Способ стимуляции гемопоэза при лечении острой лучевой болезни у собак

Способ стимуляции гемопоэза при лечении острой лучевой болезни у собак

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Изобретение относится к области ветеринарии и может быть использовано для стимуляции гемопоэза при лечении острой лучевой болезни (ОЛБ) у сельскохозяйственных и домашних животных.

В настоящее время для лечения ОЛБ и стимуляции костномозгового кроветворения у животных и человека применяют различные схемы лечения.

Для стимуляции гемопоэза у животных применяют высокоинтенсивный лазер [6, 7, 8, 9].

Разработан способ стимуляции гемопоэза у человека с помощью церулоплазмина [1, 10], применяемый при анемиях различной этиологии, в том числе и на фоне лучевой терапии при лечении онкологических больных.

В медицинской практике лечение ОЛБ направлено на нормализацию органов кроветворения (пересадка костного мозга, переливание крови, введение препаратов нуклеиновых кислот, стимуляторы кроветворения), борьбу с инфекцией (антибиотики), предупреждение возникновения кровоизлияний (витамины), уменьшение интоксикации (кровопускание, кровозамещение), воздействие на нервную систему [3, 4, 5].

Однако известный способ не всегда эффективен, трудновыполним, так как предусматривает проведение сложных хирургических операций в случае пересадки костного мозга, или имеет нежелательные побочные эффекты (отторжение костономозговых трасплантантов).

Известен способ лечения и профилактики ОЛБ у собак, основанный на применении индралина (препарат Б-190) в комплексе с димексидом, пентовитом, викасолом, антибиотиками и радиопротектором индометофеном [2].

Недостатком данного способа является его многокомпонетность и отсутствие выраженного стимулирующего влияния на функцию костномозгового кроветворения.

Целью изобретения является разработка способа стимуляции костномозгового гемопоэза при лечении ОЛБ у животных.

Указанная цель достигается тем, что в заявляемом способе на 7 сутки после облучения производят однократное нанесение остеоперфораций в костях поясов грудной и тазовой конечностей (лопатка, подвздошная и седалищные кости), эпифизов трубчатых костей грудной и тазовой конечностей (плечевая, лучевая, локтевая, бедренная, большая и малая берцовые кости, пяточная) с двух сторон и грудине в течение 2-3 секунд в 2-3 точках на каждый эпифиз и кость пояса конечности на расстоянии 1,0-1,5 см друг от друга (чертеж). При этом используют инфракрасный диодный лазер в импульсно-периодическом режиме 100Х50 с длиной волны 970 нм, развивающий мощность 25 Вт.

Доставка энергии осуществлялась чрескожно, контактным путем, через моноволоконный кварцевый световод диаметром 0,4 мм. При этом формировались сквозные перфорационные отверстия в зоне эпифизов костей в перпендикулярных плоскостях.

Осуществляют остеоперфорацию следующим образом. Производят пункцию мягких тканей до кости иглой диаметром 1,5 мм. Вводят в полость иглы лазерный световод, осуществляют лазерную остеоперфорацию. Время остеоперфорации (2-3 с) зависит главным образов от породы, возраста и толщины кости у животных.

После остеоперфорации проводят курс лечения церулоплазмином в суточной дозе 1,5-2,5 мг/кг. Препарат вводят капельно со скоростью 29-30 капель в минуту один раз в сутки, 7 инъекций с интервалом 47-48 часов.

Таким образом, в сравнении с прототипом выявлены следующие отличительные признаки:

1. Для стимуляции гемопоэза при ОЛБ у животных используется инфракрасный диодный лазер в импульсно-периодическом режиме 100Х50 с длиной волны 970 нм, развивающий мощность 25 Вт.

2. Используют однократную остеоперфорацию костей поясов грудной и тазовой конечностей (лопатка, подвздошная и седалищные кости), эпифизов трубчатых костей грудной и тазовой конечностей (плечевая, лучевая, локтевая, бедренная, большая и малая берцовые, пяточная) с двух сторон и грудине в течение 2-3 секунд в 2-3 точках на каждый эпифиз и кость пояса конечности. Точки находятся на расстоянии 1,0-1,5 см друг от друга.

