Устройство и способ для одновременного определения группы крови, серологического перекрестного контроля и анализа на антитела

Устройство и способ для одновременного определения группы крови, серологического перекрестного контроля и анализа на антитела

Иллюстрации

Показать все

Реферат

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Изобретение относится к устройству для латерально-диагонально-потокового многопараметрического анализа, в частности, в области иммуногематологии и серологии инфекционных заболеваний, предназначенному для одновременного качественного или количественного определения нескольких аналитов в одной жидкой пробе, которое содержит, по меньшей мере, одну мембрану с загрузочной зоной для нанесения жидкой пробы, по меньшей мере, две индикаторные зоны, которые могут вступать во взаимодействие с аналитом (или аналитами), и, по меньшей мере, одну абсорбционную зону, которая поглощает жидкость после ее прохождения через индикаторные зоны, причем индикаторные зоны находятся между загрузочной зоной и абсорбционной зоной; устройство отличается тем, что направления потоков от загрузочной зоны через соответствующие индикаторные зоны к абсорбционной зоне (дорожки) практически параллельны, и имеется, по меньшей мере, две различные дорожки.

Изобретение далее относится к способу определения нескольких аналитов в одной жидкой пробе, который включает в себя нанесение пробы на загрузочную зону мембраны устройства согласно настоящему изобретению, при этом количество пробы достаточно для того, чтобы обеспечить течение жидкости по направлению к абсорбционной зоне через индикаторные зоны и обеспечить возможность образования аналитами или их производными, содержащимися в жидкости пробы, комплексов в индикаторных зонах, в частности, для одновременного определения параметров клеток и плазмы, предпочтительно для одновременного проведения определения группы крови, серологического перекрестного контроля (перекрестной пробы сыворотки) и/или анализа для выявления антител; для одновременного проведения определения группы крови и определения серологических маркеров инфекционных заболеваний, имеющих значение при трансфузиях, а также для одновременного проведения определения группы крови и определения антител к другим клеткам крови, отличающимся от эритроцитов, в частности антител к тромбоцитам и антител к лимфоцитам.

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Как известно, для того, чтобы предупредить риски осложнений, например, при переливании крови, в особенности риски несовместимости групп крови и заражения вирусами и/или бактериями, проводятся различные лабораторные анализы крови доноров и пациентов для получения компонентов крови, серологически и по группе крови совместимых с кровью реципиентов и не содержащих известных передаваемых патогенов. Существующие серологические тесты, как правило, включают в себя определение групп крови донора и реципиента, в частности определение групп крови по системе групп крови АВ0, определение резус-фактора и Келл-фактора, перекрестную пробу сывороток донора и реципиента, анализы на антитела для выявления регулярных антител у донора и реципиента, а также идентификацию антител реципиента при наличии нерегулярных антител. Также в связи с трансфузиями и трансплантациями проводят выявление антител к тромбоцитам и/или лимфоцитам.

Серологические анализы для выявления маркеров инфекционных заболеваний у донора, как известно, включают в себя стандартное определение антител, в частности антител к ВИЧ-1, ВИЧ-2, к HCV (вирусу гепатита С), к Treponema pallidum (возбудителю сифилиса), а также определение поверхностного антигена гепатита В (=HBsAg: поверхностный антиген гепатита В).

В ходе серологической диагностики групп крови обычно выявляют параметры, имеющие особое значение в связи с трансфузиями или геморрагической болезнью новорожденных (Morbus Hamoliticum Neonatorum; MHN; ГБН). При этом речь идет, среди прочего, о выявлении на поверхности эритроцитов тех антигенов, которые характерны для групп крови (определение группы крови). Другие важные системы антигенов находятся на тромбоцитах, гранулоцитах, лимфоцитах, которые также играют роль при трансфузии и трансплантации. При различии антигенов тромбоцитов и гранулоцитов у матери и плода у новорожденных могут возникнуть клинические картины болезни, сходные с ГБН. Далее речь идет о выявлении регулярных групповых антител (изоагглютининов) и нерегулярных групповых антител в сыворотке или плазме.

