Способ получения средства, обладающего диуретической и противовоспалительной активностью

Способ получения средства, обладающего диуретической и противовоспалительной активностью

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Изобретение относится к медицинской и химико-фармацевтической промышленности и может быть использовано в медицине при разработке лекарственных средств с диуретической и противовоспалительной активностью.

Одной из актуальных проблем медицинской науки и практического здравоохранения является профилактика и лечение заболеваний мочевыводящих путей, которые по распространенности занимают второе место после ОРЗ в России. Течение таких заболеваний часто имеет хронический характер и требует длительного применения лекарственных препаратов. Социальная значимость этой проблемы обусловлена широким распространением и тяжестью заболеваний. В связи с этим, поиск и разработка новых эффективных и безопасных лекарственных средств и субстанций из растительного сырья, обладающих малой токсичностью, является актуальной задачей.

Среди растений, широко применяемых в научной и народной медицине, известна земляника лесная - Fragaria vesca. Листья этого растения применяются в качестве спазмолитического, диуретического и общеукрепляющего средства [Растительные ресурсы СССР. - Ленинград: Наука. - 1987. - С.48-49].

Известен способ получения водного настоя листьев земляники лесной [Государственный реестр лекарственных средств. - Москва. - 2001. - С.206], который используется в качестве диуретического и спазмолитического средства, а также для лечения желчно- и почечнокаменной болезни, подагры. Установлено, что 10%-ный водный настой листьев земляники лесной увеличивает диурез, снижает артериальное давление, изменяет амплитуду и частоту сокращений сердца, расширяет кровеносные сосуды [Коноплева М.М., Садикова В.К. Фармакологические свойства земляники лесной. / Современные аспекты теории и практики фармации: Сб. науч. тр. /1-й Ленинградский медицинский ин-т им. И.П.Павлова, - 1988. - С.145-148]. Также установлена гипогликемическая активность настоя из листьев земляники лесной [Бубенчикова В.Н., Дроздова И.Л., Воротынцева Н.И. Изучение гипогликемической активности представителей родов просвирник, шток-роза, земляника. / Человек и его здоровье: Сб. науч. тр., Курск. - 2000, Вып.3. - С.331-332].

Этот способ целесообразно принять за прототип вследствие наличия общих операций, сходного вида биологической активности, ботанического родства сырьевых источников.

Прототип имеет следующие недостатки:

- низкое содержание флавоноидов, окисляемых веществ и аскорбиновой кислоты - основных действующих веществ листьев земляники (табл.1);

- невысокая диуретическая активность водных настоев и отсутствие данных по противовоспалительной активности (табл.5);

- отсутствие параметров стандартизации и возможности контроля качества настоя;

- ограниченный срок хранения водных извлечений (2 суток).

Целью настоящего изобретения является повышение выхода действующих веществ и установление противовоспалительного действия у нового природного источника биологически активных веществ из растительного сырья, имеющего достаточную сырьевую базу.

Цель достигается тем, что в качестве источника сырья используют листья земляники садовой - Fragaria ananassa L. Воздушно-сухие листья измельчают до размера частиц 3 мм и экстрагируют 3 раза по 30 минут водой очищенной в соотношении сырье-экстрагент 1:10 в реакторе из нержавеющей стали с ложным дном вместимостью 100 л, снабженным якорной мешалкой, паровой рубашкой и гильзой для термометра. Водные извлечения объединяют. Очистку объединенных водных извлечений осуществляют фильтрацией через друк-фильтр и сепарированием. Упаривание объединенного водного извлечения проводят в циркуляционном вакуум-выпарном аппарате до 0,1 объема. Сушку проводят на распылительной сушилке. Выход готового продукта составляет 20% от массы растительного сырья.

Параметры стандартизации конечного продукта

Содержание окисляемых веществ, кислоты аскорбиновой, влажность определяют по методикам ГФXI [Государственная фармакопея СССР. - XI-е изд. - М.: Медицина. - Т.1, 2 (1987, 1990)].

