Дер Nachweis von Blutspuren» Deutsche Zeitschrift fur die gesamte Gerichtliche Medizin, 57, 410-423, констатировал также, что концентрации люминола и перекиси водорода, использованные в реактивах согласно статье Specht, W., 1937, «The Chemoluminescence of hemin: an aid for finding and recording blood stains important for forensic purposes», Angemande Chemie, 10, 155-157, были слишком сильными и вызывали ингибирующую концентрацию реакции люминола, связанную с концентрацией реактивов и, как результат, исчезновение хемилюминесценции и существенное ослабление свидетельств наличия следов крови. В 1966 году Weber К., в статье «Die Anweldung der Chemiluminescenz des Luminols in der Gerichtlichen Medizin und Toxicologie. I. Дер Nachweis von Blutspuren» Deutsche Zeitschrift fur die gesamte Gerichtliche Medizin, 57, 410-423, предложил поэтому состав, состоящий из 0,4 ммоль/л люминола, 17,6 ммоль/л перекиси водорода и 45 ммоль/л гидроксида натрия или гидроксида калия, растворенных в дистиллированной воде, для обнаружения следов сухой или свежей крови со степенью разбавления 1:20000000.

В 1990 году Grispino, R.R.J. в статье «The effects of luminal on serological analysis of dried blood stains» Crime Laboratory Digest, 17 (1), 13-23, предложил использование соединения люминола, содержащего 5,6 ммоль/л люминола, 472 ммоль/л карбоната калия или натрия и 100 ммоль/л перекиси водорода Н2O2, растворенных в дистиллированной воде, для обнаружения следов крови, высушенной в течение нескольких дней, и свежей крови при разведении этой крови в соотношении от 1:10000 до 1:100000.

Все вышеупомянутое показывает, что использование для обнаружения следов крови на месте преступления соединения, содержащего люминол в комбинации со щелочным агентом и окислителем, известно давно.

В частности, предлагалось использовать в качестве окислителя перекись водорода, а не перборат натрия, поскольку перборат натрия трудно растворяется в воде и препятствует вапоризации указанного состава. Аналогично, предлагалось использование гидроксида натрия или гидроксида калия как щелочного агента, а не карбоната, поскольку реакции окисления люминола происходит намного медленнее с карбонатом, чем с гидроксидом, то есть эмиссия света была менее интенсивна с составом, содержавшим карбонат.

В 1966 году Weber К., в статье «Die Anweldung der Chemiluminescenz des Luminols in der Gerichtlichen Medizin und Toxicologie. I. Дер Nachweis von Blutspuren» Deutsche Zeitschrift fur die gesamte Gerichtliche Medizin, 57, 410-423, также предложил соединение такого типа, но содержащее довольно малые количества люминола и перекиси водорода, поскольку слишком большие количества этих составляющих приносят с собой ингибирование реакции люминола и, как результат, отсутствие хемилюминесценции и существенное ослабление свидетельств наличия следов крови.

Кроме того, Byrne, в патентах США 5770116 и 5833887, предложил использование хемилюминесцентной реакции люминола для обнаружения следов крови, потерянной ранеными животными в охотничьих угодьях, в условиях плохой освещенности и уменьшенной видимости.

С этой целью Вуте, в патентах США 5770116 и 5833887, защищает использование состава, содержащего в дополнение к люминолу перборат натрия в качестве окислителя и карбонат натрия как щелочной агент.

Однако этот состав имеет недостатки, связанные с использованием пербората натрия и карбоната натрия, как уже описано выше.

Это особенно проявляется при использовании указанного состава во время охоты, а именно, когда обнаружение следов крови производится не темной (глухой) ночью, а скорее в обычных условиях недостатка света, как это имеет место, например, во время заката, когда потеря люминесцентной интенсивности реакции люминола с кровью является особенно нежелательной, так как интенсивность люминесценции в такое время может быть не достаточно заметна для охотника, чтобы помочь обнаружить следы крови, оставленные его добычей.