Изоагглютинины или регулярные антитела вырабатываются у всех людей вскоре после рождения и соответствуют группе крови АВ0-системы. Они направлены против тех антигенов А или В группы крови, которые отсутствуют у самих индивидуумов, то есть у людей с группой крови А имеются антитела к антигену В, у людей с группой крови В - антитела к антигену А, у людей с группой крови 0 имеются антитела к антигену А и к антигену В; у людей с группой крови АВ изоагглютининов нет. Регулярные антитела также называют полными антителами, поскольку они могут прямо агглютинировать эритроциты в NaCl-среде.

Нерегулярные, или аллоантитела, в отличие от изоагглютининов, вырабатываются при последующих иммунизациях, прежде всего - при переливании крови или беременности. Поэтому у большинства людей нет нерегулярных групповых антител. Нерегулярные антитела, связанные с переливанием крови, как правило, реагируют на тепло и относятся преимущественно к классу IgG. В отличие от регулярных антител они не способны вызывать прямую агглютинацию эритроцитов в NaCl-среде.

Как известно, для определения группы крови эритроциты исследуемого человека (донора или реципиента) соединяют с реактивами, которые содержат антитела, специфичные для групп крови. Обычно речь идет об анализах в жидких средах, при которых исследуемую смесь получают посредством смешивания пробы, содержащей эритроциты, с пробой, содержащей антитела к определенному признаку группы крови. Затем исследуемую смесь инкубируют в течение определенного периода времени в определенных условиях, а после завершения инкубации, сразу же или после этапа центрифугирования, визуально или с использованием оптических способов проверяют на наличие вероятной агглютинации или адсорбции эритроцитов. Преобладающим измерением конечной точки в серологии групп крови по-прежнему является гемагглютинация. Для каждой определяемой группы крови необходимо пипеткой нанести специальную смесь, то есть, например, для определения 9 важнейших групп крови А, В, D, С, с, Е, е, Cw и K необходимо, без учета контроля, 9 отдельных образцов.

Для перекрестной пробы сыворотки, как известно, используют реакции клеток с известной АВ0-группой крови (А1, А2, В, 0), которые инкубируют с сывороткой или плазмой исследуемого человека. После этапа центрифугирования визуально или с помощью оптических способов проверяют возможную агглютинацию эритроцитов. Для перекрестной пробы сыворотки с 4 указанными тестовыми клетками обычно необходимо нанести пипеткой 4 образца.

Для выявления нерегулярных антител, как известно, используют панель, обычно состоящую из 2 или 3 образцов клеток группы крови 0, объединенный профиль антигенов которых содержит важнейшие антигены, прежде всего антигены, относящиеся к системам групп крови Rh, Келла, Даффи, Кидда, MNS, Р, Левиса, Лютерана. Клеточный реагент соединяют с сывороткой или плазмой исследуемого человека, инкубируют и, после этапа центрифугирования, визуально или с помощью оптических способов проверяют возможную агглютинацию эритроцитов. Для определения в одной пробе пациента необходимо пипеткой нанести 2-3 образца.

Для идентификации нерегулярных антител, которую, как правило, проводят после позитивного анализа для выявления антител, используют панель, состоящую из 16 видов клеток группы крови 0, профиль антигенов которых включает важнейшие антигены, прежде всего антигены, относящиеся к системам групп крови Rh, Келла, Даффи, Кидда, MNS, Р, Левиса, Лютерана, в точно определенном соотношении. Клеточный реагент соединяют с сывороткой или плазмой исследуемого человека, инкубируют и визуально или с помощью оптических способов проверяют возможную агглютинацию эритроцитов. Для определения в одной пробе пациента необходимо пипеткой нанести до 16 образцов.

Так как основные нерегулярные антитела, имеющие отношение к трансфузии, относятся к IgG-типу и поэтому являются неполными, как правило, для того, чтобы иметь возможность обнаружить в качестве конечной точки гемагглютинацию, необходимо усиливать вышеописанные реакции, используемые для их выявления и идентификации. Наиболее широко используемым для этого реагентом является реагент, содержащий поликлональные антитела к гемоглобину человека, к которому часто добавляют антитела к комплементу (в типичном случае - антитела к C3d и/или к C3b).

