Новые нутрицевтические композиции, включающие галлат эпигаллокатехина и кетон малины

Новые нутрицевтические композиции, включающие галлат эпигаллокатехина и кетон малины

Реферат

Настоящее изобретение относится к новым нутрицевтическим композициям, включающим галлат эпигаллокатехина (далее называемый ГЭКГ) и кетон малины (4-(4-гидрокифенил)-2-бутанон, далее называемый КМ). В частности, настоящее изобретение относится к новьм нутрицевтическим композициям, применяемым для лечения и профилактики ожирения (тучности), а также связанных с ожирением состояний, например инсулин-независимого сахарного диабета (ИНСД, тип II) и синдрома X. Согласно настоящему изобретению, еще один из его объектов относится к применению ГЭКГ и КМ при приготовлении нутрицевтических композиций для лечения ожирения, а также связанных с ожирением состояний, например инсулин-независимого сахарного диабета (ИНСД, тип II) и синдрома X. Кроме того, настоящее изобретения относится к способу лечения или профилактики ожирения или связанных с ожирением состояний, например инсулин-независимого сахарного диабета (ИНСД, тип II) и синдрома X, который включает введение в организм нуждающегося в таком лечении пациента эффективного количества комбинации ГЭКГ и КМ. Далее, настоящее изобретение относится к способу лечения, улучшения или профилактики состояний, связанных с ожирением, и состояний, сопутствующих ожирению, например инсулин-независимого сахарного диабета (ИНСД, тип II) и синдрома X, путем введения в организм ГЭКГ и КМ.

В частности, предлагаемая в изобретении композиция предназначена для лечения и профилактики ожирения и для профилактики инсулин-независимого сахарного диабета у индивидов, относящихся к группе высокого риска, например индивидов с избыточным весом или индивидов с нарушенной толерантностью глюкозы.

В заявке WO 02/072086 А описано применение ГЭКГ для профилактики и лечения, в том числе, ожирения. В заявке WO 01/60319 А описано применение ГЭКГ, в том числе, для уменьшения потребления индивидом пищи. В публикации в Patent Abstracts of Japan, 2000, 9, (JP 2000169325 А) описано применение, в том числе, кетона малины в качестве средства, способствующего уменьшению жировой ткани, в частности его применение в составе косметики для кожи.

Представленная в настоящем изобретении композиция включает комбинацию ГЭКГ и КМ, которые обладают различными механизмами воздействия на усвоение, равно как и на экскрецию, глюкозы и жира, на продуцирование глюкозы в печени и потребление энергии организмом. В соответствии с этим комбинация обеспечивает аддитивный и/или синергетический эффекты при лечении или профилактике ожирения.

В контексте настоящего изобретения термин "нутрицевтическая" относится как к пищевой, так и к фармацевтической композиции. В соответствии с этим новая нутрицевтическая композиция может применяться в качестве добавки для пищевых продуктов и напитков, а также в качестве фармацевтического препарата для энтерального или парэнтерального применения, в форме твердых препаратов, таких как капсулы или таблетки, или в форме жидких препаратов, таких как растворы или суспензии. Как будет ясно из нижеизложенного, термин "нутрицевтическая композиция" относится также к еде и напиткам, включающим ГЭКГ и КМ, а также к композициям, которые представляют собой пищевые добавки и содержат оба действующих вещества.

Хотя связь между избыточным весом и ухудшением состояния здоровья известна уже давно, распространение ожирения приобрело масштабы эпидемии лишь в последние несколько десятилетий. В настоящее время в США более 50% населения страдают от избыточного веса и примерно 20% населения признаны тучными или обладающими очень большим избыточным весом. Распространенность ожирения продолжает быстро возрастать не только в промышленно развитых странах. Ожирение может стать одной из наиболее важных проблем здравоохранения в неиндустриальных странах, особенно в странах, находящихся в процессе экономических преобразований. По оценке Международной Организации Здравоохранения (МОЗ), к 2025 году примерно 300 миллионов человек будут страдать от ожирения.

Ожирение является наиболее важным фактором риска заболевания ИНСД. Более того, сравнительно небольшой избыточный вес также тесно связан с заболеваемостью ИНСД. По расчетам Международной Организации Здравоохранения, в отсутствие ожирения и избыточного веса распространенность ИНСД в США снизилась бы на 64% среди мужчин и на 74% среди женщин. ИНСД связан с повышенным риском сосудистых заболеваний, в том числе нефропатии и невропатии.