3. После остеоперфорации проводят курс лечения церулоплазмином в суточной дозе 1,5-2,5 мг/кг. Препарат вводят капельно со скорость 29-30 капель в минуту один раз в сутки, 7 инъекций с интервалом 47-48 часов.

Патентные исследования не выявили способов стимуляции гемопоэза при лечении острой лучевой болезни у животных с использованием лазеров высокоинтенсивного излучения и церулоплазмина, характеризующихся заявляемой совокупностью признаков, следовательно, можно предположить, что указанный способ соответствует критерию «новизна».

Использование совокупности существенных признаков также неизвестно, что говорит о соответствии критерию «изобретательский уровень».

Заявляемый способ может быть осуществлен в любом специализированном ветеринарном учреждении, следовательно, он соответствует критерию «промышленная применимость».

Заявленный способ иллюстрируется описанием его использования и исследованиями морфологического состава крови.

Экспериментальные исследования проводили на 12 беспородных животных, подобранных по принципу аналогов (возраст 2-3 года, вес - 13-14 кг, упитанность средняя).

Животные содержались в индивидуальных клетках в условиях вивария УГАВМ. Кормили собак 3 раза в день по нормам, установленным приказом МЗ СССР №1179 от 10 октября 1983 г. Вода в поилках - постоянно. Собаки для поддержания физиологических функций получают полноценное, сбалансированное по основным элементам кормление. Основу их рациона составляют корма растительного и животного происхождения. Типичный рацион кормления собак приведен в таблице 1 (гр./сутки на 1 животное).

Таблица 1. Рацион кормления животных по возрастным группам (в расчете на одно животное)
Вид животных	Наименование продукта
молоко	крупа	картофель	капуста	морковь	хлеб	корм. дрожжи	соль	мясо 2 кат.	мука мясокостная
ячневая	овсяная
Взрослые собаки	200	100	100	200	75	50	200	6	20	300	10

В контрольной и опытной группах (6 голов) для моделирования острой лучевой болезни применяли рентгеновское облучение животных на установке «Рентген-30» в дозе 300 R. Облучение проводилось при напряжении 112 кВ, токе 40 мА, общее время облучения составило 36 с импульсами по 2 с.

После остеоперфорации у животных проводили исследование крови через каждые 7 суток до 42-го дня после моделирования ОЛБ. После облучения в контрольной группе никакого лечения животным не проводили.

Доза рассчитывалась по формуле:

D=U²*I*t,

где D - доза облучения, в мR;

U - напряжение, в кВ;

I - сила тока, в мА;

t - общее время облучения, в минутах.

В контрольной группе (таблица 2) происходило резкое снижение содержания в крови лейкоцитов, достигая минимального значения на 21 сутки наблюдения - 1,71±0,27·10⁹ л, что ниже исходной величины в 4,4 раза. В дальнейшем происходило медленное увеличение содержания клеток белой крови, которое на 42-е сутки наблюдения составило 2,90±0,26·10⁹/л, что тем не менее на 61,6% (в 2,6 раза) было ниже фонового показателя.

Концентрация эритроцитов незначительно снижалась на протяжении 28 суток наблюдения и достигла на 28-е сутки минимального уровня 5,23±0,51·10¹²/л или на 7,1% ниже фонового показателя. В дальнейшем, на 42-е сутки наблюдения наметилось увеличение концентрации эритроцитов, которое достигло величины 5,29±0,37·10¹²/л, что меньше фонового показателя на 6,0%.

Содержание гемоглобина в крови и концентрация гемоглобина в эритроцитах снижались на протяжении 42 суток наблюдения и достигли минимального уровня 110,26±5,87 г/л и 221,46±12,73 г/л соответственно, что на 4,5 и 8,8% (Р<0,05) ниже исходного уровня.

В опытной группе собак (6 голов) на 7-е сутки после моделирования лучевого поражения для лечения ОЛБ использовали инфракрасный диодный лазер в импульсно-периодическом режиме, развивающий мощность 25 Вт.

После остеоперфорации проводился курс лечения церулоплазмином в суточной дозе 1,5-2,5 мг/кг. Препарат вводили капельно со скорость 29-30 капель в минуту один раз в сутки, 7 инъекций с интервалом 47-48 часов.