Анализ на содержание флавоноидов

Качественное обнаружение

К 0,5 мл раствора субстанции (раствор А), полученного для количественного определения, прибавляют 1 мл 5%-ного спиртового раствора алюминия хлорида; появляется желтое окрашивание.

Ультрафиолетовый спектр раствора Б, приготовленного для количественного определения, в области от 380 до 450 нм имеет максимум поглощения при длине волны 405±2 нм (см. чертеж).

Количественное определение флавоноидов

Около 0,15 г (точная навеска) сухого экстракта помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 25 мл воды очищенной (70°С), доводят водой до метки и перемешивают (раствор А).

2 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 5 мл 5%-ного спиртового раствора алюминия хлорида, 1 мл 3%-ной уксусной кислоты и доводят 70%-ным спиртом до метки (раствор Б).

Измеряют оптическую плотность раствора Б через 30 минут с помощью спектрофотометра при длине волны 405 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.

В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 2 мл раствора А и 1 мл 3%-ной уксусной кислоты, доведенных до метки 70%-ным спиртом в мерной колбе вместимостью 25 мл.

Параллельно в тех же условиях измеряют оптическую плотность раствора, содержащего 1 мл 0,05%-ного раствора рутина, приготовленного аналогично испытуемому раствору.

В качестве раствора сравнения при этом используют 1 мл 0,05%-ного раствора рутина и 1 мл 3%-ной уксусной кислоты, доведенных до метки 70%-ным спиртом в мерной колбе вместимостью 25 мл.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

где D - оптическая плотность испытуемого раствора;

D₀ - оптическая плотность раствора рабочего стандартного образца рутина;

m₀ - точная масса рутина, взятого для приготовления раствора рабочего стандартного образца, г;

m - точная масса препарата, г;

W - потеря в массе при высушивании субстанции, %.

Найдено 5,12±0,17%

Предлагаемый способ получения достаточно прост и позволяет получить продукт постоянного состава. Способ получения апробирован на АООТ «Биохиммаш» в г.Москва и может быть внедрен на предприятиях по выпуску лекарственных препаратов.

Для доказательства существенности предложенных признаков изучено влияние способа экстракции, природы экстрагента, степени измельченности сырья, температуры, кратности и продолжительности экстракции на выход БАВ из исследуемого лекарственного растения.

Количественная оценка велась по выходу суммы флавоноидов (в пересчете на рутин - стандарт), суммы окисляемых веществ и кислоты аскорбиновой.

Подбор оптимальных условий получения извлечений проводился на объединенном образце листьев земляники садовой сортов «Фестивальная», «Ромашка фестивальная», «Найдена», «Фея», «Рубиновый кулон», заготовленном на территории Племзавода «Савинский» Пермской области 16 июня и 20 августа 2002 г.

Природа экстрагента, применяемого для извлечения биологически активных веществ, играет существенную роль. Правильно подобранный экстрагент увеличивает скорость и полноту извлечения веществ из растительного материала. Кроме того, необходимо ориентироваться на количество биологически активных веществ и на их фармакологическую эффективность.

Экстракцию осуществляли с использованием воды очищенной и спирта этилового различной концентрации путем нагревания в колбе на водяной бане с обратным холодильником в течение 1 часа.

Из приведенных в таблице 2 данных видно, что максимальное количество флавоноидов переходит в 40% спирт, суммы окисляемых веществ в воду при 70°С, а выход кислоты аскорбиновой не зависит от природы экстрагента. В качестве оптимального экстрагента мы выбрали воду, так как в нее лучше переходят окисляемые вещества, кислота аскорбиновая и другие водорастворимые компоненты (гликозиды флавоноидов, полисахариды, микроэлементы, аминокислоты).

