Способ диагностики хронического инфекционно-воспалительного поражения сосудов центральной нервной системы, ассоциированного с хламидийной инфекцией

Способ диагностики хронического инфекционно-воспалительного поражения сосудов центральной нервной системы, ассоциированного с хламидийной инфекцией

Реферат

Изобретение относится к области медицины, а именно к неврологии, сосудологии и инфектологии, и может быть использовано для определения инфекционно-воспалительных заболеваний сосудов с преимущественным поражением центральной нервной системы, а также для оценки эффективности и коррекции тактики проводимой терапии.

Поражение нервной и сосудистой систем хламидийной инфекцией встречается чаще, чем диагностируется, что обусловлено хроническим течением процесса. Известно, что хламидии могут инфицировать сосудистую стенку, нервную ткань и принимать активное участие в развитии воспалительно-демиелинизирующих процессов, а также и в развитии воспалительных поражений кровеносных сосудов. Различные ассоциации хламидии между собой и с другими микроорганизмами повышают их адаптацию к внутриклеточному существованию и усиливают патогенные свойства всех ассоциантов.

Известен способ диагностики инфекционно-воспалительного системного поражения сосудов, ассоциированного с Chlamydia trachomatis по выявлению антител к хламидиям - к виду Chlamydia trachomatis в сыворотке крови, клинико-лабораторным признакам воспалительного процесса и клиническим проявлениям системного васкулита с поражением кожи, опорно-двигательной системы и почек, см. Cacoub P. et al. Post-infectious systemic vasculitis: recovery without corticotherapy // J Mal Vase 1997 Mar; 22(1) P.29-34. Способ позволяет диагностировать клинически проявляющийся системный воспалительный процесс, ассоциированный с Chlamydia trachomatis. Но способ не позволяет выявить воспалительное поражение сосудов (васкулит), ассоциированное с другими видами хламидий, имеющее вялотекущее хроническое течение, а также с преимущественным поражением сосудов центральной нервной системы, т.к антитела к хламидиям появляются в сыворотке крови при наличии локализованной хламидийной инфекции в различных органах.

Известен способ диагностики хронического инфекционно-воспалительного поражения сердечно-сосудистой системы, ассоциированного с Chlamydia pneumonia при выявлении в сыворотке крови специфических антител иммуноглобулинов (Ig) A, M, G к хламидиям к виду Chlamydia pneumonia и IgG к вирусам группы герпеса; при наличии в сыворотке крови клинико-лабораторных признаков воспалительного процесса, определенных показателей степени перикисного окисления липидов; и при определении маркеров васкулита крупных сосудов сонографией и ультразвуковым дуплексным сканированием по известным методикам, см. автореферат диссертации на соискание д.м.н. Квантелиани Т.Г. «Клинико-лабораторные корреляты повреждения сердечно-сосудистой системы при хроническом бактериально-вирусном инфицировании», Тбилиси, 2006 г., 28 с. Способ позволяет диагностировать воспалительное заболевание сердца и крупных сосудов, ассоциированное с Chlamydia pneumonia.

Недостатками указанного способа диагностики являются: способ не позволяет точно и достоверно диагностировать воспалительное поражение сосудов (васкулит) центральной нервной системы, поскольку процесс может быть локальным, и, кроме того, затрагивать не только крупные, но и мелкие сосуды, а ультразвуковое исследование не всегда достоверно и лишь косвенно выявляет признаки воспаления интракраниальных магистральных и мелких резистивных сосудов. Наличие антител к хламидиям в сыворотке крови не достоверно указывает на наличие хламидийного инфекционно-воспалительного процесса в сосудистой системе в целом, поскольку при любой локализации хламидий в сыворотке выявляют к ним антитела. Этот способ не позволяет диагностировать инфекционно-воспалительный процесс, вызванный другими видами хламидий.

