Способ моделирования неалкогольного стеатогепатита у крыс

Способ моделирования неалкогольного стеатогепатита у крыс

Реферат

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной гепатологии, и может быть использовано для изучения механизмов формирования, прогрессирования и терапии заболеваний печени неинфекционного генеза.

Экспериментальные модели жировой болезни печени широко используются для изучения механизмов формирования, выяснения роли различных факторов внешней и внутренней среды в становлении патологических процессов, дают возможность подробно изучить патогенез и изыскать средства для рационального терапевтического вмешательства и профилактики.

Изучение патогенетических и саногенетических аспектов заболеваний печени обычно проводится с использованием экспериментальных моделей, сопровождающихся глубокими структурными изменениями ткани органа, сходными с таковыми нарушениями у человека, но формирующимися за более короткий период времени. Однако в каждой из известных моделей гепатита, цирроза печени, жирового гепатоза и др. заболеваний печени за основу берется токсический фактор инициации повреждения печени [5-7].

Известен способ создания модели гепатита и цирроза печени у млекопитающих, включающий помещение животного в клетку с открытым резервуаром, наполненным 70%-ным раствором формалина. В этих условиях лабораторных животных содержат в течение 5-7 месяцев [5]. К недостаткам данного способа можно отнести длительный период моделирования и побочные эффекты токсических доз формалина на дыхательную и сердечно-сосудистую системы, способствующие летальному исходу экспериментальных животных.

Известен способ моделирования токсической гепатопатии путем введения химических веществ лабораторному животному, согласно которому однократно в желудок вводят 50%-ный раствор совтола-1 на оливковом масле из расчета 150 мг на 100 г массы тела [6].

Известен способ моделирования цирроза печени путем введения химических веществ лабораторному животному, согласно которому в желудок вводят два раза в неделю в течение месяца 50%-ный раствор совтола-1 на оливковом масле из расчета 0,25 мл на 100 г массы тела и 10%-ный раствор этанола вместо воды для питья [7].

Перечисленные выше способы моделирования токсической гепатопатии, жировой дистрофии и цирроза печени способствуют быстрому органическому поражению печени.

Однако недостатком этих способов является то, что способы имеют сугубо специфические триггерные механизмы развития заболеваний печени, которые отличаются от реальных причин, способствующих патогенезу печени у людей.

У людей же основными инициаторами неинфекционных заболеваний печени являются неправильное питание и злоупотребление алкоголем. Следовательно, существуют трудности в экстрополяции экспериментальных данных по изучению механизмов развития патологии печени на человека. В связи с этим для изучения механизмов формирования заболеваний печени, разработки новых подходов в профилактики и лечения с применением современных достижений науки и техники исследователям требуются экспериментальные модели, наиболее приближенные к реальным клиническим условиям.

Проведенные патентные исследования и анализ научной медицинской литературы показал, что конкретных рекомендаций по моделированию неалкогольного стеатогепатита (НАСТ) и цирроза печени, характерных для реальных условий развития данных заболеваний у людей, не существует.

Наиболее близким техническим решением, принятым за прототип, является способ формирования алиментарной гиперлипидемии гиперхолестериновым рационом по J. Fan. Согласно этому способу экспериментальных крыс содержат в течение 12 недель на гиперхолестериновом рационе. В результате у крыс происходит отложение избытка жира в печени и формируется стеатоз [11]. К недостаткам данного способа можно отнести низкую вероятность развития глубоких структурных повреждений печени, способствующих формированию стеатогепатита и фиброза.

Учитывая возможность развития жировой болезни печени при несбалансированном гиперкалорийном питании, представляет интерес разработка способа моделирования неалкогольного стетогепатита путем воздействия на экспериментальных животных гиперкалорийным гепатогенным рационом.

Задача изобретения состоит в том, чтобы создать более простой способ моделирования неалкогольного стеатогепатита у крыс с повышенной воспроизводимостью и высоким приближением к клиническому течению заболевания печени, воздействуя на животных алиментарными патогенетическими факторами, способствующими формированию метаболической дисфункции и структурной реорганизации печени, наиболее точно отражающей патогенетические механизмы развития заболеваний печени у людей, с минимальной смертностью животных.