Общеизвестно влияние размера частиц сырья растительного материала на интенсификацию процесса экстрагирования и выход биологически активных веществ. В результате измельчения значительно увеличивается удельная поверхность обрабатываемого материала, вследствие чего увеличивается скорость экстракции. С уменьшением размера частиц лекарственного растительного сырья возрастает число разрушенных клеток, из которых вещества быстро экстрагируются за счет простого вымывания. Для исследования влияния размера частиц сырья на интенсивность процесса экстракции мы использовали листья земляники садовой. Сырье измельчали в лабораторных условиях до размера 7 мм, 5 мм, 3 мм, 2 мм, 1 мм. Результаты анализа приведены в таблице 2.

Результаты анализа показали, что максимальный выход биологически активных веществ наблюдается при размере частиц сырья 3 мм. Измельчение менее 3 мм приводит к плохой смачиваемости сырья и в конечном счете замедляет процесс экстрагирования. При применении крупного порошка экстракция изучаемых нами биологически активных веществ уменьшается (суммы флавоноидов в пересчете на рутин с 0,21% до 0,11%, суммы окисляемых веществ с 23,2% до 21,4%, кислоты аскорбиновой с 184,7 мг % до 164,7 мг %), становится продолжительной, что приводит к извлечению большого количества сопутствующих веществ и адсорбции ценных БАВ шротом.

Была изучена зависимость выхода суммы флавоноидов в пересчете на рутин, суммы окисляемых веществ и аскорбиновой кислоты при экстракции водой очищенной в различных соотношениях к количеству сырья. Результаты анализа представлены в таблице 2.

Экспериментальные данные, представленные в таблице, свидетельствуют о том, что максимальный выход биологически активных веществ наблюдается при соотношении сырье-экстрагент 1:10 для однократного залива сырья. Дальнейшее увеличение объема экстрагента нецелесообразно, так как не достигается эффективность экстрагирования, поскольку не наблюдается увеличение выхода извлекаемых веществ.

Известно, что повышение температуры экстрагента приводит к увеличению скорости процесса извлечения биологически активных веществ. Данные, отражающие зависимость выхода суммы флавоноидов, суммы окисляемых веществ и кислоты аскорбиновой от температуры экстрагента, представлены в таблице 2.

Результаты анализа показали, что с увеличением температуры экстрагента увеличивается выход суммы флавоноидов, суммы окисляемых веществ и кислоты аскорбиновой и наиболее полное извлечение достигается при температуре экстрагента 75°С. Учитывая, что в лекарственном растительном сырье находятся термолабильные вещества, нагревание свыше 80°С нецелесообразно.

С целью определения продолжительности и кратности числа экстракций было изучено время наступления равновесной концентрации в системе сырье:экстрагент (таблица 3). Для этого навески растительного сырья настаивались с водой очищенной (80°С) в соотношении 1:10 при перемешивании в течение 30 минут. Процесс повторяли трижды, заливая сырье новой порцией экстрагента в количестве, равном слитому извлечению. Контроль полноты извлечения осуществляли методом хроматографирования на бумаге. Через каждые 15 минут в течение каждого контакта фаз отбирали по 30 мл для определения количества суммы флавоноидов в пересчете на рутин, суммы окисляемых веществ и аскорбиновой кислоты.

Равновесное состояние в системе достигается через 30, 30 и 30 минут при 1, 2 и 3 контактах фаз соответственно.

При использовании в процессе экстрагирования всех подобранных нами оптимальных условий достигается достаточно высокий выход биологически активных веществ. Результаты представлены в таблице 4. Результаты анализа свидетельствуют о том, что при трехкратной экстракции в водный экстракт выходит: суммы флавоноидов в пересчете на рутин - 98%, суммы окисляемых веществ - 99%, аскорбиновой кислоты - 86% от исходного содержания в сырье.

Оптимальные условия были положены в основу процесса экстрагирования.