После проведения рентгеновского облучения у животных в течение первых 3-х дней развиваются клинические признаки острой лучевой болезни, характеризующиеся слабым угнетением, снижением пищевой возбудимости, в некоторых случаях рвотой. Затем в течение 5-7 суток наступала вторая фаза острой лучевой болезни и у собак отмечалось улучшение общего состояния, однако при проведении гематологических исследований выявлено резкое снижение содержания в крови лейкоцитов.

После лазерной остеоперфорации у животных в течение 2 дней наблюдается незначительное угнетение, снижение аппетита. Температура тела в это время держится на верхней границе нормы (39,0°С).

Таблица 2. Динамика гематологических показателей крови собак опытной и контрольной групп ( n=6)
Группа	ФОН	3	7	14	21	28	35	42
Эритроциты, 1012/л
Контрольная	5,63±0,35	5,62±0,49	5,31±0,47	5,30±0,40	5,26±0,46	5,23±0,51	5,28±0,44	5,29±0,37
Опытная	5,58±0,32	5,59±0,35	5,57±0,34	6,34±0,31*	6,90±0,25*	8,07±0,37**	7,13±0,53**	7,22±0,52*
Лейкоциты, 109л
Контрольная	7,56±0,40	3,15±0,30	2,21±0,33	2,04±0,25	1,71±0,27	2,06±0,29	2,31±0,21	2,90±0,26
Опытная	7,96±0,64	3,26±0,21	2,86±0,34	1,94±0,38	1,10±0,37	2,31±0,32	2,94±0,36	4,32±0,40**
Гемоглобин, г/л
Контрольная	115,43±4,12	115,81±5,64	114,95±4,67	113,64±4,97	112,82±5,84	112,18±4,64	111,77±4,31	110,26±5,87
Опытная	114,92±4,25	114,54±5,77	115,26±5,80	120,69±6,26	125,49±3,46**	131,84±4,81***	127,49±3,46***	126,05±4,79**
Концентрация гемоглобина в эритроците, г/л
Контрольная	242,90±12,51	247,72±15,32	243,55±14,84	244,13±20,92	232,31±10,34	232,37±12,38	228,14±11,49	221,46±12,73
Опытная	240,73±18,38	235,14±17,35	239,57±12,76	243,43±20,34	258,51±10,19*	267,32±14,42*	252,32±13,12*	259,21±10,87*
достоверные изменения по сравнению с исходными показателями:
* - Р<0,1
** - Р<0,05
*** - P<0,01

По прошествии 2 суток состояние животных нормализуется, температура тела незначительно снижается (до 38,5°С).

После рентгеновского облучения у собак происходило резкое снижение содержания в периферической крови клеток белой крови с 7,96±0,64·10⁹/л до 3,26±0,21·10⁹ л на 3 сутки и 2,86±0,34·10⁹ л на 7-е сутки после облучения. Содержание эритроцитов и гемоглобина остается на прежнем уровне (таблица 2).

На 14-е сутки опыта (через 7 суток после проведения лазерной остеоперфорации и начала курса лечения церулоплазмином) происходило дальнейшее снижение содержания в крови лейкоцитов, которое на 21 сутки достигало минимального значения - 1,10±0,37·10⁹ л. В последующие дни наблюдения происходило повышение содержания лейкоцитов, уровень которых достиг 4,32±0,40·10⁹/л на 42-е сутки наблюдения.

Концентрация в крови эритроцитов повышалось с 14 и до 28 суток наблюдения и достигла величины 8,07±0,37·10¹²/л, что на 44,6% выше фонового показателя. В дальнейшем происходило снижение содержания эритроцитов до уровня 7,22±0,52·10¹²/л на 42-е сутки опыта.

Содержание гемоглобина в крови и концентрации гемоглобина в эритроците коррелирует с концентрацией эритроцитов. Начиная с 14-х суток опыта происходит увеличение концентрации гемоглобина в крови и концентрации гемоглобина в эритроците, которая достигает максимума на 28-е сутки наблюдения (131,84±4,81 г/л и 267,32±14,42 г/л соответственно), а затем происходит снижение до уровня 126,05±4,79 г/л и 259,21±10,87 г/л, что на 9,7% и на 7,7% выше фоновых показателей.

Клиническое состояние собак контрольной группы в течение 35 суток продолжало ухудшаться и 2 собаки (33,3%) погибли на фоне развития септических процессов.

