Полипептид фактора vii свертывания крови, его получение и применение

Полипептид фактора vii свертывания крови, его получение и применение

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к новым вариантам человеческого фактора свертывания крови VIIa, обладающим коагулирующей активностью, а также к конструкциям нуклеиновых кислот, кодирующим такие варианты, к векторам и к клеткам-хозяевам, содержащим и экспрессирующим указанную нуклеиновую кислоту, к фармацевтическим композициям, к их использованию и к способам лечения.

Предпосылки создания изобретения

Свертывание крови представляет собой процесс, заключающийся в сложном взаимодействии различных компонентов крови (или факторов), которые, в конечном счете, образуют фибриновый сгусток. В общих чертах, компоненты крови, которые участвуют в указанном процессе, называемом «каскадом» реакций свертывания крови, представляют собой ферментативно неактивные белки (проферменты или зимогены), которые превращаются в протеолитические ферменты под действием активатора (который сам является активированным фактором свертывания). Факторы свертывания крови, которые подвергаются такому превращению, обычно называются «активными факторами» и обозначаются добавлением буквы «а» к названию фактора свертывания (например, фактор VIIa).

Инициация процесса гемостаза опосредуется образованием комплекса между тканевым фактором, высвобождающимся в результате повреждения стенок сосудов, и фактором VIIa. Затем, этот комплекс превращает факторы IX и Х в их активные формы. Фактор Ха превращает ограниченное количество протромбина в тромбин на клетках, несущих тканевый фактор. Тромбин активирует тромбоциты и факторы V и VIII с превращением в факторы Va и VIIIa, и оба этих кофактора в последующем процессе приводят к полной тромбиновой «вспышке». Этот процесс включает образование фактора Ха под действием фактора IXa (в комплексе с фактором VIIIa) и происходит на поверхности активированных тромбоцитов. И наконец, тромбин превращает фибриноген в фибрин, что приводит к образованию фибринового сгустка. В последние годы было обнаружено, что фактор VII и тканевый фактор являются главными инициаторами свертывания крови.

Фактор VII представляет собой гликопротеин плазмы, который циркулирует в кровотоке в следовых количествах в виде одноцепочечного зимогена. Этот зимоген является каталитически неактивным. Одноцепочечный фактор VII может быть превращен в двухцепочечный фактор VIIa под действием фактора Ха, фактора XIIa, фактора IXa, фактора VIIa или тромбина in vitro. Очевидно, что фактор Ха является главным физиологическим активатором фактора VII. Подобно некоторым другим белкам плазмы, участвующим в гемостазе, активность фактора VII зависит от витамина К, необходимого для гамма-карбоксилирования множества остатков глутаминовой кислоты, которые образуют кластер вблизи амино-конца данного белка. Эти гамма-карбоксилированные глутаминовые кислоты необходимы для индуцируемого ионами металла взаимодействия фактора VII с фосфолипидами. Превращение зимогена фактора VII в активированную двухцепочечную молекулу происходит путем расщепления внутренней пептидной связи Arg₁₅₂-Ile₁₅₃. В присутствии тканевого фактора, фосфолипидов и ионов кальция двухцепочечный фактор VIIa быстро активирует фактор Х или фактор IX путем ограниченного протеолиза.

Часто бывает необходимо стимулировать или усиливать каскад реакций свертывания крови у индивидуума. Фактор VIIa используется для лечения расстройств, характеризующихся склонностью к кровоточивости и обусловленных рядом причин, таких как дефициты факторов свертывания крови (например, гемофилия А и В или дефицит факторов свертывания XI или VII) или присутствие ингибиторов факторов свертывания крови. Фактор VIIa также используется для снижения повышенной кровоточивости, которая имеет место у индивидуумов с нормально функционирующей системой свертывания крови (где не наблюдается дефицита факторов свертывания или отсутствуют ингибиторы, воздействующие на любой из факторов свертывания). Такая кровоточивость может быть, например, обусловлена нарушением функции тромбоцитов, тромбоцитопенией или болезнью Виллебранда. Кровоточивость является также главной проблемой при хирургических операциях и других формах повреждения тканей.

