Способ прогнозирования риска изъязвления тканей гастродуоденальной зоны путем определения липидного состава венозной крови
Патент 2337367
Авторы
Правообладатели
Классы МПК
Способ прогнозирования риска изъязвления тканей гастродуоденальной зоны путем определения липидного состава венозной крови
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии. Для осуществления способа прогнозирования риска изъязвлениия тканей гастродуоденальной зоны определяют липидный состав плазмы крови. При этом высокий риск изъязвления определяется при уровне фосфолипидов 23,18±1,30%, холестерола 15,53±0,87%, эфиров холестерола 39,71±1,38%. Низкий риск изъязвления определяется при уровне фосфолипидов 28,03±1,58%, холестерола 22,36±1,22%, эфиров холестерола 33,04±2,33%. Использование изобретения позволяет выявлять животных с низким риском возникновения эрозивно-язвенного повреждения желудочно-кишечного тракта, выделять их в отдельную группу и исключать из эксперимента по определению противоязвенной активности испытуемых препаратов. Испытания препаратов с противоульцерогенной активностью рекомендуется проводить на крысах, предрасположенных к изъязвлению, что позволяет более объективно оценивать противоульцерогенную активность тестируемых препаратов. 7 табл.
Реферат
Область применения: медицина, экспериментальная фармакология.
В экспериментальной фармакологии для испытания препаратов с противоязвенной активностью рекомендовано проводить исследования на крысах линии Вистар, так как они обладают наименьшей устойчивостью к изъязвлению желудочно-кишечного тракта. Однако даже у крыс одной популяции, одного пола и возраста в одно и то же время года наклонность к изъязвлению разная.
В экспериментальной медицине оценка процессов язвообразования проводится путем измерения диаметра язвенного дефекта после забоя животных (Окабэ С., 1970). Однако визуальный контроль язвообразования в экспериментальных условиях связан с определенными трудностями. Визуальный контроль невозможно провести без наркотизирования, забоя животных и извлечения пораженного органа. На наш взгляд, представляется целесообразным перед началом экспериментов по определению противоязвенной активности препаратов выявлять животных с низким риском развития эрозивно-язвенных повреждений, выделять их в отдельную группу и исключать из эксперимента. Это позволит получить более объективные данные о противоязвенной активности испытуемого препарата.
Кроме того, будут снижаться материальные затраты на приобретение и содержание лабораторных крыс.
Цель изобретения: улучшение прогнозирования риска изъязвления слизистой желудочно-кишечного тракта, позволяющее без забоя животных определять предрасположенность к изъязвлению.
Через 7 сут с момента моделирования на 21 крысе линии Вистар обоего пола ацетатной язвы по методу Окабэ С.(1970) извлекали желудок, рассекали по большой кривизне и визуально оценивали диаметр язвенного дефекта с последующим вычислением площади изъязвления. У 13 крыс площадь язвенного дефекта составляла 7,67±1,31 мм2 (группа 1), у 9 крыс площадь язвенного дефекта составляла 25,67±4,22 мм2 (группа 2). В крови из подключичной вены, полученной в исходном состоянии, у крыс 1-й группы по отношению ко 2-й методом тонкослойной хроматографии было выявлено: а) более высокое содержание фосфолипидов и холестерола; б) более низкое содержание эфиров холестерола (табл.1).
| Таблица 1 | |||
| Липидный состав крови у подопытных крыс из подключичной вены в исходном состоянии. | |||
| Кровь из подключичной вены | |||
| группа 1 (n=13) | группа 2 (n=9) | Р | |
| Фосфолипиды, % | 33,0±3,14 | 25,67±1,80 | <0,05 |
| Холестерол, % | 22,92±1,99 | 14,63±1,19 | <0,01 |
| Триглицериды, % | 12,64±1,56 | 15,0±1,76 | >0,1 |
| Свободные жирные кислоты, % | 4,67±0,58 | 4,56±0,58 | >0,1 |
| Эфиры холестерола, % | 33,82±2,80 | 41,5±2,32 | <0,05 |
| Общие липиды, г/л | 2,52±0,1 | 2,71±0,21 | >0,1 |
| Площадь изъязвления, мм2 | 7,67±1,31 | 25,67±4,22 | <0,001 |
| Р - достоверность различия между показателями в 1-й и 2-й группах. |
Анализ липидного спектра у 53 интактных крыс подтвердил правомерность разделения крыс на 2 группы. На 53 крысах были выявлены те же особенности липидного состава плазмы крови в исходном состоянии, что и в подопытных группах (табл.2).
| Таблица 2 | |||
| Липидный состав крови у интактных крыс из подключичной вены в исходном состоянии. | |||
| Кровь из подключичной вены | |||
| группа I (n=33) | группа II (n=20) | Р | |
| Фосфолипиды, % | 28,03±1,58 | 23,18±1,30 | <0,05 |
| Холестерол,% | 22,36±1,22 | 15,53±0,87 | <0,001 |
| Триглицериды, % | 15,41±1,28 | 16,35±1,26 | >0,1 |
| Свободные жирные кислоты, % | 5,89±0,55 | 4,56±0,41 | >0,1 |
| Эфиры холестерола, % | 33,04±2,33 | 39,71±1,38 | <0,05 |
| Общие липиды, г/л | 2,51±0,07 | 2,53±0,12 | >0,1 |
| Р - достоверность различия между показателями в I и II группах. |
Примеры конкретного выполнения экспериментов из подопытной серии.
Опыт 1.