Для этого в способе моделирования неалкогольного стеатогепатита у крыс, путем скармливания экспериментальным животным гепатопатогенного корма, согласно изобретению в течение 6 месяцев ежесуточно с кормом животным вводят 4,25 г топленого говяжьего сала и 0,43 г порошкового холестерина из расчета на 100 г массы тела.

При этом по истечении 30 суток от начала вскармливания у животных диагностируется сформировавшийся стеатоз печени, по истечении 90 суток диагностируют явно выраженный стеатогепатит, а по истечении 180 суток от начала вскармливания определяют сформировавшийся фиброз печени.

Общими с прототипом признаками являются следующие:

- скармливание экспериментальным животным гепатопатогенного корма (гиперхолестериновый рацион).

Отличительными признаками являются следующие:

- в течение 6 месяцев ежесуточно с кормом животным вводят 4,25 г топленого говяжьего сала и 0,43 г порошкового холестерина из расчета на 100 г массы тела.

При использовании изобретения увеличивается холестериновая суточная нагрузка (до 10% от общего состава рациона), оказывается дополнительное воздействие животным жиром в виде топленого говяжьего сала (до 20% от общего состава рациона), увеличивается срок воздействия алиментарной гиперкалорийной нагрузки, отмечается стабильная прибавка в весе у крыс в течение всего периода эксперимента. Помимо структурной реорганизации печени предложенный способ моделирования НАСГ сопровождается многими метаболическими нарушениями (дислипидемия, гипергликемия, окислительный стресс), являющимися основополагающими патогенетическими факторами, индуцирующими заболевания печени. За 90-180 суток формируется стеатогепатит, переходящий в фиброз печени. Изобретение дает возможность изучения стадийности формирования неалкогольной жировой болезни печени.

Проведенные патентные исследования и анализ научной медицинской информации, отражающие методологию создания экспериментальных моделей жировой болезни печени с сопутствующими метаболическими нарушениями, не выявили технологий моделирования НАСГ на экспериментальных животных, содержащих всю совокупность существенных признаков заявленного изобретения. Таким образом, заявленное техническое решение соответствует критерию «новизна». Заявляемое изобретение может быть использовано в экспериментальной медицине и биологии согласно своему назначению, и на этом основании оно соответствует критерию «промышленная применимость».

Сделать вывод о том, что заявляемое изобретение для специалиста явным образом не следует из уровня техники, позволяет тот факт, что до настоящего времени проблемы профилактики, лечения и механизма развития заболеваний печени неинфекционного генеза окончательно не решены. Предложенное решение не является простой модификацией известных способов, оно дает неожиданно высокий результат и 100%-ную воспроизводимость у подопытных животных. Предлагаемый способ моделирования НАСГ не сложен в техническом воспроизведении и создает условия для проведения совершенно оригинальных и имеющих огромное практическое значение для медицины и биологии работ по выяснению патогенетических механизмов формирования жировой болезни печени и причин, способствующих запуску процессов фиброгенеза и развития цирроза. Изобретение дает возможность проследить все стадии развития этого заболевания, вплоть до цирроза печени. На этом основании можно заключить, что заявляемый способ соответствует критерию «изобретательский уровень».

На чертеже представлено гистологическое строение ткани печени крыс в зависимости от длительности гепатогенной нагрузки:

а - контрольная группа;

гистологический срез окрашен гематоксилином и эозином. ×400.

б - опытная группа 1 (30 суток гепатогенной нагрузки);

гистологический срез окрашен гематоксилином и эозином. ×400.

в - опытная группа 2 (90 суток гепатогенной нагрузки);

гистологический срез окрашен гематоксилином и эозином. ×400.

г - опытна группа 3 (180 суток гепатогенной нагрузки);

гистологический срез окрашен пикрофуксином по Ван-Гизону. ×400.

Для создания модели неалкогольного стеатогепатита использовались белые крысы линии Вистар, выведенные в питомнике РАМН «Столбовая». Для воспроизведения экспериментальной модели использованы половозрелые особи мужского пола, средней массой 180,5±10,6 г. При разработке модели отрабатывалось воспроизведение нескольких аналогичных экспериментальных состояний, все варианты модификаций воспроизводимых моделей анализировались на основании гистологических исследований ткани печени. Отобраны были те модели, при воспроизведении которых достигались стойкие структурные нарушения печени, сопровождающиеся жировой инфильтрацией, образованием некроза печени, при отсутствии смертности экспериментальных животных.