Из всех факторов риска ожирение оказывает наиболее сильный эффект на вероятность сердечно-сосудистых заболеваний. Индивиды, страдающие от избыточного веса, относятся к группе высокого риска развития повышенного кровяного давления и неблагоприятного спектра липидов крови, снижению уровней липопротеинов с высокой плотностью (ЛПВП) и повышению уровней липопротеина с низкой плотностью (ЛПНП), повышению уровня холестерина, а также уровня триглицеридов. Было показано, что снижение веса приводит к снижению кровяного давления и улучшению спектра липидов, также было показано, что увеличение массы тела связано с повышенным уровнем смертности от сердечно-сосудистых заболеваний.

Ожирение является также фактором риска рака эндометрия. Существуют данные, свидетельствующие о возможной связи между ожирением и раком груди, почек, толстой кишки, простаты и желчного пузыря. Ожирение не только служит причиной рака, оно может также осложнять диагностику рака в силу недостаточной гибкости программ обследования и в силу того, что жировая ткань создает проблемы при диагностике. Дополнительно, избыточный вес является важнейшим фактором риска возникновения остеоартрита коленного и тазобедренного суставов; предположительно, существует также связь между избыточным весом и грыжей поясничных межпозвонковых дисков, люмбаго, хроническими болями в области шеи. В области заболеваний дыхательных путей к типичным последствиям тучности относятся приступы обструктивного апноэ (удушья) во сне и одышка.

Таким образом, лечение или профилактика ожирения могли бы снизить распространение целого ряда острых и хронических заболеваний. Обычно лечение ожирения включает изменения диеты и образа жизни. Однако пациенты плохо соблюдают предлагаемый в подобных программах режим. Как правило, пациенты не считают ожирение заболеванием, и это снижает вероятность эффективного изменения образа жизни. Более того, даже разносторонний подход, включающий диету, увеличение физической активности и изменение поведения, не обеспечивает удовлетворительный процент успешного лечения, особенно в долгосрочном масштабе времени.

В качестве более эффективного способа лечения ожирения было предложено применение средств для снижения массы тела. Однако разработка таких лекарственных средств, как амфетамины, не только не привела к ожидаемым результатам в отношении эффективности лечения, но и показала, что эти средства вызывают ряд неблагоприятных эффектов, часто тяжелых, что, в конце концов, привело к отзыву большинства этих соединений с рынка. Серотонинергические лекарственные средства, такие как фенфлурамин и дексфенфлурамин, также были связаны с тяжелыми неблагоприятными эффектами и, вследствие этого, отозваны с рынка. Другие способы лечения, такие как норадренергическое/серотонинергическое лекарственное средство сибутрамин, имело различные побочные эффекты, в том числе сухость во рту, бессонницу, анорексию, запор, увеличение частоты сердечного ритма и повышение кровяного давления. Ингибиторы липазы, например орлистат, с частотой от 10 до 30% вызывают позывы к дефекации, маслянистый стул, стеаторею, метеоризм, выделения, увеличенную дефекацию, недержание кала.

Эти факты служат иллюстрацией того, что существует необходимость в разработке безопасной и эффективной пищевой добавки для лечения и профилактики ожирения, обладающей минимальными побочными эффектами. Индивиды, страдающие от избыточного веса, проявляют интерес к веществам, которые, по их мнению, являются природными или полученными из растений пищевыми ингредиентами и которые не обладают существенными побочными эффектами. Такие соединения могут быть использованы в качестве вспомогательной терапии, наряду с изменением диеты и увеличением физической активности. Ожирение является комплексным заболеванием, обусловленным целым рядом факторов, и в силу этого комбинированная терапия является привлекательным и удобным способом снижения массы тела у разнообразных индивидов, страдающих от ожирения.

Галлат эпигаллокатехина (ГЭГК) является основным катехином, присутствующим в зеленом чае. Считается, что благоприятный эффект, оказываемый на здоровье зеленым чаем, обусловлен в основном катехинами. У мышей катехины чая приводят к снижению обусловленного диетой прироста массы тела, массы висцерального жира, а также уровней лептина, триглицеридов и глюкозы в плазме. Известно также, что катехины чая вызывают увеличение потребления энергии у крыс. Было показано, что у человека катехины чая снижают массу тела, массу висцерального жира и уровень холестерина, инсулина и глюкозы в плазме. Было также показано, что экстракт зеленого чая значительно увеличивает потребление энергии и окисление жира у здоровых людей. Кроме того, было показано, что ГЭКГ стимулирует метаболическую активность и потребление кислорода в бурой жировой ткани крыс. Дополнительно, несколько проведенных на животных исследований показали, что катехины ингибируют абсорбцию холестерина и снижают уровень холестерина в плазме. Эпикатехины увеличивают выделение холестерина и общих липидов с калом. Таким образом, ГЭКГ способствует снижению массы тела путем стимуляции термогенеза и/или изменения абсорбции жира.

