Способ моделирования острого перитонита

Способ моделирования острого перитонита

Реферат

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной хирургии.

Наиболее близким к заявленному решению является способ моделирования острого перитонита, описанный А.А.Глуховым и И.Н.Баниным (№98102558/14, Воронежская государственная медицинская академия им. Н.Н.Бурденко, 1998), который заключается во введении лабораторным животным в брюшную полость аутокрови, а затем через катетеры - микробной взвеси из стафилококка, кишечной палочки, сине-зеленого гноя и пептококка в равных соотношениях.

Недостатком данного способа является то, что моделирование воспалительного процесса в брюшной полости является сложным и трудоемким, требует выращивания культур микроорганизмов, сложной их дозировки и многократного введения. Кроме того, предложенное соотношение культур микроорганизмов не всегда может соответствовать микробиоценозу содержимого кишечника. Микробный пейзаж перитонеального экссудата обладает достаточной вариабельностью, а также видовой специфичностью, что не предусматривает описанная модель. Кроме того, она предполагает введение препарата анаэробных микроорганизмов, приготовленного в аэробных условиях, что не может не снизить их патогенности и вирулентности.

Задача изобретения - создание этиопатогенетически обоснованного управляемого способа моделирования острого перитонита, близкого к таковому, развивающемуся в условиях клиники.

Поставленная задача достигается тем, что развитие острого перитонита происходит в результате воздействия на брюшину микроорганизмов, содержащихся в кишечнике, путем внутрибрюшного введения их взвеси в концентрации, подобранной опытным путем.

Изобретение поясняется чертежами.

На фиг.1 изображено скопление экссудата в левом латеральном канале у животного на первые сутки после моделирования перитонита.

На фиг.2 изображена фотография, демонстрирующая гиперемию органов брюшной полости у животных на первые сутки после моделирования перитонита.

На фиг.3 изображено вздутие петель кишечника у житного на первые сутки после моделирования перитонита.

На фиг.4 изображена микрофотография брюшины крысы на первые сутки после моделирования перитонита: полиморфно-клеточная инфильтрация, отек и стаз в сосудах микроциркуляторного русла, окраска Г+Э, ув. 8×10.

На фиг.5 изображена микрофотография мазка жидкости из брюшной полости животного на первые сутки после моделирования перитонита:

сегментоядерные нейтрофилы, лимфоциты, макрофаги, окраска по Романовскому-Гимза, ув. 8×20.

На фиг.6 изображена микрофотография мазка жидкости из брюшной полости: сегментоядерные нейтрофилы, лимфоциты, единичные макрофаги, детрит эукариотических клеток и микробные ассоциации кокковой и палочковой флоры, окраска по Романовскому-Гимза ув. 8×90.

Способ осуществляется следующим образом.

Для моделирования перитонита используются половозрелые крысы-самцы линии Wistar без признаков заболеваний, прошедшие карантин и содержащиеся на стандартном пищевом и питьевом рационе в условиях вивария. Путем передозировки наркоза умерщвляется одно животное. Из содержимого слепой кишки этого животного готовится 10% взвесь фекалий в изотоническом (0,9%) водном растворе хлорида натрия. Полученная смесь дважды фильтруется через двойной слой марли и затем вводится интактным животным под наркозом пункционным способом из одного вкола (в центре белой линии живота) в правое и левое подреберья, в правую и левую подвздошные области из расчета 1 миллилитр на 100 граммов массы животных не позднее чем через 20 минут после приготовления (для максимального сокращения потери анаэробной микрофлоры). Во избежание повреждения внутренних органов при введении в брюшную полость смеси животные располагаются вертикально, каудальным концом вверх.

Пример конкретного выполнения

Исследования проводились в условиях операционного блока кафедры оперативной хирургии и топографической анатомии Курского государственного медицинского университета. Все манипуляции выполнялись с соблюдением требований к гуманному обращению с животными (г.Страсбург, Франция, 1986). Фармакологическое обездвиживание и обезболивание животных осуществлялось путем внутримышечного введения 2% раствора Рометара в дозе 0, 2 мл/кг. Путем передозировки эфирного наркоза проводилось умерщвление одной крысы. Содержимое слепой кишки изымалось, взвешивалось, ex tempore готовилась 10% смесь с изотоническим раствором хлорида натрия. Затем она дважды фильтровалась через двойной слой марли. После этого в течение 20 минут вводили полученную взвесь из одного (в центре белой линии живота) вкола в правое и левое подреберья, в правую и левую подвздошную области из расчета 1 миллилитр на 100 граммов массы животного сорока половозрелым крысам-самцам линии Wistar.

Через сутки летальность составляла 20%. Выжившие животные выводились из эксперимента путем передозировки эфирного наркоза. При ревизии у всех особей в брюшной полости обнаруживалась мутная жидкость (фиг.1), петли кишечника вздуты, гиперемированы, отечны, сосуды брыжейки расширены (фиг.2-3). Передняя брюшная стенка, петли кишечника изымались для гистологического исследования с последующим изготовлением парафиновых срезов и их окраской гематоксилин-эозином и пикро-сириус-красным, изучением под световым микроскопом. Из перитонеальной жидкости готовился мазок и окрашивался по Романовскому-Гимзе.

При изучении окрашенных срезов отмечались признаки острого воспаления в органах и тканях брюшной полости: явления отека, полнокровие и стаз в сосудах микроциркуляторного русла, массивная клеточная инфильтрация полиморфноклеточного характера (фиг.4).

В перитонеальной жидкости были обнаружены сегментоядерные нейтрофилы, лимфоциты, единичные макрофаги, детрит эукариотических клеток и микробные ассоциации, которые представляли собой две группы микроорганизмов: множество кокков, окрашенных в темно-синий цвет, располагающихся гроздьями во всех полях зрения, предположительно стафилококков, и палочковидные микроорганизмы, которые по Романовскому-Гимзе окрашивались в розовый цвет и были представлены как в виде единичных микроорганизмов, так и в парах (фиг.5-6).

Таким образом, предложенная модель острого перитонита выгодно отличается простотой выполнения, воспроизводимостью, сходностью клинико-лабораторных и патоморфологических изменений у всех экспериментальных животных, что позволяет наиболее адекватно воспроизводить в условиях опыта близкую к клинике патологическую ситуацию с последующей разработкой и экспериментальной апробацией методов лечения острого распространенного перитонита.

Способ моделирования острого перитонита, отличающийся тем, что лабораторному животному в брюшную полость вводят профильтрованную 10%-ную взвесь содержимого слепой кишки животного того же вида в изотоническом растворе хлорида натрия из расчета 1 мл на 100 г массы тела не позднее чем через 20 мин после приготовления взвеси.