Способ моделирования неалкогольного стеатогепатита осуществляют следующим образом. Животные в течение 180 суток (6 месяцев) находятся на специальной гиперкалорийной гепатогенной диете, насыщенной животными жирами (табл.1).

Таблица 1
Суточный рацион крыс (г/100г массы животного)
Ингредиенты	Экспериментальный рацион	Общевиварный рацион
Говяжье сало	4,25	0,5
Холестерин	0,43	-
Подсолнечное масло	0,5	0,5
Смесь зерновая	5	5
Хлеб пшеничный (сухари)	2	20
Крупа овсяная	1,3	1,3
Мясо говяжье второй категории	2	2
Творог обезжиренный	0,8	0,8
Морковь	3,3	3,3
Зелень	3,3	3,3
Дрожжи пивные	0,05	0,05
Соль поваренная	0,1	0,1

В диету включен холестерин (10% от общего состава рациона), как один из факторов, активизирующих липидные нарушения, процессы жировой инфильтрации печени, структурную дезинтеграцию гепатоцитов. Среди патогететически ориентированных факторов базовой являлась жировая нагрузка топленым говяжьим салом (20% от общего состава рациона), увеличивающим общий калораж рациона гепатогенной диеты. То есть в модели неалкогольного стеатогепатита инициируются механизмы, характеризующиеся ожирением, дислипидемией, стеатозом печени.

Для обоснования заявленного изобретения в лаборатории биомедицинских исследований НИИ Медицинской климатологии и восстановительного лечения (г.Владивосток) были проведены экспериментальные работы на крысах линии Вистар.

Для исследования выделялось 4 группы крыс:

контрольная группа - интактные крысы, содержащиеся на стандартном рационе вивария (10 голов);

опытная группа 1 - крысы, содержащиеся на экспериментальном гиперкалорийном рационе в течение 30 суток (10 голов);

опытная группа 2 - крысы, содержащиеся на экспериментальном гиперкалорийном рационе в течение 90 суток (10 голов);

опытная группа 3 - крысы, содержащиеся на экспериментальном гиперкалорийном рационе в течение 180 суток (10 голов).

Животные ежедневно осматривались, учитывалась поедаемость корма. За время опыта не было случаев падежа и заболеваний животных. Эвтаназию животных осуществляли путем декапитации под эфирным наркозом в соответствии с требованиями Европейской конвенции по защите экспериментальных животных 86/609 EEC [10]. Оценивались биометрические показатели: вес крысы, индекс Кетле, относительная и абсолютная масса печени, висцерального жира. Состояние системы «перекисное окисление липидов - антиоксидантная защита» (ПОЛ-АОЗ) характеризовали по интегральному показателю антиоксидантной активности (АОА) в плазме крови, содержанию глутатиона, активности ферментов глутатионового звена (глутатионредуктаза - ГР, глутатионпероксидаза - ГП) в печени и каталазы в крови, количеству образовавшихся продуктов липопероксидации в крови и печени (гидроперекиси липидов (ГЛ), диеновые коньюгаты (ДК), малоновый диальдегид (МДА). Уровень липидов, глюкозы и активность аланинаминотрансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (ACT), лактатдегидрогеназы (ЛДГ) в сыворотке крови исследовали с помощью биохимического анализатора FP-901 (Финляндия) с помощью наборов фирмы «Ольвекс» (Россия). Определяли уровень общего холестерина (ОХС), триглицеридов (ТГ), ХС липопротеидов высокой плотности (ХС ЛПВП), результаты выражали в ммоль/л. Холестерин липопротеидов низкой (ЛПНП) и очень низкой плотности (ЛПОНП) определяли расчетным методом по формулам Фридвальда. Индекс атерогенности (ИА) рассчитывали по формуле ОХС-ХС ЛПВП/ХС ЛПВП [3]. Для проведения гистологического исследования ткани печени небольшие фрагменты центральной части правой доли органа фиксировались в 10%-ном растворе нейтрального формалина, приготовленного на 0,07М фосфатном буфере (рН=6,98). Обезвоживание тканей проводили в этиловом спирте возрастающей концентрации и заливали в парапласт. Далее с помощью микротома (МЗП-01 «ТЕХНОМ») готовили срезы исследуемых органов толщиной 7 мкм. Для гистологических исследований срезы тканей печени окрашивали гематоксилин-эозином по Романовскому, пикрофуксином по Ван-Гизону на выявление коллагеновых волокон [8]. Препараты исследовали при помощи микроскопа фирмы «Carl Zeiss» (Германия) (ув. об.×10, ×40 и ×90).

