Способ нормализации уровня 2 антиплазмина при анемии у новорожденных телят и поросят

Способ нормализации уровня 2 антиплазмина при анемии у новорожденных телят и поросят

Реферат

Изобретение относится к биологии и ветеринарии, а именно к гематологии.

Аналогов предлагаемого способа нормализации уровня α₂ антиплазмина у новорожденных телят и поросят с анемией не существует.

Имеются сведения о применении при анемии у телят и поросят ферроглюкина (Внутренние незаразные болезни сельскохозяйственных животных. Под ред. В.М.Данилевского. М.: «Агропромиздат», 1991. - 576 с.).

В качестве эффективных стимуляторов жизнедеятельности растущего организма в современной ветеринарии применяются фоспренил - препарат на основе фосфатов полипренолов, получаемых из хвои (Деева А.В., Салахова З.А., Лобова Т.П. и др. Повышение сохранности и продуктивности поросят при использовании фоспренила и гамавита. // Ветеринария. - 2006. - №4. - с.13-15), и крезацин (производный ароксиалкилкарбоновых кислот). Крезацин представляет собой белый кристаллический порошок, хорошо растворимый в воде, со слабым специфическим запахом, сладковато-горьковатого вкуса. Он проявляет эффективное стимулирующее действие на живые организмы, повышая выживаемость животных в неблагоприятных и экстремальных условиях, стимулируя или нормализуя жизненные процессы (Байматов В.Н., Латыпов М.М. Влияние крезацина на состояние птицы. Ветеринария, 2006, №11, с.49-51).

Однако никогда ранее лечебный комплекс, состоящий из ферроглюкина, фоспренила и крезацина не применялся у новорожденных телят и поросят с анемией с целью нормализации уровня α₂ антиплазмина.

Целью изобретения является повышение эффективности коррекции уровня α₂ антиплазмина у новорожденных телят и поросят с анемией.

Сущность заявляемого способа заключается в том, что для оптимизации уровня α₂ антиплазмина новорожденным телятам и поросятам с анемией назначаются ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 10 суток, фоспренил внутримышечно, двоекратно в разных шприцах в разные точки, первый раз 0,07 мл/кг одновременно с препаратом железа, второй раз в дозе 0,07 мл/кг через шесть дней после первой инъекции ферроглюкина и крезацин 4 мг/кг при включении его в схему выпаивания на 10 суток.

Способ позволяет нормализовать уровень α₂ антиплазмина у новорожденных телят и поросят с анемией через 3 суток после завершения лечения, переводя его на уровень, близкий к таковому для здоровых телят и поросят. При соблюдении рекомендаций заявляемого способа возможно поддержание в последующем активности уровня α₂ антиплазмина в оптимальном состоянии, что позволит у новорожденных телят и поросят существенно снизить риск тромботических осложнений, оздоровить стадо, увеличить привесы, снизить падеж и повысить качество и объем получаемой мясной продукции.

Заявляемый способ осуществляется следующим образом.

Для диагностики у новорожденных телят и поросят с анемией нарушения уровня α₂ антиплазмина проводится его оценка по следующей методике (Баркаган З.С., Момот А.П. Основы диагностики нарушений гемостаза. М., 1999).

α₂ антиплазмин (α₂-АП) является наиболее важным ингибитором фибринолиза, в присутствии которого происходит быстрое формирование необратимого, лишенного активности комплекса "плазмин-α₂-АП". Метод основан на определении способности α₂-АП исследуемого образца плазмы инактивировать добавляемый в плазму очищенный плазмин. Содержание остаточного плазмина определяется по степени гидролиза хромогенного субстрата, специфичного по отношению к этому ферменту.

α₂-АП_{образец}+плазмин _{избыток}=[α₂-АП-плазмин]+плазмин _{остаток}

Используются следующие реактивы: 1. Плазмин свиньи или быка, лиофилизированный, соответственно. Разводится в буфере до концентрации 0,1 СТА Е/мл. 2. Хромогенный субстрат D-Norvalylcyclohexylalanillysil-p-nitroanilide. Разводится в дистиллированной воде до концентрации 3 ммоль/л. 3. Раствор буфера: KH₂PO₄ (100 ммоль/л), NaCl 9 г/л, глицерин (250 г/л), рН 7,5.

Для выполнения исследования необходима также стандартная или контрольная нормальная плазма с известным содержанием α₂-АП или пулированная (взятая не менее чем от 10 здоровых телят или поросят соответственно), активность α₂-АП в которой принимается за 100%.

Применяется следующее оборудование: спектрофотометр с термостатируемой кюветой. Температура реакции +37°С. Используемая длина волны 405 нм. Ширина оптического пути кюветы -1 см.

Материалом для исследования служит цитратная бедная тромбоцитами плазма.

Предварительно все смешиваемые реагенты подогреваются до +37°С. Ход определения приводится в таблице.

Таблица.
Схема определения уровня α2 антиплазмина
Последовательность операций	Исследуемый образец	Контроль(плазмин)
1. Внести в кювету или пробирку:
исследуемую плазму	20 мкл (0,02 мл)	-
физиологический (0,15 М) раствор хлорида натрия	-	20 мкл (0,02 мл)
раствор плазмина	1,0 мл	1,0 мл
2. Перемешать и инкубировать при +37°С в течение 1 мин
3. Добавить хромогенный субстрат и включить секундомер	0,1 мл	0,1 мл
В течение 30 сек учитывают показатели поглощения и одновременно включают секундомер. Спустя 60 и 120 сек повторно определяют показатели поглощения.