Наиболее часто используемым способом выявления антител к тромбоцитам является так называемый MAIPA-тест (иммобилизация моноклональных антител на антигенах тромбоцитов). При этом исследуемые тромбоциты инкубируют с исследуемой сывороткой. После стадии промывки их инкубируют с моноклональным антителом, например специфическим антителом мыши к определенному гликопротеину тромбоцитов. Затем тромбоциты лизируют и разбавленный лизат переносят в реакционную лунку планшета для микротитрования, покрытую, например, антителами козы к антителам мыши. Антитело козы к антителам мыши связывает антитело мыши и связанный с ним комплекс тромбоцитарного гликопротеина и антитела человека. Антитело человека выявляют посредством добавления конъюгированного с ферментом антитела козы к IgG человека.

С помощью стандартных диагностических анализов можно определять либо клеточные, либо плазматические параметры. Для определения параметров составных частей крови первоначально необходимо разделить клетки и плазму.

Анализы с латеральными (поперечными) потоками в настоящее время часто используются в качестве экспресс-анализов, например в качестве тестов на беременность, для определения маркеров инфекционных заболеваний или для скрининга на наркотики. Оборудование для анализа с латеральными потоками состоит, как известно, из твердого носителя, на котором имеется загрузочная зона, куда наносят исследуемую пробу, разделительная мембрана, с которой соединены связывающие элементы, например акцепторные антитела или антигены, и на которой удается обнаружить реакции связывания, и поглощающая абсорбционная зона, которая вынуждает исследуемую пробу прямолинейно протекать через разделительную мембрану.

Стандартные тесты с латеральными потоками на испытательных мембранах описаны, как правило, с разделением, напоминающим хроматографическое. Аналит, содержащийся в пробе, специфически связывается с фиксированными на мембране связывающими элементами, которые, как правило, образуют расположенные друг за другом или накладывающиеся друг на друга ряды индикаторных зон. Образующийся в результате связывания комплекс становится видимым за счет индикаторных частиц, которые, как правило, уже присутствуют в сухом виде в определенном порядке на подушечке для высвобождения конъюгата. Подушечка для высвобождения конъюгата расположена между загрузочной зоной и мембраной. Предварительно нанесенные цветные индикаторные частицы покрыты, например, антителом к выявляемому аналиту.

Стандартным форматом анализа с боковыми потоками является так называемый «сэндвич-анализ», при котором как индикаторная зона, так и индикаторные частицы покрыты лигандами, ориентированными на определяемые аналиты, обычно антителами. При этом лиганд (связывающий элемент) иммобилизован на мембране. Реактив-детектор, обычно антитело, связанное с окрашенной полистирольной частицей или коллоидными металлами, депонирован в подушечке для высвобождения конъюгата и может оттуда вымываться. Этот комплекс служит индикаторной частицей. После нанесения пробы, подлежащей исследованию, она очень быстро увлажняет подушечку для высвобождения конъюгата, за счет чего индикаторные частицы мобилизируются. Индикаторные частицы мигрируют вместе с фронтом жидкости вдоль пористой мембраны. Находящийся в пробе аналит связывается антителом, которое находится на поверхности индикаторной частицы. Когда проба проходит через индикаторную зону, комплекс аналита и индикаторной частицы иммобилизуется в индикаторной зоне за счет реакции аналита с антителом, связанным в индикаторной зоне, что ведет к появлению видимого сигнала.

Следующим известным форматом анализа на мелкие аналиты с одной антигенной детерминантой, не способные связывать одновременно два антитела, является так называемый «конкурентный анализ». Связанный с поверхностью индикаторной частицы реагент-детектор в норме является молекулой, идентичной или аналогичной аналиту. Индикаторные частицы депонированы в подушечке для высвобождения конъюгата. Индикаторные частицы мигрируют вместе с фронтом жидкости вдоль пористой мембраны. Когда проба, содержащая аналит, и индикаторные частицы (которые также эффективно захватывают аналит) проходят через индикаторную зону, связывается часть молекул аналита, содержащихся в пробе, и часть индикаторных частиц. Чем больше аналита содержится в пробе, тем эффективнее он конкурирует за связывание с индикаторными частицами, и тем слабее становится сигнал.

