2-этил-6-метил-3-гидроксипиридинийгидроксибутандиоат, обладающий противоишемической, церебропротекторной, нейротропной и липидрегулируемой активностями, фармацевтические композиции и лекарственное средство

2-этил-6-метил-3-гидроксипиридинийгидроксибутандиоат, обладающий противоишемической, церебропротекторной, нейротропной и липидрегулируемой активностями, фармацевтические композиции и лекарственное средство

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Изобретение относится к области медицины, конкретно к новому химическому соединению - производному 3-гидроксипиридина, обладающему противоишемической, церебро-протекторной, нейротропной и липидрегулируемой активностями, фармацевтическим композициям на основе этого соединения.

Указанные свойства позволяют предполагать возможность применения предлагаемых фармацевтических композиций на основе нового соединения для профилактики и лечения сердечно-сосудистых, психических заболеваний, ишемии мозга и ожирения.

Известное противоишемическое средство из группы β-адреноблокаторов - анаприлин (М.Д.Машковский. Лекарственные средства, М., ООО "Новая волна", 2002, т.I, стр.254-256) реализует свои положительные свойства, в основном, на фоне угнетения сердечной мышцы (кардиодепрессивное действие), имеет ряд нежелательных побочных эффектов (головокружение, бронхоспазм, агрегация эритроцитов и др.).

Известным ноотропным средством, широко применяемым в медицинской практике, является пирацетам (М.Д. Машковский. Лекарственные средства, М., ООО "Новая волна", 2002, т.I, стр.111-113).

Цель изобретения - новое соединение, обладающее противоишемическим, церебропротекторным, ноотропным и липидрегулируемым свойствами, не имеющее в отличие от анаприлина кардиодепрессивного действия и нежелательных побочных эффектов, фармацевтические композиции на основе нового соединения, а также возможность применения предлагаемых фармацевтических композиций на основе нового соединения для профилактики и лечения сердечно-сосудистых, психических заболеваний, ишемии мозга и ожирения.

Поставленная цель достигается новым соединением, а именно: 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридинийгидроксибутандиоатом формулы:

а также фармацевтическими композициями, содержащими новое соединение с рабочим названием Этоксидол: таблетки, растворы для инъекций.

Новое соединение получают известным способом, а именно: взаимодействием 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина с гидроксибутандиовой кислотой в присутствии растворителя при нагревании.

Твердую дозированную фармацевтическую композицию в виде таблетки, содержащую активное вещество и целевые добавки, получают путем предварительного гранулирования с последующим таблетированием. При этом соотношение активного вещества и целевых добавок составляет, мас.%:

активное вещество	0,05-40,0
целевые добавки	60,0-99,95

В качестве целевых добавок она содержит необязательно одновременно крахмал, натрия кроскармеллозу, поливинилпирролидоны, сахара, производные целлюлозы, аэросил, глицин, N-ацетил-L-глутаминовую кислоту, 2-(диметиламино)этанол, соли стеариновой кислоты, корригирующие вещества, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

крахмал	0,0-15,0
натрия кроскармеллоза	0,0-10,0
поливинилпирролидоны	0,0-10,0
сахара	0,0-20,0
производные целлюлозы	0,0-50,0
аэросил	0,0-10,0
глицин	0,0-10,0
N-ацетил-L-глутаминовая кислота	0,0-15,0
2-(диметиламино)этанол	0,0-10,0
соли стеариновой кислоты	0,0-1,0
корригирующие вещества	0,0-10,0

Присутствие в твердых лекарственных формах крахмала, сахаров, поливинилпирролидонов, натрия кроскармеллозы, производных целлюлозы обеспечивает повышение скорости высвобождения и полноту всасывания активного вещества, увеличивает распадаемость и растворение лекарственной формы, а также создает условия для проникновения воды и ферментов в таблетку. Крахмал предпочтительно используют кукурузный или картофельный.

Присутствие солей стеариновой кислоты обеспечивает эффект скольжения, необходимый на стадии прессования таблеток. В качестве солей целесообразно применять стеарат магния или кальция.

Глицин, N-ацетил-L-глутаминовая кислота, 2-(диметиламино)этанол в качестве целевых добавок к активному веществу способствуют интенсификации процессов клеточного метаболизма и обмена веществ, окислительно-восстановительных процессов, регенерации клеток, липидного обмена, что должно положительно влиять на ход лечения ишемической болезни сердца, ишемии мозга и нейропротекции.

Фармацевтическую композицию в виде раствора для инъекций, содержащую активное вещество и целевые добавки, получают путем постепенного растворения компонентов в воде для инъекций.

При этом соотношение активного вещества и целевых добавок составляет, мас.%:

активное вещество	0,05-40,0
целевые добавки	60,0-99,95.