Данные, полученные в результате исследований, приведены в графических и табличных материалах.

Весоростовые параметры крыс с ДЛП представлены в таблице 2. У всех крыс опытных групп по сравнению с интактной группой выявлено увеличение массы тела, индекса Кетле, двукратное повышение относительной и абсолютной массы висцеральной жировой ткани и печени.

Таблица 2
Весоростовые параметры крыс при моделировании НАСГ, М±m
Показатели	Контрольная группа, n=10	Сроки воздействия экспериментальным рационом
30 дней (опытная 1), n=10	90 дней (опытная 2),n=10	180 дней (опытная 3),n=10
Вес крысы до эксперимента, г	168,0±4,1	174±5,6	178,5±8,5	180±28
Вес крысы после окончания эксперимента, г	250,0±8,9	324,5±8,7***	361,4±12,2*	471,2±67,9**
Прирост массы тела, г	82±4,2	151,5±11,3***	182,8±6,1***	280,2±65,7***
Рост крысы, см	19,4±0,1	20,1±0,5	20,8±0,2	26,3±0,3*
Индекс Кетле, у.е.	6,7±0,2	8,0±0,1**	8,3±0,2**	8,4±1,2**
Абсолютная масса печени, г	8,16±0,23	16,75±0,64***	16,2±1,0***	27,9±4,1***
Относительная масса печени, %	3,2±0,05	5,1±0,02***	4,5±0,6*	5,9±0,8**
Абсолютная масса висцерального жира, г	5,91±0,68	15,71±0,96***	13,2±0,2***	12,5±3,4***
Относительная масса висцерального жира, %	2,3±0,01	4,8±0,1***	2,8±0,1**	2,6±0,6***
Примечание здесь и далее: (*) - статистическая значимость различий относительно контрольной группы: * - р<0,05; ** - р<0,01; ***-p<0,001.

Изучение показателей липидного обмена показало, что у крыс под влиянием гепатогенного рациона на 30-е сутки формировалась алиментарная дислипидемия, проявляющаяся повышением уровня ОХС, ТГ, ХС ЛПОНП в сыворотке крови (табл.3). При этом ХС ЛПВП снижался более чем в 2 раза, а индекс атерогенности увеличился на порядок (р<0,001). Через 90 суток алиментарной нагрузки концентрация ОХС в крови выровнялась с таковым показателем у контрольных крыс, уровни ТГ и ХС ЛПОНП достоверно снизились более чем в 2 раза. Воздействие гиперкалорийного рациона в течение 180 суток вызывало прогрессирование гиперлипидемии. По сравнению с показателями контрольной группы отмечено достоверное повышение ОХС в крови и индекса атерогенности. Полученные результаты характеризуют динамику нарушений липидного обмена на всех этапах эксперимента. Обнаруженные при этом низкие значения ХС ЛПОНП у крыс 2-й и 3-й опытных групп являются одним из критериев метаболических нарушений в печени и развития стеатогепатита. Формирование НАСГ сопровождалось развитием гипергликимии, доказательством чего явилось повышение уровня глюкозы в крови во всех опытных группах крыс.