Европейский патент №200421 (ZymoGenetics) относится к нуклеотидной последовательности, кодирующей человеческий фактор VII, и к рекомбинантной экспрессии фактора VII в клетках млекопитающего.

В работе Dickinson et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1996) 93, 14379-14384) описаны варианты фактора VII, где каждый из Lys157, Val158, Glu296, Met298, Asp334, Ser336 или Lys337 были заменены Ala.

В работе Iwanaga et al. (Thromb. Haemost. (supplement August 1999), 466, abstract 1474) описаны варианты FVIIa, в которых остатки 316-320 были делетированы либо остатки 311-322 были заменены соответствующими остатками трипсина.

Однако, пока еще остается актуальной необходимость в получении вариантов фактора VIIa, которые обладают коагулирующей активностью; вариантов, которые обладают высокой активностью и могут быть введены в относительно низких дозах; и вариантов, которые не продуцируют нежелательных побочных эффектов, таких как системная активация каскада реакций свертывания крови и кровотечение соответственно, ассоциируемых с традиционной терапией.

Описание изобретения

Настоящее изобретение относится к полипептидам фактора свертывания крови VIIa, обладающим коагулирущей активностью.

В своем первом аспекте, настоящее изобретение относится к полипептиду фактора VII, включающему аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, или к его варианту, где, по крайней мере, одна аминокислота, соответствующая Lys в положении 157 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой, при условии, что указанным вариантом не является FVII(Ala157).

Во втором своем аспекте, настоящее изобретение относится к полипептиду фактора VII, включающему аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, или к его варианту, где, по крайней мере, одна аминокислота, соответствующая Lys в положении 337 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой, при условии, что указанным вариантом не является FVII(Ala337).

В своем третьем аспекте, настоящее изобретение относится к полипептиду фактора VII, включающему аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, или к его варианту, где, по крайней мере, одна аминокислота, соответствующая Asp в положении 334 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой, при условии, что указанным вариантом не является FVII(Ala334).

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к полипептиду фактора VII, включающему аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, или к его варианту, где, по крайней мере, одна аминокислота, соответствующая Ser в положении 336 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой, при условии, что указанным вариантом не является FVII(Ala336).

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к полипептиду фактора VII, включающему аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, или к его варианту, где, по крайней мере, одна аминокислота, соответствующая Val в положении 158 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой, при условии, что указанным вариантом не является FVII(Ala158).

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к полипептиду фактора VII, включающему аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, или к его варианту, где, по крайней мере, одна аминокислота, соответствующая Glu в положении 296 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой, при условии, что указанным вариантом не является FVII(Ala296).

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к полипептиду фактора VII, включающему аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, или к его варианту, где, по крайней мере, одна аминокислота, соответствующая Met в положении 298 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой, при условии, что указанным вариантом не является FVII(Ala298).

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к полипептиду фактора VII с последовательностью SEQ ID NO:1, где одна аминокислота, независимо выбранная из группы, состоящей из Lys в положении 157, Lys в положении 337, Asp в положении 334, Ser в положении 336, Val в положении 158, Glu в положении 296 и Met в положении 298 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой, при условии, что указанным вариантом не являются FVII(Ala157), FVII(Ala334), FVII(Ala336), FVII(Ala337), FVII(Ala158), FVII(Ala296) или FVII(Ala298).