В опытной группе собак клинические признаки острой лучевой болезни были менее выражены и к концу периода наблюдения (42 сутки) все животные выглядели клинически здоровыми. Лечебная эффективность составила 100%.

Таким образом, полученные результаты доказывают высокую эффективность применения остеоперфорации эпифизов костей с помощью высокоинтенсивного инфракрасного диодного лазера и церулоплазмина для стимуляции гемопоэза при лечении острой лучевой болезни.

Литература

1. Инструкция по применению церулоплазмина. Регистрационный номер 90/411/1. Утверждена Фармакологическим комитетом 19.10.1990 г.

2. Колесниченко, И.С. Противолучевые схемы профилактики и лечения служебных собак. / Колесниченко И.С., Михайлов Л.С., Бояринов А.С., Гришин А.В. // Ветеринария, 2005; №12, - С.52-54.

3. Куршаков Н.А., Лучевая болезнь, в книге: Многотомное руководство по внутренним болезням, т.10, М., 1963; Радиационная медицина, 4 изд., М., 1968.

4. Кротков Ф.Г., Человек и радиация, М., 1968.

5. Линденбратен Л.Д., Медицинская радиология, М., 1969.

6. Молоканов, В.А. Стимуляция гемопоэза у животных методом лазерной остеоперфорации. / В.А.Молоканов, В.В.Стрижиков // Актуальные проблемы биологии и ветеринарной медицины мелких домашних животных: сб. науч. тр. - Троицк, 2005. - С.265-269.

7. Пашнин, Д.А. Влияние высокоинтенсивного лазерного излучения на динамику гемопоэза и перекисного окисления липидов / Д.А.Пашнин, В.В.Стрижиков, Р.В.Михайленко // Молодые ученые - сельскому хозяйству России. Материалы II Всероссийской конференции молодых ученых (23-25 ноября 2005 г.): сб. науч. тр. - Москва, 2005.

8. Пашнин, Д.А. Влияние лазерной остеоперфорации на биохимический статус собак. / Д.А.Пашнин, В.В.Стрижиков, Р.В.Михайленко // Перспективные направления научных исследований молодых ученых. Материалы IX научно-практической конференции, посвященной 75-летию УГАВМ (9-11 ноября 2005 г.): сб. науч. тр. - Троицк, 2005. - C.113-114.

9. Стрижиков, В.В. Динамика гемопоэза, содержания общего белка и среднемолекулярных пептидов в сыворотке крови на фоне лазерной остеоперфорации. / В.В.Стрижиков, Д.А.Пашнин, Р.В.Михайленко // Перспективные направления научных исследований молодых ученых. Материалы IX научно-практической конференции, посвященной 75-летию УГАВМ (9-11 ноября 2005 г.): сб. науч. тр. - Троицк, 2005. - С.142-143.

10. Пат. 2268745 Российская Федерация, МПК А61К 38/43, А61К 33/34, А61К 33/14, A61N 5/10, А61Р 7/06 Способ профилактики и (или) лечения анемии у детей (варианты). / Чардымова Л.Р., Паршиков В.В., Привалова Л.П., Ефремова Л.М., Крайнева Т.А.; заявитель и правообладатель Нижегородская государственная медицинская академия. - 2003121205/14; заявл. 08.07.2003; опубл. 10.01.2005, бюл. №03.

Способ стимуляции гемопоэза при лечении острой лучевой болезни у собак, включающий введение медикаментозных средств, отличающийся тем, что в качестве медикаментозного средства используют церулоплазмин, перед введением которого на 7-е сутки после ионизирующего облучения с помощью инфракрасного диодного лазера мощностью 25 Вт длиной волны 970 нм, снабженного моноволоконным кварцевым световодом диаметром 0,4 мм, в импульсно-периодическом режиме 100×50 осуществляют однократную остеоперфорацию лопатки, подвздошной, седалищной костей и грудины, а также эпифизов плечевой, лучевой, локтевой, бедренной, большой и малой берцовых и пяточной костей в 2-3 точках на расстоянии 1,0-1,5 см с двух сторон в течение 2-3 с, а церуплазмин вводят капельно со скорость 29-30 капель в минуту один раз в сутки в суточной дозе от 1,5 до 2,5 мг/кг массы тела животного, при этом курс лечения церуплазмином составляет 7 процедур с интервалом 47-48 ч.