Половозрелого самца массой 240 г, находящегося на стандартной диете, наркотизировали нембуталом (30 мг/кг). Кровь для исследования в исходном состоянии получили из подключичной вены в объеме 1,0 мл. В полученной пробе крови определили концентрацию общих липидов стандартным набором фирмы «Лахема». Липидный спектр плазмы крови определили методом тонкослойной хроматографии на пластинах Sorbfil. [1]. (см. таблицу 3).
| Таблица 3 | ||||||
| Фракции липидов в исходном состоянии | ФЛ, % | ХС, % | ТГ,% | ЖК, % | ЭХС, % | ОЛ, г/л |
| 35 | 22 | 8 | 4 | 31 | 2,31 |
Ацетатную язву смоделировали по методу Окабэ С. (1970) путем нанесения на серозную оболочку желудка 70%-ной уксусной кислоты на 30 сек после получения крови из подключичной вены. После экспозиции уксусной кислоты в течение 30 сек ее удалили фильтровальной бумагой. Рану ушили послойно. В течение 6 последующих суток крыса имела свободный доступ к воде и пище. За 14 часов до окончания эксперимента животное находилось в условиях пищевой депривации при свободном доступе к воде. Эксперимент завершили через 7 сут с момента моделирования ацетатной язвы. Получили кровь из подключичной вены, извлекли желудок. Желудок вскрыли по большой кривизне под холодной проточной водой. Измерили диагонали зоны эрозивно-язвенного повреждения с последующим вычислением площади дефекта. В данном случае на малой кривизне в антральной зоне обнаружили язвенный дефект размером 4×2 мм, что позволяет отнести животное к 1-й группе с низким риском изъязвления.
Опыт 2.
Половозрелую самку массой 190 г, находящуюся на стандартной диете, наркотизировали нембуталом (30 мг/кг). Кровь для исследования в исходном состоянии получили из подключичной вены в объеме 1,0 мл. В полученной пробе крови определили концентрацию общих липидов стандартным набором фирмы «Лахема». Липидный спектр плазмы крови определили методом тонкослойной хроматографии на пластинах Sorbfil [1] (см. таблицу 4).
| Таблица 4 | ||||||
| Фракции липидов в исходном состоянии | ФЛ, % | ХС, % | ТГ, % | ЖК, % | ЭХС, % | ОЛ, г/л |
| 27 | 13 | 18 | 5 | 37 | 3,52 |
Ацетатную язву смоделировали по методу Окабэ С. (1970) путем нанесения на серозную оболочку желудка 70%-ной уксусной кислоты на 30 сек после получения крови из подключичной вены. После экспозиции уксусной кислоты в течение 30 сек ее удалили фильтровальной бумагой. Рану ушили послойно. В течение 6 последующих суток крыса имела свободный доступ к воде и пище. За 14 часов до окончания эксперимента животное находилось в условиях пищевой депривации при свободном доступе к воде. Эксперимент завершили через 7 сут с момента моделирования ацетатной язвы. Получили кровь из подключичной вены, извлекли желудок. Желудок вскрыли по большой кривизне под холодной проточной водой. Измерили диагонали зоны эрозивно-язвенного повреждения с последующим вычислением площади дефекта. В данном случае на малой кривизне в антральной зоне обнаружили язвенный дефект размером 4×4 мм, что позволяет отнести животное ко 2-й группе с высоким риском изъязвления.
Выявленные закономерности соответствия характера липидного спектра и степени предрасположенности к изъязвлению отмечались у 18 из 21 подопытных крыс. У 3 животных эта закономерность не прослеживалась.
1) Половозрелый самец, масса животного 230 г.
| Таблица 5 | ||||||
| Фракции липидов в исходном состоянии | ФЛ, % | ХС, % | ТГ, % | ЖК, % | ЭХС, % | ОЛ, г/л |
| 33 | 8 | 19 | 5 | 35 | 3,52 |
Площадь язвенного дефекта желудка 16 мм2.
2) Половозрелая самка, масса животного 200 г.
| Таблица 6 | ||||||
| Фракции липидов в исходном состоянии | ФЛ, % | ХС, % | ТГ, % | ЖК, % | ЭХС, % | ОЛ, г/л |
| 17 | 10 | 22 | 10 | 41 | 3,2 |
Площадь язвенного дефекта желудка 4 мм2.
3) Половозрелый самец, масса животного 220 г.
| Таблица 7 | ||||||
| Фракции липидов в исходном состоянии | ФЛ,% | ХС,% | ТГ,% | ЖК,% | ЭХС,% | ОЛ, г/л |
| 32 | 32 | 11 | 2 | 23 | 3,2 |
Площадь язвенного дефекта желудка 16 мм2.
Таким образом, по липидному составу венозной крови можно прогнозировать риск изъязвления тканей желудочно-кишечного тракта. При низком содержании холестерола и фосфолипидов и высоком содержании эфиров холестерола в венозной крови нанесение стандартного химического повреждения приводило к формированию эрозивно-язвенного дефекта большей площади (25,67±4,22 мм2), что свидетельствовало о более высоком риске изъязвления. При высоком содержании холестерола и фосфолипидов и низком содержании эфиров холестерола в венозной крови нанесение стандартного химического повреждения приводило к формированию эрозивно-язвенного дефекта меньшей площади (7,67±1,31 мм2), что свидетельствовало о более низком риске изъязвления.
Источники информации
1. Шаршунова М. Тонкослойная хроматография в фармации и клинической биохимии: в 2х ч. - М.: Мир, 1980. - 621с.
Способ прогнозирования риска изъязвления слизистой желудочно-кишечного тракта в эксперименте, отличающийся тем, что определяют липидный состав плазмы крови, при этом высокий риск изъязвления определяют при уровне фосфолипидов (23,18±1,30)%, холестерола (15,53±0,87)%, эфиров холестерола (39,71±1,38)%, а низкий риск изъязвления определяют при уровне фосфолипидов (28,03±1,58)%, холестерола (22,36±1,22)%, эфиров холестерола (33,04±2,33)%.