Способ получения лечебно-профилактической добавки

Способ получения лечебно-профилактической добавки

Реферат

Изобретение относится к технологии получения кормовых биологически активных добавок и может быть использовано в биотехнологии, микробиологии и сельском хозяйстве, в частности в кормопроизводстве.

Известен способ производства кормопродукта, включающий приготовление сусла, сбраживание его с получением бражки, перегонку бражки с получением этилового спирта и послеспиртовой барды, выращивание микроорганизмов на послеспиртовой барде с получением их биомассы, разделение биомассы на твердую и жидкую фракции и использование твердой фракции в качестве кормопродукта, отличающийся тем, что на послеспиртовой барде выращивают пары штаммов молочно-кислых и пропионово-кислых бактерий: Lactobacillus plantarum B578/25 и Propionibacterium freudenreichii subsp.shermanii Ас103/12 или Lactobacillus plantarum В 578/25 и Propionibacterium acnes Ac 1450/28 (патент РФ № 2250265, МПК С12Р 7/06, опубл. 20.04.05 г.).

Наиболее близким аналогом (прототипом) является способ получения белково-витаминного корма, заключающийся в инкубации микроорганизмов на питательной среде, содержащей минеральные соли и источник углерода в виде отхода производства по переработке природного сырья или в виде ферментолизата отхода с получением целевого продукта в виде биомассы инкубируемых микроорганизмов, при этом в качестве минеральных солей используют соль кобальта, в качестве отхода производства используют зерно, мукомольные отходы, крахмальные отходы, послеспиртовую барду, пивную дробину, плодовые выжимки или молочную сыворотку, ферментолизат готовят из зерна, мукомольных отходов, крахмальных отходов, пивной дробины или плодовых выжимок, а инкубируют на питательной среде культуры молочно-кислых и пропионово-кислых бактерий (Lactobacillus plantarum 578/25 и Propionibacterium freudenreichii subsp.shermanii 103/12), используемые парами: совместно молочнокислые и пропионово-кислые бактерии (патент РФ № 2243678, МПК А23К 1/06, С12N 1/16, опубл. 10.01.05 г.).

Недостатком указанных аналогов является использование нестандартизованных питательных сред (отходы производства природного сырья), что снижает качество готового продукта в части биологической активности бактерий-пробиотиков, увеличивает время культивирования бактерий (до 48,5 часов). При этом титр бактерий в конечном продукте не указывается. Однако в примере 1 отмечено, что процесс культивирования прекращается в экспоненциальной фазе роста, что косвенно подтверждает низкий титр указанного консорциума бактерий в конечном продукте. Кроме того, известные кормовые добавки в основном исследованы на питательные свойства и не содержат данных о их лечебно-профилактических свойствах.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является создание такого способа, который позволил бы получать добавку в корм с более широким спектром профилактических и лечебных свойств и в более короткие сроки, а также повышающую продуктивность и стрессоустойчивость животных.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе получения лечебно-профилактической добавки, предусматривающей приготовление питательной среды, введение в нее посевных доз штаммов бактерий Lactobacillus plantarum и Propionibacterium freudenreichii с последующим их культивированием до получения готового продукта, согласно изобретению используют штамм бактерий Lactobacillus plantarum ВКПМ В-2347 и штамм бактерий Propionibacterium freudenreichii ВКПМ В-6561, питательная среда содержит пептон мясной ферментативный, глюкозу, дрожжевой экстракт, кукурузно-лактозную питательную среду, кобальт сернокислый, аммоний сернокислый, агар-агар и дистиллированную воду, при следующем содержании компонентов, г/л дистиллированной воды:

Пептон мясной ферментативный	9-11
Глюкоза	29-31
Дрожжевой экстракт	4,5-5,5
Кукурузно-лактозная питательная среда	1,9-2,1
Кобальт сернокислый	0,24-0,26
Аммоний сернокислый	4,5-5,5
Агар-агар	0,9-1,1
Вода дистиллированная	1000 мл

а инкубирование бактерий в питательной среде осуществляют до достижения ими титра не менее 1×10⁶ КОЕ в 1 см³.

Дрожжевой экстракт в виде порошка получен автолизом штаммов дрожжей Sacchoromyces cerevisiae, выращенных на средах на мелассе. Физико-химические характеристики: сухое вещество, азот, амино азот, хлорид натрия, протеин, углеводы, рН 7,0. Средний аминокислотный состав: аланин, аргинин, аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота, глицин, гистидин, изолейцин, лейцин, лизин, метионин, фениланин, пролин, серин, теонин, тирозин, триптофан, Валин. Средний витаминный состав: В1, В2, В5, В6, В8, В9, В12, PP. Минеральный состав: натрий, калий, фосфор, кальций, магний, селен, цинк.