В качестве целевых добавок она содержит необязательно одновременно глицин, N-ацетил-L-глутаминовую кислоту, 2-(диметиламино)этанол, трилон Б при следующем соотношении компонентов, мас.%:

глицин	0,0-10,0,
N-ацетил-L-глутаминовая кислота,	0,0-50,0
2-(диметиламино)этанол	0,0-20,0
трилон Б	0,0-5,0

Трилон Б в качестве целевой добавки способствует повышению стабильности раствора.

Заявляемые соотношения компонентов найдены экспериментальным путем, являются оптимальными и позволяют получить технический результат, соответствующий поставленной задаче:

фармацевтические композиции отвечают требованиям Государственной Фармакопеи XI издания, имеют срок годности не менее 2-х лет и обеспечивают высокий фармакотерапевтический эффект активного вещества.

Синтез нового вещества, состав и способы изготовления заявляемых фармацевтических композиций приведены в следующих примерах.

Пример 1. 2-Этил-6-метил-3-гидроксипиридинийгидроксибутандиоат.

К 380 мл 2-пропанола добавляют 31,28 г (0,288 моля) 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина, 31,49 г (0,235 моля) гидроксибутандиовой кислоты. Реакционную массу нагревают и перемешивают с обратным холодильником при 65-70°С в течение 5-10 мин, фильтруют, фильтрат охлаждают до 5-10°С. Образовавшийся осадок отделяют, промывают 40 мл охлажденного 2-пропанола, сушат. Получают 58,76 г соединения I (выход 95%), белый кристаллический продукт с температурой плавления 106-107°С.

C₁₂H₁₇NO₆

Найдено, %: С 53,05; Н 6,14; N 5,14.

Вычислено, %: С 53,14; Н 6,27; N 5,17.

ИК-спектр, см^-1: 1656, 1558, 1298, 1168, 1092, 854 (в вазелиновом масле).

УФ-спектр, нм: 223, 291 (в этаноле).

Пример 2. Твердая фармацевтическая композиция в виде таблетки.

В аппарат загружают 268,56 г целлюлозы микрокристаллической, 8,63 г аэросила, 31,20 г крахмала и 37,440 г сахара молочного, смесь увлажняют водным раствором 2-(диметиламино)этанола и кислоты N-ацетил-L-глутаминовой в количестве 280,97 г и тщательно перемешивают.

Полученную массу гранулируют через сито с диаметром отверстий 2 мм. Гранулы сушат при 45-50°С до постоянного веса и протирают через сито с диаметром отверстий 1 мм. Получают 446,70 г гранулята №1. Выход на стадии составляет 99,03%.

Аналогично получают 125,98 г гранулята №2 из 105,05 г Этоксидола, 20,80 г глицина и 13,45 г 10%-ного водного раствора поливинилпирролодона. Выход на стадии - 99,03%.

Для получения массы для таблетирования в аппарат загружают грануляты №1 и №2, тщательно перемешивают и опудривают смесью порошков: аэросил - 1,24 г, натрия кроскармеллоза - 13,18 г, магния стеарат - 6,18 г и ароматизатор - 6,18 г.

Для получения таблеток полученную смесь таблетируют. Получают 600 г (1000 штук) таблеток Этоксидола в среднем по 100 мг каждая. Выход составляет 95,2%, считая на исходный Этоксидол.

Пример 3. Твердая фармацевтическая композиция в виде таблетки.

Аналогично примеру 2 гранулят №1 получают, исходя из 278,56 г целлюлозы микрокристаллической, 8,63 г аэросила и 37,44 г сахара молочного, смесь увлажняют водным раствором 2-(диметиламино) этанола и кислоты N-ацетил-L-глутаминовой в количестве 280,97 г. Гранулят 2 получают, исходя из 105,05 г Этоксидола и 33,12 г 10%-ного водного раствора поливинилпирролодона. Для получения таблеток смесь гранулятов №1 и №2 опудривают смесью порошков кроскармеллоза - 14,21 г, кальция стеарата - 6,07 г, ароматизатора - 6,31 г и таблетируют.

Получают 600 г (1000 штук) таблеток Этоксидола в среднем по 100 мг каждая.

Выход составляет 95,2%, считая на исходный Этоксидол.

Пример 4. Твердая фармацевтическая композиция в виде таблетки.

Аналогично примеру 2 гранулят №1 получают, исходя из 306,00 г целлюлозы, 8,63 г аэросила и 37,44 г сахара, смесь увлажняют водным раствором 2-(диметиламино) этанола и кислоты N-ацетил-L-глутаминовой в количестве 280,97 г. Гранулят №2 получают, исходя из 105,05 г Этоксидола, 10,40 г глицина и 24,11 г 10%-ного водного раствора поливинилпирролодона. Для получения таблеток смесь гранулятов №1 и №2 опудривают смесью порошков кроскармеллозы - 10,33 г, кальция стеарата - 4,07 г, аэросила - 1,04 г и ароматизатора - 5,83 г и таблетируют.