Кетон малины (4-(4-гидроксифенил)-2-бутанон), КМ) является одной из характерных составляющих аромата малины. Это соединение было обнаружено в ягодах малины в форме свободного кетона и в форме глюкозида. Это соединение быстро накапливается в плодах малины во время их созревания. КМ или его глюкозид были обнаружены не только в ягодах малины, но также в корне ревеня, клюкве и иглах сосны.

Нутрицевтическая композиция согласно настоящему изобретению содержит ГЭКГ в количестве, позволяющем вводить его в организм в суточной дозировке от примерно 0,01 мг до примерно 60 мг в пересчете на кг массы тела, предпочтительно в суточной дозировке от примерно 0,01 мг до примерно 10 мг в пересчете на кг массы тела. Таким образом, если нутрицевтическая композиция представляет собой пищевой продукт или напиток, приемлемое количество содержащегося в ней ГЭКГ находится в пределах от примерно 0,3 мг до примерно 1250 мг в пересчете на одну порцию. Если нутрицевтическая композиция представляет собой фармацевтический препарат, то этот препарат может содержать от примерно 1 мг до примерно 4000 мг ГЭКГ в пересчете на единицу дозировки твердого препарата, например в пересчете на капсулу или таблетку, или в пересчете на соответствующую дозировку жидкого препарата, или от примерно 1 мг до примерно 4000 мг в пересчете на суточную дозировку. В предпочтительном варианте осуществления изобретения нутрицевтическая композиция согласно настоящему изобретению дополнительно содержит кетон малины (КМ). Количество КМ в суточной дозировке композиции в соответствие с настоящим изобретением может составлять от примерно 0,01 мг в до примерно 60 мг в пересчете на килограмм массы тела индивида, нуждающегося в приеме этой композиции. Приемлемое содержание КМ в пищевых продуктах или напитках составляет от примерно 0,3 мг до примерно 1250 мг в пересчете на одну порцию. Если нутрицевтическая композиция представляет собой фармацевтический препарат, то этот препарат может содержать от примерно 1 мг до примерно 4000 мг КМ в пересчете на единицу дозировки твердой лекарственной формы, например в пересчете на капсулу или таблетку, или на соответствующую дозировку жидкого препарата, или от примерно 1 мг до примерно 4000 мг в пересчете на суточную дозировку жидкого препарата.

Пределы, в которых находится суточные дозировки (для индивида с массой тела 70 кг) составляют для галлата эпигаллокатехина (ГЭКГ) от 1 до 4000 мг/сутки; и для кетона малины (КМ) составляют от 1 до 4000 мг/сутки.

Представленные ниже примеры иллюстрируют настоящее изобретение, но при этом никак не ограничивают его.

А. Фармацевтические композиции могут быть приготовлены общепринятыми способами, с применением перечисленных ниже ингредиентов.

Пример 1

Мягкая желатиновая капсула

Мягкие желатиновые капсулы могут быть приготовлены обычным способом с применением перечисленных ниже ингредиентов:

Галлат эпигаллокатехина (ГЭКГ)	100 мг
Кетон малины (КМ)	100 мг
Прочие ингредиенты: глицерин, вода,
желатин, растительное масло

Пример 2

Твердая желатиновая капсула

Твердые желатиновые капсулы могут быть изготовлены обычным способом с применением перечисленных ниже ингредиентов:

Галлат эпигаллокатехина (ГЭКГ)	100 мг
Кетон малины (КМ)	100 мг
Прочие ингредиенты:
Наполнители: лактоза, целлюлоза
или производные целлюлозы	достаточное количество
Смазывающее вещество: при
необходимости стеарат магния	(0,5%)

Пример 3

Таблетка

Таблетки могут быть изготовлены обычным способом, с применением перечисленных ниже ингредиентов:

Галлат эпигаллокатехина (ГЭКГ)	50 мг
Кетон малины (КМ)	50 мг
Прочие ингредиенты:
микрокристаллическая целлюлоза,
диоксид кремния (SiO2), стеарат магния,
кросскармеллоза натрия

Б. Пищевые продукты могут быть приготовлены общепринятым способом с применением указанных ниже ингредиентов:

Пример 4

Безалкогольный напиток, включающий 30% сока

Стандартная порция:	240 мг
Действующие вещества:
Галлат эпигаллокатехина (ГЭКГ)	0,3-1250 мг в пересчете на одну порцию
Кетон малины (КМ)	0,3-1250 мг в пересчете на одну порцию

I. Состав для приготовления безалкогольного напитка приготовливают из следующих ингредиентов:

Концентрат сока и растворимые в воде ароматизаторы.