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к полипептиду фактора VII с последовательностью SEQ ID NO:1, где две аминокислоты, независимо выбранные из группы, состоящей из Lys в положении 157, Lys в положении 337, Asp в положении 334, Ser в положении 336, Val в положении 158, Glu в положении 296 и Met в положении 298 SEQ ID NO:1, заменены другими аминокислотами.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к полипептиду фактора VII с последовательностью SEQ ID NO:1, где три аминокислоты, независимо выбранные из группы, состоящей из Lys в положении 157, Lys в положении 337, Asp в положении 334, Ser в положении 336, Val в положении 158, Glu в положении 296 и Met в положении 298 SEQ ID NO:1, заменены другими аминокислотами.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к полипептиду фактора VII с последовательностью SEQ ID NO:1, где четыре аминокислоты, независимо выбранные из группы, состоящей из Lys в положении 157, Lys в положении 337, Asp в положении 334, Ser в положении 336, Val в положении 158, Glu в положении 296 и Met в положении 298 SEQ ID NO:1, заменены другими аминокислотами.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к полипептиду фактора VII с последовательностью SEQ ID NO:1, где пять аминокислот, независимо выбранные из группы, состоящей из Lys в положении 157, Lys в положении 337, Asp в положении 334, Ser в положении 336, Val в положении 158, Glu в положении 296 и Met в положении 298 SEQ ID NO:1, заменены другими аминокислотами.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к полипептиду фактора VII с последовательностью SEQ ID NO:1, где шесть аминокислот, независимо выбранные из группы, состоящей из Lys в положении 157, Lys в положении 337, Asp в положении 334, Ser в положении 336, Val в положении 158, Glu в положении 296 и Met в положении 298 SEQ ID NO:1, заменены другими аминокислотами.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к полипептиду фактора VII с последовательностью SEQ ID NO:1, где аминокислоты, состоящие из Lys в положении 157, Lys в положении 337, Asp в положении 334, Ser в положении 336, Val в положении 158, Glu в положении 296 и Met в положении 298 SEQ ID NO:1, заменены другими аминокислотами.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к варианту фактора свертывания крови VII, где один или несколько из остатков: Lys в положении 157, Lys в положении 337, Asp в положении 334, Ser в положении 336, Val в положении 158, Glu в положении 296 и Met в положении 298 SEQ ID NO:1 - заменен(ы) другим аминокислотным остатком, который может кодироваться конструкциями нуклеиновых кислот, и необязательно, где один или несколько дополнительных аминокислотных остатков в остальных положениях протеазного домена заменены другим аминокислотным остатком, который может кодироваться конструкциями нуклеиновых кислот; при условии, что указанным вариантом не являются FVII(Ala157), FVII(Ala334), FVII(Ala336), FVII(Ala337), FVII(Ala158), FVII(Ala296) или FVII(Ala298).

Используемый здесь термин «FVII(Ala157)» означает вариант фактора свертывания крови VII с последовательностью SEQ ID NO:1, где Lys в положении 157 SEQ ID NO:1 заменен аланином. Этот термин, например, не включает варианты фактора свертывания VII, где две или несколько аминокислот в положениях SEQ ID NO:1 заменены другими аминокислотами.

Используемый здесь термин «FVII(Ala337)» означает вариант фактора свертывания крови VII с последовательностью SEQ ID NO:1, где Lys в положении 337 SEQ ID NO:1 заменен аланином. Этот термин, например, не включает варианты фактора свертывания VII, где две или несколько аминокислот в положениях SEQ ID NO:1 заменены другими аминокислотами.

Используемый здесь термин «FVII(Ala334)» означает вариант фактора свертывания крови VII с последовательностью SEQ ID NO:1, где Asp в положении 334 SEQ ID NO:1 заменен аланином. Этот термин, например, не включает варианты фактора свертывания VII, где две или несколько аминокислот в положениях SEQ ID NO:1 заменены другими аминокислотами.

Используемый здесь термин «FVII(Ala336)» означает вариант фактора свертывания крови VII с последовательностью SEQ ID NO:1, где Ser в положении 336 SEQ ID NO:1 заменен аланином. Этот термин, например, не включает варианты фактора свертывания VII, где две или несколько аминокислот в положениях SEQ ID NO:1 заменены другими аминокислотами.