Получают 600 г (1000 штук) таблеток Этоксидола в среднем по 100 мг каждая.

Выход составляет 95,5%, считая на исходный Этоксидол.

Пример 5. Твердая фармацевтическая композиция в виде таблетки.

Аналогично примеру 2 гранулят №1 получают, исходя из 269,00 г целлюлозы, 8,63 г аэросила, 30,3 г крахмала и 37,44 г сахара, смесь увлажняют водным раствором 2-(диметиламино)этанола и кислоты N-ацетил-L-глутаминовой в количестве 280,97 г. Гранулят №2 получают, исходя из 105,05 г Этоксидола, 33,98 г глицина и 13,45 г 10%-ного водного раствора поливинилпирролодона. Для получения таблеток смесь гранулятов №1 и №2 опудривают смесью порошков кроскармеллозы - 10,33 г, магния стеарата - 6,18 г, аэросила - 1,24 г и ароматизатора - 6,07 г и таблетируют. Получают 600 г (1000 штук) таблеток Этоксидола в среднем по 100 мг каждая. Выход составляет 97,2%, считая на исходный Этоксидол.

Пример 6. Фармацевтическая композиция в виде раствора для инъекций.

В колбу на 2,0 л наливают 700,0 мл воды для инъекций и постепенно при перемешивании загружают 50,0 г Этоксидола, 16,0 г 2-(диметиламино)этанола, 34,0 г кислоты N-ацетил-L-глутаминовой, 0,1 г глицина и 0,5 г трилона Б. После растворения всех компонентов раствор доводят до объема 1000 мл, затем раствор фильтруют в асептических условиях через «миллипор» диаметром 0,22 мкм. Получают 500 ампул по 2 мл.

Пример 7. Фармацевтическая композиция в виде раствора для инъекций.

Аналогично примеру 6 загружают 50,0 г Этоксидола, 20,0 г 2-(диметиламино)этанола, 0,05 г глицина. Получают 500 ампул по 2 мл.

Пример 8. Фармацевтическая композиция в виде раствора для инъекций.

Аналогично примеру 6 загружают 50,0 г Этоксидола, 1,0 г кислоты N-ацетил-L-глутаминовой и 0,05 г трилона Б. Получают 500 ампул по 2 мл.

Таблица 2
Фармацевтическая композиция Этоксидола в виде раствора для инъекций
Наименование показателя качества	Нормы требований качества	Фактические показатели
Пример 6	Пример 7	Пример 8
Описание	Бесцветная или слегка окрашенная жидкость	Бесцветная жидкость	Слегка окрашенная жидкость	Бесцветная жидкость
Прозрачность	Препарат должен быть прозрачным (ГФХ1, вып.1, с.198)	Прозрачен	Прозрачен	Прозрачен
Цветность	Окраска раствора не интенсивнее эталона №7б (ГФ X1, вып.1, с.194)	Не интенсивнее эталона №7б	Не интенсивнее эталона №7б	Не интенсивнее эталона №7б
Посторонние примеси	Глутаминовая кислота не более 0,5%	Менее 0,5%	Менее 0,5%	Менее 0,5%
Стабильность	2 года при 20°С	2 года	2 года	2 года

Противоишемические, церебропротекторные, ноотропные и липидрегулируемые свойства заявляемого вещества установлены на общепринятых стандартных моделях.

Пример 9. Изучение противоишемической активности.

Эксперименты проведены на белых нелинейных крысах-самцах, мышах, кроликах и кошках в сравнении с Анаприлином.

Влияние на соотношение зоны некроза к зоне ишемии при ишемическом повреждении миокарда крыс изучали в дозе 5% от ЛД₅₀. В той же дозе изучали влияние на развитие реперфузионных аритмий. Фибрилляцию желудочков вызывали окклюзией коронарных артерий. Определяли влияние препарата на кардиогемодинамику и перекисное окисление липидов (ПОЛ), индуцированные иммобилизационным стрессом.

Показано, что Этоксидол в дозе 10 мг/кг устраняет фибрилляцию желудочков при окклюзии коронарных артерий и снижает количество животных, у которых возникает фибрилляция желудочков до 2 из 8 опытных в дозе 10 мг/кг и 2 из 9 - в дозе 23 мг/кг.

Этоксидол достоверно увеличивает порог фибрилляции желудочков миокарда кошек в дозе 23,0 мг/кг в период с 5 до 60 мин после окклюзии коронарных артерий, в то время как Анаприлин обладает таким эффектом в изотоксической дозе в период с 30 по 60 мин.

В условиях острой ишемии миокарда в дозе 15 мг/кг оказывает отчетливое кардиопротективное действие на кардиогемодинамику, приближая значения сократимости (dP/dt), АД и другие до уровня интактного контроля.