(г)

1.1 Апельсиновый концентрат

60,3° Брикса, кислотность 5,15%

657,99

Лимонный концентрат

43,5° Брикса, кислотность 32,7%
Апельсиновый ароматизатор, водорастворимый	13,43
Абрикосовый ароматизатор, водорастворимый	6,71
Вода	26,46

1.2 Краситель

β-каротин 10% (растворимый в холодной воде, CWS)	0,89
вода	67,65

1.3 Кислота и антиоксидант

Аскорбиновая кислота	4,11
Безводная лимонная кислота	0,69
Вода	43,18

1.4 Стабилизаторы

Пектин	0,20
Бензоат натрия	2,74
Вода	65,60

1.5 Жирорастворимые ароматизаторы

Апельсиновый ароматизатор, жирорастворимый	0,34
Апельсиновое масло, очищенное	0,34

1.6 Действующие вещества

Действующие вещества, ГЭКГ и КМ в указанных выше концентрациях

Концентраты фруктовых соков и водорастворимые ароматизаторы смешивают без доступа воздуха. Краситель растворяют в деионизированной воде. Аскорбиновую кислоту и лимонную кислоту растворяют в воде. Бензоат натрия растворяют в воде. Пектин добавляют при помешивании и растворяют при кипении. Раствор охлаждают. Апельсиновое масло и растворимые в масле ароматизаторы предварительно смешивают между собой. Действующие вещества, указанные в п.1.6, предварительно смешивают в сухом виде, затем добавляют при помешивании предпочтительно в смесь концентратов фруктовых соков (1.1).

Для того, чтобы приготовить смесь для безалкогольного напитка, все части 3.1.1-3.1.6 смешивают вместе, затем гомогенизируют с помощью смесителя типа Turrax и, затем, с помощью гомогенизатора высокого давления (p₁=200 бар, р₂=50 бар).

II. Сироп для приготовления напитка приготавливают из следующих ингредиентов, г:

Смесь для приготовления	74,50
безалкогольного напитка
Вода	50,00
Сахарный сироп 60°	150,0
Брикса

Ингредиенты сиропа для приготовления напитка смешивают между собой. К сиропу для приготовления напитка добавляют воду до получения 1 литра готового к употреблению напитка.

Варианты осуществления изобретения.

Вместо применения бензоата натрия, напиток может быть пастеризован. Напиток может быть также газирован.

Пример 5

Хлеб из пяти злаков, г:

Стандартная порция 50 г
Действующие вещества:
Галлат эпигаллокатехина	0,3-1250 мг в пересчете на порцию
Кетон малины	0,3-1250 мг в пересчете на порцию
Другие компоненты	%
Мука из пяти злаков	56,8
Вода	39,8
Дрожжи	2,3
Соль	1,1

Дрожжи растворяют в части воды. Все ингредиенты смешивают вместе для получения теста. Соль добавляют в конце замешивания. После завершения брожения тесто перерабатывают и разделяют до получения буханки. Перед выпечкой батон следует смочить водой и посыпать мукой.

Технологический процесс:

Замешивание:	4 минуты на 1-ой скорости
Спиральная система для замешивания	5 минут на 2-ой скорости
Расстойка	60 мин
Температура теста при расстойке	22-24°С
Время расстойки	30 мин
Выпечка:
Печь	Печь датского типа
Температура выпечки	250/220°С
Время выпечки	50-60 мин

Пример 6

Печенье типа "Милане"

Стандартная порция	30 г
Действующие вещества:
Галлат эпигаллокатехина	0,3-1250 мг в пересчете на порцию
Кетон малины	0,3-1250 мг в пересчете на порцию
Прочие компоненты:	(г)
Пшеничная мука, тип 550	41,0
Сахар	20,5
Жир/Сливочное масло	20,5
Цельное яйцо (свежее)	18,0
Лимонный ароматизатор	достаточное количество
Средство для выпечки	достаточное количество

Все ингредиенты добавляют постепенно, при помешивании, до получения сладкого песочного теста.