Известен способ диагностики хронического инфекционно-воспалительного поражения центральной нервной системы (ЦНС), ассоциированного с хламидийной инфекцией, включающий исследование ликвора, крови, соскобов из носоглотки, конъюктивы и аногенитальной области путем культурального и генетического методов для обнаружения инфекционных возбудителей и исследование ликвора и сыворотки иммунологическим методом для выявления в них олигоклональных иммуноглобулинов IgG и лямбда- и каппа-свободных легких цепей, см. статью Вайншенкер Ю.И., Неустроева Ю.А. «Хроническая хламидийная инфекция ЦНС как причина демиелинизирующего поражения головного мозга» журн. «Неврологический Вестник им.В.М.Бехтерева», 2007, т.39, вып.1, с.62-65. Способ позволяет диагностировать хронический иммунологически-опосредованный воспалительный процесс в пределах ЦНС, поскольку определение олигоклональных IgG и свободных легких цепей - признанный золотой стандарт диагностики воспалительных иммунологически-опосредованных заболеваний головного и спинного мозга. Применение культурального и генетического методов, позволяющих выявить сам возбудитель или его антиген - «золотые стандарты» диагностики любой инфекции; параллельное применение обоих методов и поиск широкого спектра сочетанных возбудителей как в местах их первичного проникновения, так и генерализации с поражением ЦНС, повышает точность диагностики. Этот способ диагностики является самым близким решением, и его можно взять за прототип.

Недостатками указанного выше способа диагностики являются: способ не определяет топику воспалительно-демиелинизирующего поражения ЦНС, в частности не выделяет паравазальное поражение, которое могло бы указывать на воспалительный процесс сосудистой стенки «по соседству»; не определяет точные критерии (маркеры), позволяющие выделить непосредственно хроническое воспалительное поражение сосудов при наличии общего хронического воспалительного процесса в головном и спинном мозге; не определяет значимые для диагностики инфекционно-воспалительные поражения сосудов ЦНС и сочетанные с хламидийной инфекционные возбудители; не определяет биологические материалы, выявление в которых инфекционных возбудителей имеет значимость для диагностики инфекционно-воспалительного поражения сосудов центральной нервной системы. Следовательно, этот способ диагностики недостаточно точен и эффективен при определении инфекционно-воспалительного поражения ЦНС.

Техническим результатом предложенного способа диагностики является: повышение точности, качества и эффективности диагностики инфекционно-воспалительного поражения центральной нервной системы посредством выявления маркеров иммунологически-опосредованного поражения сосудов разного калибра с определением показателей хронического воспалительного процесса в пределах центральной нервной системы и при обнаружении хламидийно-сочетанной инфекции в клинически значимых и доступных для забора биологических материалах от пациента.

Этот результат достигается тем, что в способе диагностики хронического инфекционно-воспалительного поражения сосудов центральной нервной системы, ассоциированного с хламидийной инфекцией, включающем исследование материалов из первичных и вторичных очагов поражения посредством культурального и генетического методов для обнаружения инфекционных возбудителей, а также исследование сыворотки крови и ликвора из вторичных очагов поражения иммунологическим методом для выявления в них олигоклональных иммуноглобулинов и свободных легких цепей, при осуществлении исследований при значениях лямбда-свободных легких цепей в ликворе ≥0,01mkg/ml и/или каппа-свободных легких цепей в ликворе ≥0,5mkg/ml из 8 мл венозной крови пациента, оставшейся после забора и исследования, центрифугированием при скорости вращения 1500 об/мин в течение 10' получают 4 мл сыворотки, и в ней иммунологическим методом определяют антитела к бета 2 гликопротеину I, к эндотелию, к Clq-фактору комплемента и криоглобулины в виде криокрита и активности ревматоидного фактора, и при значениях антител к бета 2 гликопротеину I≥5 U/ml и/или к эндотелию ≥:1:10 и/или к Clq фактору комплемента ≥ 10U/ml или криоглобулинов в виде криокрита >0% и/или активности ревматоидного фактора ≥1:20 и при обнаружении хламидий и/или патогенных форм бактероидов в ликворе и/или в крови и/или в соскобах из носоглотки и/или конъюктивы устанавливают поражения, при этом при определении криоглобулинов в виде криокрита вначале проводят инкубацию сыворотки крови при температуре +4°С в течение 5 суток и при выявлении осадка-криоприципитата определяют его объемное соотношение к объему сыворотки, а при определении криоглобулинов в виде активности ревматоидного фактора проводят исследование путем агглютинации.