Кроме того, все испытания, выполненные в прошлом, проводились на сильно разведенных образцах крови.

Предлагаемое изобретение направлено на устранение недостатков, присущих составам, которые были предметами испытаний в прошлом, и может использоваться в реальных практических условиях и обстоятельствах, то есть позволит обнаруживать даже незначительные следы свежей крови немедленно и с интенсивностью свечения, достаточной для того, чтобы быть видимым не только в полной темноте, но также и в условиях сумерек или недостатка света, как это имеет место на закате.

С этой целью, изобретение предлагает состав для обнаружения следов крови человека или животного, включающий соединение люминола, окислитель и щелочь, растворенные, предпочтительно, в водном растворителе, отличающийся тем, что люминол присутствует в количестве, соответствующем концентрации между 1 и 20 ммоль/л в конечном составе, а окислителем является перекись водорода, которая присутствует в количестве, соответствующем концентрации между 25 и 100 ммоль/л в конечном составе, и что щелочью служит сода NaOH, которая присутствует в количестве, соответствующем концентрации между 25 ммоль/л и 500 ммоль/л в конечном составе.

Чтобы предлагаемое изобретение было реализовано в наиболее предпочтительном осуществлении, соединение люминола должно присутствовать в количестве, соответствующем концентрации между 1 и 10, лучше 5 ммоль/л.

Кроме того, во многих случаях будет предпочтительно ограничить содержание соды NaOH в пределах от 25 до 150 ммоль/л.

Предпочтительно, чтобы показатель рН состава сохранялся ниже приблизительно 11,5, что будет пояснено несколько позже.

Конечно, специалисту будет вполне понятно, что концентрация каждого из компонентов взаимосвязана с концентрацией других используемых компонентов.

Аналогично, выражение "соединение люминола", используемое в описании и в формуле изобретения, обозначает как собственно люминол, так и соединения, близкие люминолу по химической структуре и способные вызывать хемилюминесценцию подобно люминолу. Примерами таких составов могут служить диэтиловый изолюминол и амино-бутилэтиловый изолюминол.

Предпочтительно, чтобы в соединение люминола было люминолом.

В первом предпочтительном осуществлении состава по изобретению сода NaOH присутствует в концентрации приблизительно 90 ммоль/л в конечном составе.

Во втором предпочтительном осуществлении состава по изобретению сода NaOH присутствует в концентрации от 25 до 50 ммоль/л в конечном составе.

Во всех случаях предпочтительно, чтобы водный растворитель был водой и, еще лучше, негазированной водой.

Другая цель изобретения - использование состава согласно изобретению для обнаружения следов крови человека или животного.

Состав согласно первому предпочтительному осуществлению является наиболее подходящим для обнаружения следов крови животного в охотничьих угодьях.

Состав согласно второму предпочтительному осуществлению является наиболее подходящим для обнаружения следов крови человека на месте преступления или несчастного случая.

Согласно изобретению предлагается также полевой комплект, предназначенный для приготовления состава по изобретению, который в его первом предпочтительном осуществлении должен содержать:

- в первом сосуде, по крайней мере, одну индивидуальную дозу, содержащую соединение люминола в количестве, соответствующем от 1 до 20 ммолей,

- во втором сосуде, по крайней мере, одну индивидуальную дозу, содержащую от 25 до 100 ммолей перекиси водорода, и

- в третьем сосуде, по крайней мере, одну индивидуальную дозу, содержащую от 25 до 500 ммолей соды NaOH.

В первом варианте, это первое предпочтительное осуществление комплекта по изобретению предназначено для приготовления состава по изобретению в соответствии с его первым предпочтительным осуществлением и содержит:

- в первом сосуде, по крайней мере, одну индивидуальную дозу, содержащую указанное соединение люминола, в частности, в количестве, соответствующем от 1 до 10 ммолей,

- во втором сосуде, по крайней мере, одну индивидуальную дозу, содержащую от 25 до 100 ммолей перекиси водорода, и

- и третьем сосуде, по крайней мере, одну индивидуальную дозу, содержащую от 25 до 150 ммолей соды NaOH.