Как известно, эти индикаторные частицы преимущественно состоят из коллоидного золота или из полистирола, которые получают способами, известными в данной области техники, и на которые наносят покрытие. В типичных форматах анализов с латеральными потоками аналиты определяют непрямыми способами. Под прямым определением аналита в контексте настоящего изобретения понимают, что аналит уже связан с индикаторной частицей (например, эритроцитом) естественным образом. В наиболее употребительном случае непрямого определения аналита проба, подлежащая анализу, содержит, как правило, в качестве аналитов не связанные с клетками, например плазматические, компоненты, и кроме пробы, подлежащей анализу, необходимы два реагента, а именно индикаторная частица и связывающий элемент. При непрямом определении аналит сначала связывается с выделившимися из подушечки для высвобождения конъюгата индикаторными частицами, после чего этот комплекс в ходе второй реакции со связывающим элементом иммобилизуется в индикаторных зонах.

При проведении стандартных анализов с латеральными потоками, в которых в качестве индикаторных частиц использовались эритроциты, связанные с аналитами, подлежащими определению, например с антигенами, специфичными для групп крови, до сих пор в индикаторных зонах антитела к соответствующим групповым антигенам, выполнявшие роль связывающих элементов, располагали в расположенных друг за другом или накладывающихся друг на друга полосах только в одной проточной дорожке, например анти-А и анти-В антитела к групповым антигенам А или В или антитела к антигену Rh-системы групп крови. При этом стандартные анализы с латеральными потоками обладают недостатком, состоящим в том, что эритроциты, связавшиеся с антителами, образуют барьер для потока других аналитов, подлежащих определению в данной пробе, например для других связанных с клетками антигенов. Из-за агглютинации или адсорбции клеток в полосах связывающих элементов, расположенных проксимально к загрузочной зоне, другие аналиты, в особенности клетки или фрагменты клеток, содержащиеся в пробе, подлежащей исследованию, невозможно беспрепятственно и явно разделить, и вследствие этого невозможно однозначно или полностью доказать их присутствие. Это может привести, например, у пациента с АВ Rh-позитивной D группой крови к ослаблению или устранению В- и D-полос, что может привести к неправильной интерпретации его группы крови как А Rh-отрицательной. Поэтому до сих пор в серологической диагностике групп крови намеренно не использовали анализы с латеральными потоками с более чем одной индикаторной зоной. Для измерения нескольких, в особенности клеточных и плазматических, параметров групп крови до сих пор нужно было проводить раздельные анализы отдельных параметров.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Задача изобретения состоит в том, чтобы преодолеть недостатки, существующие на современном уровне техники, прежде всего недостатки стандартных анализов с латеральными потоками, в которых используют расположенные друг за другом или накладывающиеся друг на друга индикаторные зоны, или зоны обнаружения, для одновременного измерения различных параметров пробы, более конкретно клеточных и плазматических параметров.

Эта задача согласно настоящему изобретению достигнута за счет устройства для одновременного качественного или количественного определения одного или нескольких аналитов в жидкой пробе или в нескольких жидких пробах, которое содержит, по меньшей мере, одну мембрану, содержащую загрузочную зону для нанесения жидкой пробы, по меньшей мере, одну группу индикаторных зон, состоящую, по меньшей мере, из двух индикаторных зон, которые могут взаимодействовать с аналитом или аналитами, и абсорбционную зону, которая поглощает жидкость после того, как она проходит через индикаторные зоны, причем индикаторные зоны расположены между загрузочной зоной и абсорбционной зоной;

это устройство отличается тем, что направления потоков от загрузочной зоны через соответствующие индикаторные зоны одной группы к абсорбционной зоне, которые представляют собой проточные дорожки, практически параллельны, и имеется, по меньшей мере, две различные дорожки.

Индикаторные зоны устройства согласно настоящему изобретению расположены на мембране и содержат связывающие элементы, которые захватывают или присоединяют к себе содержащиеся в пробе аналиты, подлежащие определению. В индикаторных зонах обнаруживаются реакции соединения между аналитом и связывающим элементом. В качестве особо предпочтительных связывающих элементов на пористую мембрану наносят антитела или фрагменты антител, лектины, антигены или эпитопы антигенов и/или клетки или фрагменты клеток. Каждая индикаторная зона предпочтительно содержит один элемент, связывающий один из исследуемых аналитов.