Таблица 3
Биохимические показатели крови крыс при моделировании НАСГ, М±m
Показатели, ммоль/л	Контрольная группа,n=10	Сроки воздействия экспериментальным рационом
30 дней (опытная 1), n=10	90 дней (опытная 2),n=10	180 дней (опытная 3),n=10
ОХС	1,57±0,04	3,34±0,04***	1,68±0,08	2,04±0,17*
ТГ	1,12±0,04	1,95±0,06***	0,51±0,05***	1,17±0,08
ХС ЛПВП	0,67±0,04	0,26±0,02***	0,50±0,08	0,5±0,15
ХСЛПНП	0,7±0,16	0,84±0,196	0,96±0,12	0,9±0,06
ХС ЛПОНП	0,65±0,19	1,14±0,29*	0,23±0,02**	0,20±0,03***
ИА, у.е.	1,43±0,15	11,87±1,55***	2,46±0,35	7,4±0,8***
Глюкоза, ммоль/л	5,4±0,1	8,7±0,2***	7,2±0,1***	12,0±0,3***
АЛТ	52,2±3,5	108,9±3,5***	42,4±1,1*	172±12***
ACT	118,6±6,1	243,1±9,1***	130,8±14,4	165,6±2,5***
ЛДГ	936±133	1799,1±176,8**	730±92	1285±56,1***
АСТ/АЛТ, у.е.	2,26±0,10	2,23±0,09	3,08±0,09*	0,96±0,07***

Морфофункциональное состояние печени крыс опытных групп оценивали по активности в сыворотке крови ферментов - АЛТ, ACT, ЛДГ (табл.3). У животных, содержавшихся на экспериментальном рационе, наблюдалось повышение активности ферментов печени (р<0,001), что свидетельствовало о повреждении целостности клеток печени, развитию цитолитического синдрома. Интерпретация выявленных изменений говорит о формировании заболеваний печени [1, 2]. Причем снижение соотношения АСТ/АЛТ (коэффициент де Ритиса) на 180 день эксперимента свидетельствует о хроническом течении патологического процесса.

Таблица 4
Показатели системы ПОЛ-АОЗ в крови и печени крыс при моделировании НАСГ
Показатели	Контрольная группа, n=10	Сроки воздействия экспериментальным рационом
30 дней (опытная 1),n=10	90 дней (опытная 2),n=10	180 дней (опытная 3), n=10
В крови
АОА, %	22,7±0,6	24,64±2,2	40,8±2,02***	21,6±3,6
МДА, нмоль/г.Hb	4,6±0,3	5,31±0,31*	8,12±0,2**	9,1±0,2***
ГПЛ, у.е.	0,66±0,07	0,19±0,04***	0,81±0,12	1,27±0,24*
Каталаза, %	86,5±1,1	44,3±1,4***	80,8±2,2	44,66±9,76*
В печени
ДК, нмоль/мг липидов	1,07±0,17	9,34±0,23**	1,14±0,13	0,63±0,07***
ГПЛ, ед.опт.пл./г ткани	0,4±0,05	0,97±0,05	0,31±0,03***	0,88±0,02***
МДА, нмоль/мг белка	2,07±0,06	4,66±0,15**	4,67±0,09**	6,22±0,90***
ГЛ, мкг/мг белка	8,03±0,12	4,96±0,11**	4,5±0,17**	3,1±0,17***
ГР, нмоль НАДФН/мин/мг белка	1,64±0,10	1,12±0,04**	1,55±0,11	1,01±0,04***
ГП, нмоль ГЛ /мин/мг белка	0,91±0,02	0,75±0,09	0,12±0,01***	0,14±0,01***

Формирование модели НАСГ сопровождалось развитием окислительного стресса в клеточных и тканевых субстратах, как одного из главного этиопатогенетического фактора индуцирующего заболевания печени [1, 9]. Установлено накопление малонового диальдегида в крови и печени в опытных группах крыс (табл.4). На последней стадии формирования НАСГ, когда в печени выявлялись участки с фиброзом, отмечалось двукратное повышение уровня гидроперекисей липидов в крови и печени. При этом активность антиоксидантных ферментов снижалась на порядок. Отмечалось падение активности ГР в 3 раза (р<0,001), ГП в 4,4 раза. Обуславливающим фактором дезактивации этих ферментов стало снижение содержания восстановленного глутатиона в печени крыс опытной группы 4, уровень которого был в 2 раза (р<0,01) ниже, чем у контрольной группы животных. Выявленные изменения характеризуют развитие окислительного стресса в организме животных на всех этапах развития НАСГ.