Во втором варианте, это первое предпочтительное осуществление комплекта по изобретению предназначено для приготовления состава в соответствии со вторым способом применения, в частности, для использования его на месте преступления, и содержит:

- в первом сосуде, по крайней мере, одну индивидуальную дозу, содержащую соединение люминола в количестве, соответствующем приблизительно 5 ммолям,

- во втором сосуде, по крайней мере, одну индивидуальную дозу, содержащую приблизительно 50 ммолей перекиси водорода, и

- в третьем сосуде, по крайней мере, одну индивидуальную дозу, содержащую от 25 до 50 ммолей соды NaOH.

Во втором предпочтительно осуществлении, комплект для приготовления состава в соответствии с изобретением содержит:

- в первом сосуде, по крайней мере, одну индивидуальную дозу, содержащую указанное соединение люминола в количестве, соответствующем от 1 до 20 ммолей в премиксе или с содой NaOH в количестве от 25 до 500 ммолей, или с перекисью водорода в количестве от 25 до 100 ммолей, в твердой совместимой форме;

- во втором сосуде, по крайней мере, одну индивидуальную дозу, содержащую от 25 до 100 ммолей перекиси водорода, или от 25 до 500 ммолей соды, в зависимости от премикса первого сосуда.

Предпочтительно, комплект для приготовления состава в соответствии с изобретением содержит:

- в первом сосуде, по крайней мере, индивидуальную дозу, содержащую соединение люминола в количестве, соответствующем от 1 до 20 ммолей люминола, в премиксе или с содой NaOH в количестве от 25 до 150 ммолей, или с перекисью водорода в количестве от 25 до 100 ммолей, в твердой совместимой форме, и

- во втором сосуде, по крайней мере, индивидуальную дозу, содержащую 50 ммолей перекиси водорода, или от 25 до 150 ммолей соды NaOH, в зависимости от премикса первого сосуда.

Следует отметить, что перекись водорода в твердой форме доступна на рынке, в частности от фирмы SIGMA-ALDRICH, или в таблетках, или в виде порошка, в форме продукта присоединения мочевины под названием "Urea Adduct" ("Аддукт Мочевины").

Альтернативно, комплект содержит:

- в первом сосуде, по крайней мере, одну индивидуальную дозу, содержащую соединение люминола в количестве, соответствующем приблизительно 5 ммолям люминола, в премиксе либо с содой NaOH в количестве от 25 до 50 ммолей, или 90 ммолей, либо с перекисью водорода в количестве 50 ммолей в твердой совместимой форме, и

- во втором сосуде, по крайней мере, одну индивидуальную дозу, содержащую либо 50 ммолей перекиси водорода, либо от 25 до 50 ммолей, или 90 ммолей, соды NaOH, в зависимости от премикса первого сосуда.

В соответствии с еще одним предпочтительным осуществлением изобретения, три основных компонента состава по изобретению могут быть смешаны в единственном премиксе по рецептуре, известной специалистам в области составления рецептов, обеспечивая их совместимость без возникновения преждевременной реакции, чтобы они могли таким образом быть совместно включены в единственный сосуд. Конечно, известны определенные методы упаковки, предотвращающие преждевременные реакции. Изобретение также в равной степени касается подбора состава, в котором три основных компонента по изобретению объединены в пределах единственного сосуда.

Во всех случаях, в комплекте согласно изобретению каждый сосуд предпочтительно является многоразовой емкостью, выполненной из пластмассового материала или стекла.

Эти сосуды могут также быть пакетиками, содержащими индивидуальные дозы в порошковой форме.