Этоксидол в дозе 1 мг/кг обладает способностью снижать интенсивность проявления процессов перекисного окисления липидов, вызванных иммобилизацией кроликов в течение 30 дней, о чем свидетельствует снижение уровня малонового диальдегида (МДА) в плазме крови на 46% и в ткани почек. При этом уровень общего холестерина снижается на 41,7%, а индекс атерогенности снижается на 82,9%.

Таблица 4
Изменения показателей кардиогемодинамики (%) у крыс с острой ишемией миокарда в условиях открытой грудной клетки, n=8
Время от начала опыта, мин	Регистрируемые параметры
dp/dt max, %	САД, мм рт.ст.	ЧСС, уд/мин
Исход	100±4,0	98±5,2	432±17,0
5	-15±2,5	-15±4,4*	-5±1,4
10	-14±5,0	-18±4,1*	-1±3,6
15	-19±4,7	-18±5,5*	-1±4,0
20	-17±4,0	-22±5,8*	-3±2,7
30	-18±4,7	-22±5,8*	-4±2,2
40	-21±4,7	-23±6,5*	-5±2,7
50	-18±4,7	-24±6,2*	-5±3,0
60	-19±4,9	-20±7,0*	-7±3,0
Примечание: * - различия с исходным уровнем достоверны при р<0,05.

Таким образом, Этоксидол в эксперименте проявляет выраженное кардиопротективное действие, проявляющееся в снижении альтерации тканей миокарда в условиях ишемии, восстановлении поврежденных ишемией параметров кардиогемодинамики. Кроме того, для него характерно антиоксидантное действие и липидрегулирующий эффект при моделировании стрессобусловленных прооксидантных состояний.

Пример 10. Изучение нейропротективной активности.

Изучение ноотропного действия Этоксидола осуществлялось при использовании 2-х методик:

- изучение влияния Этоксидола на обучаемость условного рефлекса пассивного избегания крыс недоучек;

- изучение влияния Этоксидола на нарушенную память - тест амнезии условного рефлекса пассивного избегания, вызванную скополамином у крыс.

Исследование ноотропных эффектов проводили в сертифицированной установке "Lafayette Instrument Co" (США). Исследование выполнено на белых беспородных половозрелых крысах самцах массой 250-280 г.

Тест на воспроизведение обучаемости проводили через 24 ч после обучения, регистрировали латентный период захода животного в темное отделение и затем регистрировали в течение 180 с число животных, совсем не зашедших в темный опасный отсек и остававшихся на освещенной висячей платформе (крысы, хорошо помнящие ситуацию).

Этоксидол и препарат сравнения Пирацетам вводили однократно внутрь (интрагастрально) при помощи специального зонда в объеме 0,2 мл на 100 г веса крысы за 40 минут до обучения. Животным контрольной группы вводили дистиллированную воду.

Все исследуемые вещества существенно не изменяли латентное время выполнения навыка захода в темную камеру (табл.3). Латентный период захода в темную камеру при выполнении норкового рефлекса при первом помещении животных в камеру не изменялся по сравнению с контролем (табл.5).

После этого осуществляли обучение УРПИ, для чего крыса получала в темной камере небольшое болевое раздражение.

Контрольные животные после обучения и при последующем воспроизведении обученного через 24 ч после обучения помнили о болевом раздражении, полученном в темной камере, и заходили туда с большим латентным периодом. Только 1 крыса из 15-ти совсем не зашла в темную камеру.

Согласно приведенным в таблице 5 результатам Этоксидол в дозе 200 мг/кг и таблетки в дозе 100 мг/кг улучшают обучение условному рефлексу пассивного избегания у крыс недоучек, что выражается в достоверном увеличении латентного времени захода в темную камеру при воспроизведении рефлекса. Пирацетам в дозе 200 мг/кг также улучшал обучение условному рефлексу пассивного избегания по показателю латентного периода выполнения рефлекса и по показателю увеличения процента животных, совсем не зашедших в темную камеру. Таким образом, Этоксидол в дозе 200 мг/кг и таблетки в дозе 100 мг/кг улучшают обучение условному рефлексу пассивного избегания у крыс недоучек и по показателю латентного периода выполнения рефлекса имеет сходную эффективность с Пирацетамом в дозе 200 мг/кг.

Изучение антиамнестического действия Этоксидола в методике скополаминовой амнезии.

Изучение влияния веществ на амнезию осуществляли в сертифицированной установке "Lafayette Instrument Co" (США).

Крысу сажали на ярко освещенную платформу хвостом к открытой гильотинной двери, ведущей в темную камеру. Вследствие норкового рефлекса после нахождения входа в темный отсек камеры крыса переходила в темный отсек. Регистрировали латентное время выполнения этого навыка. Затем крысу оставляли на 180 с в темной камере с целью ее освоения, и крыса почти все время проводила в темной камере.

