Антиоксидантное средство растительного происхождения

Антиоксидантное средство растительного происхождения

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии и может быть использовано для лечения и профилактики заболеваний, где основным патогенетическим фактором является нарушение процессов перекисного и свободнорадикального окисления, особенно липидов. Синдром пероксидации лежит в основе патогенеза практически всех заболеваний, в частности ишемическая болезнь сердца, инфаркт миокарда, атеросклероз, инсульт, токсические поражения печени, онкологические заболевания.

Известны фармакологические препараты, являющиеся синтетическими аналогами природных антиоксидантов (α-токоферол, аскорбиновая кислота, пропиловый, октиловый и додециловый эфиры галловой кислоты) и большая группа искусственных антиокислителей на основе серосодержащих и фенольных соединений (дибунол, бутилоксианизол) (И.В.Сорокина и др. Роль фенольных антиоксидантов в повышении устойчивости органических систем к свободнорадикальному окислению, - Новосибирск, 1997, с.20-26). Перечень фармакопейных средств, используемых как антиоксиданты, весьма ограничен - это лишь аскорбиновая кислота (причем в единственной форме - L аскорбата), витамин Е (и, как правило, только α-токоферол), отдельные биофлавоноиды - кверцетин, рутин. Синтетические фенолы не нашли широкого применения в лечебной практике. Отчасти это связано с наличием у некоторых из них побочных действий и определенной токсичности.

Перспективными антиоксидантами являются препараты, изготовленные из природного сырья. Их действие обусловлено синергическим эффектом входящих в них биологически активных соединений.

Аналогами изобретения являются препараты на основе природных флавоноидов: рутин, кверцетин, пикногенол, кемпферол, диквертин. Известны такие их свойства, как капилляропротекторные, гиполипидемические, кардиотоноческие, гепатопротекторные. Механизм действия заключается в стабилизации клеточных и субклеточных мембран, обусловленной выраженными антиоксидантными свойствами биофлавоноидов за счет акцептирования радикальных и ионрадикальных частиц (регулируют скорость реакций перекисной деструкции липидной фракции мембран) [Ю.Ю.Гичев, Ю.П.Гичев Антиоксиданты для профилактики и лечения сердечно-сосудистых заболеваний // Руководство по биологически активным пищевым добавкам. - М.: «Триада», 2001. - С.86].

Наиболее близким аналогом являются шишки хмеля обыкновенного (Humulus lupulus L.) "Хмель-сырец и хмель прессованный" ГОСТ 21946-76-ГОСТ 21948-76. Лекарственным сырьем являются собранные в фазе начала цветения и высушенные соплодия культивируемых или дикорастущих растений. Хмеля обыкновенного шишки богаты биологически активными веществами, такими как: эфирные масла (более 100 компонентов), горькие гликозиды, фитогормоны, органические кислоты, флавоноиды (кверцетин, рутин, мирицетин, кемпферол и др.), витамины группы В, РР, С, Н, токоферол, аминокислоты, кумарины, дубильные вещества, пектиновые вещества, алкалоиды. Препараты шишек хмеля оказывают седативное, нейротропное, противовоспалительное, противоязвенное, капилляроукрепляющее, антиоксидантное, болеутоляющее, снотворное действие [Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование; семейство Rutaceae-Eleagnaceae. - JI., 1988. - 357 с.; Регистр лекарственных средств России. Энциклопедия лекарств. - М.: ООО «РЛС-2005», 2005. - 12 изд. - 1440 с.].

Задачей изобретения является расширение области применения препаратов из листьев хмеля обыкновенного, а также расширение арсенала антиоксидантных средств.

Технический результат при использовании изобретения - получение средства с выраженным антиоксидантным действием.

Указанный технический результат достигается за счет применения густого экстракта из листьев хмеля обыкновенного (Humulus Lupulus) в качестве антиоксидантного средства.

Данных об антиоксидантном воздействии препаратов из листьев хмеля обыкновенного в доступной научно-медицинской и патентной литературе не обнаружено.