Более предпочтительно, если, по крайней мере, один или каждый сосуд выполнен в виде ячейки, сформированной в, по крайней мере, одной прозрачной упаковке.

Еще более предпочтительно, если комплект по изобретению содержит, по крайней мере, одну прозрачную упаковку с, по крайней мере, тремя ячейками, причем одна из них содержит индивидуальную дозу соединения люминола в количестве, соответствующем от 1 до 20 ммолей, другая содержит индивидуальную дозу от 25 до 500 ммолей соды NaOH, и еще одна из этих, по крайней мере, трех ячеек содержит от 25 до 100 ммолей перекиси водорода.

Альтернативно, комплект по изобретению может содержать, по крайней мере, одну прозрачную упаковку с, по крайней мере, двумя ячейками, причем одна из них содержит индивидуальную дозу с составом люминола в количестве, соответствующем от 1 до 20 ммолей, в премиксе или с содой NaOH в количестве от 25 до 500 ммолей, или с перекисью водорода от 25 до 100 ммолей в твердой совместимой форме, а вторая из этих, по крайней мере, двух ячеек содержит индивидуальную дозу или перекиси водорода от 25 до 100 ммолей, или от 25 до 500 ммолей соды, в зависимости от премикса первой ячейки.

В третьем варианте, комплект содержит, по крайней мере, одну прозрачную упаковку с, по крайней мере, одной ячейкой, содержащей индивидуальную дозу состава премикса в твердой совместимой форме трех основных компонентов состава по изобретению.

Предпочтительно, чтобы во всех различных формах комплекта по изобретению, по крайней мере, одна из индивидуальных доз была оформлена в виде таблетки.

Но более предпочтительно, чтобы в комплекте по изобретению каждая доза люминола, перекиси водорода и соды была оформлена в виде таблетки.

Во всех рассматриваемых случаях полезно, чтобы каждая индивидуальная доза дополнительно содержала наполнители, облегчающие прямое разрушение и растворение таблетки.

Изобретение предлагает также способ приготовления состава согласно изобретению, включающий растворение в воде индивидуальной дозы соединения люминола, индивидуальной дозы перекиси водорода и индивидуальной дозы соды, причем каждую из этих индивидуальных доз берут из сосудов комплекта по изобретению.

Изобретение также предлагает способ обнаружения и локализации в условиях уменьшенной освещенности или при полном отсутствии света раненого или убитого животного, который включает распыление состава согласно изобретению или состава, полученного способом согласно изобретению, на участках местности, где предположительно прошло животное, чтобы вызвать люминесцентную реакцию в результате контакта состава со следами крови, потерянной животным.

Другой задачей изобретения является способ поиска и локализации следов крови человека на месте преступления, который включает распыление состава согласно изобретению или состава, полученного способом согласно изобретению, на месте преступления, чтобы вызвать люминесцентную реакцию в результате контакта состава со следами крови человека.

Изобретение станет более понятным, а его другие цели, подробности и преимущества будут более очевидными из последующего описания изобретения.

Согласно изобретению было неожиданно установлено, что состав, содержащий от 1 до 20 ммоль/л соединения люминола, от 25 до 100 ммоль/л перекиси водорода (Н2О2), действующей как окислитель, и от 25 ммоль/л до 500 ммоль/л соды (NaOH) как щелочного агента, растворенных предпочтительно в водном растворителе, позволяет обеспечить быстрое и эффективное обнаружение следов крови, как человека, так и животного, свежей или высохшей, смытой или нет.

Следует отметить, что в этом составе концентрация соединения люминола от 1 до 20 ммолей, предпочтительно от 1 до 10 ммолей, делает возможным получить оптимальную интенсивность свечения, без необходимость использовать тяжелые дозы соединения люминола.