Способ получения иллюстрируется следующим примером: 6 кг листьев земляники садовой измельчают до размеров частиц сырья 3 мм, помещают в реактор через верхний люк, заливают водой очищенной в соотношении сырья и растворителя 1:10 и с учетом коэффициента водопоглощения сырья.

Экстрагируют при постоянном перемешивании при температуре 80±5°C в течение 30 минут. Первое извлечение сливают, одновременно фильтруя, в мерник и направляют на следующую стадию технологического процесса.

Аналогичным способом проводят еще две экстракции по 30 и 30 минут, подавая каждый раз в реактор воду очищенную в количестве, равном объему слитого экстракта.

Полученные извлечения объединяют, фильтруют и подают в циркуляционный вакуумный аппарат для упарки. Упарку ведут при температуре реакционной массы 60±5°C и давлении 0,01 кгс/см² (9,81 гПа) приблизительно до 1/10 первоначального объема. В результате упарки получают 10 л водного кубового остатка (плотность 1,043 г/см³). Упаренный экстракт подвергают очистке сепарированием. Получают очищенный экстракт (плотность 1,043 г/см³) и осадок балластных веществ в количестве 0,005 кг, который не используют. Очищенный экстракт сушат на распылительной сушилке «Niro Atomazer» (Дания).

Водный экстракт подается к распылителю дозирующим насосом и распыляется на мелкие капельки. Удаление влаги происходит за счет контакта с горячим воздухом, поступающим в камеру. Далее порошок вместе с воздухом поступает в циклон высокой производительности, где происходит отделение порошка от воздуха и сбор его в емкость. Режим работы: температура воздуха на входе - 130-140°С, температура на выходе - 70-80°С. Скорость подачи исходной смеси 2,0-2,5 л/ч, давление сжатого воздуха 5,2 кгс/см² (0,52 мПа).

Получают сухой продукт в количестве 1,2 кг, что составляет 20% от массы абсолютно-сухого сырья. Потеря в массе при высушивании 3,4%.

Сухой экстракт представляет собой порошок от желто-зеленого до коричневато-зеленого цвета со слабым запахом и горьковатым, слегка вяжущим вкусом. Содержание флавоноидов - 5,12±0,17%, окисляемых веществ - 82,3±8,5%, аскорбиновой кислоты - 1,1±0,12%, влажность - 3,5±0,3%.

Диуретическая активность

Мочегонное действие исследовано на 24 белых беспородных крысах обоего пола массой 220-280 г. Крыс в течение суток перед опытом лишали воды и пищи. Водную нагрузку осуществляли per os непосредственно перед опытом из расчета 25 мл/кг. Сбор мочи производили через 5 и 24 часа после водной нагрузки [Гацура В.В. Методы первичного фармакологического исследования биологически активных веществ. / Средства, влияющие на диурез. - М., - 1974. - С.103-105]. Исследуемые препараты вводили per os в дозе 150 мг/кг.

В результате проведенных опытов установлено, что у контрольных животных через 5 часов после водной нагрузки диурез составил 2,4 мл, а через сутки - 2,9 мл. Прироста диуреза за 19 часов не было.

Настой земляники лесной в дозе 150 мг/кг проявил мочегонное действие. Об этом свидетельствует увеличение диуреза через 24 часа и прирост объема мочи за 19 часов на 1,7 мл (табл.5), что соответствует литературным данным [Коноплева М.М., Садикова В.К. Изучение диуретического действия фенольных соединений земляники лесной. / Недостаточность кровообращения. - Л., 1986. - С.175-177]. Следует отметить, что настой земляники лесной не изменил пятичасового диуреза.

Экстракт земляники садовой сухой в дозе 150 мг/кг оказал мочегонное действие, что проявилось увеличением диуреза через 24 часа и приростом объема мочи за 19 часов на 2,9 мл (табл.5). Экстракт земляники садовой сухой также не изменил пятичасового диуреза.

Таким образом, экстракт из листьев земляники садовой сухой увеличивал суточный диурез на 75,9%, в то время как настой из листьев земляники лесной лишь на 31,0%.