Используемый здесь термин «FVII(Ala158)» означает вариант фактора свертывания крови VII с последовательностью SEQ ID NO:1, где Val в положении 158 SEQ ID NO:1 заменен аланином. Этот термин, например, не включает варианты фактора свертывания VII, где две или несколько аминокислот в положениях SEQ ID NO:1 заменены другими аминокислотами.

Используемый здесь термин «FVII(Ala296)» означает вариант фактора свертывания крови VII с последовательностью SEQ ID NO:1, где Glu в положении 296 SEQ ID NO:1 заменен аланином. Этот термин, например, не включает варианты фактора свертывания VII, где две или несколько аминокислот в положениях SEQ ID NO:1 заменены другими аминокислотами.

Используемый здесь термин «FVII(Ala298)» означает вариант фактора свертывания крови VII с последовательностью SEQ ID NO:1, где Met в положении 298 SEQ ID NO:1 заменен аланином. Этот термин, например, не включает варианты фактора свертывания VII, где две или несколько аминокислот в положениях SEQ ID NO:1 заменены другими аминокислотами.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к конструкции нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид фактора VII настоящего изобретения.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к конструкции нуклеиновой кислоты, включающей нуклеотидную последовательность, кодирующую вариант фактора VII.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к рекомбинантному вектору, включающему конструкцию нуклеиновой кислоты, кодирующую вариант FVIIa.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к рекомбинантной клетке-хозяину, содержащей указанную конструкцию нуклеиновой кислоты или указанный вектор.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к трансгенному животному, содержащему и экспрессирующему указанную конструкцию нуклеиновой кислоты.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к трансгенному растению, содержащему и экспрессирующему указанную конструкцию нуклеиновой кислоты.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к способу продуцирования полипептида фактора VII настоящего изобретения, где указанный способ предусматривает культивирование клетки, включающей конструкцию нуклеиновой кислоты в подходящей культуральной среде в условиях, обеспечивающих экспрессию указанной конструкции нуклеиновой кислоты, и выделение полученного полипептида из этой культуральной среды.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к способу продуцирования варианта фактора VII настоящего изобретения, где указанный способ предусматривает культивирование клетки, включающий конструкцию нуклеиновой кислоты в подходящей культуральной среде в условиях, обеспечивающих экспрессию указанной конструкции нуклеиновой кислоты, и выделение полученного полипептида из этой культуральной среды.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к способу продуцирования полипептида фактора VII, где указанный способ предусматривает выделение указанного полипептида из молока, продуцируемого указанным трансгенным животным.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к способу продуцирования варианта фактора VII, где указанный способ предусматривает выделение указанного варианта из молока, продуцируемого указанным трансгенным животным.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к способу продуцирования полипептида фактора VII, где указанный способ предусматривает культивирование клетки указанного трансгенного растения, содержащего указанную конструкцию нуклеиновой кислоты, и выделение указанного полипептида из полученного растения.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к способу продуцирования варианта фактора VII, где указанный способ предусматривает культивирование клетки указанного трансгенного растения, содержащего указанную конструкцию нуклеиновой кислоты, и выделение указанного варианта из полученного растения.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей полипептид фактора VII, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, или его вариант, где, по крайней мере, одна аминокислота, соответствующая Lys в положении 157 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой; и, необязательно, фармацевтически приемлемый носитель.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей полипептид фактора VII, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, или его вариант, где, по крайней мере, одна аминокислота, соответствующая Lys в положении 337 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой; и, необязательно, фармацевтически приемлемый носитель.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей полипептид фактора VII, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, или его вариант, где, по крайней мере, одна аминокислота, соответствующая Asp в положении 334 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой; и, необязательно, фармацевтически приемлемый носитель.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей полипептид фактора VII, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, или его вариант, где, по крайней мере, одна аминокислота, соответствующая Ser в положении 336 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой; и, необязательно, фармацевтически приемлемый носитель.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей полипептид фактора VII, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, или его вариант, где, по крайней мере, одна аминокислота, соответствующая Val в положении 158 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой; и, необязательно, фармацевтически приемлемый носитель.