Способ определения хлорацетанилидных гербицидов (ацетохлор, бутахлор, алахлор) с помощью пьезокварцевого иммуносенсора

Способ определения хлорацетанилидных гербицидов (ацетохлор, бутахлор, алахлор) с помощью пьезокварцевого иммуносенсора

Реферат

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть рекомендовано для селективного определения хлорацетанилидных гербицидов (ацетохлора, бутахлора, алахлора) в объектах окружающей среды - почве, продуктах питания, промышленных сточных и природных водах.

Известен способ определения хлорацетанилидных гербицидов (ацетохлор, бутахлор, алахлор) с применением иммуноферментного анализа (WEB: www.abraxiskits.com). Недостатками данного способа являются относительно низкая чувствительность (например, предел обнаружения ацетохлора 0,19 нг/мл, что превышает ПДК), продолжительность (включает несколько стадий), одноразовое использование дорогостоящих биореагентов, косвенное определение аналитов после введения в пробу дополнительных ферментных меток.

Известен способ определения бутахлора с применением иммуноферментного анализа (GUO Yongen, CHEN Jiahua, WANG Nengdong, ZHANG Xiu, GUO Zhenquan, JIN Shenq / Preparation and Application of Polyclonal Antibody to Butachlor // Anal Lett Vol.38, №4, pp.447-452). Недостатками данного способа являются продолжительность (включает несколько стадий), низкая чувствительность (0,5 нг/мл), одноразовое использование дорогостоящих биореагентов, косвенное определение бутахлора после введения в пробу дополнительных ферментных меток.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату является способ определения ацетохлора с применением пьезокварцевого иммуносенсора в проточно-инжекционном режиме (Mikhail Yu. Lebedev; Sergei A. Eremin; Petr Skladal // Development of the Piezoelectric Biosensor for Acetochlor Detection // Anal Lett Vol 36, Issue 11 (2003) P.: 2443-2457). Недостатком данного способа является невысокая чувствительность (предел обнаружения равен 0,2 нг/мл, ПДК гербицидов данной группы составляет 0,1 нг/мл). Такой способ не позволяет осуществлять мониторинг хлорацетанилидных гербицидов в объектах окружающей среды.

Задачей настоящего изобретения является снижение предела обнаружения хлорацетанилидных гербицидов (ацетохлор, бутахлор, алахлор), увеличение чувствительности определения и уменьшение его продолжительности в сложных по составу пробах с последующей регенерацией иммунореагентов.

Поставленная задача решается тем, что пробу, содержащую хлорацетанилидный гербицид, обрабатывают ацетонитрилом в присутствии сульфата аммония и к экстракту добавляют фиксированное количество антител в фосфатном буфере (рН 7,1-7,5). Полученный раствор экстракта в фосфатном буфере наносят на поверхность сенсора с покрытием на основе хлорацетанилид-белкового конъюгата и регистрируют изменение частоты колебания сенсора при взаимодействии хлорацетанилид-белкового конъюгата с антителами к хлорацетанилидному гербициду относительно сенсора сравнения с рецепторным слоем на основе белка. Аналитический сигнал обратно пропорционален концентрации хлорацетанилидного гербицида в анализируемой пробе. Регенерацию рецепторного покрытия для проведения последующих определений осуществляют нанесением на поверхность раствора тиоционата калия, обеспечивая многократное использование сенсора.

При осуществлении пробоподготовки микроэкстракцией к 1 мл анализируемой пробы, содержащей хлорацетанилидный гербицид (ацетохлор, бутахлор, алахлор), добавляют 217 мкл ацетонитрила и 0,5370 г высаливателя - (NH₄)₂SO₄ и перемешивают в течение 2 мин до выделения органического растворителя в самостоятельную фазу. Органическую фазу отбирают микрошприцем и используют для анализа. Для этого к 1 мкл экстракта на основе ацетонитрила, содержащего хлорацетанилидный гербицид, добавляют раствор сыворотки, содержащий соответствующие антитела, отвечающий 50%-ному связыванию в гетерогенный иммунокомплекс. Смесь доводят фосфатным буферным раствором до 1 мл (рН=7,1-7,5) и выдерживают до завершения реакции в течение 15 мин при 20°С.