В одной из форм осуществления настоящего изобретения индикаторные зоны расположены так, что жидкость пробы при движении по проточной дорожке протекает не более чем через одну индикаторную зону. Например, индикаторные зоны могут быть расположены на мембране со смещением. При этом индикаторные зоны предпочтительно расположены в диагональном ряду, идущем от проксимальной стороны к дистальной или наоборот. Особые конструктивные решения являются V-образными, W-, М- или N-образными или перевернутыми V-образными, W-, М- или М-образными. В еще одной форме осуществления индикаторные зоны расположены параллельно рядом друг с другом в виде линейного ряда.

Только использование смещенных индикаторных зон с латеральным расположением обеспечивает возможность проведения мультипараметрического анализа с использованием в качестве индикаторных частиц эритроцитов. Особо предпочтительная форма осуществления с диагональным расположением обладает преимуществом, состоящим в том, что на устройство согласно настоящему изобретению можно нанести особенно практичную и легко читаемую маркировку результатов; так как каждый параметр, подлежащий определению, занимает определенное Х- или Y-положение, можно рассматривать устройство согласно настоящему изобретению как систему координат с ординатой (плоскость проточных дорожек) и абсциссой (плоскость загрузочной зоны).

В следующей форме осуществления изобретения более одного ряда индикаторных зон предпочтительно расположены диагонально от проксимальной стороны к дистальной или наоборот или, например, также V-образно, W-, М- или N-образно или в виде перевернутых букв V, W, М или N, в направлении течения друг за другом и/или со смещением вбок, и индикаторные зоны различных рядов либо разделены промежутками, так что жидкость пробы по каждой дорожке может протечь не больше чем через одну индикаторную зону, либо не разделены промежутками, так что жидкость пробы по каждой проточной дорожке может протечь больше чем через одну индикаторную зону.

Более одного ряда индикаторных зон, например два ряда индикаторных зон, на различном расстоянии от загрузочной зоны особо предпочтительно иметь тогда, когда в одной пробе цельной крови необходимо определить клеточные и плазматические параметры. В одной из форм осуществления изобретения, например при анализе с использованием в качестве пробы цельной крови, связывающие элементы выбирают так, что содержащиеся в плазме аналиты, например все виды антител, которые протекают в устройстве от загрузочной зоны к абсорбционной зоне через индикаторные области, связываются связывающими элементами в ряду индикаторных зон, расположенном проксимально по отношению к загрузочной зоне (т.е. вблизи нее). Связывающие элементы для выявления аналитов, связанных с клетками, например эритроцитарных антигенов, напротив, выбирают так, чтобы они связывались со связывающими элементами в ряду индикаторных зон, расположенных дистально по отношению к загрузочной зоне (т.е. в удалении от нее). При этой предпочтительной форме осуществления настоящего изобретения, кроме эритроцитов, предпочтительно используют дополнительный вид индикаторных частиц, предпочтительно изготовленных из коллоидного золота или полистирола, или фиксированные эритроциты. Эти индикаторные частицы, в частности, используют для того, чтобы выявить аналиты, не связанные с эритроцитами, например свободные антитела плазмы, в виде комплекса в индикаторной зоне. Если, например, используют два вида индикаторных частиц, один из которых не является эритроцитами, индикаторные зоны обоих рядов могут быть не разделены промежутками, или они могут быть расположены друг за другом в одной проточной дорожке. Предпочтительным при этом является такое расположение, при котором аналиты, определяемые в плазме, выявляются в проксимальных индикаторных зонах, а аналиты, связанные с эритроцитами, выявляются в дистальных индикаторных зонах. В форме осуществления настоящего изобретения с более чем одним рядом индикаторных зон, описанной ранее, где связывающие элементы каждого ряда реагируют или связываются с эритроцитами, являющимися индикаторными частицами, ряды индикаторных зон разделены промежутками или не расположены последовательно в одной проточной дорожке.