Противовоспалительная активность

Противовоспалительную активность определяли на 18 крысах обоего пола массой 220-280 г. Животные содержались на обычном рационе. Исследуемые препараты листьев земляники лесной - настой (официальное лекарственное средство) и садовой - сухой экстракт (перспективная субстанция) вводили в дозе 150 мг/кг перорально за час до моделирования каррагенинового воспаления. Каррагениновый отек вызывали субплантарным введением 0,1% раствора каррагенина [Методические рекомендации по изучению новых нестероидных препаратов. /Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - ЗАО «ИИА «Ремедиум», 2000. - С.236]. О противовоспалительной активности судили по изменению выраженности воспаления в динамике. Воспалительный отек регистрировали онкометрически через 3 и 5 часов после моделирования воспаления. Контрольным крысам вводили эквиобъемное количество растворителя.

Настой из листьев земляники лесной в испытанной дозе не оказал достоверного влияния на развитие и течение каррагенинового воспаления (табл.6).

Экстракт листьев земляники садовой сухой в дозе 150 мг/кг проявил противовоспалительную активность. Об этом свидетельствует достоверное торможение воспалительного отека на 3 и 5 часе наблюдения.

Сравнение выраженности противовоспалительной активности экстракта листьев земляники садовой сухого и индометацина (функционального аналога) показал, что фитопрепарат не уступал типичному нестероидному противовоспалительному средству.

Статистическую обработку данных фармакологического эксперимента проводили по критерию Стьюдента. Эффект считали достоверным при р≤0,05 [Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. 2-е изд., Л.: Медицинская литература, 1963].

Острая токсичность

Острую токсичность определяли на двух видах половозрелых лабораторных животных: 150 мышах (самцы и самки с массой 18-20 г) и 90 крысах линии Вистар обоего пола массой 160-180 г. Животные содержались на обычном рационе, перед началом хронического опыта были клинически здоровы. Сухой экстракт из листьев земляники садовой вводили в виде 5-10% водных суспензий, приготовленных ex tempore в объемах 0,3-10,0 мл на животное. Длительность наблюдения за животными составляла 14 дней. В ходе эксперимента следили за поведением, внешним видом, двигательной активностью, реакцией животных на внешние раздражители. Клиническую картину «острого» отравления лабораторных животных регистрировали при введении экстракта в дозах, близких к среднесмертельным. Определение параметров токсичности при однократном введении лабораторным животным осуществляли при помощи метода Дейхмана и Ле Бланка с установлением ориентировочной среднесмертельной дозы [Арзамасцев Е.В. с соавт. (1973)] и методом пробит-анализа по Литчфилду и Уилкокосону [Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. 2-е изд.. Л.: Медицинская литература, 1963]. При внутрибрюшинном введении экстракта из листьев земляники садовой сухого мышам самцам в диапазоне доз 700-1000 мг/кг массы тела через 5 минут отмечали симптомы возбуждения ЦНС: беспокойство, двигательное возбуждение; через 10-15 минут - груминг, гиперемию сосудов ушных раковин и хвоста, «корчи». Через 20 минут одышку, через 30 минут наступало снижение двигательной активности, заторможенность. Гибель отдельных животных зарегистрирована на следующие сутки после введения экстракта. При внутрибрюшинном введении экстракта мышам самкам картина «острой» интоксикации соответствовала описанной выше у самцов, но проявлялась от введения несколько больших доз субстанции.

Внутрибрюшинное введение изучаемого экстракта крысам обоего пола в дозах от 1100 до 2000 мг/кг вызывало беспокойство, двигательное возбуждение, через 15-20 минут гиперемию сосудов ушных раковин и хвоста, через 30 минут - груминг, одышку, «корчи». Через 40-50 минут наступало снижение двигательной активности и сон. Гибель отдельных животных зарегистрирована на следующие сутки после введения экстракта.