Действительно, в присутствии в конечном составе от 25 до 500 ммолей, предпочтительно от 25 до 150 ммолей, а лучше приблизительно 90 ммоль/л гидроокиси натрия NaOH, и от 25 до 100 ммоль/1 перекиси водорода, Н2О2, интенсивность люминесценции повышается с увеличением концентрации соединения люминола, но практически достигает предела, начиная с концентрации от 10 до 20 ммоль/л соединения люминала. Между тем было неожиданно установлено, что с составами согласно изобретению и при слабой концентрации, в частности приблизительно 5 ммоль/л, соединения люминола получается 93% максимальной интенсивности свечения.

В качестве окислителя выбрана перекись водорода, Н2O2, не только из-за ее подходящей цены, но также и по причине, указанной Grispino, R.R.J. в статье «The effects jf luminal on serological analisis of dried blood stanis», Crime Laboratory Digest, 17 (1), 13-23, а именно, что перборат, который трудно растворим в воде или в водном растворителе, при использовании его в качестве окислителя вызывает блокировку распылительной системы раствором и, следовательно, не пригоден для использования

Кроме того, было неожиданно установлено, что с перекисью водорода могут быть получены более высокие уровни люминесценции.

Чтобы изобретение могло быть лучше понято, будет рассмотрено несколько вариантов его осуществления, используя примеры просто как иллюстрации, которые не являются исчерпывающими или ограничивающими изобретение. Примеры 1-4 - это часть изобретения и они включены в пункты формулы изобретения. Другими примерами изобретения, обеспечивающими эквивалентные результаты, являются:

- состав, содержащий от 10 до 20 ммоль/л соединения люминола, приблизительно 40 ммолей NaOH и приблизительно 50 ммолей Н2О2;

- состав, содержащий приблизительно 5 ммоль/л соединения люминола, 50 ммоль/л Н2О2 и приблизительно 120 ммоль/л NaOH.

Пример 1 состава согласно изобретению

Приготовили состав согласно изобретению, состоящий из 5 ммоль/л люминола, 50 ммоль/л NaOH и 50 ммоль/л Н2О2, растворенных в 1 литре дистиллированной воды. Этот состав распылялся на следующие образцы крови:

- овечья кровь, разбавленная в пропорции 1:1000000, и овечья кровь, разбавленная в пропорции 1:100000,

- цельная свежая овечья кровь,

- цельная высохшая овечья кровь.

Измерили показатель рН состава. Интенсивность свечения, полученного в процессе реакций между рассматриваемым составом и каждым из различных образцов, была измерена согласно прилагаемым протоколам.

Что касается разбавленной крови, значение интенсивности свечения было получено с помощью люминометра LUMAC модели Biocounter M2500, изготовляемого и поставляемого корпорацией LUMAC. Это устройство было модифицировано таким образом, чтобы оно могло быть оснащено фотомультипликаторной трубой ХАМАМАЦУ (HAMAMATSU) и связано с его регистратором, который записывает интенсивность свечения в условных единицах согласно методу, принятому в обычной практике специалистов в области люминометрии.

Для измерения интенсивности свечения на цельной свежей или на цельной высохшей крови использовалась камера CCD модели LAS-1000, производства фирмы FUJIFILM, связанная с компьютером, оборудованным процессором программного обеспечения для автоматической регистрации пиковой интенсивности, а также времени продолжительности реакции.

Время реакции между составом согласно изобретению и каждым из различных образцов крови было измерено в соответствии с нижеследующим протоколом.

Завершение реакции для разбавленной крови определяли с помощью кривой интенсивности свечения, регистрировавшейся регистратором, связанным с люминометром, когда достигался максимальный пик интенсивности свечения; или, наоборот, использовались значения, данные компьютером в случае образца цельной крови. Как можно видеть в Таблице 1, в случае данного примера 1 составе по изобретению, для цельной свежей крови и цельной высохшей крови пик максимальной интенсивности достигнут в течение 40 секунд с момента распыления состава.

Результаты измерений приведены в нижеследующей Таблице 1.