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей полипептид фактора VII, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, или его вариант, где, по крайней мере, одна аминокислота, соответствующая Glu в положении 296 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой; и, необязательно, фармацевтически приемлемый носитель.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей полипептид фактора VII, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, или его вариант, где, по крайней мере, одна аминокислота, соответствующая Met в положении 298 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой; и, необязательно, фармацевтически приемлемый носитель.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей вариант фактора свертывания VII, где один или несколько из остатков: Lys в положении 157, Lys в положении 337, Asp в положении 334, Ser в положении 336, Val в положении 158, Glu в положении 296 и Met в положении 298 SEQ ID NO:1 - заменен(ы) другим аминокислотным остатком, который может кодироваться конструкциями нуклеиновых кислот, и, необязательно, где один или несколько дополнительных аминокислотных остатков в остальных положениях протеазного домена заменены другим аминокислотным остатком, который может кодироваться конструкциями нуклеиновых кислот; и, необязательно, фармацевтически приемлемый носитель.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к использованию полипептида фактора VII, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, или его варианта, где, по крайней мере, одна аминокислота, соответствующая Lys в положении 157 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой, в целях получения лекарственного средства для лечения эпизодического кровотечения или в целях усиления нормальной системы гемостаза.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к использованию полипептида фактора VII, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, или его варианта, где, по крайней мере, одна аминокислота, соответствующая Lys в положении 337 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой, в целях получения лекарственного средства для лечения эпизодического кровотечения или в целях усиления нормальной системы гемостаза.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к использованию полипептида фактора VII, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, или его варианта, где, по крайней мере, одна аминокислота, соответствующая Asp в положении 334 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой, в целях получения лекарственного средства для лечения эпизодического кровотечения или в целях усиления нормальной системы гемостаза.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к использованию полипептида фактора VII, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, или его варианта, где, по крайней мере, одна аминокислота, соответствующая Ser в положении 336 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой, в целях получения лекарственного средства для лечения эпизодического кровотечения или в целях усиления нормальной системы гемостаза.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к использованию полипептида фактора VII, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, или его варианта, где, по крайней мере, одна аминокислота, соответствующая Val в положении 158 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой, в целях получения лекарственного средства для лечения эпизодического кровотечения или в целях усиления нормальной системы гемостаза.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к использованию полипептида фактора VII, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, или его варианта, где, по крайней мере, одна аминокислота, соответствующая Glu в положении 296 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой, в целях получения лекарственного средства для лечения эпизодического кровотечения или в целях усиления нормальной системы гемостаза.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к использованию полипептида фактора VII, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, или его варианта, где, по крайней мере, одна аминокислота, соответствующая Met в положении 298 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой, в целях получения лекарственного средства для лечения эпизодического кровотечения или в целях усиления нормальной системы гемостаза.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к использованию варианта фактора свертывания VII, где один или несколько из остатков: Lys в положении 157, Lys в положении 337, Asp в положении 334, Ser в положении 336, Val в положении 158, Glu в положении 296 и Met в положении 298 SEQ ID NO:1 - заменен(ы) другим аминокислотным остатком, который может кодироваться конструкциями нуклеиновых кислот, и, необязательно, где один или несколько дополнительных аминокислотных остатков в остальных положениях протеазного домена заменены другим аминокислотным остатком, который может кодироваться конструкциями нуклеиновых кислот, в целях получения лекарственного средства для лечения эпизодического кровотечения или в целях усиления нормальной системы гемостаза.