Химический состав пептона мясного ферментативного в виде порошка: рН 6,5-7,0; нерастворимые примеси в %, <7,0; сульфированная зола, % <5,0; истинный пептон, % <70,0; общий азот, % >14,0; аминный азот, % >3,0; свободный белок, оптическая плотность <0,25.

Характеристика штаммов. Lactobacillus plantarum штамм ВКПМ В-2347. Морфологические и тинкториальные свойства: грамположительные неспорообразующие палочки. Образуют на агаризованных питательных средах (МПА) колонии со складчатой поверхностью. Размер клеток, мкм: ширина 0,6-0,8; длина 1,5-3,0. Культуральные свойства: растет на 7% NaCl. Вирулентные и токсигенные свойства: не вирулентен, не токсичен. Условия сохранения штамма на предприятии: на скошенном плотном питательном агаре при (6±2)°С. Условия пассирования штамма: на плотном питательном агаре в чашках Петри при (37±2)°С. Сбраживает фруктозу, лактозу, галактозу, глюкозу (кислота), мальтозу, маннит, рибозу, сахарозу, целлобиозу. Образует DL-формы молочной кислоты. Оптимум рН 5,8-6,0. Оптимум температуры 37°С. Способ, условия и состав среды для размножения штамма: вода дистиллированная - 600 мл, мясная вода - 400 мл, дрожжевой экстракт - 5,0 г, натрия ацетат - 5,0 г, глюкоза - 2,5 г, аммония цитрат - 2,0 г, К₂НРO₄ - 2,0 г, MgSO₄·7Н₂О - 0,2 г, MgO₄·4Н₂O - 0,05 г, Твин 80 - 1 мл, агар - 5,0 г. Штамм не является зоопатогенным, фитопатогенным и не представляет опасности по другим причинам. Штамм депонирован в Центральном музее промышленных микроорганизмов ГосНИИ Генетика (Москва) под номером ВКПМ В-2347 и в НПФ "Исследовательский центр" (Кольцово) под номером IC-762-2-3 (см. табл.1 и 2).

Таблица 1Характеристика культурально-морфологических свойств штаммов
№ п/п	Признак	Propionibacterium freudenreichii штамм IC-763-3-4, ВКПМ В-6561	Lactobacillus plantarum штамм IC-762-2-3, ВКПМ В-2347
1.	Обычный цвет колоний	Не определялся*	Белый
2.	Форма и размер колоний на твердой питательной среде	Не определялся*	Выпуклые, с цельным краем, непрозрачные диаметром (2-5) мм
3.	Форма колоний на полужидкой питательной среде	Колонии, похожие на хвост кометы	Колонии гвоздикообразной формы
4.	Окраска по Граму	Положительная	Положительная
5.	Подвижность	Неподвижны	Неподвижны
6.	Размер клеток	Не определялся	Не определялся
7.	Форма клеток	Кокковидные палочки, иногда раздвоенные. Располагаются одиночно, в парах, в коротких цепочках	Палочки правильной формы, в коротких цепочках
8.	Спорообразование	Отсутствует	Отсутствует
9.	Отношение к кислороду	Факультативные анаэробы	Факультативные анаэробы, слабо растут в аэробных условиях
10.	Оптимальная для роста температура	37°С	30°С
Примечание: "+" - реакция положительная, "-" - реакция отрицательная, * - параметры не определены в связи с отсутствием нужных для роста условий Propionibacterium freudenreichii штамм ВКПМ В-6561. Штамм депонирован в Центральном музее промышленных микроорганизмов ГосНИИ Генетика. Культурально-морфологические особенности штамма: неподвижные палочки размером 0,5-1,5 мкм, иногда образующие короткие изогнутые цепочки, иногда имеют вид кокков. Грамположительные. Неспорообразующие. Аэротолерантные. Сбраживает фруктозу, лактозу, галактозу, глюкозу, маннозу. Главный продукт метаболизма - пропионовая кислота. В клеточной стенке основным компонентом является мезо-ДАН. Оптимум рН 7,0-7,2. Оптимум температуры 37°С.