Пример 2 состава согласно изобретению

Приготовили состав согласно изобретению, состоящий из 5 ммоль/л люминола, 90 ммоль/л NaOH и 50 ммоль/л Н2О2, растворенных в 1 литре дистиллированной воды.

Такие же самые измерения, как и указанные в примере 1, были выполнены согласно идентичным протоколам.

Результаты измерений представлены в нижеследующей Таблице 1.

Пример 3 состава согласно изобретению

Приготовили состав согласно изобретению, состоящий из 5 ммоль/л люминола, 25 ммоль/л NaOH и 50 ммоль/л Н2О2, растворенных в 1 литре дистиллированной воды.

Такие же самые измерения, как и указанные в примере 1, были выполнены согласно идентичным протоколам.

Результаты измерений представлены в нижеследующей Таблице 1.

Пример 4 состава согласно изобретению

Приготовили состав согласно изобретению, состоящий из 5 ммоль/л люминола, 40 ммоль/л NaOH и 50 ммоль/л Н2O2, растворенных в 1 литре дистиллированной воды.

Такие же самые измерения, как и указанные в примере 1, были выполнены согласно идентичным протоколам.

Результаты измерений представлены в нижеследующей Таблице 1.

Сравнительный пример 1

Для сравнения был приготовлен состав, содержащий 5 ммоль/л люминола, 10 ммоль/л NaOH и 50 ммоль/л Н2О2, растворенные в 1 литре дистиллированной воды.

Такие же самые измерения, как и указанные в примере 1, были выполнены согласно идентичным протоколам.

Результаты измерений представлены в нижеследующей Таблице 1.

Сравнительный пример 2

Был приготовлен состав, применявшийся в прошлом и описанный Grispino, R.R.J. в статье «The effects jf luminal on serological analisis of dried blood stanis». Crime Laboratory Digest, 17 (1), 13-23. Этот состав содержал 5,6 ммоль/л люминола, 472 ммоль/л Na2CO3 и 100 ммоль/л H2О2, растворенных в 1 литре дистиллированной воды.

Такие же самые измерения, как и указанные в примере 1, были выполнены согласно идентичным протоколам.

Результаты измерений представлены в нижеследующей Таблице 1.

Сравнительный пример 3

Был приготовлен состав, содержавший те же самые концентрации люминола, H2О2 и щелочного агента, что и в составе сравнительного примера 2, описанного Grispino, R.R.J. в статье «The effects jf luminal on serological analisis of dried blood stanis», Crime Laboratory Digest, 17 (1), 13-23. Однако в этом составе, в качестве щелочного агента использован К2СО3 вместо Na2CO3.

Такие же самые измерения, как и указанные в примере 1, были выполнены согласно идентичным протоколам.

Результаты измерений представлены в нижеследующей Таблице 1.

Сравнительный пример 4

Был приготовлен состав, описанный Grodsky, M., Wright, К. & Kirk, P.L. в статье «Simplified preliminary blood testing. An improved technique and comparative study of methods», Journal of the America Institute of Criminal Law and Criminology, 42, 95-104, и Byrne в патентах США 5770116 и 5833887. Этот состав содержал 5,6 ммоль/л люминола, 472 ммоль/л Na2CO3 и, в качестве окислителя, 45,5 ммоль/л NaBO3.

Такие же самые измерения, как и указанные в примере 1, были выполнены согласно идентичным протоколам.

Результаты измерений представлены в нижеследующей Таблице 1.

Сравнительный пример 5

Был приготовлен состав, описанный Weber К., в 1966 году в статье «Die Anweldung der Chemiluminescenz des Luminols т der Gerichtlichen Medizin und Toxicologie. I. Дер Nachweis von Blutspuren» Deutsche Zeitschrift fur die gesamte Gerichtliche Medizin, 57, 410-423. Этот состав содержал 0,4 ммоль/л люминола, 45 ммоль/л NaOH и 17,6 ммоль/л H2О2, растворенных в 1 литре дистиллированной воды.