Далее на поверхность массочувствительного пьезокварцевого иммуносенсора с рецепторным покрытием на основе хлорацетанилид-белкового конъюгата (ацетохлор-, бутахлор-, алахлор-), наносят предварительно подготовленную пробу в фосфатном буферном растворе (рН=7,1-7,5), содержащую хлорацетанилидный гербицид и фиксированное количество антител к нему, и регистрируют изменение частоты колебаний сенсора при взаимодействии хлорацетанилид-белкового конъюгата с антителами к хлорацетанилидному гербициду относительно сенсора сравнения, содержащего белковую молекулу. В качестве аналитического сигнала сенсора используют разность изменения частоты колебания индикаторного и сенсора сравнения при взаимодействии хлорацетанилид-белкового конъюгата с поликлональными антителами к соответствующему гербициду, присутствующими в пробе. Аналитический сигнал сенсора обратно пропорционален содержанию хлорацетанилида в анализируемой пробе. После каждого цикла измерения осуществляют регенерацию рецепторного покрытия, нанося на поверхность раствор тиоционата калия.

Отличительными признаками предложенного способа являются:

- высокая чувствительность способа, позволяющая осуществлять определение хлорацетанилидных гербицидов в жидких средах в интервале концентраций 0,005-0,2 нг/мл, при этом предел обнаружения равен 0,002 нг/мл;

- высокая селективность определения хлорацетанилидного гербицида в сложных по составу смесях, в том числе в присутствии родственных соединений;

- многократное (более 30 раз) использование иммуносенсора вследствие регенерации биорецепторного покрытия после каждого цикла измерения;

- относительно невысокая продолжительность анализа.

Это позволяет проводить определение ацетохлора и алахлора в жидких средах в диапазоне концентраций 0,005-0,2 нг/мл и бутахлора - 0,01-0,4 нг/мл в сложных по составу смесях. Высокая селективность обеспечивается использованием специфичных иммунореагентов - поликлональных антител к хлорацетанилидному гербициду и хлорацетанилид-белковых конъюгатов (белок: БСА - бычий сывороточный альбумин, СТИ - соевый трипсиновый ингибитор, ОВА - овальбумин и др.). Многократное (более 30 раз) использование иммуносенсора после регенерации биорецепторного покрытия обеспечивает снижение затрат на осуществление анализа.

Способ осуществляется следующим образом.

Для создания иммуносенсора используется пьезокварцевый массочувствительный резонатор АТ-среза с серебряными электродами диаметром 5-8 мм и собственной частотой колебаний (5-10 МГц)±1 Гц. После тщательной очистки и обезжиривания поверхность серебряного электрода пьезокварцевого резонатора обрабатывают 0,6 мкл 2,5%-го раствора γ-аминопропилтриэтоксисилана в ацетоне, высушивают на воздухе и выдерживают 30-40 минут при 70°С. После нанесения 15 мкл 2,5% свежеприготовленного раствора глутарового альдегида и 10 мкл 0,05% раствора хлорацетанилид-белкового конъюгата происходит прочное закрепление биослоя. Сенсор выдерживают 10-12 часов при 4°С во влажной камере

Создание сенсора сравнения проводят аналогично, только на поверхности электродов кварцевого кристалла закрепляют белок, который использовался при создании гаптен-белкового конъюгата.

При проведении измерений пьезокварцевый иммуносенсор закрепляют в ячейке, содержащей силикагель.