Таблица 2Характеристика биохимических свойств штаммов
№ п/п	Признак	Propionibacterium freudenreichii штамм IC-763-3-4, ВКПМ В-6561	Lactobacillus plantarum штамм IC-762-2-3, ВКПМ В-2347
1.	Рост в анаэробных условиях	+	+
2.	Рост в аэробных условиях	-	+
3.	Толерантность к разным концентрациям хлорида натрия (наличие роста):
0,5%	+	+
1%	+	+
2%	+	+
3%	+	+
4%	+	+
5%	+	+
6%	+	+
7%	+	+
8%	+	+
9%	+	+
10%	+	+
11%	+	+
12%	-	-
4.	Каталазная активность	-	-
5.	Амилазная активность	+	+
6.	Протеазная активность	-	-
7.	Образование аммиака	-	-
8.	Образование	-	-
	сероводорода
9.	Образование индола	-	-
10.	Утилизация Сахаров и
- спиртов:
- глюкоза	+	+
- мальтоза	-	+
- рамноза	+	+
- лактоза	-	+
- маннит	+	+
- дульцит	+	+
- арабиноза	+	+
- сорбит	+	+
11.	Лецитиназная активность	+	+
12.	Гидролиз эскулина	+	-
13.	В - гемолиз	-	-
Примечание: "+" - реакция положительная, "-" - реакция отрицательная.

Способ, условия и состав сред для длительного хранения штамма - лиофилизация в сепарированном молоке в условиях, лишенных кислорода, и 10% сахарозожелатиновом агаре. Способ, условия и состав среды для размножения штамма - вода дистиллированная - 1000 мл, дрожжевой экстракт - 10,0 г, К₂НРО₄ - 1,0, Na₂HPO₄·2H₂O - 3,0 г, лактат Na (70%) - 40 мл. Растворить все ингредиенты и добавить лактат натрия. Оптимум рН 7,0. Штамм не является зоопатогенным, фитопатогенным и не представляет опасности по другим причинам.

Более подробные результаты изучения культурально-морфологических и биохимических свойств бактерий Propionibacterium freudenreichii штамм IC-763-3-4, ВКПМ В-6561 и Lactobacillus plantarum штамм IC-762-2-3, ВКПМ В-2347 представлены в таблицах 1 и 2.

Способ получения кормовой биологически активной добавки.

Технологический процесс производства биологически активной добавки к корму Велес включает следующие этапы: размножение штаммов - продуцентов на селективных питательных средах, наработка посевного материала, ферментация, приготовление конечной препаративной формы и фасовка.

Культивирование микроорганизмов. Микробные штаммы, полученные из центрального музея промышленных микроорганизмов ВНИИ Генетика или из музея НПФ "Исследовательский центр", в изотоповском шкафу (ШИ-11) боксового помещения, суспендируют в стерильном физиологическом растворе, а затем полученной суспензией засевают селективные питательные среды в соотношении 0,1 см³ суспензии на 10 см³ питательной среды. В качестве селективной питательной среды для лактобактерий используют МРС среду, для пропионово-кислых - среду на основе лактата натрия и сернокислого аммония. Инкубирование лактобактерий проводят при 32°С в течение 2-3 сут, пропионово-кислых - при 37°С в течение 3-5 сут. Проводят от 2 до 5 пассажей культур на селективных питательных средах с постепенным увеличение объема питательной среды.

Питательная среда для лактобактерий состоит из следующих компонентов (на 1000 см³):

Пептон ферментативный сухой ГОСТ 13805	10,0
Дрожжевой экстракт «Sigma»	20,0 см3
Глюкоза безводная ГОСТ 6038	20,0 г
Твин-80 ТУ 6-14-938	1,0 см3
Калий фосфорнокислый двузамещенный ГОСТ 2493	2,0 г
Уксуснокислый натрий ГОСТ 2080	5,0 г
Триаммония цитрат	2,0 г
Сульфата магния	0,2 г
Четырехводный сульфат марганца	50,0 мг
Агар микробиологический ГОСТ 17206	950,0 мг
Мясная вода	1000,0 см3

Питательная среда для пропионово-кислых бактерий состоит из следующих компонентов (на 1000 см³):

Лактат натрия ТУ 9199-060-00334557	40,0 г
Аммоний сернокислый "ч" ГОСТ 3769	10,0 г
Дрожжевой экстракт «Sigma»	5,0 г
Агар микробиологический ГОСТ 17206	950,0 мг

На данном этапе проводят микробиологический и микроскопический анализ штаммов, то есть соответствие их культурально-морфологических признаков паспортным данным.