После этого тесто оставляют на холоду (4°С) по меньшей мере на 2 часа, затем раскатывают тесто до толщины примерно 5 мм. Куски теста вырезают и, перед выпечкой, их поверхность смазывают яичным желтком.

Выпечка:
Печь	Канальная печь
Температура выпечки	180°С
Время выпечки	15 мин

Пример 7

Тосты

Стандартная порция	100 г
Действующие вещества:
Галлат эпигаллокатехина	0,3-1250 мг в пересчете на порцию
Кетон малины	0,3-1250 мг в пересчете на порцию
Прочие компоненты:	(%)
Пшеничная мука, тип 550	55,4
Вода	33,2
Дрожжи	2,8
Соль	1,1
Жир/Сливочное масло	5,5
Солод	0,6
Эмульгатор для выпечки теста	1,4

Дрожжи растворяют в части воды. Все ингредиенты смешивают вместе для получения теста. Соль добавляют в конце замешивания. После этого тесто перерабатывают и разделяют и помещают в хлебопекарную форму на время брожения. После выпечки каравай немедленно вынимают из формы.

Технологический процесс:

Замешивание:	5-6 минут на 1-ой скорости
Спиральная система для замешивания	3-4 минуты на 2-ой скорости
Расстойка теста	нет
Температура теста	22-24°С
Время расстойки	40 мин
Выпечка:
Печь	Печь датского типа
Температура выпечки	220°С
Время выпечки	35-40 мин

Пример 8

Йогурт (термостатного способа производства) жирность 3,5%:

Стандартная порция	225 г
Действующие вещества:
Галлат эпигаллокатехина	0,3-1250 мг в пересчете на порцию
Кетон малины	0,3-1250 мг в пересчете на порцию
Прочие компоненты:	(%)
Цельное жирное молоко
(жирность 3,8%)	90,5
Снятое сухое молоко	2,0
Сахар	5,0
Культура	2,5

Молоко нагревают до 35°С, затем добавляют сухое молоко, стабилизатор, сахар, и действующие вещества. Полученную смесь нагревают до 65°С для того, чтобы растворить ингредиенты. Затем смесь гомогенизируют с помощью гомогенизатора высокого давления (p₁=150 бар, р₂=50 бар) при 65°С. Эту эмульсию пастеризуют при 80°С в течение 20 минут. После охлаждения до 45°С к смеси добавляют натуральный йогурт/культуру и перемешивают. Затем смесь разливают в стаканчики и дают ей бродить в течение 3-4 часов при температуре 45°С, пока уровень рН не достигнет 4,3, затем йогурт охлаждают до 4°С и хранят при этой температуре

Пример 9

Йогурт (с нарушенным сгустком) жирность 3,5%:

Стандартная порция	225 г
Действующие вещества:
Галлат эпигаллокатехина (ГЭКГ)	0,3-1250 мг в пересчете на порцию
Кетон малины (КМ)	0,3-1250 мг в пересчете на порцию
Прочие компоненты:	(%)
Цельное жирное молоко
(жирность 3,8%)	90,2
Снятое сухое молоко	2,0
Стабилизатор	0,3
Сахар	5,0
Культура	2,5

Молоко нагревают до 35°С, затем добавляют сухое молоко, стабилизатор, сахар и действующие вещества. Полученную смесь нагревают до 65°С для того, чтобы растворить ингредиенты. Затем смесь гомогенизируют с помощью гомогенизатора высокого давления (p₁=150 бар, р₂=50 бар) при 65°С. Эту эмульсию пастеризуют при 80°С в течение 20 минут. После охлаждения до 45°С к смеси добавляют натуральный йогурт/культуру и перемешивают. Затем смесь разливают в стаканчики и дают ей бродить в течение 3-4 часов при температуре 45°С, пока уровень рН не достигнет 4,3, затем йогурт охлаждают до 4°С и хранят при этой температуре.

Пример 10

Мороженое с жирностью 8%:

Стандартная порция	85 г
Действующие вещества:
Галлат эпигаллокатехина (ГЭКГ)	0,3-1250 мг в пересчете на порцию
Кетон малины (КМ)	0,3-1250 мг в пересчете на порцию
Прочие компоненты:	(г)
Молоко (жирность 3,87%)	600,0
Сливки (жирность 35%)	166,0
Сахар	109,00
Сироп глюкозы 80%	70,00
Стабилизатор мороженого	5,00
Ароматизатор	достаточное количество
Краситель	достаточное количество

Сахар, снятое сухое молоко и стабилизатор добавляют в молоко и сливки, перемешивают и нагревают до 45°С. Затем добавляют маточный раствор красителя и глюкозу, а также действующие вещества. Смесь нагревают и пастеризуют при 80°С в течение 20 минут. Затем смесь гомогенизируют. Затем смесь охлаждают при постоянном помешивании и добавляют ароматизатор при температуре 5°С. Смесь выдерживают при 5°С в течение по меньшей мере 4 часов, затем пропускают через машину для изготовления мороженого (взбитость приблизительно 100%). Мороженым заполняют стаканчики и хранят при температуре от -20 до -30°С.