Внутрижелудочное введение изучаемого экстракта мышам (самцы и самки) в дозах до 8000 мг/кг вызывало у них снижение двигательной активности, беспокойство, взъерошенность, через 15-20 минут - одышку, цианоз ушных раковин и хвоста. Гибель мышей зарегистрирована на третьи сутки после введения экстракта сухого.

При однократном внутрибрюшинном введении экстракта из листьев земляники сухого мышам и крысам самцам и самкам установлены следующие показатели: ЛД₅₀: 850±70 и 1500±120 мг/кг (самцы); 1008±105 и 1900±180 мг/кг (самки) соответственно. При введении экстракта из листьев земляники садовой сухого в желудок мышам и крысам показатели среднесмертельных доз увеличиваются в среднем в 5-7 раз и соответственно равны: 6000±570 и 7200±600 мг/кг (самцы); 7400±530 и 9200±850 мг/кг (самки) соответственно.

При внутрижелудочном введении экстракта из листьев земляники сухого крысам обоего пола в дозах до 10000 мг/кг, отмечали симптомы отравления, схожие с описанными у мышей, однако они наступали в более поздние сроки наблюдения и от введения больших доз. В таблице 7 представлены параметры токсичности экстракта из листьев земляники сухого при однократном введении лабораторным животным. Анализ полученных результатов свидетельствует о том, что при однократном внутрибрюшинном введении исследуемого экстракта мыши оказались более чувствительным видом лабораторных животных к действию субстанции препарата по сравнению с крысами. Самцы проявили большую чувствительность к экстракту по сравнению с самками.

Таким образом, экстракт земляники сухой при однократном введении лабораторным животным можно отнести к малотоксичным веществам.

Хроническая токсичность

Хроническую токсичность определяли на 45 крысах самцах линии Вистар массой 200-220 г. Животные содержались на обычном рационе, перед началом хронического опыта были клинически здоровы. Сухой экстракт из листьев земляники садовой вводили животным внутрижелудочно, зондом в виде 2-10% водных растворов, приготовленных непосредственно перед введением, в объеме 1,5-5,0 мл на крысу в дозах 72 и 720 мг/кг, один раз в сутки в течение 3 месяцев [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ, М., 2005, с.41-122]. Во время эксперимента у крыс отмечали общее состояние, двигательную активность, аппетит, динамику массы тела, состояние шерстного покрова, реакцию на внешние раздражители. Через 1 и 3 месяца после начала введения экстракта у животных проводили исследование гематологических показателей периферической крови: общее количество эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, содержание гемоглобина, гематокрит, среднее содержание гемоглобина в эритроците, средняя концентрация гемоглобина в эритроците, средний объем эритроцитов, ширина распределения эритроцитов по объему, гемограмм; биохимических показателей сыворотки крови: общий белок, альбумины, общий холестерин, общий билирубин, мочевина, глюкоза, креатинин, а также активность некоторых ферментов сыворотки крови: щелочная фосфатаза, аланин- и аспартаттрансаминазы. В конце 1 и 3 месяцев определяли состояние сердечно-сосудистой системы крыс на электрокардиографе «Heart Mirror». О функции почек крыс судили по результатам диуреза в условиях 3% водной нагрузки, а центральной нервной системы - по тестам поведенческих и ориентировочных реакций в условиях «открытого поля». После 3-месячного введения экстракта животных подвергали эвтаназии в СО₂ камере. У них определяли коэффициенты массы и проводили патогистологическое исследование внутренних органов. Экстракт из листьев земляники сухой не оказал общетоксического влияния и не раздражал слизистые желудочно-кишечного тракта экспериментальных животных.