Анализ качественного состава листьев и экстракта хмеля обыкновенного методами показал наличие в нем полифенольных соединений, органических кислот, аскорбиновой кислоты. Методами тонкослойной и высокоэффективной жидкостной хроматографии идентифицированы в листьях и экстракте хмеля обыкновенного рутин, апигенин, гесперидин, кверцетин, дигидрокверцетин, галловая кислота, танин, эпикатехин; хлогорогеновая, кофейная, цикориевая кислоты и др. биологически активные вещества [Латыпова Г.М., Закиева С.В., Искандарова З.М., Уразлина О.И. Исследование качественного состава экстракта хмеля обыкновенного листьев // Фармация из века в век. Труды научно-практической конференции. Часть III. Анализ и стандартизация лекарственных средств - 2008. - Санкт-Петербург, стр. 84-87]. Исследования количественного состава флавоноидных соединений экстракта хмеля обыкновенного методами УФ-спектрофотометрии показали, что содержание суммы флавоноидов в густом экстракте составляет 4,0-6,0% [Латыпова Г.М., Закиева С.В., Искандарова З.М., Шафикова С.Ф. Исследование количественного состава флавоноидных соединений густого экстракта хмеля обыкновенного листьев // Сб. трудов 3-й международной научной конференции «Актуальные проблемы регионоведения». Часть 1. - Курск, 2008. - С.120-123].

Приготовление густого экстракта производят следующим образом: 100,0 г растительного сырья заливают 1000 мл 70% раствора этилового спирта, настаивают трое суток при комнатной температуре в экстракторе, процесс мацерации повторяют трижды. Полученные водно-спиртовые настойки объединяют, испаряют на роторном испарителе под вакуумом. Далее доводят до состояния густого экстракта в выпарительных чашах в сушильном шкафу при температуре 60°С.

На фиг.1 изображена запись типичной картины хемилюминесценции модельной системы "Цитрат-фосфат-люминол" (активные формы кислорода) без добавления фитопрепарата (контрольный образец).

На фиг.2 изображена запись типичной картины хемилюминесценции модельной системы "Желточные липопротеиды" (перекисное окисление липидов) без добавления фитопрепарата (контрольный образец).

На фиг.3 изображена запись типичной картины влияния густого экстракта из листьев хмеля обыкновенного на хемилюминесценцию модельной системы "Цитрат-фосфат-люминол" (доза ФП 0,5 мг).

На фиг.4 изображена запись типичной картины влияния густого экстракта из листьев хмеля обыкновенного на хемилюминесценцию модельной системы "Цитрат-фосфат-люминол" (доза ФП 1 мг).

На фиг.5 изображена запись типичной картины влияния густого экстракта из листьев хмеля обыкновенного на хемилюминесценцию модельной системы "Цитрат-фосфат-люминол" (доза ФП 2 мг).

На фиг.6 изображена запись типичной картины влияния густого экстракта из листьев хмеля обыкновенного на хемилюминесценцию модельной системы "Цитрат-фосфат-люминол" (доза ФП 3 мг).

На фиг.7 изображена запись типичной картины влияния густого экстракта из листьев хмеля обыкновенного на хемилюминесценцию модельной системы "Цитрат-фосфат-люминол" (доза ФП 5 мг).

На фиг.8 изображена запись типичной картины влияния густого экстракта из листьев хмеля обыкновенного на хемилюминесценцию модельной системы "Цитрат-фосфат-люминол" (доза ФП 10 мг).

На фиг.9 изображена запись типичной картины влияния густого экстракта из листьев хмеля обыкновенного на хемилюминесценцию модельной системы

" Желточные липопротеиды " (доза ФП 0,05 мг).

На фиг.10 изображена запись типичной картины влияния густого экстракта из листьев хмеля обыкновенного на хемилюминесценцию модельной системы

"Желточные липопротеиды " (доза ФП 1 мг).

На фиг.11 изображена запись типичной картины влияния густого экстракта из листьев хмеля обыкновенного на хемилюминесценцию модельной системы

"Желточные липопротеиды " (доза ФП 2 мг).

На фиг.12 изображена запись типичной картины влияния густого экстракта из листьев хмеля обыкновенного на хемилюминесценцию модельной системы

"Желточные липопротеиды " (доза ФП 3 мг).

На фиг.13 изображена запись типичной картины влияния густого экстракта из листьев хмеля обыкновенного на хемилюминесценцию модельной системы

"Желточные липопротеиды " (доза ФП 5 мг).

На фиг.14 изображена запись типичной картины влияния густого экстракта из листьев хмеля обыкновенного на хемилюминесценцию модельной системы

"Желточные липопротеиды " (доза ФП 10 мг).