Пример 11

Жевательные конфеты
Действующие вещества:
Галлат эпигаллокатехина (ГЭКГ)	0,3-1250 мг в пересчете на 30 г продукта
Кетон малины (KM)	0,3-1250 мг в пересчете на 30 г продукта
Прочие компоненты:	(г)
Желатин (Gelatine 200 Bloom)	80,0
Вода I	125,0
Сахар кристаллический	290,0
Вода II	120,00
Сироп глюкозы DE 38	390,00
Лимонная кислота	10,0
Ароматизатор	2,0
Краситель	достаточное количество
Выход продукта, примерно	1000,0

Желатин диспергируют в воде I, перемешивают и растворяют путем нагревания в паровой бане или микроволновой печи. Сахар смешивают с водой II и доводят смесь до кипения, кипятят до получения прозрачного раствора. Прекращают нагревание. Прежде чем раствор сахара остынет, его смешивают с сиропом глюкозы. Медленно добавляют раствор желатина. Оставляют стоять до тех пор, пока с поверхности раствора можно будет собрать пену, и температура достигнет 60-65°С. Добавляют при помешивании ароматизатор, лимонную кислоту и раствор красителя, а также действующие вещества. Переносят в формы, отпечатанные в лотке с крахмалом, и оставляют при комнатной температуре по меньшей мере на 48 часов. Очищают от крахмальной пудры и отполировывают маслом или воском. Высушивают при комнатной температуре и упаковывают в герметичные пакеты.

Пример 12

Эффективность воздействия комбинации ГЭКГ и КМ, а также обоих соединений по отдельности на массу тела и степень ожирения была проверена в ходе 4-недельного исследования на мышах лини C57BL6/J, содержавшихся на диете с высоким содержанием жира и сахарозы (число особей в группе: 8-11). Эта модель вызванного диетой ожирения и ранней стадии диабета II типа широко используется для определения эффективности средств от ожирения.

Самцы мышей линии C57BL6/J были получены в Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME, США). В эксперименте использовали взрослых мышей, чей возраст составлял 4 недели. Мышей содержали индивидуально в пластиковых клетках с подстилкой и обеспечивали им неограниченный доступ к корму с высоким содержанием жира и сахарозы (Kliba #2154, Klibamuehle, Kaiseragust, Швейцария) и водопроводной воде. В помещениях, где находились клетки с животными, поддерживались постоянная температура (24°С), влажность (55%) и световой режим (цикл 12 часов света - 12 часов темноты). Мыши были случайным образом разделены на четыре группы. ГЭКГ и КМ вводили в виде смешанных пищевых добавок. Зерновую целлюлозу (составлявшую 2% диеты) использовали в качестве вещества - носителя для КМ и ГЭКГ, а также без действующих веществ, в качестве плацебо. Группа 1 получала плацебо, группа 2 получала ГЭКГ в суточной дозировке 1400 мг/кг массы тела, группа 3 получала КМ в суточной дозировке 1400 мг/кг массы тела и группа 4 получала ГЭКГ и КМ в суточных дозировках 1400 и 1400 мг/кг массы тела соответственно. В течение всего эксперимента регистрировали массу тела и потребление пищи. Данные представлены как средние для группы с каждым типом диеты.

Массы тела для каждой группы представлены в таблице 1. Прием пищи различными группами не различался в течение эксперимента. Мыши, получавшие контрольную диету, потребляли такое же количество энергии, как и мыши, получавшие ГЭКГ, КМ или комбинированную терапию ГЭКГ + КМ. Для каждой группы было рассчитано снижение массы тела (МТ) по сравнению с контрольной группой (данные представлены в таблице 2). Ожидаемый эффект от комбинированной терапии ГЭКГ и КМ был рассчитан как сумма от монотерапий КМ и ГЭКГ. Синергетический фактор (СФ) был определен как частное наблюдаемого эффекта и ожидаемого эффекта. Значения СФ>1 говорят о том, что комбинированная терапия обладает синергетическим эффектом.