В следующей и особо предпочтительной форме осуществления настоящего изобретения более одного ряда индикаторных зон, предпочтительно в виде диагональных рядов, идущих по диагонали от проксимальной стороны к дистальной или наоборот, или в виде V-образных, W-, М- или М-образных рядов или рядов, имеющих форму перевернутых букв V, W, М или N, или, например, в виде рядов, идущих параллельно друг другу со смещением, расположены с двух сторон (например, под углом 180°) от центральной загрузочной зоны. Такое расположение выгодно, прежде всего, в том случае, если в пробе цельной крови необходимо определить клеточные и плазматические параметры.

В одной из форм осуществления настоящего изобретения, например в анализе с использованием в качестве пробы цельной крови, связывающие элементы выбраны так, что аналиты, содержащиеся в плазме, например каждый вид антител, которые проходят через устройство от загрузочной зоны к абсорбционной зоне через индикаторные зоны, связываются со связывающими элементами ряда индикаторных зон, расположенного с одной стороны загрузочной зоны. Связывающие элементы для выявления аналитов, связанных с клетками, например эритроцитарных антигенов, напротив, выбирают так, чтобы эти аналиты связывались связывающими элементами в ряду индикаторных зон, расположенных с противоположной стороны от загрузочной зоны. В этой предпочтительной форме осуществления настоящего изобретения, кроме эритроцитов, используют другие сорта индикаторных частиц, предпочтительно состоящих из коллоидного золота или полистирола. Эти индикаторные частицы, в частности, используют для того, чтобы выявить в индикаторной зоне в виде комплекса аналиты, не связанные с эритроцитами, например свободные антитела плазмы.

В предпочтительной форме осуществления изобретения загрузочная зона содержит две различные мембраны различной пористости. В этой предпочтительной форме осуществления настоящего изобретения, кроме эритроцитов, предпочтительно используют другие сорта индикаторных частиц, предпочтительно состоящих из коллоидного золота или полистирола. Эти индикаторные частицы, в частности, используют для того, чтобы выявить в индикаторной зоне в виде комплекса аналиты, не связанные с эритроцитами, например свободные антитела плазмы.

В предпочтительной форме осуществления изобретения загрузочная зона, кроме того, содержит две различные мембраны различной пористости. В этой предпочтительной форме осуществления изобретения, кроме эритроцитов, предпочтительно используют другие сорта индикаторных частиц, предпочтительно состоящих из коллоидного золота или полистирола. Эти индикаторные частицы, в частности, используют для того, чтобы выявить в индикаторной зоне в виде комплекса аналиты, не связанные с эритроцитами, например свободные антитела плазмы.

В особо предпочтительной форме осуществления изобретения загрузочная зона содержит одну мембрану или две мембраны различной пористости. Кроме того, одна из двух мембран содержит подушечку с конъюгатом, которая расположена между уплотнителем и индикаторными зонами. В этой предпочтительной форме осуществления изобретения, кроме эритроцитов, предпочтительно используют другие сорта индикаторных частиц, предпочтительно состоящих из коллоидного золота или полистирола. Эти индикаторные частицы, в частности, используют для того, чтобы выявить в индикаторной зоне в виде комплекса аналиты, не связанные с эритроцитами, например свободные антитела плазмы. Этот другой сорт индикаторных частиц, используемый в дополнение к эритроцитам, предпочтительно содержится в подушечке с конъюгатом в сухом виде. Кроме того, подушечка с конъюгатом служит для того, чтобы замедлить течение эритроцитов. Это приводит к тому, что при двустороннем расположении относительно одной общей загрузочной зоны в одном направлении создаются условия, оптимизированные для выявления клеточных свойств, а в другом направлении - оптимизированные условия для выявления плазматических свойств.

С использованием устройства согласно настоящему изобретению выполняют анализ с латеральным потоком, более конкретно серологическую диагностику групп крови, в котором в качестве индикаторных частиц используют эритроциты, и в одном испытательном устройстве можно одновременно определить несколько клеточных параметров, например эритроцитарные антигены или эпитопы антигенов, плазматические параметры и/или свойства клеток крови, более конкретно свойства составных частей цельной крови, в исследуемой пробе. Кроме того, таким образом получают наиболее простую в изготовлении и простую в обращении, более конкретно требующую малого числа серий опытов и не требующую подготовки пробы, а также требующую меньших затрат испытательную систему, с помощью которой можно одновременно определить различные клеточные параметры и/или плазматические параметры одной пробы или нескольких проб, подлежащих исследованию.