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к способу лечения эпизодического кровотечения или усиления нормальной системы гемостаза у индивидуума, где указанный способ предусматривает введение индивидууму, нуждающемуся в этом, терапевтически или профилактически эффективного количества полипептида фактора VII, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, или его варианта, где, по крайней мере, одна аминокислота, соответствующая Lys в положении 157 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к способу лечения эпизодического кровотечения или усиления нормальной системы гемостаза у индивидуума, где указанный способ предусматривает введение индивидууму, нуждающемуся в этом, терапевтически или профилактически эффективного количества полипептида фактора VII, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, или его варианта, где, по крайней мере, одна аминокислота, соответствующая Lys в положении 337 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к способу лечения эпизодического кровотечения или усиления нормальной системы гемостаза у индивидуума, где указанный способ предусматривает введение индивидууму, нуждающемуся в этом, терапевтически или профилактически эффективного количества полипептида фактора VII, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, или его варианта, где, по крайней мере, одна аминокислота, соответствующая Asp в положении 334 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к способу лечения эпизодического кровотечения или усиления нормальной системы гемостаза у индивидуума, где указанный способ предусматривает введение индивидууму, нуждающемуся в этом, терапевтически или профилактически эффективного количества полипептида фактора VII, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, или его варианта, где, по крайней мере, одна аминокислота, соответствующая Ser в положении 336 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к способу лечения эпизодического кровотечения или усиления нормальной системы гемостаза у индивидуума, где указанный способ предусматривает введение индивидууму, нуждающемуся в этом, терапевтически или профилактически эффективного количества полипептида фактора VII, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, или его варианта, где, по крайней мере, одна аминокислота, соответствующая Val в положении 158 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к способу лечения эпизодического кровотечения или усиления нормальной системы гемостаза у индивидуума, где указанный способ предусматривает введение индивидууму, нуждающемуся в этом, терапевтически или профилактически эффективного количества полипептида фактора VII, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, или его варианта, где, по крайней мере, одна аминокислота, соответствующая Glu в положении 296 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к способу лечения эпизодического кровотечения или усиления нормальной системы гемостаза у индивидуума, где указанный способ предусматривает введение индивидууму, нуждающемуся в этом, терапевтически или профилактически эффективного количества полипептида фактора VII, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, или его варианта, где, по крайней мере, одна аминокислота, соответствующая Met в положении 298 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к способу лечения эпизодического кровотечения или усиления нормальной системы гемостаза у индивидуума, где указанный способ предусматривает введение индивидууму, нуждающемуся в этом, терапевтически или профилактически эффективного количества варианта фактора свертывания VII, где один или несколько из остатков: Lys в положении 157, Lys в положении 337, Asp в положении 334, Ser в положении 336, Val в положении 158, Glu в положении 296 и Met в положении 298 SEQ ID NO:1 - заменен(ы) другим аминокислотным остатком, который может кодироваться конструкциями нуклеиновых кислот, и, необязательно, где один или несколько дополнительных аминокислотных остатков в остальных положениях протеазного домена заменены другим аминокислотным остатком, который может кодироваться конструкциями нуклеиновых кислот.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей вариант фактора свертывания VII, где один или несколько из остатков: Lys в положении 157, Lys в положении 337, Asp в положении 334, Ser в положении 336, Val в положении 158, Glu в положении 296 и Met в положении 298 SEQ ID NO:1 - заменен(ы) другим аминокислотным остатком, который может кодироваться конструкциями нуклеиновых кислот, и, необязательно, где один или несколько дополнительных аминокислотных остатков в остальных положениях протеазного домена заменены другим аминокислотным остатком, который может кодироваться конструкциями нуклеиновых кислот, при условии, что указанным вариантом не являются FVII(Ala157), FVII(Ala334), FVII(Ala336), FVII(Ala337), FVII(Ala158), FVII(Ala296) или FVII(Ala298), и необязательно фармацевтически приемлемый носитель.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к использованию варианта фактора свертывания VII, где один или несколько из остатков: Lys в положении 157, Lys в положении 337, Asp в положении 334, Ser в положении 336, Val в положении 158, Glu в положении 296 и Met в положении 298 SEQ ID NO:1 - заменен(ы) другим аминокислотным остатком, который может кодироваться конструкциями нуклеиновых кислот, и, необязательно, где один или несколько дополнительных аминокислотных остатков в остальных положениях протеазного домена заменены другим аминокислотным остатком, который может кодироваться конструкциями нуклеиновых кислот, при условии, что указанным вариантом не является FVII(Ala157), FVII(Ala334), FVII(Ala336), FVII(Ala337), FVII(Ala158), FVII(Ala296) или FVII(Ala298), в целях получения лекарственного средства для лечения эпизодического кровотечения или в целях усиления нормальной системы гемостаза.