При осуществлении пробоподготовки микроэкстракцией к 1 мл анализируемой пробы, содержащей хлорацетанилидный гербицид, добавляют 217 мкл ацетонитрила и 0,5370 г высаливателя - (NH₄)₂SO₄ и перемешивают в течение 2 мин до выделения органического растворителя в самостоятельную фазу. Органическую фазу отбирают микрошприцем и используют для анализа. Для этого к 1 мкл экстракта на основе ацетонитрила, содержащего хлорацетанилидный гербицид, добавляют раствор сыворотки, содержащий соответствующие антитела, отвечающий 50%-ному связыванию в гетерогенный иммунокомплекс, смесь доводят фосфатным буферным раствором (рН=7,1-7,5) до 1 мл и выдерживают до завершения реакции в течение 15 мин при 20°С.

Перед началом первого измерения пьезокварцевый иммуносенсор выдерживают в фосфатным буферным растворе (рН=7,1-7,5) в течение 30 мин до стабилизации сигнала сенсора. Затем на поверхность обоих сенсоров (индикаторного и сенсора сравнения) наносят предварительно подготовленную пробу (5 мкл), что вызывает снижение частоты колебания сенсора вследствие образования на поверхности электрода иммунокомплекса хлорацетанилид-белкового конъюгата с поликлональными антителами к соответствующему хлорацетанилидному гербициду и неспецифических взаимодействий матричных компонентов пробы (индикаторный сенсор) или только неспецифических взаимодействий матричных компонентов пробы (сенсор сравнения).

В качестве аналитического сигнала пьезокварцевого иммуносенсора используют изменение частоты колебания сенсора (Δf) вследствие увеличения массы рецепторного покрытия в результате взаимодействия антител с хлорацетанилид-белковым конъюгатом относительно сенсора сравнения.

Сигнал рассчитывается по следующему уравнению:

Δf=Δf_инд-Δf_сравн,

Δf=Δf_m-Δf,

где f_m - частота колебаний иммуносенсора до начала измерения с предварительно нанесенным биорецепторным слоем; f - минимальная частота колебаний сенсора, соответствующая образованию гетерогенного иммунокомплекса; Δf_инд - изменение частоты колебаний индикаторного сенсора после нанесения пробы, Δf_сравн - изменение частоты колебаний сенсора сравнения после нанесения пробы.

После этого оба сенсора промывают буферным раствором до стабилизации сигнала сенсора и наносят регенерирующий раствор, разрушающий образовавшийся иммунный комплекс (индикаторный сенсор). Частота колебаний сенсора при этом возвращается к исходному значению.

Концентрацию хлорацетанилидного гербицида в пробе определяют по предварительно построенному градуировочному графику.

Для построения градуировочного графика проводят предварительное концентрирование хлорацетанилидного гербицида методом микроэкстракции. При осуществлении пробоподготовки микроэкстракцией к 1 мл анализируемой пробы, содержащей хлорацетанилидный гербицид с концентрациями 0,005; 0,01; 0,02; 0,05; 0,1; 0,2; 0,4 нг/мл, добавляют 217 мкл ацетонитрила и 0,5370 г высаливателя - (NH₄)₂SO₄ и перемешивают в течение 2 мин до выделения органического растворителя в самостоятельную фазу. Коэффициент концентрирования в этом случае составляет 10, т.е. концентрация гербицида в экстракте по сравнению с исходной увеличивается в 10 раз. Органическую фазу отбирают микрошприцем и используют для анализа. Для этого к 1 мкл экстракта на основе ацетонитрила, содержащего хлорацетанилидный гербицид, добавляют раствор сыворотки, содержащий соответствующие антитела, отвечающий 50%-ному связыванию в гетерогенный иммунокомплекс, смесь доводят фосфатным буферным раствором (рН=7,1-7,5) до 1 мл и выдерживают до завершения реакции в течение 15 мин при 20°С.

Значение аналитического сигнала обратно пропорционально содержанию аналита в пробе.

Градуировочный график линеен в диапазоне концентраций в жидких средах для определения

ацетохлора 0,005-0,2 нг/мл: Δf=-72·с+165;

бутахлора 0,01-0,4 нг/мл: Δf=-2,2·с+45,6;

алахлора 0,005-0,2 нг/мл: Δf=-50·с+123,

где Δf - аналитический сигнал; с - концентрация ацетохлора, бутахлора, алахлора.