Штаммы лакто- и пропионово-кислых бактерий на жидких питательных средах хранят в холодильнике при 4-6°С. Для наработки кормовой добавки они могут быть использованы в течение месяца.

Далее нарабатывают кормовую добавку в виде консорциума биомасс Lactobacillus plantarum штамм ВКПМ В-2347 и Propionibacterium freudenreichii штамм ВКПМ В-6561:

Для этого готовят питательную среду следующего состава

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72	1000
Глюкоза	30
Пептон мясной ферментативный	10
Дрожжевой экстракт	5
Питательная среда ГМК	2
Кобальт сернокислый	0,25
Аммоний сернокислый	5
Агар-агар	1.

Для получения кормовой добавки во флаконах среду разливают в градуированные флаконы вместимостью 500 мл по 300 мл. Из пробирок с микроорганизмами (Lactobacillus plantarum штамм ВКПМ В-2347 и Propionibacterium freudenreichii штамм ВКПМ В-6561), заложенными на хранение, переносят над пламенем горелки 9 мл культуры в каждый флакон с питательной средой. Флаконы помещают на стеллаж в термальной комнате и выращивают клетки при температуре (37±1)°С стационарно в течение 18-20 ч до получения титра лакто- и пропионово-кислых бактерий в количестве не менее 1×10⁶ КОЕ в 1 см³.

Для получения кормовой добавки в бутылях готовят питательную среду выше приведенного состава на 40 000 см³. Готовую среду разливают в стерильные стеклянные бутыли по (5000±0,1) см³. После стерилизации бутыли со средой охлаждают до температуры (37±2)°С. Каждую бутыль засевают по 300 см³ (каждого штамма в 1 бутыль) суспензии из флаконов с Lactobacillus plantarum штамм ВКПМ В-2347 и Propionibacterium freudenreichii штамм ВКПМ В-6561. Инкубируют при температуре (37,0±0,5)°С в течение 20-24 ч до получения титра лакто- и пропионо-вокислых бактерий в количестве не менее 1×10⁶ КОЕ в 1 см³.

Лактобактерии, в частности Lactobacillus plantarum, синтезируют широкий спектр веществ, которые ингибируют рост других бактерий. К этим веществам относятся конечные продукты метаболизма, такие как органические кислоты (молочная и уксусная), перекись водорода и соединения, известные как бактериоцины: лизоцин, лектролин, низин, лактоцидин, ацидофилин. Бактериоцины - белки, которые продуцируются некоторыми микроорганизмами, и оказывают губительное действие на близкородственные микроорганизмы. В общем, бактериоцины имеют меньший спектр активности, чем антибиотики, но действие их более выражено.

Пропионово-кислые бактерии, в частности Propionibacterium freudenreichii принадлежат к резидентным видам симбиотической микрофлоры кишечного тракта животных. Наибольшее их количество обитает в рубце жвачных животных. В процессе их жизнедеятельности они способны снижать избыточную кислотность силосов, предотвращая тем самым возникновение ацидоза у животных. Продуктами метаболизма пропионовых бактерий служат пропионовая и уксусная кислота, которые хорошо усваиваются животными. Кроме того, пропионовая кислота обладает ярко выраженными бактерицидными и фунгицидными свойствами.

Скармливание культур пропионово-кислых бактерий или препаратов на их основе приводит к элиминации патогенной микрофлоры и увеличению количества лакто-, бифидо- и пропионово-кислых бактерий. Например, дача препарата пропиацин поросятам в течение 7-10 дней 1 раз в день из расчета 0,5% от массы корма приводила к снижению содержания кишечной палочки на 17,1-20,1%, других видов условно-патогенным микроорганизмов на 20,1-24,1%. При этом было отмечено увеличение количества молочнокислых и пропионово-кислых бактерий. Тенденция к уменьшению условно-патогенной и гнилостной микрофлоры сохранялась на 28 и 61 день развития поросят. Животные имели хороший аппетит, интенсивность их роста была выше по сравнению с контролем.