В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к способу лечения и профилактики расстройств, характеризующихся склонностью к кровотечениям, или усиления нормальной системы гемостаза у индивидуума, где указанный способ предусматривает введение указанному индивидууму, нуждающемуся в этом, терапевтически или профилактически эффективного количества варианта фактора свертывания VII, где один или несколько из остатков: Lys в положении 157, Lys в положении 337, Asp в положении 334, Ser в положении 336, Val в положении 158, Glu в положении 296 и Met в положении 298 SEQ ID NO:1 - заменен(ы) другим аминокислотным остатком, который может кодироваться конструкциями нуклеиновых кислот, и, необязательно, где один или несколько дополнительных аминокислотных остатков в остальных положениях протеазного домена заменены другим аминокислотным остатком, который может кодироваться конструкциями нуклеиновых кислот, при условии, что указанным вариантом не являются FVII(Ala157), FVII(Ala334), FVII(Ala336), FVII(Ala337), FVII(Ala158), FVII(Ala296) или FVII(Ala298).

В одном из вариантов осуществления изобретения, полипептидом фактора VII является полипептид, в котором аминокислота, соответствующая Lys в положении 157 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой.

В другом варианте осуществления изобретения, полипептидом фактора VII является полипептид, в котором аминокислота, соответствующая Lys в положении 337 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой.

В другом варианте осуществления изобретения, полипептидом фактора VII является полипептид, в котором аминокислота, соответствующая Asp в положении 334 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой.

В другом варианте осуществления изобретения, полипептидом фактора VII является полипептид, в котором аминокислота, соответствующая Ser в положении 336 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой.

В другом варианте осуществления изобретения, полипептидом фактора VII является полипептид, в котором аминокислота, соответствующая Val в положении 158 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой.

В другом варианте осуществления изобретения, полипептидом фактора VII является полипептид, в котором аминокислота, соответствующая Glu в положении 296 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой.

В другом варианте осуществления изобретения, полипептидом фактора VII является полипептид, в котором аминокислота, соответствующая Met в положении 298 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой.

В другом варианте осуществления изобретения, полипептидом фактора VII является полипептид, в котором, по крайней мере, одна аминокислота в остальных положениях в протеазном домене заменена другой аминокислотой.

В другом варианте осуществления изобретения, полипептидом фактора VII является полипептид, в котором, по большей мере, 20 дополнительных аминокислот в остальных положениях в протеазном домене заменены другими аминокислотами.

В другом варианте осуществления изобретения, полипептидом фактора VII является полипептид, в котором, по крайней мере, одна аминокислота, соответствующая аминокислоте в положении, выбранном из положений 159-170 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой.

В другом варианте осуществления изобретения, полипептидом фактора VII является полипептид, в котором, по крайней мере, одна аминокислота, соответствующая аминокислоте в положении, выбранном из положений 290-312 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой.

В другом варианте осуществления изобретения, полипептидом фактора VII является полипептид, в котором, по крайней мере, одна аминокислота, соответствующая аминокислоте в положении, выбранном из положений 330-339 SEQ ID NO:1, заменена другой аминокислотой.