Динамику формирования метаболических нарушений и гистологическое строение ткани печени оценивали на 30-е, 90-е и 180-е сутки воздействия на крыс экспериментальным рационом. Доказательством развития модели неалкогольного стеатогепатита у животных служило исследование гистологических срезов ткани печени, окрашенных гематоксилин-эозином по Романовскому и пикрофуксином по Ван-Гизону на выявление коллагена.

Через 30 дней от начала воздействия на животных гиперкалорийным гепатогенным рационом анализ гистологических препаратов ткани печени у крыс выявил стеатоз печени (фиг.1-б). В подтверждение чего явилось нарушение балочной структуры печеночных долек, гипертрофия гепатоцитов, мелкокапельная и крупнокапельная жировая инфильтрация, сужение просветов синусоидных капилляров.

Через 90 суток у крыс, находящихся на экспериментальном рационе, в печени развивался стеатогепатит, характеризующийся фокальными участками некроза с лимфомакрофагальными элементами, жировой дистрофией гепатоцитов. Видны участки со смешанным типом стеатоза и некротизированными гепатоцитами (фиг.1-в).

На 180 сутки воздействия на крыс гепатогенным рационом гистоструктура печени подверглась значительным изменениям, выразившимся в увеличении площади некротизированных участков (10-15% от общей площади исследуемых участков печени), окруженных лимфомакрофагальным инфильтратом, нарушении балочного строения долек печени (фиг.1-г). Гепатоциты не образовывали трабекул, располагались беспорядочно, синусоиды не прослеживались. Было отмечено расширение крупных портальных трактов за счет разрастания стромы и заполнения ее воспалительным инфильтратом. Некоторые портальные тракты были с некротическими изменениями сосудов. Стенки таких сосудов слабо различались, в некоторых случаях были нарушены. Выявлялась деструкция желчных протоков, сопровождаемая большими очагами воспалительного инфильтрата. На препаратах, окрашенных по Ван-Гизону, в препортальной зоне четко обнаруживались коллагеновые волокна, что является прямым доказательством сформировавшегося фиброза печени.

Таким образом, удалось получить модель неалкогольного стеатогепатита, характеризующуюся ожирением, нарушением структурной организации, некрозом ткани, формированием фиброза печени. Разработанная модель неалкогольного стеатогепатита позволяет также изучать стадийность развития жировой болезни печени, характеризующейся формированием 3-х стадий - стеатоза, стеатогепатита и фиброза. Развитие модели НАСГ учитывает большинство клинически значимых факторов повреждения печени, наиболее часто встречающиеся в патогенезе НАСГ.

Известно, что алиментарный фактор является одним из главных этиопатогенетических индукторов формирования дисметаболических нарушений в печени, триггерным механизмом развития стеатоза печени и неалкогольного стеатогепатита [1, 2, 4, 9]. По данным литературы формирование цирроза печени из НАСГ наблюдается у 7-16% взрослых пациентов, в 60-80% случаев цирроз печени явился результатом наличия у человека патогенетических факторов прогрессирования НАСГ: гиперлипидемии, избыточной массы тела, инсулинорезистентности [4]. Нарушение липидного обмена, отложение избыточного количества легкоокисляемого жира в печени активируют процессы перекисного окисления липидов, усугубляют структурно-функциональную дезорганизацию печени, становятся независимыми патогенетическими звеньями в общей цепочке механизмов формирования заболеваний гепатобилиарной системы [1, 2, 9]. Продукты липопероксидации способны повреждать мембраны гепатоцитов, активировать звездчатые клетки печени с развитием воспаления и фиброза. Гиперактивация процессов пероксидации липидов сопровождается значительным изменением состава и степени окисленности мембранных фосфолипидов, что в конечном итоге приводит к нарушению целостности клеточных мембран, функционирования рецепторного аппарата, снижению толерантоности к глюкозе, развитию гипергликемии, гиперферментемии. В предложенном способе моделирования НАСГ были инициированы основные патогенетические триггерные механизмы, запускающие процессы фиброгенеза. Таким образом, полученные данные свидетельствует об идентичности экспериментально вызванных патогенетических изменений предложенной модели НАСГ описанным в литературе механизмам.