Эти преимущества устройство согласно настоящему изобретению обеспечивает в любой области медицинской диагностики, где необходимо одновременно определять различные клеточные параметры и плазматические параметры, особенно в области серологии групп крови и серологии инфекционных заболеваний, более конкретно для любой диагностики в рамках трансфузионной медицины, например для одновременного проведения определения группы крови, в ходе которого прежде всего определяют антигены, связанные с эритроцитами, или эпитопы антигенов, и перекрестной пробы сыворотки, в ходе которой прежде всего определяют регулярные антитела (изоагглютинины), и/или анализа на антитела, в ходе которого прежде всего определяют нерегулярные антитела, а также для одновременного проведения определения группы крови и определения важных при трансфузиях серологических маркеров инфекционных заболеваний, например антител к ВИЧ-1, ВИЧ-2, вирусу гепатита С, Treponema pallidum, а также поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg), и для одновременного проведения определения группы крови и определения антител к другим клеткам крови, отличающимся от эритроцитов, более конкретно - антител к тромбоцитам и антител к лимфоцитам.

Для этого может быть использована кровь с антикоагулянтом или нативная цельная кровь, при этом перед определением нет необходимости обязательно отделять друг от друга эритроциты и фракцию сыворотки или плазмы. Определение может быть осуществлено в ручном формате, который не требует вообще никаких приборов (в том числе - электрического тока).

В предпочтительной форме осуществления устройства согласно настоящему изобретению индикаторные зоны, предпочтительно расположенные дистально относительно загрузочной зоны ряды индикаторных зон, содержат антитела, или фрагменты антител, или лектины, которые могут захватывать или связывать групповые антигены всех мыслимых систем групп крови, подлежащих определению, а значит - и несущие их клетки, содержащиеся в пробе крови. В качестве предпочтительных связывающих элементов в индикаторных зонах на пористой мембране, предпочтительно в ряду, расположенном дистально относительно других рядов индикаторных зон, используют антитела, фрагменты антител или лектины к антигенам или эпитопам антигенов, более конкретно относящихся к системам групп крови АВ0, Rh и Келла, например анти-А, анти-В, анти-D и анти-K. Предпочтительно в одной индикаторной зоне этого ряда индикаторных зон, предпочтительно в индикаторной зоне, расположенной дистально по отношению ко всем остальным индикаторным зонам этого ряда, помещают контрольный связывающий элемент (контроль = ctl), который посредством позитивной реакции подтверждает протекание пробы через индикаторные зоны. Контрольным связывающим элементом предпочтительно является поликлональное антиэритроцитарное антитело.

В этой предпочтительной форме осуществления устройства согласно настоящему изобретению в следующем, предпочтительно расположенном проксимально по отношению к загрузочной зоне, ряду индикаторных зон находятся антигены или эпитопы антигенов, которые захватывают или связывают регулярные антитела, содержащиеся в пробе. В качестве предпочтительных связывающих элементов на пористую мембрану наносят групповые антигены А1, А2, В, 0 или эпитопы этих антигенов, например эритроцитарные мембраны эритроцитов определенных групп крови (А1, А2, В, 0) или синтетически полученные вещества, характерные для групп крови. Предпочтительно в одной индикаторной зоне этого ряда индикаторных зон, предпочтительно в индикаторной зоне, расположенной дистально по отношению ко всем остальным индикаторным зонам этого ряда, помещают контрольный связывающий элемент (контроль = ctl), который посредством позитивной реакции подтверждает протекание пробы через индикаторные зоны. Контрольным связывающим элементом предпочтительно является антитело к IgG.