Одной из главных отличительных особенностей пропионово-кислых бактерий является их способность продуцировать высокое количество витаминов группы В, преимущественно В12. Использование биомассы пропионовых бактерий в качестве источника витамина В12 не уступает по эффективности синтетическим аналогам. Было отмечено увеличение ежесуточных привесов и снижение затрат корма 1 кг прироста поросят. Наиболее оптимальные дозировки биомассы пропионовых бактерий в пересчете на витамин В12 составляли 10-40 мкг на 1 кг живой массы. Аналогичные результаты по использованию биомассы бактерий в качестве источника витамина В12 были получены на цыплятах. При этом привес живой массы увеличился (1,1-6,9%) по сравнению с коммерческим препаратом В12.

Участие пропионовых бактерий в процессах пищеварения также связано с их высокой ферментативной активность. Например, некоторые штаммы обладают амилазной, протеолитической активностью; способны усваивать широкий спектр углеводов.

Пример 1. Влияние кормовой добавки Велес на резидентную микрофлору кишечного тракта животных, эффективность кормовой добавки при лечении дисбактериозов

Изучение влияния кормовой добавки на видовой состав микрофлоры желудочно - кишечного тракта животных проводили в лабораторных условиях на клинически здоровых белых беспородных мышах (3 серии опытов по 100 животных в каждом); цыплятах-бройлерах кросса «Кобб»: 3 серии опытов - по 100 цыплят в каждом; в домашних и клинических условиях на собаках: общее количество животных различных пород и полов - 120 особей; телятах: в условиях животноводческих комплексов, ферм и подворий - 312 животных; поросятах: общее количество животных 450 особей. Кормовую добавку скармливали индивидуальным способом из расчета 0,5 см³ на 1 кг живого веса 3 раза в день.

В ходе работы было показано, что скармливание кормовой добавки Велес приводит к нормализации видового состава микрофлоры желудочно-кишечного тракта животных. Так, в экспериментах на белых беспородных мышах было установлено, что скармливание кормовой добавки приводит к 10-100-кратному увеличению количества лакто- и бифидобактерий. При этом не было отмечено изменения численности штаммов кишечной палочки, протей, грибов, стафилококков и стрептококков. Эффект от применения кормовой добавки сохранялся в течение месяца после прекращения ее скармливания, что, вероятно, свидетельствует о способности лакто- и пропионово-кислых бактерий, входящих в состав препарата, приживаться в желудочно-кишечном тракте животных. Аналогичные результаты были получены при скармливании кормовой добавки другим видам животных: поросятам, цыплятам, телятам, собакам (табл.3).