Процедура проведения измерений с использованием пьезокварцевого иммуносенсора. К 1 мл исследуемого образца добавляют 217 мкл ацетонитрила и 0,5370 г (NH₄)₂SO₄ и перемешивают в течение 2 мин до выделения органического растворителя в самостоятельную фазу. Затем к 1 мкл экстракта добавляют раствор сыворотки, содержащий соответствующие антитела, отвечающий 50%-му связыванию в гетерогенный иммунокомплекс и доводят до 1 мл фосфатным буферным раствором (рН=7,1-7,5). Подготовленную таким образом пробу наносят на поверхность пьезокварцевого иммуносенсора и выдерживают в течение 2 мин до образования гетерогенного иммунокомплекса на поверхности серийно выпускаемого отечественного пьезокварцевого сенсора АТ-среза с серебряными электродами (диаметром 5-8 мм) и собственной частотой колебаний (5-10 МГц)±1 Гц. Аналитический отклик сенсора обратно пропорционален содержанию хлорацетанилидного гербицида в пробе.

Регенерацию биочувствительного покрытия пьезокварцевого сенсора осуществляют нанесением на поверхность раствора KCNS 0,02-0,10 мМ. Определение концентрации хлорацетанилидного гербицида осуществляют по градуировочному графику, построенному с применением стандартных образцов.

Пример 1. К 1 мл исследуемого образца с концентрацией хлорацетанилидного гербицида (ацетохлор, алахлор) 0,002 нг/мл добавляют 217 мкл ацетонитрила и 0,5370 г (NH₄)₂SO₄ и перемешивают в течение 2 мин до выделения органического растворителя в самостоятельную фазу. Затем к 1 мкл экстракта добавляют раствор сыворотки, содержащий соответствующие антитела, отвечающий 50%-му связыванию в гетерогенный иммунокомплекс и доводят до 1 мл фосфатным буферным раствором (рН=7,1-7,5). Подготовленную таким образом пробу наносят на поверхность пьезокварцевого иммуносенсора и выдерживают в течение 2 мин до образования гетерогенного иммунокомплекса на поверхности серийно выпускаемого отечественного пьезокварцевого резонатора АТ-среза с серебряными электродами (диаметром 5-8 мм) и собственной частотой колебаний (5-10 МГц)±1 Гц. Аналитический отклик сенсора обратно пропорционален содержанию хлорацетанилидного гербицида в пробе.

Регенерацию биочувствительного покрытия пьезокварцевого сенсора осуществляют нанесением на поверхность раствора KCNS 0,02-0,10 мМ. Определение концентрации хлорацетанилидного гербицида осуществляют по градуировочному графику, построенному с применением стандартных образцов.

ацетохлор: Δf=164; найдено 0,001 нг/мл;

алахлор: Δf=121; найдено 0,001 нг/мл.

Предел обнаружения ацетохлора (алахлора) - 0,002 нг/мл. Разработанный метод не позволяет проводить количественное определение концентраций гербицидов на уровне 0,002 нг/мл.

Пример 2. Исследуемый образец хлорацетанилидного гербицида (бутахлор) с исходной концентрацией 0,005 нг/мл после предварительной пробоподготовки (пример 1) наносили на поверхность пьезокварцевого иммуносенсора в фосфатном буферном растворе (рН=7,1-7,5) и выдерживали в течение 2 мин. Далее аналогично примеру 1.

Δf=45 Гц; найдено 0,002 нг/мл. Предел обнаружения бутахлора - 0,005 нг/мл. Разработанный метод не позволяет проводить количественное определение концентраций бутахлора на уровне 0,005 нг/мл.

Пример 3. Исследуемый образец хлорацетанилидного гербицида (ацетохлор, бутахлор, алахлор) с исходной концентрацией 0,02 нг/мл после предварительной пробоподготовки (пример 1) наносили на поверхность пьезокварцевого иммуносенсора в фосфатном буферном растворе (рН=7,1-7,5) и выдерживали в течение 2 мин. Далее аналогично примеру 1.