В этой предпочтительной форме осуществления устройство может содержать в дополнительном ряду индикаторных зон, предпочтительно расположенном проксимально по отношению к загрузочной зоне, антигены или эпитопы этих антигенов, которые захватывают или связывают нерегулярные антитела или их фрагменты в пробе. Для этого в качестве предпочтительных связывающих элементов на пористую мембрану наносят клеточные мембраны различных эритроцитарных препаратов нулевой группы крови, комбинированный антигенный профиль которых перекрывает (охватывает) те антигены, которые направлены против важнейших нерегулярных антител, существенных для переливания крови. Предпочтительно в одной индикаторной зоне этого ряда индикаторных зон, предпочтительно в индикаторной зоне, расположенной дистально по отношению ко всем остальным индикаторным зонам этого ряда, помещают контрольный связывающий элемент (контроль = ctl), который посредством позитивной реакции указывает протекание пробы через индикаторные зоны. Контрольным связывающим элементом предпочтительно является антитело к IgG.

В следующей предпочтительной форме осуществления устройства согласно настоящему изобретению индикаторные зоны, предпочтительно расположенные в дистальном по отношению к загрузочной зоне ряду индикаторных зон, содержат антитела, или фрагменты антител, или лектины, которые при определении группы крови могут захватывать или связывать антигены группы крови, подлежащие определению, и за счет этого связывать несущие их клетки, присутствующие в пробе. В качестве предпочтительных связывающих элементов в индикаторные зоны на пористой мембране, предпочтительно находящиеся в ряду, расположенном дистально по отношению к загрузочной зоне и другим рядам индикаторных зон, наносят антитела, или фрагменты антител, или лектины к антигенам или эпитопам антигенов системы групп крови АВ0, например анти-А, анти-В или анти-А и анти-В. Предпочтительно в одной индикаторной зоне этого ряда индикаторных зон, предпочтительно в индикаторной зоне, расположенной дистально по отношению ко всем остальным индикаторным зонам этого ряда, помещают контрольный связывающий элемент (контроль = ctl), который посредством позитивной реакции подтверждает протекание пробы через индикаторные зоны. Контрольным связывающим элементом предпочтительно является поликлональное антитело к эритроцитам.

В этой предпочтительной форме осуществления устройства согласно настоящему изобретению в еще одном ряду индикаторных зон, предпочтительно расположенном проксимально по отношению к загрузочной зоне, присутствуют мембраны тромбоцитов и/или лимфоцитов или составные части мембран в качестве связывающих элементов для выявления антитромбоцитарных/антилимфоцитарных антител.

В следующей предпочтительной форме осуществления устройства согласно настоящему изобретению индикаторные зоны, предпочтительно расположенные в дистальном по отношению к загрузочной зоне ряду индикаторных зон, содержат антитела, или фрагменты антител, или лектины, которые при определении группы крови могут захватывать или связывать антигены группы крови, подлежащие определению, и за счет этого связывать несущие их клетки, присутствующие в пробе. В качестве предпочтительных связывающих элементов в индикаторные зоны на пористой мембране, предпочтительно находящиеся в ряду, расположенном дистально по отношению к загрузочной зоне и другим рядам индикаторных зон, помещают антитела, или фрагменты антител, или лектины к антигенам или эпитопам антигенов системы групп крови АВ0, например анти-А, анти-В или анти-А и анти-В.

Предпочтительно в одной индикаторной зоне этого ряда индикаторных зон, предпочтительно в индикаторной зоне, расположенной дистально по отношению ко всем остальным индикаторным зонам этого ряда, помещают контрольный связывающий элемент (контроль = ctl), который посредством позитивной реакции подтверждает протекание пробы через индикаторные зоны. Контрольным связывающим элементом предпочтительно является поликлональное антитело к эритроцитам.

В этой предпочтительной форме осуществления устройства согласно настоящему изобретению в еще одном ряду индикаторных зон, предпочтительно расположенном проксимально по отношению к загрузочной зоне, присутствуют связывающие элементы для выявления инфекционных агентов, более конкретно полученные синтетическим путем пептиды или рекомбинантные антигены, экспрессированные с использованием рекомбинантных ДНК, которые включают в себя диагностически значимые последовательности поверхностных белков соответствующего маркера (обнаружение антител), или антитела, ориентированные против поверхностных белков инфекционных агентов (обнаружение антигенов).

При использовании устройства согласно настоящему изобретению для одновременного определения клеточных и плазматических параметров одной пробы не нужно раздельно наносить пипеткой образцы для каждого отдельного определения, а можно в одной пробе одновременно определить все желаемые параметры, более конкретно при одновременном проведении о