Сущность решения выражается в совокупности существенных признаков, достаточной для достижения обеспечиваемого решением технического результата.

Существенными признаками предложенного способа диагностики, совпадающими с признаками прототипа, являются: А - исследование материалов из первичных и вторичных очагов поражения посредством культурального и генетического методов для обнаружения инфекционных возбудителей; Б - исследование сыворотки крови и ликвора из вторичных очагов поражения иммунологическим методом для выявления в них олигоклональных иммуноглобулинов и свободных легких цепей.

Существенными отличительными признаками предлагаемого способа диагностики являются: В - при осуществлении исследования при значениях лямбда-свободных легких цепей в ликворе ≥ 0,01mkg/ml и/или каппа-свободных легких цепей в ликворе ≥0,5 mkg/ml из 8 мл венозной крови пациента, оставшейся после забора и исследования, центрифугированием при скорости вращения 1500 об/мин в течение 10' получают 4 мл сыворотки; Г - в сыворотке иммунологическим методом определяют антитела к бета 2 гликопротеину 1, к эндотелию, к Clq - фактору комплемента и криоглобулины в виде криокрита и активности ревматоидного фактора; Д - устанавливают значения антител к бета 2 гликопротеину I≥5 U/ml и/или к эндотелию ≥1:10 и/или к Clq фактору комплемента ≥10 U/ml и/или криоглобулинов в виде криокрита >0% и/или активности ревматоидного фактора ≥1:20 и при обнаружении хламидий и/или патогенных форм бактероидов в ликворе и/или в крови и/или в соскобах носоглотки и/или конъюктивы устанавливают поражение.

Частные отличительные признаки: Е - при определении криоглобулинов в виде криокрита вначале проводят инкубацию сыворотки крови при температуре +4°С в течение 5 суток и при выявлении осадка - криопреципитата определяют его объемное соотношение к объему сыворотки; Ж - при определении криоглобулинов в виде активности ревматоидного фактора проводят исследование путем агглютинации.

Способ диагностики хронического инфекционно-воспалительного поражения сосудов центральной нервной системы, ассоциированного с хламидийной инфекцией осуществляют следующим образом. У больного с подозрением на хроническое инфекционно-воспалительное поражение сосудов (васкулит) центральной нервной системы берут материалы из первичных очагов поражения: соскобы со слизистой носоглотки, конъюктивы, аногенитальной области и из вторичных очагов: производят забор крови из вены - 10 мл, выполняют люмбальную пункцию и производят забор 3 мл ликвора. Соскобы 2 мл крови и 2 мл ликвора исследуют параллельно проводимыми культуральным и генетическим методами для выделения возбудителей. При осуществлении исследования 1 мл ликвора для определения свободных легких цепей, при значениях лямбда свободных легких цепей в ликворе ≥0,01 mkg/ml и/или каппа свободных легких цепей в ликворе ≥0,5 mkg/ml из оставшейся крови - 8 мл центрифугированием со скоростью вращения 1500 об/мин в течение 10' получают сыворотку - 4 мл и затем путем иммунологического метода по известным методикам и стандартам используемых иммунологических реакций ее исследуют для определения антител к бета 2 гликопротеину I, антител к эндотелию, антител к Clq фактору комплемента и криоглобулинов в виде криокрита и активности ревматоидного фактора.