Таблица 3.Влияние кормовой добавки на резидентную микрофлору ЖКТ
Группы микроорганизмов	Количество микроорганизмов в зависимости от сроков продолжительности скармливания кормовой добавки, КОЕ/г экскрементов
До начала	Через 5 дней	Через 10 дней	Через 20 дней	Через 40 дней
Мыши
Патогенные энтеробактерии	0	0	0	0	0
Кишечная палочка с нормальной ферментативной активностью	9,1×105	8,7×105	9,0×105	8,6×105	8,3×105
Кишечная палочка с пониженной ферментативной активностью (лактозонегативные)	8,8×102	1,3×103	0,9×103	7,2×102	0,8×103
Кишечная палочка с гемолитической активностью	0	0	0	0	0
Протеи	5,4×102	4,2×102	6,5×102	5,6×102	8,3×102
Другие условно-патогенные бактерии	7,0×102	3,0×102	8,0×102	6,0×102	4,0×102
Стафилококки плазманегативные	8,1×102	7,4×102	9,0×102	8,8×102	7,3×102
Стрептококки гемолитические	1,2×106	0,9×106	0,7×106	0,6×106	1,0×106
Грибы	9,2×102	8,3×102	8,2×102	7,9×102	7,3×102
Клостридии	0	0	0	0	0
Лактобактерии	0,2×107	3,0×107	5,1×107	4,5×107	3,5×107
Бифидобактерии	1×107	100,0×107	200,4×107	250,7×107	220,5×107
Телята
Патогенные энтеробактерии	0	0	0	0	0
Кишечная палочка с нормальной ферментативной активностью	5,1×106	8,1×106	6,2×106	6,5×106	4,1×106
Кишечная палочка с пониженной ферментативной активностью (лактозонегативные)	3,3×106	5,8×105	5,6×105	4,9×105	3,7×105
Кишечная палочка с гемолитической активностью	0	0	0	0	0
Протеи	0	0	0	0	0
Другие условно-патогенные бактерии	0	0	0	0	0
Стафилококки плазманегативные	0	0	0	0	0
Стрептококки гемолитические	5,0×104	6,1×104	4,8×104	4,7×104	4,2×104
Грибы	0	0	0	0	0
Клостридии	0	0	0	0	0
Лактобактерии	1,2×107	8,4×107	8,1×107	7,9×107	8,2×107
Бифидобактерии	8,3×107	98,0×107	111,1×107	114,2×107	122,6×107
Поросята
Патогенные энтеробактерии	0	0	0	0	0
Кишечная палочка с нормальной ферментативной активностью	3,6×105	3,4×105	4,1×105	3,8×105	4,2×105
Кишечная палочка с пониженной ферментативной активностью (лактозонегативные)	3,5×103	3,6×103	3,7×103	3,8×103	4,1×103
Кишечная палочка с гемолитической активностью	0	0	0	0	0
Протеи	6,5×103	0	0	0	0
Другие условно-патогенные бактерии	0	0	0	0	0
Стафилококки плазманегативные	0	0	0	0	0
Стрептококки гемолитические	4,4×104	4,9×104	4,7×104	4,6×104	3,9×10
Грибы	0	0	0	0	0
Клостридии	0	0	0	0	0
Лактобактерии	0,8×106	6,0×107	8,0×107	8,1×107	9,0×107
Бифидобактерии	0,8×108	9,0×108	62,1×108	50,2×108	32,6×l08
Цыплята
Патогенные энтеробактерии	0	0	0	0	0
Кишечная палочка с нормальной ферментативной активностью	1,1×105	2,1×105	1,5×105	2,3×105	2,7×105
Кишечная палочка с пониженной ферментативной активностью (лактозонегативные)	2,9×106	3,1×106	2,8×106	3,2×106	2,9×106
Кишечная палочка с гемолитической активностью	0	0	0	0	0
Протеи	4,8×104	3,9×102	4,7×10	5,1×102	5,1×102
Другие условно-патогенные бактерии	0	0	0	0	0
Стафилококки плазманегативные	0	0	0	0	0
Стрептококки гемолитические	1,1×106	1,9×106	2,0×106	1,7×106	1,6×106
Грибы	0	0	0	0	0
Клостридии	0	0	0	0	0
Лактобактерии	0,8×106	6,0×107	8,0×107	8,1×107	9,0×107
Бифидобактерии	0,8×108	9,0×108	62,1×108	50,2×108	32,6×108

Собаки
Патогенные энтеробактерии	0	0	0	0	0
Кишечная палочка с нормальной ферментативной активностью	2,7×105	2,1×105	3,1×105	3,0×105	3,2×105
Кишечная палочка с пониженной ферментативной активностью (лактозонегативные)	3,1×104	3,0×104	2,8×104	2,9×104	3,0×104
Кишечная палочка с гемолитической активностью	0	0	0	0	0
Протеи	0	0	0	0	0
Другие условно-патогенные бактерии	0	0	0	0	0
Стафилококки плазманегативные	0	0	0	0	0
Стрептококки гемолитические	0	0	0	0	0
Грибы	0	0	0	0	0
Клостридии	0	0	0	0	0
Лактобактерии	0,5×107	5,5×107	6,7×107	6,0×107	6,9×107
Бифидобактерии	1,2×108	11,2×108	12,3×108	14,8×108	15,7×108

Изучено влияние кормовой добавки на видовой состав микрофлоры животных в зависимости от нормы расхода. Опыты были выполнены на цыплятах различных пород в 5 повторах. В каждой группе не менее 1000 птиц.

Установлено, что влияние кормовой добавки на видовой состав микрофлоры проявляется в дозировках, начиная от 0,1 см³ на 1 кг живой массы при групповом способе дачи. Повышение нормы расхода более 0,5 см³ не приводит к увеличению эффекта (табл.3).

На чертеже представлен график влияния кормовой добавки Велес на количество лакто-, бифидо- и пропионовых бактерий у цыплят в зависимости от нормы ее расхода.

В ходе работы была изучена эффективность кормовой добавки при лечении дисбактеризов животных. С этой целью в животноводческих хозяйствах и на птицефабриках были выбраны животные, у которых выявлено пониженное содержание лакто- и бифидобактерий.

В опытах были задействованы 3200 цыплят различных кроссов и 410 телят различных пород, 450 поросят различных пород. Кормовую добавку задавали с питьевой водой из расчета 0,1, 0,2, 0,3, 0,4 и 0,5 см³ на 1 кг живого веса. Продолжительность дачи препарата - 10 дней, кратность - от 1 до 3 раз в день.