ацетохлор: Δf=151 Гц; найдено 0,02 нг/мл;

бутахлор Δf=45 Гц; найдено 0,02 нг/мл;

алахлор Δf=113 Гц; найдено 0,02 нг/мл.

Предел обнаружения ацетохлора (алахлора) - 0,002 нг/мл, бутахлора - 0,005 нг/мл.

Пример 4. Исследуемый образец хлорацетанилидного гербицида (ацетохлор, бутахлор, алахлор) с исходной концентрацией 0,05 нг/мл после предварительной пробоподготовки (пример 1) наносили на поверхность пьезокварцевого иммуносенсора в фосфатном буферном растворе (рН=7,1-7,5) и выдерживали в течение 2 мин. Далее аналогично примеру 1.

ацетохлор: Δf=129 Гц; найдено 0,05 нг/мл;

бутахлор Δf=44 Гц; найдено 0,05 нг/мл;

алахлор Δf=98 Гц; найдено 0,05 нг/мл.

Предел обнаружения ацетохлора (алахлора) - 0,002 нг/мл, бутахлора - 0,005 нг/мл.

Пример 5. Исследуемый образец хлорацетанилидного гербицида (ацетохлор, бутахлор, алахлор) с исходной концентрацией 0,1 нг/мл после предварительной пробоподготовки (пример 1) наносили на поверхность пьезокварцевого иммуносенсора в фосфатном буферном растворе (рН=7,1-7,5) и выдерживали в течение 2 мин. Далее аналогично примеру 1.

ацетохлор: Δf=93 Гц; найдено 0,1 нг/мл;

бутахлор Δf=43 Гц; найдено 0,1 нг/мл;

алахлор Δf=73 Гц; найдено 0,1 нг/мл.

Предел обнаружения ацетохлора (алахлора)- 0,002 нг/мл, бутахлора - 0,005 нг/мл.

Пример 6. Исследуемый образец хлорацетанилидного гербицида (ацетохлор, бутахлор, алахлор) с исходной концентрацией 0,2 нг/мл после предварительной пробоподготовки (пример 1) наносили на поверхность пьезокварцевого иммуносенсора в фосфатном буферном растворе (рН=7,1-7,5) и выдерживали в течение 2 мин. Далее аналогично примеру 1.

ацетохлор: Δf=21 Гц; найдено 0,2 нг/мл;

бутахлор Δf=41 Гц; найдено 0,2 нг/мл;

алахлор Δf=23 Гц; найдено 0,2 нг/мл.

Предел обнаружения ацетохлора (алахлора) - 0,002 нг/мл, бутахлора - 0,005 нг/мл.

Пример 7. Исследуемый образец бутахлора с исходной концентрацией 0,3 нг/мл после предварительной пробоподготовки (пример 1) наносили на поверхность пьезокварцевого иммуносенсора в фосфатном буферном растворе (рН=7,1-7,5) и выдерживали в течение 2 мин. Далее аналогично примеру 1.

Δf=39 Гц; найдено 0,3 нг/мл. Предел обнаружения бутахлора - 0,005 нг/мл.

Пример 8. Исследуемый образец бутахлора с концентрацией 0,4 нг/мл после предварительной пробоподготовки (пример 1) наносили на поверхность пьезокварцевого иммуносенсора в фосфатном буферном растворе (рН=7,1-7,5) и выдерживали в течение 2 мин. Далее аналогично примеру 1.

Δf=37 Гц; найдено 0,3 нг/мл.

Предел обнаружения бутахлора - 0,005 нг/мл.

Пример 9. Исследуемый образец 5 мкл, содержащий ацетохлор и структурный аналог (бутахлор, алахлор) в соотношении концентраций 1:1, наносили на поверхность пьезокварцевого иммуносенсора в фосфатном буферном растворе (рН=7,1-7,5) и выдерживали в течение 2 мин. Далее аналогично примеру 1.