Иммунологический метод исследования основан на специфическом взаимодействии антигенов и антител. В зависимости от их механизма и учета результатов его подразделяют в том числе на: реакции с использованием химических и физических методов, например, непрямая иммунофлюоресценция для определения антител к эндотелию сосудов, иммуноферментный анализ для определения свободных легких цепей, антител к бета 2 гликопротеину I, антител к Clq фактору комплемента; на реакции, основанные на феномене агглютинации, например, реакция непрямой агглютинации на частицах латекса для определения криоглобулинов. Для выявления криоглобулинов проводят инкубацию сыворотки крови при температуре 4°С в течение 5 суток, при появлении осадка - криопреципитата определяют криокрит, равный соотношению объема криопреципитата к объему сыворотки. Определение активности ревматоидного фактора осуществляют при исследовании сыворотки с растворенными криокритом, инкубирующейся при температуре 37°С, и супернатанта, ранее находящегося при 4°С, путем агглютинации на частицах латекса. Выявление повышенного уровня свободных легких цепей в ликворе свидетельствует о наличии иммунологически-опосредованного воспалительного процесса в центральной нервной системе. Хламидийная инфекция в центральной нервной системе приводит к повышению свободных легких цепей в ликворе или в ликворе и в сыворотке крови, а также к появлению олигоклонального IgG -« золотого» маркера воспалительной демиелинилизации, что делает эту скрытую хроническую инфекцию, схожей по иммунологическим характеристикам с рассеянным склерозом и другими иммунологически-опосредованными демиелинизирующими заболеваниями. Повышенный уровень антител к бета 2 гликопротеину I является маркером антифосфолипидного синдрома, при котором развивается поражение преимущественно сосудов большого и среднего калибра, проявляющееся тромбозами и геморрагиями. Повышенный уровень антител к эндотелию - маркер различных иммунологически-опосредованных поражений сосудов преимущественно крупного и среднего калибра. Повышенный уровень антител к Clq фактору комплемента - маркер ряда поражений мелких сосудов и капилляров, проявляющихся геморрагиями. Повышенный уровень криоглобулинов - маркер криоглобулинемического поражения мелких сосудов и капилляров.

Затем, независимо от другой выявленной сочетанной инфекции при обнаружении хламидий и/или патогенных форм бактероидов в ликворе и/или в крови и/или в соскобах из носоглотки и/или конъюктивы и при значениях антител к бета 2 гликопротеину I≥5 U/ml и/или антител к эндотелию ≥1:10 и/или антител к Clq фактору комплемента ≥10 U/ml и/или криоглобулинов в виде криокрита >0% и/или активности ревматоидного фактора ≥1:20 устанавливают инфекционное воспалительное поражение сосудов центральной нервной системы, ассоциированное с хламидийной инфекцией, определяя диагноз.

Предложенный способ диагностики прошел клинические испытания на базе Института мозга человека РАН при обследовании 6 больных с хроническими хламидийно-сочетанным инфекционно-воспалительным поражением сосудов преимущественно центральной нервной системы. При обследовании пациентов использовался комплекс из клинико-лабораторного обследования, нейрохирургических методов, включающих дуплексное и допплерографическое исследование сосудов, электроэнцефалографию, магнитно-резонансную томографию, позитронно-эмиссионную томографию и магнитно-резонансную томографию - ангиографию, спиральную компьютерную томографию-ангиографию. В ходе клинических испытаний было улучшено качество диагностики и лечения больных с хронической и острой цереброваскулярной патологией, в том числе имевшейся на фоне воспалительно-демиелинилизирующих заболеваний мозга, у больных с симптоматической эпилепсией, а также с другими заболеваниями центральной нервной системы, поскольку было выявлено хроническое инфекционно-воспалительное и иммунологически-опосредованное поражение сосудов при этих состояниях, что позволило адекватно и точно корректировать лечение пациентов.

Клинические примеры. Пример 1. Больной Б. 26 лет. Предварительный диагноз: острый рассеянный энцефаломиелит. Ишемический инсульт в бассейне левой средней мозговой артерии. В таблице 1 представлены данные исследований.

Таблица 1
	Исходно	В динамике
Олигоклональный IgG в ликворе	+	-
Лямбда свободные легкие цепи mkg/ml в ликворе	0,038 (≥0,01)	0,01 (≥0,01)
Каппа свободные легкие цепи в ликворе mkg/ml	1,28(≥0,5)	<0,5
Антитела к бета 2 гликопротеину I U/ml	71,9 (≥5)	153,6 (≥5)
Антитела к эндотелию	<1:10	1:40(≥1.10)
Антитела к Clq фактору комплемента U/ml	≤10	≤10
Криоглобулины - криокрит %	0	0
Криоглобулины - активность ревматоидного фактора	<1:20	1:40(≥1:20)
Хламидии в ликворе	-	+
Патогенные формы бактероидов в ликворе	-	+
Хламидии в крови	-	+
Патогенные формы бактероидов в крови	+	+
Хламидии в соскобах носоглотки, конъюктивы, аногенитальной области	-	+
Патогенные формы бактероидов в соскобах из аногенитальной области	+	+