Было установлено (табл.4 и 5), что скармливание кормовой добавки приводит к резкому увеличению количества лакто- и бифидобактерий. Эффективность кормовой добавки напрямую зависимосит от дозировки и кратности применения. Максимальная эффективность была получена при 3-кратном использовании кормовой добавки по 0,5 см³ на 1 кг живого веса. Снижение количества лакто- и бифидобактерий не было зарегистрировано в течение 2 месяцев после прекращения скармливания кормой добавки, что свидетельствует о способности штаммов, входящих в состав кормовой добавки, приживаться в желудочно-кишечном тракте животных.

Таблица 4.Влияние кормовой добавки Велес на содержание лактобактерий в желудочно-кишечном тракте цыплят в зависимости от кратности и нормы расхода препарата (Количество лактобактерий, КОЕ/г экскрементов)
Кратность, раз в сутки	Дозы препарата, см3 на кг живого веса
0,1	0,2	0,3	0,4	0,5
Цыплята
1	90,3×104	110,1×104	930,2×104	2550,6×104	3560,3×04
2	100,7×104	150,1×104	3500,3×104	1950,7×104	9700,5×104
3	250,8×104	1070,3×104	1480,8×104	3207,3×104	10500,7×104
Поросята
1	10,5×104	524,3×104	327,6×104	2590,1×104	4000,4×104
2	50,3×104	375,2×104	2567,1×104	5240,3×104	6500,5×104
3	150,7×104	1800,7×104	3195,5×104	6700,7×104	8500,6×104
Телята
1	150,2×104	54,4×104	274,4×104	3500,3×104	4000,2×104
2	300,5×104	250,5×104	2579,6×104	4500,2×104	4980,7×104
3	900,4×104	1980,4×104	3256,7×104	5439,1×104	5400,1×104

Таблица 5.Влияние кормовой добавки Велес на содержание бифидобактерий в желудочно-кишечном тракте цыплят в зависимости от кратности и нормы расхода препарата (Количество бифидобактерий, КОЕ/г экскрементов)
Кратность, раз в сутки	Дозы препарата, см3 на кг живого веса
0,1	0,2	0,3	0,4	0,5
Цыплята
1	142,2×105	306,3×105	92,1×106	306,2×106	2090,3×106
2	546,3×105	905,4×105	450,2×106	1500,3×106	5999,1×106
3	1650,2×105	550,1×106	2780,2×106	7754,2×106	9006,3×106
Телята
1	120,1×106	127,3×106	92,5×106	306,4×106	809,3×106
2	37,3×106	305,4×106	450,3×106	1500,3×106	5999,2×106
3	212,5×106	455,6×106	2780,2×106	7754,1×106	9006,6×106
Поросята
1	164,1×106	274,2×106	587,7×106	1200,4×106	3100,3×106
2	247,3×106	684,3×106	950,5×106	1700,5×106	6600,6×106
3	594,4×106	1050,1×106	1587,3×106	2788,3×106	8500,7×106

Пример 2. Эффективность применения кормовой добавки Велес при кормлении лактирующих коров

Было изучено влияние кормовой добавки на молочную продуктивность коров. Испытания препарата проводили в различных условиях содержания коров: животноводческих комплексах, на фермах и частных подворьях. Породы животных были различные, в том числе и беспородные. Общее количество животных, задействованных в опыте, составило 940 коров различного возраста. Препарат задавали с водой из расчета 0,1, 0,2, 0,3, 0,4 и 0,5 см³ на 1 кг живого веса по 2 раза в день на одну корову.

Испытания показали, что дача препарата в течение 10 дней приводит к достоверному повышению удоев. В целом удои в опытной группе животных были на 1,5-2,8 л больше по сравнению с удоями в контрольной группе. При этом жирность молока увеличилась с 3,31-3,48% до 3,69-4,1%. Результаты эксперимента представлены в табл.6.

Таблица 6.Влияние кормовой добавки на удои молока у коров.
Показатели	Контроль	Опыт, расход препарата на кг живого веса
0,1	0,2	0,3	0,4	0,51
Начало опыта
Среднесуточные удои молока фактической жирности, кг	32,2	31,3	30,9	31,8	32,4	32,0
Содержание жира, %	3,46	3,31	3,43	3,34	3,48	3,40
Конец опыта
Среднесуточные удои молока фактической жирности, кг	31,3	33,7	33,1	34,0	34,2	33,9
Содержание жира, %	3,50	3,69	3,72	3,82	4,10	3,72

В другой серии экспериментов было изучено влияние кормовой добавки на удои молока, а также расходы кормов при производстве 1 кг молока (табл.7). Эксперименты также проводили на черно-пестрой породе коров в условиях промышленного содержания. Экспериментальные и контрольные группы животных состояли из 25 животных. Повторность эксперимента 4-х кратная. Условия содержания и кормления животных были одинаковыми в контрольной и опытных группах. Препарат задавали с питьевой водой из расчета 0,1 см³ на 1 кг живого веса по 1 и 2 раза в день на протяжении 10 дней.

