Способ прогнозирования устойчивости мембран эритроцитов периферической крови при обострении герпесвирусной инфекции у беременных

Способ прогнозирования устойчивости мембран эритроцитов периферической крови при обострении герпесвирусной инфекции у беременных

Реферат

Цель изобретения заключается в прогнозировании увеличения лизофосфатидилхолина в мембранах эритроцитов периферической крови в зависимости от изменения протеина полосы 3 при герпесвирусной инфекции.

Прототипом избран способ выявления белкового каркаса мембран и его взаимодействия с фосфолипидами в эритроцитах у человека. Отмечено, что интегральные белки (протеин полосы 3) пересекают мембрану эритроцитов и способствуют упорядочению структуры прилежащих фосфолипидов (Singer S., 1972; Steck Т., 1974; Benner V., 1985; Shen В., Josephs R., Steck Т., 1986).

Известные данные имеют следующие недостатки.

1. Получена только качественная характеристика взаимозависимости между фосфолипидами и белковым каркасом мембран эритроцитов (теоретическое предложение).

2. Отсутствуют данные, позволяющие прогнозировать какой из фосфолипидов мембран эритроцитов взаимодействует активнее при насыщении периферической крови вирусным антигеном (вирус простого герпеса) с интегральным белком протеина полосы 3.

В отличие от описанного прототипа проводится подробный анализ динамики содержания в мембранах эритроцитов как фосфолипидов, так и белков стромы при герпесвирусной инфекции, когда токсины возбудителя активно действуют на мембранную структуру эритроцитов (титр антител к вирусу герпеса составлял 1:12800).

Цель достигается тем, что оценка изменения фосфолипидного состава мембран эритроцитов периферической крови в период вспышки герпесвирусной инфекции проводится на основании определения спектра фосфолипидов мембран эритроцитов с одновременным учетом белков каркаса мембран (анкирин, гликофорин, спектрин, протеин полосы 3) с последующей обработкой методом дискриминантного анализа.

Заявленный способ имеет следующие приемы:

а) С помощью двумерной, тонкослойной хроматографии на силикагеле определяют фосфолипидный состав мембран эритроцитов у беременных в момент обострения герпесвирусной инфекции (Rouser G., Siakotos A., FleischerS., 1966).

б) Одновременно в этой же порции крови в мембранах эритроцитов методом диск электрофореза в ступенчатом градиентном полиакриламидном геле (10%) с додецилсульфатом натрия были выявлены следующие фракции: α-спектрин; β-спектрин; протеин полосы 3; гликофорин и анкирин.

в) Титр антител к вирусу герпеса определялся иммуноферментным методом на спектрофотометре "Stax-Fax-2100" (USA).

г) Электронно-микроскопическое строение мембран эритроцитов изучалось после общепринятых приемов заливки под электронным микроскопом "Tesla".

д) Интегральная оценка взаимоотношения фосфолипидов и белковых фракций у здоровых беременных и испытывавших обострение герпесвирусной инфекции (титр антител - 1:12800) решали путем составления дискриминантного уравнения, при выполнении которого было установлено, что наиболее реальным было в этой ситуации взаимодействие протеина полосы 3 (синтез которого подавляется с 18,34±0,78 усл.ед. до 12,25±0,18 усл.ед. (р<0,001)), что повлекло за собой увеличение продукции лизофосфатидилхолина с 4,5±0,6% до 10,5±0,85%. Остальные белки не оказывают при статистическом анализе влияние на процентное содержание лизофосфатидилхолина. Создается угроза нарушения структуры мембраны эритроцитов и прежде всего появления их «текучести» (фигура 1 - А, Б), обнаруженной при электронно-микроскопических исследованиях у этих пациентов.

D=7,36·Lph+(-6,216·полоса-3)=7,36·10·5+(-6,216·15,1)=-12,8

Дискриминантная функция (-12,8), граничное значение которой -55,46. Поскольку дискриминантная функция больше граничного значения, прогнозируется неустойчивость эритроцитарной мембраны в силу нарастания процентного содержания в ней лизофосфатидилхолина. Полученные данные позволяют считать, что при дискриминантном показателе, меньшем -12,8, развивается дезинтеграция клеточных мембран эритроцитов в силу повышения содержания в них лизофосфатидилхолина.

Способ прогнозирования устойчивости мембран эритроцитов периферической крови при обострении герпесвирусной инфекции у беременных, характеризующийся тем, что на силикагеле с помощью двухмерной, тонкослойной хроматографии определяют в фосфолипидном составе мембран эритроцитов содержание лизофосфатидилхолина, одновременно в этой же порции крови в мембранах эритроцитов методом диск электрофореза в ступенчатом градиентном полиакриламидном 10%-ном геле с додецильсульфатом натрия определяют содержание протеина полосы 3, интегральную оценку взаимосвязи между исследуемыми параметрами у здоровых беременных и беременных, испытавших обострение герпесвирусной инфекции, решают, определяя дискриминантную функцию (D), с помощью дискриминантного уравнения по формуле D=7,36×Lph+{-6,216 × протеин полосы 3}, и при значении D равной или меньше -12,8 прогнозируют неустойчивость мембран эритроцитов.