Результаты исследования свидетельствуют о несомненной экономической привлекательности использования данной модели. В первую очередь модель НАСГ может позиционироваться в области хронических экспериментов для оценки степени нарушения функционального состояния гепатобилиарной системы и поиска эффективных фармакотерапевтических гепатопротекторных средств, т.к. у животных структурные нарушения в печени и жировая инфильтрация сохраняются в течение 5-ти месяцев. Кроме этого создание модели проводится при отсутствии смертности животных, а также используется наиболее доступный биологический вид - крысы, что является важным и соответствует поставленной цели. Создание такой модели делает возможным проведение экспериментов, постановка которых в клинике является практически неосуществимой. Новая модель НАСГ может быть использована для проведения поиска и испытания действия вновь синтезированных или полученных из естественных источников гепатопротекторных препаратов.

Таким образом, проведенные исследования позволили получить новую экспериментальную модель неалкогольного стеатогепатита, в основе которой лежит комплексное сочетание патологических факторов, инициирующих каскад повреждений в печени, приводящих к развитию стойких морфофункциональных нарушений органа. Предложенная модель проста в исполнении, отличается хорошей воспроизводимостью, отсутствием летального исхода экспериментальных животных.

Техническим результатом изобретения является повышение воспроизводимости, упрощение способа и приближение к клиническому течению данной патологии печени.

Предлагаемый способ моделирования позволяет в большей мере приблизиться к клиническому течению патологического процесса в печени.

Предлагаемым способом моделирования воспроизводится надежная модель стеатогепатита, что подтвержено морфологическим анализом печени, гистохимическими и биохимическими показателями. Кроме того, способ обеспечивает возможность изучения развития стеатогепатита в динамике.

Список литературы

1. Буеверова Е.Л., Драпкина О.М., Ивашкин В.Т. Атерогенная дислипидемия и печень // Рос.мед. вести. 2008. 1:17-23.

2. Григорьев П.Я. Жировой гепатоз (жировая инфильтрация печени): диагностика, лечение и профилактика // Рус.мед. журн. 2002. 1:30-31.

3. Климов А.Н., Никульчева Н.Г. Обмен липидов, липопротеидов и его нарушения. СПб.: Питер Ком, 1999. 512.

4. Лазебник Л.Б., Зеленогородская Л.А., Морозов И.А. и др. Клинико-морфологические изменения печени при атерогенной дислипидемии и при лечении статинами // Терапевт. арх. 2003. 5:8-12.

5. Пат. Ru 94026117. Способ создания модели гепатита и цирроза печени млекопитающих. Бояринов Г.А., Смирнов В.П., Кауров Я.В. и др., опубл. 27.08.1996.

6. Пат. Ru 2188457. Способ моделирования токсической гепатопатии. Мышкин В.А., Ибатуллина Р.Б., Волкова Е.С. и др., опубл. 27.08.2002.

7. Пат. Ru 2197018. Способ моделирования цирроза печени. Мышкин В.А., Ибатуллина Р.Б., Савлуков А.И. и др., опубл.20.01.2003.

8. Пирс Э. Гистохимия. М.: Изд-во иностр.литературы, 1962. 967.

9. Chitturi S., Farrell G.C. Etiopathogenesis of non-alcoholic steatohepatitis // Semin. Liver. Dis. 2001. 21: 27-41.

10. European Convention for the Protection of Vertebrate Animals used for exsperimental and other scientific purposes. Strasburg: Council of Europe, 1986:51.

11. Fan J. Effect of low-calorie diet on steatohepatitis in rats with obesity and hyperlipidemia // World J. of Gastroenterology. 2003. 9(9): 2045-2049.

1. Способ моделирования неалкогольного стеатогепатита у крыс путем скармливания экспериментальным животным гепатопатогенного корма, отличающийся тем, что в течение 6 месяцев ежесуточно с кормом животным вводят 4,25 г топленого говяжьего сала и 0,43 г порошкового холестерина из расчета на 100 г массы тела.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что по истечении 30 суток от начала вскармливания определяют сформировавшуюся модель стеатоза печени.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что по истечении 90 суток от начала вскармливания определяют сформировавшуюся модель стеатогепатита.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что по истечении 180 суток от начала вскармливания определяют сформировавшуюся модель фиброза печени.