Такие же самые измерения, как и указанные в примере 1, были выполнены согласно идентичным протоколам.

Результаты измерений представлены в нижеследующей Таблице 1.

Сравнительный пример 6

Был приготовлен состав, содержащий 0,4 ммоль/л люминола, 45 ммоль/л КОН и 17,6 ммоль/л H2О2, растворенных в одном литре дистиллированной воды. Этот состав подобен составу, описанному Weber, К. в 1966 году в статье «Die Anweldung der Chemiluminescenz des Luminols in der Gerichtlichen Medizin und Toxicologie. I. Дер Nachweis von Blutspuren» Deutsche Zeitschrift fur die gesamte Gerichtliche Medizin, 57, 410-423, указанному в сравнительном примере 5, но в котором сода была заменена гидроокисью калия.

Такие же самые измерения, как и указанные в примере 1, были выполнены согласно идентичным протоколам.

Результаты измерений представлены в нижеследующей Таблице 1.

В ходе этих испытаний было отмечено, что после взбалтывания в присутствии крови, растворы гидроокиси оставались прозрачными, в то время как растворы, содержащие карбонат, показывали признаки выделения газа.

Из таблицы 1 можно заметить, что составы, содержащие в качестве щелочног агента гидроокись натрия или гидроокись калия, а не карбонат натрия или карбонат калия, показывают лучшие результаты в отношении интенсивности световой эмиссии.

Таким же образом, можно отметить, что когда эти составы распыляются на цельную свежую кровь или цельную высохшую кров, они дают наиболее сильную интенсивность свечения.

ТАБЛИЦА 1
СоставpHКровь, разведенная до I:1000 000Кровь, разведенная до I:100000Цельная кровь - свежаяЦельная кровь - сухая
Пример 1Люминол 5 ммоль/лNaOH 50 ммоль/лH2О2 50 ммоль/л11,78I:75 у.е. Продолжительность реакции: 4 минI:1106 у.е.я. Продолжительность реакции: 4 минI:66430 у.е./мм2 Продолжительность реакции: 40 секI:48405 у.е./мм2 Продолжительность реакции: 40 сек
Пример 2Люминол 5 ммоль/лNaOH 90 ммоль/лH2О2 50 ммоль/л12,36I:394 у.е. Продолжительность реакции: 2 минI:=насыщениеI:72043 у.е./мм2 Продолжительность реакции: 40 секI:73805 у.е./мм2 Продолжительность реакции: 1 min
Пример 3Люминол 5 ммоль/лNaOH 25 ммоль/лH2О2 50 ммоль/л11,12I:15 у.е. Продолжительность реакции: 4 минI:123 у.е.я. Продолжительность реакции: 4 минI:37445 у.е./мм2 Продолжительность реакции: 30 секI:39733 y.e./мм2 Продолжительность реакции: 30 сек
Пример 4Люминол 5 ммоль/лNaOH 40 ммоль/лH2О2 50 ммоль/л11,5I: не замерялась Продолжительность реакции: non-testedI: не замерялась Продолжительность реакции: non-testedI: 55165 у.е./мм2 Продолжительность реакции:I:44930 у.е./мм2 Продолжительность реакции:
Сравнительный пример 1 Люминол 5 ммоль/лNaOH 10 ммоль/лH2О2 50 ммоль/л10,21I:4 у.е. Продолжительность реакции: 4 минI:24 у.е.я. Продолжительность реакции: 4 минI:19480 у.е./мм2 Продолжительность реакции: 30 секI:17970 у.е./мм2 Продолжительность реакции: 20 сек
Сравнительный пример 2 Люминол 5,6 ммоль/лNa2CO3 472 ммоль/лH2О2 100 ммоль/л10,72I:96 у.е. Продолжительность реакции: >15 minI:250 у.е.я. Продолжительность реакции: 4 минI:31235 у.е./мм2 Продолжительность реакции: 50 секI:30973 у.е./мм2 Продолжительность реакции: 40 сек
Сравнительный пример 3Люминол 5,6 ммоль/лК2СО3 472 ммоль/лH2О2 100 ммоль/л10,95I:30 у.е. Продолжительность реакции: >15 минI:173 у.е.я. Продолжительность реакции: 4 мин1:33360 у.е./мм2Продолжительность реакции: 40 секI:26405 у.е./мм2 Продолжительность реакции: 30 сек
Сравнительный пример 4 Люминол 5,6 ммоль/лNa2CO3 472 ммоль/лNaBO3 45,5 ммоль/л10,90I:155 у.е. Продолжительность реакции: >15 минI:529 у.е.я. Продолжительность реакции: 4 минI:31803у.е./мм2 Продолжительность реакции: 30 секI:32175 у.е./мм2 Продолжительность реакции: 30 сек
Сравнительный пример 5 Люминол 0,4 ммоль/лNaOH 45 ммоль/л H2О2 17,6 ммоль/л12,33I:245 у.е. Продолжительность реакции: 8 минI:1542 у.е.я. Продолжительность реакции: >15 минI: 31210 у.е./мм2 Продолжительность реакции: 20 секI:29853 у.е./мм2 Продолжительность реакции: 20 сек
Сравнительный пример 6 Люминол 0,4 ммоль/л КОН 45 ммоль/лH2О2 17,6 ммоль/л11,86I:255 у.е. Продолжительность реакции: 4 минI:1402 у.е.я. Продолжительность реакции: 10 минI:29020 у.е./мм2 Продолжительность реакции: 20 секI:27645 у.е./мм2 Продолжительность реакции: 20 сек