Таблица 1
	Масса тела
	Начальная (г)	Неделя 2 (г)	Неделя 4 (г)
Контроль	10,6	20,4	23,6
ГЭКГ (1400 мг/кг МТ/сутки)	11,4	17,7*	21,4*
КМ (1400 мг/кг МТ/сутки)	11,5	19,0*	22,1*
ГЭКГ + КМ (1400+1400 мг/кг МТ/сутки)	11,2	14,9*	18,3*
* значительно отличается от контроля (уровень значимости р<0,05)
Таблица 2
	Снижение массы тела
	Неделя 2 (г)	Неделя 4 (г)
ГЭКГ (1400 мг/кг МТ/сутки)	2,7	2,2
КМ (1400 мг/кг МТ/сутки)	1,6	1,5
Ожидаемое (ГЭКГ 1400 мг/кг МТ/сутки) + КМ (1400 мг/кг МТ/сутки))	4,3	3,7
Комбинированная терапия (ГЭКГ 1400 мг/кг МТ/сутки) + КМ (1400 мг/кг МТ/сутки))	5,5*	5,3*
СФ	1,28	1,43
* значительно отличается от контроля (уровень значимости р<0,05)

При кормлении мышей линии C57BL6/J кормом с высоким содержанием жира и сахарозы их масса тела значительно увеличилась за время исследования (4 недели). Однако в тех случаях, когда в диету добавляли ГЭКГ или КМ, масса тела значительно снижалась по сравнению с мышами из контрольной группы, не получавшими добавок. Комбинированная терапия ГЭКГ и КМ привела к большему снижению массы тела, чем любая из монотерапий. Более того, уменьшение массы тела было значительно выше, чем ожидаемое уменьшение от сложения эффектов ГЭКГ и КМ. Таким образом, эффект комбинированной терапии является синергетическим, что проиллюстрировано тем фактом, что СФ>1 как для недели 2, так и для недели 4.

Пример 13

Эффективность воздействия комбинации ГЭКГ и КМ, а также обоих соединений по отдельности на массу тела и степень ожирение была проверена в ходе 5-недельного исследования на мышах db/db линии C57BLKS/J (от 8 до 9 особей в группе). Эта модель диабета II типа с тяжелой гипергликемией и ожирением широко используется для определения эффективности соединений для лечения ожирения и диабета.

Самцы мышей db/db были приобретены в Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME, США). В эксперименте использовали взрослых мышей, чей возраст составлял 8 недели. Мышей содержали индивидуально в пластиковых клетках с подстилкой и обеспечивали им неограниченный доступ к стандартному корму для грызунов и водопроводной воде. В помещении, где находились клетки, поддерживались постоянная температура (24 С), влажность (55%) и световой режим (цикл 12 часов света - 12 часов темноты). Мыши были случайным образом разделены на четыре группы. ГЭКГ и КМ вводили в виде смешанных пищевых добавок. Зерновую целлюлозу (составлявшую 2% диеты) использовали в качестве вещества - носителя для КМ и ГЭКГ, а также без действующих веществ, в качестве плацебо. Группа 1 получала плацебо, группа 2 получала ГЭКГ в суточной дозировке 1400 мг/кг массы тела, группа 3 получала КМ в суточной дозировке 1400 мг/кг массы тела и группа 4 получала ГЭКГ и КМ в суточных дозировках 1400 и 1400 мг/ кг массы тела соответственно. В течение всего эксперимента регистрировали массу тела и потребление пищи. Данные представлены как средние для группы с каждым типом диеты.

Массы тела для каждой группы представлены в таблице 3. Прием пищи различными группами не различался в течение эксперимента. Для каждой группы было рассчитано снижение массы тела (МТ) по сравнению с контрольной группой (данные представлены в таблице 4). Ожидаемый эффект от комбинированной терапии ГЭКГ и КМ был рассчитан как сумма от монотерапий КМ и ГЭКГ. Синергетический фактор (СФ) был определен как частное наблюдаемого эффекта и ожидаемого эффекта. Значения СФ>1 говорят о том, что комбинированная терапия обладает синергетическим эффектом.