Согласно известному способу диагностики (прототип) в ликворе выявлены олигоклональный IgG, лямбда свободные легкие цепи ≥0,01mkg/ml, каппа - свободные легкие цепи ≥0,5mkg/ml, что указывает на имеющийся хронический воспалительный процесс в центральной нервной системе. Поскольку хламидии не установлены ни в одном из исследованных биологических материалов, то диагностировать хламидийную этиологию хронического воспаления не представлялось возможным. Но согласно заявленному способу диагностики при значениях лямбда свободных легких цепей ≥0,01mkg/ml, каппа свободных легких цепей ≥0,5mkg/ml, проведено дополнительное исследование на сочетанную инфекцию - патогенные формы бактероидов выявлены в крови, в сыворотке крови выявлены антитела к бета 2 гликопротеину I≥5U/ml, поэтому диагностировано хроническое инфекционно-воспалительное поражение сосудов центральной нервной системы, ассоциированное с хламидийной инфекцией. В динамике, на первых этапах этиотропного лечения хламидии, а также патогенные формы бактероидов определены в ликворе и крови, в соскобах из носоглотки и конъюктивы, выявлены антитела к эндотелию ≥1:10, криоглобулины - активность ревматоидного фактора ≥1:20, что также подтвердило диагноз. В этом примере диагноз по способу, указанному в прототипе, был не достоверен: он не предполагал наличие хронической хламидийной инфекции в центральной нервной системе. Это могло бы привести к неправильному лечению и, как следствие, к плохому исходу заболевания, поскольку в терапию были бы включены гормоны и цитостатики, а не этиотропная антибактериальная терапия. Согласно заявляемому способу, не смотря на отсутствие хламидии в исследуемых материалах, была установлена истинная инфекционная природа поражения сосудов в центральной нервной системе. Это помогло правильно проводить этиотропное лечение. На фоне обострения, закономерного этапа лечения хронических заболеваний, хламидии, а также другие маркеры инфекционно-воспалительного поражения сосудов в центральной нервной системе, были выявлены. Это позволило не только еще раз подтвердить правильность диагностики сосудистого поражения, но и также опосредовано установить природу демиелинизирующего энцефаломиелита. Дальнейшая санация от возбудителей привела к нивелированию маркеров инфекционно-воспалительного поражения сосудов и демиелинизирующего процесса в центральной нервной системе и улучшению состояния пациента.

Пример 2. Больной П. 19 лет. Вялотекущий инфекционно-воспалительный демиелинизирующий энцефаломиелит, системный геморрагический синдром с поражением центральной нервной системы.

Таблица 2
	Исходно	На фоне лечения (1 этап)	На фоне лечения (2 этап)	После лечения (контр. исслед. через 8 мес.)
Олигоклональн. IgG в ликворе	+	+	-	-
Лямбда СЛЦ в ликворе, mkg/ml	<0,01	0,02(≥0,01)	<0,01	0,01
Каппа СЛЦ в ликворе, mkg/ml	3,9(≥0,5)	3.0(≥0,5)	0,45(<0,5)	0,3(<0,5)
атБ2ГП(U/ml)	<10	5,8(≥5)	5,0(≥5)	1,16(<5)
АЭат	<1:10	1:10(≥1:10)	<1:10	<1:10
атClq(U/ml)	40(≥10)	40(≥10)	10(≥10)	5,2(<10)
КГ-криокрит, %	0	1%(>0%)	1%(>0%)	0
КГ-актив. РФ	<1:20	1:20(≥1:20)	<1:20	<1:20
Хламидии в ликворе	+	+	-	-
П.Ф. бактер. в ликворе	+	+	-	-
Хламидии в крови	-	+	+	-
П.Ф. бактер. в крови	+	-	-	-
Хламидии в соскобах из н/глотки, конъюнктивы, аноген. области	+	+	+ в н/глотке	-
П.ф. бактер. в соскобах. из н/глотки, конъюнктивы, аноген. области	+	-	-	-