Введено ацетохлора:	Найдено ацетохлора:
0,05 нг/мл	0,05±0,002 нг/мл

Δf=129 Гц. Присутствие структурных аналогов (бутахлора, алахлора) не оказывает влияние на определение ацетохлора.

Пример 10. Исследуемый образец 5 мкл, содержащий ацетохлор и структурный аналог (бутахлор, алахлор) в соотношении концентраций 1:2, наносили на поверхность пьезокварцевого иммуносенсора в фосфатном буферном растворе (рН=7,1-7,5) и выдерживали в течение 2 мин. Далее аналогично примеру 1.

Введено ацетохлора:	Найдено ацетохлора:
0,05 нг/мл	0,05±0,002 нг/мл

Δf=129 Гц. Присутствие структурных аналогов (бутахлора, алахлора) не оказывает влияние на определение ацетохлора.

Пример 11. Исследуемый образец 5 мкл, содержащий ацетохлор и структурный аналог (бутахлор, алахлор) в соотношении концентраций 1:10, наносили на поверхность пьезокварцевого иммуносенсора в фосфатном буферном растворе (рН=7,1-7,5) и выдерживали в течение 2 мин. Далее аналогично примеру 1.

Введено ацетохлора:	Найдено ацетохлора:
0,05 нг/мл	0,05±0,002 нг/мл

Δf=129 Гц. Присутствие структурных аналогов (бутахлора, алахлора) не оказывает влияние на определение ацетохлора.

Пример 12. Исследуемый образец 5 мкл, содержащий бутахлор и структурный аналог (ацетохлор, алахлор) в соотношении концентраций 1:1, наносили на поверхность пьезокварцевого иммуносенсора в фосфатном буферном растворе (рН=7,1-7,5) и выдерживали в течение 2 мин. Далее аналогично примеру 1.

Введено бутахлора:	Найдено бутахлора:
0,1 нг/мл	0,1±0,004 нг/мл

Δf=43 Гц. Присутствие структурных аналогов (ацетохлора, алахлора) не оказывает влияние на определение бутахлора.

Пример 13. Исследуемый образец 5 мкл, содержащий бутахлор и структурный аналог (ацетохлор, алахлор) в соотношении концентраций 1:2, наносили на поверхность пьезокварцевого иммуносенсора в фосфатном буферном растворе (рН=7,1-7,5) и выдерживали в течение 2 мин. Далее аналогично примеру 1.

Введено бутахлора:	Найдено бутахлора:
0,1 нг/мл	0,1±0,004 нг/мл

Δf=43 Гц. Присутствие структурных аналогов (ацетохлора, алахлора) не оказывает влияние на определение бутахлора.

Пример 14. Исследуемый образец 5 мкл, содержащий бутахлор и структурный аналог (ацетохлор, алахлор) в соотношении концентраций 1:10, наносили на поверхность пьезокварцевого иммуносенсора в фосфатном буферном растворе (рН=7,1-7,5) и выдерживали в течение 2 мин. Далее аналогично примеру 1.

Введено бутахлора:	Найдено бутахлора:
0,1 нг/мл	0,1±0,004 нг/мл

Δf=43 Гц. Присутствие структурных аналогов (ацетохлора, алахлора) не оказывает влияние на определение бутахлора.

Пример 15. Исследуемый образец 5 мкл, содержащий алахлор и структурный аналог (ацетохлор, бутахлор) в соотношении концентраций 1:1, наносили на поверхность пьезокварцевого иммуносенсора в фосфатном буферном растворе (рН=7,1-7,5) и выдерживали в течение 2 мин. Далее аналогично примеру 1.

Введено алахлора:	Найдено алахлора:
0,05 нг/мл	0,05±0,002 нг/мл

Δf=98 Гц. Присутствие структурных аналогов (ацетохлора, бутахлора) не оказывает влияние на определение алахлора.

Пример 16. Исследуемый образец 5 мкл, содержащий алахлор и структурный аналог (ацетохлор, бутахлор) в соотношении концентраций 1:2, наносили на поверхность пьезокварцевого иммуносенсора в фосфатном буферном растворе (рН=7,1-7,5) и выдерживали в течение 2 мин. Далее аналогично примеру 1.