И хотя это и не отражено в Таблице 1, было также отмечено, что с составами согласно изобретению или с составами, использовавшимися в прошлом, содержащими гидроокись калия, эмиссия света происходит в виде кратковременной вспышки, что привело к отказу от этого щелочного агента.

Такие же результаты были получены с составами по изобретению, распыленными на пятно крови, вымытое в воде, смешанной с отбеливателем, ополоснутое в воде и высушенное.

Исходя из Таблицы 1 можно далее отметить, что предпочтительным составом согласно изобретению, по времени световой эмиссии, и для свежей крови и для крови, оставленной сохнуть в течение приблизительно 30 минут, является состав, состоявший из 5 ммоль/л люминола, 90 ммоль/л NaOH, и 50 ммоль/л H2О2, растворенных в воде.

Фактически, одинаково, как для свежей крови, так и для высохшей крови, раствор, полученный с этим преимущественным составом по изобретению вызывает эмиссию очень яркого света, которая достигает предела, когда концентрация NaOH превышает 90 ммоль/л.

Этот состав является поэтому особенно подходящим для того, чтобы показать следы крови, потерянной ранеными животными, даже в условиях затухающего и исчезающего света, например на закате или светлой ночью, в противоположность полной ночной темноте.

Однако такой состав имеет значение показателя рН выше чем 12, что может быть неприемлемым, когда состав используется для обнаружения и локализации следов крови на месте преступления или несчастного случая, так как при таком значении показателя рН может быть поставлена под угрозу ДНК-идентификация выявленной крови.

Действительно, при значении показателя рН выше или равном 12 кровь, локализованная посредством соединения люминола, не может при идентификации обеспечивать надежные и воспроизводимые результаты исследования ДНК.

В самом деле, следует отметить, что ДНК крови, "обработанной" составом, включающим соединения люминола с показателем рН, большим или равным 12, подвергалась деградации.

Напротив, состав по изобретению, содержащий 5 ммоль/л люминола, 50 ммоль/л H2О2, и от 25 до 50 ммоль/л NaOH, имеет значение показателя рН, который понижен до приблизительно 11,5, что обеспечивает надежные и воспроизводимые исследования ДНК, как это было подтверждено Институтом уголовных расследований национальной П