Для получения амнезии УРПИ животным вводили скополамин (1,0 мг/кг внутрибрюшинно) за 30 минут до обучения. Тест на воспроизведение обученного и амнезию проводили через 24 ч после обучения, для чего крысу опять сажали на платформу хвостом к отверстию и регистрировали:

- латентный период захода животного в темное отделение и

- затем в течение 180 с - число животных, совсем не зашедших в темный опасный отсек и остававшихся на освещенной висячей платформе (крысы, хорошо помнящие ситуацию).

Этоксидол и Пирацетам вводили однократно внутрь в объеме 0,2 мл на 100 г веса крысы за 40 минут до обучения. Животным контрольной группы вводили дистиллированную воду.

В контрольных экспериментах при помещении крысы на освещенную платформу животные с коротким латентным периодом заходят в темную камеру и получают там болевое раздражение (обучение). При воспроизведении рефлекса через 24 часа после обучения крысы помнят обученное, и при помещении их на освещенную платформу животные остаются там и не заходят в темную опасную камеру, где они накануне получили болевое раздражение (обучение) (табл.6).

Скополамин достоверно укорачивает длительность латентного периода захода в темную камеру при воспроизведении рефлекса и достоверно уменьшает (до 20%) число животных, совсем не зашедших в темный отсек камеры при воспроизведении, т.е. помнящих о нанесенном там накануне аверсивном стимуле (табл.6).

Этоксидол в дозе 100 мг/кг достоверно (р≤0,05) увеличивает (в 1,92 раза) длительность латентного периода захода крыс в темный отсек при воспроизведении рефлекса по сравнению с животными, получавшими один скополамин. Наряду с этим, под влиянием препарата наблюдается достоверное повышение (до 50%) числа животных, не зашедших в темный отсек камеры при воспроизведении амнезированного рефлекса, т.е. помнящих о нанесенном аверсивном стимуле (табл.6). Полученные данные свидетельствуют о наличии у Этоксидола в дозе 100 мг/кг отчетливого антиамнестического эффекта.

Пирацетам в дозе 100 мг/кг достоверно (р≤0,05) увеличивает (в 1,8 раза) длительность латентного периода захода в темный отсек при воспроизведении рефлекса, но достоверно не повышает число животных, не зашедших в темный отсек камеры при воспроизведении амнезированного рефлекса.

Таблица 6
Антиамнестическая активность Этоксидола на модели скополаминовой амнезии условного рефлекса пассивного избегания
Препарат, доза	Латентный период захода в темную камеру (с)	Процент животных, не вошедших в темную камеру
Обучение	Воспроизведение
КонтрольДист. вода, внутрь	16,2±2,5	163,0±17,0	90
Скополамин 1 мг/кг, в/б	10,1±1,54	55,4±21,25*	20*
Этоксидол 100 мг/кг + Скополамин	14,6±2,63	106,42±22,4#	50#
Этоксидол 200 мг/кг + Скополамин	11,3±2,15	75,82±23,0	27
Этоксидол раствор 100 мг/кг + Скополамин	13,9±2,63	107,42±22,4#	50#
Пирацетам 100 мг/кг + Скополамин	12,3±1,91	99,23±14,7#	40
Пирацетам 200 мг/кг + Скополамин	13,5±1,52	105,73±21,4#	50#
* - р<0,05 достоверность различий по t-критерию Стьюдента относительно группы животных, получавших дистиллированную воду;
* - р<0,05 достоверность значений по критерию Стьюдента относительно контроля с амнезией.

Таким образом, Этоксидол в дозе 100 мг/кг (раствор) обладает антиамнестическим эффектом, который характеризуется достоверным увеличением латентного времени захода в темную камеру и увеличением числа животных, совсем не зашедших в опасную камеру, по сравнению с показателями контрольных животных с амнезией. Аналогичным эффектом обладает Пирацетам в дозах 100 и 200 мг/кг. По антиамнестическому эффекту Этоксидол в дозе 100 мг/кг не уступает Пирацетаму в дозе 100 мг/кг.

Изучение антиалкогольного действия Этоксидола осуществлялось в опытах на половозрелых беспородных белых крысах-самцах по 2-м тестам: методики открытого поля и методики вращающегося стержня.

Этоксидол и Пирацетам вводили однократно внутрь (интрагастрально) за 40 минут до эксперимента.

Регистрировали горизонтальную двигательную активность по числу пересеченных квадратов, вертикальную двигательную активность по числу вертикальных стоек и исследовательскую активность по числу обследований (заглядываний) отверстий.