Как следует из приведенных данных, экстракт из листьев земляники садовой сухой обладает самостоятельным диуретическим и противовоспалительным действием, причем превосходит аналог растительного происхождения (настой из листьев земляники лесной) и не уступает по выраженности фармакологического эффекта типичному нестероидному противовоспалительному средству (индометацину). Фитопрепарат не обладает острой и хронической токсичностью. Выявленные фармакологические свойства у нового фитопрепарата, полученного из нового вида сырья (листьев земляники садовой), свидетельствуют о перспективности данного сырья в качестве источника получения различных лекарственных форм и их внедрения в арсенал эффективных лекарственных средств природного происхождения для лечения заболеваний, сопровождающихся отеками и воспалением.

Сравнительная характеристика заявленного способа с выбранным прототипом представлена в таблице 8.

Предлагаемый способ по сравнению с известным позволяет получить препарат постоянного состава с более высокой диуретической активностью в сочетании с противовоспалительным эффектом за счет увеличения содержания действующих веществ; позволяет контролировать технологические стадии получения и стандартизовать целевой продукт; позволяет получить препарат, удобный для хранения и транспортировки.

Вышеуказанные преимущества в сочетании с предложенной схемой получения способствуют рациональному способу использования лекарственного растительного сырья, расширению ассортимента природных лекарственных средств с диуретической и противовоспалительной активностью и открывают перспективу внедрения данного способа в фармацевтическую промышленность.

Литература

1. Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. 2-е изд., Л.: Медицинская литература, 1963.

2. Бубенчикова В.Н., Дроздова И.Л., Воротынцева Н.И. Изучение гипогликемической активности представителей родов просвирник, шток-роза, земляника. / Человек и его здоровье: Сб. науч. тр., Курск. - 2000, Вып.3. - С.331-332.

3. Гацура В.В. Методы первичного фармакологического исследования биологически активных веществ. / Средства, влияющие на диурез. - М., - 1974. - С.103-105.

4. Государственный реестр лекарственных средств. - Москва. - 2001. - С.206.

5. Государственная фармакопея СССР. - XI-е изд. - М.: Медицина. - Т.1, 2 (1987, 1990).

6. Коноплева М.М., Садикова В.К. Изучение диуретического действия фенольных соединений земляники лесной. / Недостаточность кровообращения. - Л., 1986. - С.175-177.

7. Коноплева М.М., Садикова В.К. Фармакологические свойства земляники лесной. / Современные аспекты теории и практики фармации: Сб. науч. тр. / 1-й Ленинградский медицинский ин-т им. И.П.Павлова, - 1988. - С.145-148.

8. Методические рекомендации по изучению новых нестероидных препаратов. /Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ.- ЗАО «ИИА «Ремедиум», 2000. - С.236.

9. Растительные ресурсы СССР. - Ленинград: Наука. - 1987. - С.48-49.

10. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ, М., 2005, с.41-122.

Таблица 1Показатели качества листьев и препаратов земляники садовой
Препараты земляники садовой	Флавоноиды, %	Окисляемые вещества, %	Кислота аскорбиновая, мг %	Влажность, %
Листья земляники садовой	2,5±0,40	31,2±8,5	291,2±8,1	7,56±0,5
Водный настой 1:10	0,21±0,03	23,3±3,23	184,66±8,7	-
Экстракт сухой (экстрагент вода)	5,12±0,17	82,3±8,5	1100±20,6	3,5±0,3
Таблица 2Содержание биологически активных веществ в извлечении из листьев земляники садовой в зависимости от исследуемого фактора
Фактор	Содержание БАВ
сумма флавоноидов в пересчете на рутин, %	Сумма окисляемых веществ, %	Кислота аскорбиновая, мг %
Экстрагент	вода	0,21±0,03	23,27±3,23	184,66±8,72
спирт 10%	0,27±0,02	19,31±2,10	178,55±7,98
спирт 20%	0,38±0,03	16,58±2,60	179,8±8,23
спирт 30%	0,52±0,02	14,95±3,10	180,69±8,13
спирт 40%	0,79±0,03	11,99±2,70	182,58±8,55
Размер частиц сырья, мм	7,0	0,11±0,03	21,4±0,9	164,7±8,7
5,0	0,8±0,04	28,2±4,5	170,3±10,04
3,0	0,21±0,03	25,2±3,2	204,7±8,7
2,0	0,16±0,01	20,6±5,9	176,0±11,4
1,0	0,18±0,08	20,8±1,08	200,0±10,8
Соотношение сырье:экстрагент	1:5	0,25±0,02	18,38±2,9	159,87±8,14
1:10	0,55±0,03	24,32±3,2	185,65±8,72
1:15	0,49±0,02	21,45±2,7	183,71±7,95
1:20	0,48±0,03	22,35±3,1	180,52±8,21
Температура экстрагирования, °С	20	0,15±0,03	15,85±3,0	179,85±8,5
30	0,17±0,02	17,90±2,8	179,99±8,3
40	0,19±0,03	18,85±2,7	180,55±7,9
50	0,21±0,02	19,95±2,9	182,63±8,1
60	0,22±0,03	21,05±2,7	185,76±7,5
75	0,28±0,03	25,38±2,9	195,9±8,3
80	0,22±0,02	26,45±3,2	180,6±8,2