Таблица 3
	Масса тела
	Начальная (г)	Неделя 2 (г)	Неделя 4 (г)
Контроль	32,2	38,7	38,4
ГЭКГ (1400 мг/кг МТ/сутки)	32,2	35,7*	37,7
КМ (1400 мг/кг МТ/сутки)	32,5	38,4	38,0
ГЭКГ + КМ (1400+ 1400 мг/кг МТ/сутки)	32,4	33,7*	34,3*
* значительно отличается от контроля (уровень значимости р<0,05)
Таблица 4
	Снижение массы тела
	Неделя 2 (г)	Неделя 4 (г)
ГЭКГ (1400 мг/кг МТ/сутки)	3,0	0,8
КМ (1400 мг/кг МТ/сутки)	0,3	0,4
Ожидаемое (ГЭКГ 1400 мг/кг МТ/сутки) + КМ (1400 мг/кг МТ/сутки))	3,3	1,2
Комбинированная терапия (ГЭКГ 1400 мг/кг МТ/сутки) + КМ (1400 мг/кг МТ/сутки))	5,0*	4,1*
СФ	1,52	3,42
* значительно отличается от контроля (уровень значимости р<0,05)

Модель db/db широко используется для определения эффективности соединений, предназначенных для снижения массы тела и соединений, предназначенных для лечения диабета. Как показано в таблице 1, у таких мышей в начале жизни быстро развивается тяжелое ожирение, а затем их масса тела выходит на плато. Добавка в диету ГЭКГ привела к значительному снижению массы тела по окончании недели 2 по сравнению с мышами контрольной группы, не получавшими добавок. Терапия КМ не вызвала значительного повышения массы тела за время эксперимента. После четырех недель терапии ни ГЭКГ, ни КМ не вызвали значительного снижения массы тела, если применялись в виде монотерапии; однако комбинированная терапия ГЭКГ и КМ привело к значительному снижению массы тела по сравнению с контрольной группой, не получавшей терапии. Таким образом, комбинированная терапия ГЭКГ и КМ привела к большему снижению массы тела, чем любая из монотерапий. Более того, уменьшение массы тела при комбинированной терапии ГЭКГ и КМ было значительно выше, чем ожидаемое уменьшение от сложения эффектов ГЭКГ и КМ. Таким образом, эффект комбинированной терапии ГЭКГ и КМ является синергетическим, что проиллюстрировано тем фактом, что СФ> 1 как для недели 2, так и для недели 4.

1. Нутрицевтическая композиция, предназначенная для лечения или профилактики ожирения или состояний, связанных с ожирением, таких как инсулиннезависимый сахарный диабет (ИНСД, тип II) и синдром X, включающая эффективные количества галлата эпигаллокатехина (ГЭКГ) и 4-(4-гидроксифенил)-2-бутанона(КМ).

2. Нутрицевтическая композиция по п.1, включающая ГЭКГ в количестве, достаточном для введения в организм индивида в количестве от примерно 0,01 мг до примерно 60 мг в пересчете на кг массы тела, и КМ в количестве, достаточном для введения в организм индивида в количестве от примерно 0,01 мг до примерно 60 мг в пересчете на кг массы тела.

3. Нутрицевтическая композиция по любому из пп.1 и 2, которая представляет собой фармацевтическую композицию.

4. Нутрицевтическая композиция по п.3, которая представляет собой твердую фармацевтическую композицию, включающую примерно от примерно 10 мг до примерно 500 мг ГЭКГ и от примерно 10 мг до примерно 500 мг КМ на единицу дозировки.

5. Нутрицевтическая композиция по п.3, которая представляет собой твердую фармацевтическую композицию, включающую от примерно 10 мг до примерно 50 мг ГЭКГ и от примерно 10 мг до примерно 50 мг КМ в пересчете на единицу дозировки.

6. Нутрицевтическая композиция по одному из п.1 или 2, которая представляет собой пищевой продукт, напиток или поддерживающую (функциональную) добавку к пищевому продукту или напитку.

7. Применение ГЭКГ и КМ в производстве нутрицевтической композиции для лечения или профилактики ожирения или состояний, связанных с ожирением, таких, как инсулиннезависимый сахарный диабет (ИНСД, тип II) и синдром X.

8. Применение по п.7, в котором ГЭКГ применяется в количестве, достаточном для обеспечения суточной дозировки от примерно 0,01 мг до примерно 60 мг в пересчете на кг массы тела индивида, в организм которого вводится данное соединение, и КМ применяется в количестве, достаточном для обеспечения суточной дозировки от примерно 0,01 мг до примерно 60 мг в пересчете на кг массы тела индивида, в организм которого вводится данное соединение.

9. Способ лечения или профилактики ожирения или состояний, связанных с ожирением, таких как инсулиннезависимый сахарный диабет (ИНСД, тип II) и синдром X, который заключается во введении в организм нуждающегося в таком лечении индивида эффективного количества комбинации ГЭКГ и КМ.