Введено алахлора:	Найдено алахлора:
0,05 нг/мл	0,05±0,002 нг/мл

Δf=98 Гц. Присутствие структурных аналогов (ацетохлора, бутахлора) не оказывает влияние на определение алахлора.

Пример 17. Исследуемый образец 5 мкл, содержащий алахлор и структурный аналог (ацетохлор, бутахлор) в соотношении концентраций 1:10, наносили на поверхность пьезокварцевого иммуносенсора в фосфатном буферном растворе (рН=7,1-7,5) и выдерживали в течение 2 мин. Далее аналогично примеру 1.

Введено алахлора:	Найдено алахлора:
0,05 нг/мл	0,05±0,002 нг/мл

Δf=98 Гц. Присутствие структурных аналогов (ацетохлора, бутахлора) не оказывает влияние на определение алахлора.

Данный способ позволяет существенно увеличить чувствительность определения ацетохлора (бутахлора, алахлора) в сложных по составу смесях, а также обеспечивает многократное использование иммуносенсора после регенерации биорецепторного покрытия, что снижает затраты на осуществление анализа. Предел обнаружения ацетохлора (алахлора) равен 0,002 нг/мл, бутахлора - 0,005.

Сравнительная характеристика известного и предлагаемого способа определения ацетохлора (бутахлора, алахлора) в жидких средах приведена в таблице.

Таблица
Сравнительная характеристика известного и предлагаемого способа детектирования ацетохлора (бутахлора, алахлора) в жидких средах
Показатели	Известный способ	Предлагаемый способ
Диапазон определяемых содержаний
ацетохлора	0,20-100 нг/мл	0,005-0,2 нг/мл
бутахлора	1,0-100 мг/мл	0,01-0,4 нг/мл
алахлора	0,05-5,0 нг/мл	0,005-0,2 нг/мл
Предел обнаружения
ацетохлора	0,2 нг/мл	0,002 нг/мл
бутахлора	0,5 нг/мл	0,005 нг/мл
алахлора	0,042 нг/мл	0,002 нг/мл
Применение дополнительных меток
ацетохлор	Не требуется	Не требуется
бутахлор	Требуется	Не требуется
алахлор	Требуется	Не требуется
Объем анализируемой пробы	200 мкл	5 мкл
Вид анализа
ацетохлор	Дискретный/прямой	Дискретный/прямой
бутахлор	Дискретный/косвенный	Дискретный/прямой
алахлор	Дискретный/косвенный	Дискретный/прямой
Регенерация иммунореагентовацетохлор	После каждого цикла измерения	После каждого цикла измерения
бутахлор	Отсутствует	После каждого цикла измерения
алахлор	Отсутствует	После каждого цикла измерения
Продолжительность измерения аналитического сигнала, мин
ацетохлор	30 мин	10-12 мин
бутахлор	15 мин	10-12 мин
алахлор	15 мин	10-12 мин

Способ высокочувствительного и селективного определения хлорацетанилидных гербицидов (ацетохлор, бутахлор, алахлор) с помощью пьезокварцевого иммуносенсора, отличающийся тем, что пробу, содержащую хлорацетанилидный гербицид, обрабатывают ацетонитрилом в присутствии сульфата аммония и к экстракту добавляют фиксированное количество антител в фосфатном буфере (рН 7,1-7,5), затем наносят на поверхность сенсора с покрытием на основе хлорацетанилид-белкового конъюгата и регистрируют изменение частоты колебания сенсора при взаимодействии хлорацетанилид-белкового конъюгата с антителами к хлорацетанилидному гербициду относительно сенсора сравнения с рецепторным слоем на основе белка, аналитический сигнал обратно пропорционален концентрации хлорацетанилидного гербицида в пробе, для проведения последующих определений осуществляют регенерацию рецепторного слоя нанесением на его поверхность раствора тиоцианата калия, обеспечивая многократное использование сенсора.