В другом варианте осуществления изобретения, полипептидом фактора VII является полипептид, в котором указанная аминокислота Lys в положении 157 SEQ ID NO:1 заменена аминокислотой, выбранной из группы, состоящей из Gly, Val, Ser, Thr, Asn, Gln, Asp и Glu.

В другом варианте осуществления изобретения, полипептидом фактора VII является полипептид, в котором указанная аминокислота Lys в положении 337 SEQ ID NO:1 заменена аминокислотой, выбранной из группы, состоящей из Ala, Gly, Val, Ser, Thr, Asn, Gln, Asp и Glu.

В другом варианте осуществления изобретения, полипептидом фактора VII является полипептид, в котором указанная аминокислота Asp в положении 334 SEQ ID NO:1 заменена аминокислотой, выбранной из группы, состоящей из Gly и Glu.

В другом варианте осуществления изобретения, полипептидом фактора VII является полипептид, в котором указанная аминокислота Ser в положении 336 SEQ ID NO:1 заменена аминокислотой, выбранной из группы, состоящей из Gly и Glu.

В другом варианте осуществления изобретения, полипептидом фактора VII является полипептид, в котором указанная аминокислота Val в положении 158 SEQ ID NO:1 заменена аминокислотой, выбранной из группы, состоящей из Ser, Thr, Asn, Gln, Asp и Glu.

В другом варианте осуществления изобретения, полипептидом фактора VII является полипептид, в котором указанная аминокислота Glu в положении 296 SEQ ID NO:1 заменена аминокислотой, выбранной из группы, состоящей из Arg, Lys и Val.

В другом варианте осуществления изобретения, полипептидом фактора VII является полипептид, в котором указанная аминокислота Met в положении 298 SEQ ID NO:1 заменена аминокислотой, выбранной из группы, состоящей из Lys, Arg, Gln и Asn.

В другом варианте осуществления изобретения, полипептидом фактора VII является полипептид, где указанная аминокислота заменена другой аминокислотой, которая может кодироваться конструкциями нуклеиновых кислот.

В другом варианте осуществления изобретения, полипептидом фактора VII является полипептид, который представляет собой полипептид фактора VII человека.

В другом варианте осуществления изобретения, полипептидом фактора VII является полипептид, который представляет собой полипептид фактора VIIa человека.

В другом варианте осуществления изобретения, полипептидом фактора VII является полипептид, независимо выбранный из группы, состоящей из [E296V]-FVII, [M298Q]-FVII и [S336G]-FVII.

В другом варианте осуществления изобретения, полипептидом фактора VII является полипептид, независимо выбранный из группы, состоящей из [V158T/M298Q]-FVII, [E296V/M298Q]-FVII, [V158D/E296V]-FVII, [V158D/M298Q]-FVII и [V158D/M298K]-FVII.

В другом варианте осуществления изобретения, полипептидом фактора VII является [V158D/E296V/M298Q]-FVII.

В другом варианте осуществления изобретения, полипептидом фактора VII является [V158D/E296V/M298Q/К337А]-FVII.

В другом варианте осуществления изобретения, вариантами фактора VII являются варианты, в которых один или несколько из остатков: Lys в положении 157, Lys в положении 337, Asp в положении 334, Ser в положении 336, Val в положении 158, Glu в положении 296 и Met в положении 298 SEQ ID NO:1 - заменен(ы) другим аминокислотным остатком, который может кодироваться конструкциями нуклеиновых кислот и, необязательно, где один или несколько дополнительных аминокислотных остатков в остальных положениях протеазного домена заменены другим аминокислотным остатком, который может кодироваться конструкциями нуклеиновых кислот, при условии, что указанным вариантом не являются FVII(Ala157), FVII(Ala334), FVII(Ala336), FVII(Ala337), FVII(Ala158), FVII(Ala296) или FVII(Ala298).

В одном