Таблица 7.Влияние кормовой добавки на удои молока, а также расходы кормов при производстве 1 кг молока
Показатели	Контроль	Опыт, кратность дачи препарата в сутки
1 раз	2 раза
Среднесуточное потребление сухого вещества, кг	21,9	21,8	21,4
Среднесуточное потребление кормовых единиц	18,9	18,7	18,6
Ежедневный расход обменной энергии, МДж	234	235	231
Удои натурального молока, кг	2490	2629	2532
Содержание белка в молоке, %	4,10	4,11	4,09
Суточный удой молока 4%-ной жирности	25,7	27,1	26,1
Затраты на 1 кг молока 4%-ной жирности сухого вещества, г	0,84	0,80	0,82
Затраты на 1 кг молока 4%-ной жирности кормовых единиц	0,74	0,69	0,71
Затраты на 1 кг молока 4%-ной жирности обменной энергии, МДж	9,11	8,67	8,85

Таким образом, использование кормовой добавки Велес способствует увеличению продуктивных показателей коров в период лактации. При этом под влиянием кормовой добавки происходит существенное снижение затрат на производство единицы молока. Увеличение удоев и содержания жира в молоке, вероятно, связано с положительным влиянием кормовой добавки на процесс пищеварения и как следствие на обмен веществ в организме коров.

Пример 3. Влияние кормовой добавки Велес на иммунологические показатели организма животных

Эксперименты проводили в условиях вивария НПФ ИЦ. Объектом исследования были цыплята-бройлеры 7-дневного возраста кросса «Смена». Для эксперимента отбирали по 400 цыплят и содержали в одинаковых условиях. В возрасте 20 дней цыплят переводили на комбикорм пшенично-ячменного типа. Цыплят делили на четыре группы по 100 особей в каждой. Первая группа не получала кормовую добавку (контроль), вторая и третья получала кормовую добавку из расчета 0,1, 0,3 и 0,5 см³ на 1 кг живого веса. Продолжительность скармливания препарата составляла 10 дней.

В ходе работы было установлено, что скармливание кормовой добавки приводит к статически достоверному повышению уровня лизоцима, бета-лизинов и бактерицидной активности крови цыплят. После прекращения скармливания кормовой добавки было зарегистрировано постепенное снижение уровня изучаемых показателей до уровня контроля. Максимальное влияние кормовой добавки на иммунологические показатели крови цыплят было отмечено при норме ее расхода 0,5 см³ на 1 кг живого веса. Следует также отметить, что влияние кормовой добавки сохраняется около месяца после прекращения ее скармливания. Результаты эксперимента представлены в табл.8.

Таблица 8.Влияние кормовой добавки на иммунологические показатели организма цыплят
Показатели	Контроль	Опыт, дозы препарата, мл на кг живого веса
0,1	0,3	0,5
До начала скармливания препарата
Лизоцим, мкг/мл	3,2	3,3	3,1	3,3
Бета-лизины, %	25,4	26,2	25,2	26,3
Бактерицидность, %	52,7	53,1	52,8	52,7
Через 10 дней после начала скармливания препарата
Лизоцим, мкг/мл	3,3	3,5	3,7	4,0
Бета-лизины, %	27,1	34,1	36,2	38,8
Бактерицидность, %	53,1	58,4	59,8	61,9
Через 30 дней после начала скармливания препарата
Лизоцим, мкг/мл	3,2	3,6	3,5	3,5
Бета-лизины, %	26,4	31,8	32,9	32,4
Бактерицидность, %	52,8	59,7	58,4	57,9
Через 50 дней после начала скармливания препарата
Лизоцим, мкг/мл	3,3	3,4	3,2	3,3
Бета-лизины, %	25,9	27,9	27,8	28,1
Бактерицидность, %	52,7	54,4	53,7	53,6

Таким образом, применение кормовой добавки повышает неспецифическу