Этанол вводили в дозе 1,5 мг/кг внутрибрюшинно и затем через 10 минут вводили исследуемое вещество в дозе 100 мг/кг внутрь (интрагастрально). Регистрацию поведения в открытом поле осуществляли через 40 минут после введения Этоксидола или Пирацетама. При введении дистиллированной воды или одного этанола (контрольные исследования) регистрацию поведения в открытом поле осуществляли через 40 минут после их введения.

В результате проведенных исследований установлено, что этанол в дозе 1,5 г/кг не изменяет горизонтальную двигательную активность, но в то же время достоверно уменьшает вертикальную двигательную активность. Кроме того, этанол значительно и достоверно уменьшает исследовательскую активность, уменьшая число обследованных отверстий (табл.7).

Этоксидол, вводимый в дозе 100 мг/кг (внутрь) интактным животным, вызывает недостоверное снижение горизонтальной и вертикальной двигательной активности и числа обследованных отверстий.

Этоксидол при введении после этанола восстанавливает нарушения поведения крыс в открытом поле, что выражается в достоверном увеличении сниженных под влиянием этанола вертикальных стоек и числа обследованных отверстий (табл.7). При изучении влияния Пирацетама в дозе 100 мг/кг на эффекты этанола установлено, что Пирацетам, так же как Этоксидол, вызывает достоверное увеличение числа вертикальных стоек.

Таким образом, Этоксидол в дозе 100 мг/кг внутрь обладает способностью восстанавливать вызванные этанолом нарушения двигательной активности и ориентировочно-исследовательского поведения животных в открытом поле, что выражается в достоверном увеличении вертикальных стоек и числа обследованных отверстий.

Таблица 7
Антиалкогольный эффект Этоксидола на способность восстанавливать нарушения поведения, вызываемые этанолом, в тесте открытого поля
Вещество, доза, способ введения	Число горизонтальных перемещений	Число вертикальных перемещений	Число обследованных отверстий
Контроль интактный, дист. вода	24,6±2,02	9,5±1,19	15,7±1,54
Контроль - Этанол (1,5 г/кг, в/б)	29,6±2,8	5,0±0,7*	6,9±1,23*
Этоксидола (100 мг/кг, внутрь)	22,1±7,4	6,8±1,9	9,3±4,7
Этанол (1,5 г/кг, в/б) + Этоксидола (100 мг/кг, внутрь)	32,3±4,9	8,6±1,2#	9,7±1,4#
Этанол (1,5 г/кг, в/б) + Этоксидола (100 мг/кг, внутрь) таблетки	34,0±4,9	7,0±1,9	9,8±1,4#
Пирацетам (100 мг/кг, внутрь)	26,4±8,3	8,7±2,1	12,4±2,1
Этанол (1,5 г/кг, в/б) + пирацетам (100 мг/кг, внутрь)	21,9±7,1	8,2±1,3#	9,5±2,2
* - р<0,05 достоверность различий по t-критерию Стьюдента относительно группы интактных животных;
# - р<0,05 достоверность различий по t-критерию Стьюдента относительно группы животных, получавших этанол.

Пирацетам в дозе 100 мг/кг вызывает только увеличение числа вертикальных стоек. По антиалкогольному действию в тесте открытого поля Этоксидол превосходит Пирацетам.

Нарушение координации движения оценивали в тесте вращающегося стержня (rota rod test) со скоростью оборота - 3 оборота в минуту. При помещении крысы на вращающийся стержень животное в норме, перебирая лапами, удерживается на нем. Животные с побочными эффектами моторного, седативного характера и другими нарушениями не удерживаются на стержне и падают с него. Регистрировали время удерживания на стержне и число животных, упавших с вращающегося стержня в течение 2-х минут.

Установлено, что в контрольной группе крыс, получивших дистиллированную воду, только одно животное из десяти упало со стержня в течение 2-х минут регистрации. Этанол в дозе 1,5 мг/кг резко нарушает у крыс координацию движений: после введения этанола на вращающемся стержне не удержалось 100% животных (табл.8).

Этоксидол в дозе 100 мг/кг внутрь не нарушал координацию движений у крыс на вращающемся стержне. Введение Этоксидола на фоне этанола приводило к восстановлению нарушенной этанолом координации движений. Под влиянием Этоксидола наблюдалось увеличение до 50% числа животных, удержавшихся на стержне (контроль после этанола - 0%) и достоверное увеличение (в 4,6 раза по сравнению с контролем после этанола) времени удерживания на вращающемся стержне.