Таблица 6Противовоспалительная активность препаратов листьев земляники лесной и садовой
Препарат	Доза, мг/кг	Число животных	Торможение воспалительного отека, %
Настой из листьев земляники лесной	150	6	10,5±4,9	8,7±3,5
Экстракт листьев земляники садовой сухой	150	6	36,9±3,5***1 ***2	40,9±3,3***1 ***2
Индометацин	10	6	30,2±2,4***1 ***2	52,1±2,6***1***2
Примечание: * р<0,05; ** р<0,01; *** р<0,001***1 - по сравнению с контролем***2 - по сравнению с настоем из листьев земляники лесной
Таблица 7Показатели токсичности экстракта из листьев земляники сухого при однократном введении лабораторным животным
Вид и пол животных	Способ введения	Параметры токсичности, мг/кг
LD16	LD50±m	LD84
Мыши самцы	внутрибрюшинно	670	850±70	1240
Мыши самки	внутрибрюшинно	800	1008±105	1600
Крысы самцы	внутрибрюшинно	1100	1500±120	1800
Крысы самки	внутрибрюшинно	1200	1900±180	2300
Мыши самцы	в желудок	5000	6000±570	7500
Мыши самки	в желудок	5200	7400±530	8400
Крысы самцы	в желудок	6100	7200±600	8500
Крысы самки	в желудок	7100	9200±850	12000

Таблица 8Сравнительная характеристика заявленного способа с выбранным прототипом
№ п/п	Параметр сравнения	Известный способ	Заявленный способ
1	Растительное сырье	листья земляники лесной	листья земляники садовой
2	Экстрагент	Вода	вода
3	Очистка	-	фильтрация сепарирование
4	Концентрирование	-	упаривание в циркуляционном вакуум-выпарном аппарате
5	Сушка	-	на распылительной сушилке
6	Выход целевого продукта	Настой	сухой экстракт 20%
7	Содержание БАВ,%
	- флавоноиды	0,21	5,12
	- окисляемые вещества	23,3	82,3
	- аскорбиновая кислота	0,18	1,10

Способ получения средства, обладающего диуретической и противовоспалительной активностью, включающий экстракцию растительного сырья - листьев земляники садовой, измельченного от >1,0 мм до ≤3,0 мм, методом дробной мацерации водой очищенной в соотношении сырье-экстрагент 1:10, в реакторе из нержавеющей стали с ложным дном вместимостью 100 л, снабженным якорной мешалкой, паровой рубашкой и гильзой для термометра, при времени настаивания 90 мин (трехкратное настаивание по 30 мин); объединение водных извлечений, фильтрацию, сепарирование, упаривание в циркуляционном вакуум-выпарном аппарате и высушивание на распылительной сушилке.