Согласно известному способу диагностики (прототипу) в ликворе выявлены олигоклональный IgG, каппа-свободные легкие цепи ≥0,5 mkg/ml, хламидии, а также патогенные формы бактероидов, что позволило установить хламидийно-ассоциированный энцефаломиелит, но определить сопутствующее поражение сосудов не представлялось возможным. По заявленному способу: каппа-свободные легкие цепи ≥0,5 mkg/ml, хламидии выявлены в ликворе, кроме того, патогенные формы бактероидов выявлены в ликворе и крови, в сыворотке крови определены антитела к Clq фактору комплемента ≥10 U/ml и диагностировано хроническое инфекционно-воспалительное поражение сосудов центральной нервной системы, ассоциированное с хламидийной инфекцией. На фоне санации организма от хламидийной инфекции признаки инфекционно-воспалительного поражения сосудов, а также энцефаломиелита купированы.

По известному способу диагностики (прототипу) не был установлен достоверный диагноз, поскольку выявлена только хламидийно-ассоциированная этиология демиелинизирующего энцефаломиелита, но не установлена причина поражения сосудов, в том числе головного и спинного мозга. Согласно заявленного способа единый генез обоих заболеваний был установлен. Проведенная патогенетическая и этиологически обоснованная терапия привела к улучшению состояния пациента. Таким образом, предлагаемый способ повышает точность, улучшает качество и эффективность диагностики хронического инфекционно-воспалительного поражения сосудов центральной нервной системы, ассоциированного с хламидийной инфекцией, что привело к улучшению результатов лечения.

Использование изобретения «Способ диагностики хронического инфекционно-воспалительного поражения сосудов центральной нервной системы, ассоциированного с хламидийной инфекцией», по сравнению с прототипом позволило повысить точность эффективность диагностики хронических скрытых, вялотекущих или остро протекающих ишемических и гемаррагических синдромов в центральной нервной системе вследствие воспалительного, иммунологически-опосредованного поражения крупных и мелких сосудов, обусловленного хламидийно-ассоциированной инфекцией, посредством выявления маркеров иммунологически-опосредованного поражения сосудов разного калибра при наличии определенных показателей хронического воспалительного процесса в пределах центральной нервной системы и при обнаружении хламидийной сочетанной инфекции в клинически значимых и доступных для забора биологических материалах от пациента. Предложенный способ диагностики был апробирован на практике при лечении заболеваний центральной нервной системы в Институте мозга человека РАН и может быть рекомендован как способ диагностики хронических инфекционно-воспалительных поражений сосудов центральной нервной системы, протекающих как изолировано, так и в составе системных заболеваний. Способ способствует повышению точности и качества диагностики и, как следствие, приводит к улучшению результатов лечения сосудистых, иммунологически-опосредованных демиелинилизирующих, дегенеративных заболеваний, эпилепсии и других с возможным хламидийным генезом. Предлагаемый способ диагностики точен, информативен, поскольку определяет комплекс значимых для установления диагноза критериев.

Способ диагностики хронического инфекционно-воспалительного поражения сосудов центральной нервной системы, ассоциированного с хламидийной инфекцией, включающий исследование материалов из первичных очагов поражения: соскобов со слизистой носоглотки, конъюнктивы, аногенитальной области и из вторичных очагов: крови и ликвора посредством культурального и генетических методов для обнаружения инфекционных возбудителей, а также исследование сыворотки крови и ликвора иммунологичекими методами, и при определении в ликворе содержания лямбда-свободных легких цепей ≥0,01mkg/ml и/или каппа-свободных легких цепей ≥0,5mkg/ml далее в сыворотке крови определяют антитела к бета 2 гликопротеину 1, к эндотелию, к Clq-фактору комплемента и криоглобулины в виде криокрита и активности ревматоидного фактора и при значениях антител к бета 2 гликопротеину 1≥5 U/ml и/или к эндотелию ≥1:10 и/или к Clq фактору комплемента ≥10 U/ml и/или криоглобулины в виде криокрита >0% и/или активности ревматоидного фактора ≥1:20 и при обнаружении хламидий и/или патогенных форм бактероидов в ликворе, и/или крови, и/или соскобах из носоглотки и/или конъюнктивы устанавливают поражение сосудов ЦНС, ассоциированное с хламидийной инфекцией.