Вычисляют скорость изменения поглощения за 1 мин (Δ А/мин), которая пропорциональна активности α₂-АП. Для этого рассчитывают разницу поглощения при 405 нм между 0 и 60 секундами инкубации, а также между 60 и 120 секундами. Определяют среднюю величину из двух показателей Δ А/мин.

Каждая серия анализов требует не менее одного значения для раствора плазмина (Δ А/мин _{плазмин}) и одного референтного значения, определяемого с использованием контрольной нормальной плазмы (Δ А/мин _{контроль}) с известным значением α₂-АП. Эти значения используют для вычисления внутрилабораторного коэффициента пересчета (К_п):

Содержание α₂-АП в исследуемом образце плазмы в виде % от нормы в дальнейшем вычисляется по формуле:

α₂-АП_{образец}(% от нормы) = Кп×(Δ А/мин _{плазмин} - Δ А/мин образец)

В норме уровень α₂-АП в плазме крови составляет 80-120%.

Снижение активности α₂-АП может быть определено при активации фибринолиза, его повышение сопряжено с риском тромбоза.

При диагностике у новорожденных телят и поросят с анемией повышения α₂-АП необходимо назначение лечения согласно заявленному способу.

Пример 1

У новорожденного поросенка с анемией №23 была взята кровь и исследована по изложенной выше схеме.

У данного поросенка отмечалось нарушение эритропоэза с признаками снижения уровня содержания железа в его организме, сопровождаясь изменением показателей крови. Так, количество гемоглобина у него составляло 77,0 г/л, эритроцитов 3,84×10¹²/л, сидероцитов 0,8% при уровне железа в сыворотке 11,0 мкмоль/л с повышением общей железосвязывающей способности сыворотки крови до 72,4 мкмоль/л.

При обследовании у поросенка была выявлена повышенная активность α₂-АП (146%). Животному был назначен ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 10 суток, фоспренил внутримышечно, двоекратно в разных шприцах в разные точки, первый раз 0,07 мл/кг одновременно с препаратом железа, второй раз в дозе 0,07 мл/кг через шесть дней после первой инъекции ферроглюкина и крезацин 4 мг/кг при включении его в схему выпаивания на 10 суток.

Через 3 суток после окончания лечения у поросенка нормализовалась красная кровь. Так, количество гемоглобина у него возросло до 125,0 г/л, эритроцитов - до 5,24×10¹²/л, сидероцитов до 7,9% при увеличении железа в сыворотке до 24,4 мкмоль/л и снижении общей железосвязывающей способности сыворотки крови до 32,0 мкмоль/л. У поросенка была достигнута полная нормализация активности α₂-АП (110%).

Наблюдение за поросенком в последующем зарегистрировало стабильность достигнутого уровня α₂-АП, составившего через 1 месяц после окончания лечения (112%).

Пример 2

У новорожденного теленка с анемией №34 была взята кровь и исследована по изложенной выше схеме.

У данного теленка отмечалось нарушение эритропоэза с признаками снижения уровня содержания железа в его организме, сопровождаясь изменением показателей крови. Так, количество гемоглобина у него составляло 80,9 г/л, эритроцитов 4,02×10¹²/л, сидероцитов 1,1% при уровне железа в сыворотке 11,9 мкмоль/л с повышением общей железосвязывающей способности сыворотки крови до 67,4 мкмоль/л.

При обследовании у теленка была выявлена повышенная активность α₂-АП (139%). Животному был назначен ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 10 суток, фоспренил внутримышечно, двоекратно в разных шприцах в разные точки, первый раз 0,07 мл/кг одновременно с препаратом железа, второй раз в дозе 0,07 мл/кг через шесть дней после первой инъекции ферроглюкина и крезацин 4 мг/кг при включении его в схему выпаивания на 10 суток.

Через 3 суток после окончания лечения у теленка нормализовалась красная кровь.

Так, количество гемоглобина у него возросло до 129,0 г/л, эритроцитов - до 5,40×10¹²/л, сидероцитов до 8,2% при увеличении железа в сыворотке до 28,0 мкмоль/л и снижении общей железосвязывающей способности сыворотки крови до 32,1 мкмоль/л.

У теленка была достигнута полная нормализация активности α₂-АП (92%).

Наблюдение за теленком в последующем не зарегистрировало отрицательной динамики α₂-АП. Через 1 месяц α₂-АП составлял 93%.

Использование предлагаемого способа оптимизации активности α₂-АП в ветеринарии поможет избежать сосудистых нарушений у новорожденных телят и поросят с анемией, оздоровить стадо, снизить падеж, увеличить привесы, повысить качество и объем получаемой мясной продукции и получать в последующем от этих телят и поросят здоровое потомство.

Способ нормализации уровня α₂ антиплазмина у новорожденных телят и поросят с анемией, предусматривающий применение ферроглюкина по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 10 сут, фоспренила внутримышечно, двоекратно в разных шприцах в разные точки, первый раз 0,07 мл/кг одновременно с препаратом железа, второй раз в дозе 0,07 мл/кг через шесть дней после первой инъекции ферроглюкина и крезацина 4 мг/кг при включении его в схему выпаивания на 10 сут.