Таблица 8
Антиалкогольный эффект Этоксидола по способности восстанавливать нарушение координации движений, вызванное этанолом в тесте вращающегося стержня
Вещество, доза, способ введения	Время удерживания на стержне, с	Процент животных, удержавшихся на стержне в течение 120 с
Контроль интактный, дистиллированная вода	103,5±12,02	90
Контроль - Этанол (1,5 г/кг, в/б)	18,5±7,82*	0*
Этоксидол (100 мг/кг, внутрь)	110,7±11,9	80
Этанол (1,5 г/кг, в/б) + Этоксидол (100 мг/кг, раствор)	85,8±16,05#	60#
Пирацетам (100 мг/кг, внутрь)	108,5±17,1	90
Этанол (1,5 г/кг, в/б) + пирацетам (100 мг/кг, внутрь)	58,3±12,8#	50#
* - р<0,05 достоверность различий по t-критерию Стьюдента относительно группы интактных животных.
# - р<0,05 достоверность различий относительно группы животных, получавших этанол.

Пирацетам в дозе 100 мг/кг внутрь не нарушал координацию движений у крыс на вращающемся стержне. Введение Пирацетама на фоне этанола приводило к восстановлению нарушенной этанолом координации движений. Под влиянием Пирацетама наблюдалось повышение до 50% числа животных, не удерживающихся на стержне (контроль после этанола - 0%), и достоверное увеличение (в 3,1 раза по сравнению с контролем после этанола) времени удерживания на вращающемся стержне.

Таким образом, Этоксидол в дозе 100 мг/кг раствор обладает выраженным антиалкогольным действием в тесте вращающегося стержня, что выражается в восстановлении под влиянием препарата нарушенной этанолом координации движений. Под влиянием Этоксидола достоверно увеличивается (в 4,6 раза) время удерживания крыс на вращающемся стержне и увеличивается до 60% число животных, удержавшихся на стержне (контроль с этанолом - 0%). По влиянию на нарушенную этанолом координацию движений Этоксидол превосходит Пирацетам.

Пример 11. Экспериментальное изучение эффективности применения Этоксидола при ишемии мозга (церебропроторная активность).

Для исследования использовали здоровых половозрелых животных (крысы), прошедших карантин 14 дней, в эксперименте использовали животных одной возрастной группы (6 месяцев).

Исследования проведены на 3 группах лабораторных животных:

- контрольная - животные с моделированием ишемии мозга;

- животные с ишемией мозга, которым вводили Этоксидол в дозе 5 мг/кг;

- животные с ишемией мозга, которым вводили Этоксидол в дозе 20 мг/кг.

Этоксидол вводили внутрибрюшино профилактически (за 30 минут до моделирования патологии) и терапевтически (сразу после ишемии).

1. Для создания ишемии головного мозга использовали несколько стандартных моделей [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. / Под ред. Р.У.Хабриева. - 2-е изд., перераб. и доп. - М.: ОАО «Издательство «Медицина», 2005. - 832 с.; Сернов Л.Н., Гацура В.В. Элементы экспериментальной фармакологии. - М., 2000. - 352 с.]:

гравитационные перегрузки в кранио-каудальном положении;

пережатие обеих сонных артерий у белых крыс на 10-15 мин на фоне системной артериальной гипотензии до 40 мм рт.ст.;

в качестве модели ишемии мозга использовали билатеральную окклюзию обеих сонных артерий в течение 24-х часов.

Тотальную ишемию мозга моделировали с помощью гравитационных перегрузок в кранио-каудальном положении. Проведенные исследования показали, что при моделировании гравитационных перегрузок [Гаевый М.Д., Аджиенко Л.М., Макарова Л.М. Ишемия головного мозга, вызванная гравитационной перегрузкой. // Экспер. и клин. фармакол. - 2000. - Т.63, №3, с.63-64] в кранио-каудальном направлении происходит снижение артериального давления в сонной артерии до 0, т.е. у животных имеет место тотальная ишемия мозга. Для моделирования гравитационных перегрузок использовали центрифугу диаметром 2 м. Бодрствующих крыс помещали в специальные контейнеры-пеналы, укрепленные к концам рычагов центрифуги, а мощный двигатель в течение 10 с создавал необходимую степень гравитации. На первом этапе работы проводили исследования по выявлению наиболее эффективных доз Этоксидола, способствующих увеличению выживаемости животных при гипергравитации. С этой целью животным вводили Этоксидол внутрибрюшинно в дозах 5, 10 и 100 мг/кг профилактически в течение 3 суток до моделирования патологии. Величина гравитационных перегрузок в данном случае подбиралась так, чтобы летальность животных в контрольной группе составляла не более 20%. Критерием церебропротективного действия являлось увеличение выживания животных (в %) в сравнении с контрольными животными.

Объемную скорость мозгового кровотока (МК) у крыс регистрировали методом водородного клиренса с помощью платинового электрода, расположенного на поверхности сагиттального синуса в области стока синусов. Метод основан на регистрации скорости вымывания предварительно введенного водорода из мозговой ткани и позволяет определить объемную скорость МК [Гаевый М.Д., Аджиенко Л.М., Макарова Л.М. Ишемия головного мозга, вызванная гравитационной перегрузкой. // Экспер. и клин. фармакол. - 2000. - т.63, №3, с.63-64].