В таблице представлен анализ антиоксидантного действия густого экстракта из листьев хмеля обыкновенного на хемилюминесценцию модельных систем.

Метод исследования основан на регистрации хемилюминесценции биологического материала с использованием аппаратно-программного комплекса ХЛМ-003. Комплекс состоит из портативного хемилюминомера, процессорного блока и монитора.

Для оценки влияния густого экстракта из листьев хмеля обыкновенного на процессы свободнорадикального перекисного окисления липидов использовали модельные системы. Для их приготовления использовали фосфатно-солевой буферный раствор следующего состава: 20 мМ КН₂РO₄, 105 мМ КСl (рН 7,45). Инициировали процесс добавлением 1 мл соли FeSO₄ (конечная концентрация ионов Fе²⁺ в среде инкубации составила 2,5 мМ).

Были созданы следующие модельные системы:

1) система, где имитируется генерация активных форм кислорода (АФК) - на основе фосфатно-солевого буферного раствора с цитратом натрия (2,5% раствор) с добавлением люминола (10^-5 М), который резко повышает активность свечения;

2) система, где протекают реакции перекисного окисления липидов, состоящая из суспензии желточных липопротеидов, обладающая высокой окисляемостью.

На исследование ХЛ отбирали 1 мл пробы (20 мг/мл белка), разводили в 19 мл охлажденного буфера с цитратом натрия; растворы ФП добавляли в исследуемую модельную систему за 1 мин. до введения FeSO₄. В качестве контроля служили модельные системы без добавления фитопрепарата (в тех же объемах добавляли физиологический раствор).

В 20 мл модельных систем вносили 1% растворы густого экстракта в различных дозах (0,05; 0,1; 0,2; 0,3; 0,5 и 1,0 мл, что в пересчете на густой экстракт соответствует: 0,5 мг; 1,0 мг; 2 мг; 3 мг; 5 мг и 10 мг). Число опытов для каждой модельной системы составляло 6.

Оценивали интегральный показатель хемилюминесценции светосумму свечения, которая выражалась в условных единицах (1 у.е.= 3.06×10⁵ квантов в с). Результаты исследований подвергались статистической обработке методом критерия Фишера-Стьюдента. Достоверными считались различия при р≤0,05; 0,001. Показатели выражены в процентах от контрольного значения (табл.).

Анализ представленных в таблице и фигурах 3-14 результатов показывает, что при добавлении в модельные системы, имеющие различный антиоксидантный статус, 1% раствора густого экстракта из листьев хмеля обыкновенного происходит угнетение основного параметра хемилюминесценции - светосуммы свечения. Во всех модельных системах отмечался статистически значимый антиоксидантный эффект при введении 1% раствора густого экстракта во всех дозах по сравнению с контрольными образцами, при этом с увеличением доз антиоксидантный эффект усиливался.

Таким образом, на основании полученных результатов следует, что в различных модельных системах густой экстракт из листьев хмеля обыкновенного оказывал прямое антиоксидантное действие, что обосновывает применение густого экстракта из листьев хмеля обыкновенного в качестве эффективного антиоксидантного средства для профилактики и лечения свободнорадикальных патологий.

Анализ антиоксидантного действия водно-спиртового экстракта из листьев хмеля обыкновенного на хемилюминесценцию модельных систем
Доза водно-	Модельная система	Модельная система
спиртового	Цитрат-фосфат-	Желточные
экстракта	люминол	липопротеиды
(количество
сухого вещества,
мг/мл)
0,05 мл	82,95%±0,57%**	17,98±0,64%**
(0,5 мг)
0,1 мл	43,93±1,53%**	13,26±1,07%**
(1 мг)
0,2 мл	44,44±0,91%**	16,52±0,72%*
(2 мг)
0,3 мл	35,04±1,00%**	23,59±0,51%**
(3 мг)
0,5 мл	33,64±1,44%**	11,07±0,97%**
(5 мг)
1 мл	18,24±2,2%**	6,94±2,1%**
(10 мг/мл)
Контроль	100±0,49%**	100±0,08%**
(модельные
системы без ФП

Результаты (светосумма свечения) выражены в процентах от контрольных образцов.

Наличие статистически достоверного различия между контролем и опытом

(* р<0,05; ** р<0,001).

Применение густого экстракта из листьев хмеля обыкновенного(Humulus Lupulus) в качестве антиоксидантного средства.