Оценку МК проводили по кривой изменения напряжения водорода на электроде полярографическим способом и рассчитывали по формуле (1) для вычисления органного кровотока в расчете на 100 г мозга.

где Т ¹/₂ - время (в минутах), за которое значение кривой клиренса снижается в два раза по логарифмической шкале;

λ - отношение количества водорода в 1 г ткани к количеству водорода в 1 мл крови.

Для стабилизации дыхания у наркотизированных крыс использовали боксовый дыхательный аппарат.

Определение ауторегуляторных реакций сосудов мозга

Необходимым условием для изучения регуляторных реакций сосудов мозга является моделирование острых сдвигов системного артериального давления (САД). Для этой цели использовали кровопускание, позволяющее снизить САД до любого уровня, а последующая инфузия крови в артериальное русло позволяет поднимать САД до исходного уровня.

Учитывая то, что глубокий наркоз угнетает регуляторные реакции мозговых сосудов, исследования проводились под легким наркозом. Поскольку условием для изучения регуляции мозгового кровотока является стабильный режим оксигенации крови, опыты проводились при искусственном дыхании под контролем pO₂ и рН крови с помощью биологического микроанализатора.

О характере цереброваскулярных реакций судили по показаниям МК и сопротивлении сосудов мозга (ССМ) при различных уровнях перфузионного давления. Оценку регуляторных возможностей системы внутричерепного кровообращения производили на основании коэффициента регуляции, который рассчитывали по формуле (2):

где К - коэффициент регуляции;

R_o и P_o - исходные значения сопротивления (мм рт.ст./100 г/ мин/ мл) и давления (мм рт.ст.) в сосудах мозга;

ΔR и ΔР - изменения сопротивления (мм рт.ст./100 г/ мин/ мл) и давления (мм рт.ст.) в сосудах мозга при воздействии на систему.

При анализе коэффициента регуляции учитывали, что если К=0, регуляция в системе отсутствует, значение К>0 свидетельствует о наличии ауторегуляции, причем при К<1 происходит неполная ауторегуляция, при К=1 - полное регулирование. Когда К>1 - это свидетельствует о гиперкомпенсации, К<0 свидетельствует об извращенных патологических реакциях, приводящих к углублению нарушений, вызванных внешней действующей силой.

ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ЭТОКСИДОЛА НА ВЫЖИВАЕМОСТЬ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ ПРИ ТОТАЛЬНОЙ ИШЕМИИ МОЗГА

Изучение Этоксидола на модели тотальной ишемии головного мозга проведено на модели, вызываемой гравитационными перегрузками в кранио-каудальном положении. Критерием церебропротекторного действия явился % выживания животных. Этоксидол вводили внутрибрюшинно профилактически в дозах 1, 5, 20 и 100 мг/кг (субстанция, таблетки и раствор).

Таблица 9
Влияние Этоксидола на выживаемость животных при гравитационных перегрузках в кранио-каудальном положении
Условие опыта	Выживаемость, %
Контроль	33,3±6,7
Этоксидол 1 мг/кг	50,0±7,1
Этоксидол 5 мг/кг	66,6±6,7*
Этоксидол 20 мг/кг	66,6±6,7*
Этоксидол 100 мг/кг	50,0±7,1

В контрольной серии опытов выживаемость животных составила в среднем 33.3% (табл.9). Введение этоксидола в дозе 5 и 20 мг/кг оказывало положительное влияние на изучаемый показатель, увеличивая выживаемость до 66,6% (табл. 9), т.е. на 33,4% относительно животных контрольной группы. Применение Этоксидола в дозах 1 и 100 мг/кг не приводило к статистически значимому изменению выживаемости крыс в условиях тотальной ишемии головного мозга (табл.9).

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о целесообразности изучения Этоксидола в качестве потенциального церебротпротектора в дозах 5 и 20 мг/кг.

Пример 12. ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ЭТОКСИДОЛА НА МОЗГОВОЙ КРОВОТОК И ЕГО АУТОРЕГУЛЯЦИЮ В ПОСТИШЕМИЧЕСКОМ ПЕРИОДЕ

Для оценки влияния Этоксидола на мозговой кровоток и его ауторегуляцию в условиях острой ишемии мозга использовалась модель циркуляторной ишемии мозга, которая создавалась путем окклюзии обеих сонных артерий у крыс в течение 12 мин с одновременным снижением САД до 40 мм рт.ст.

Контрольные опыты по исследованию изменения динамики показателей мозгового кровотока (МК), системного артериального давления (САД) и сопротивления сосудов мозга (ССМ) проводились на 2-х группах животных. В первой группе находились животные, у которых не моделировалась ишемия, во второй - животные с ишемией, у которых изучали показатели в постишемическом периоде.

В 1 группе крыс на протяжении все