Наполнители с экстрактом коры магнолии для ухода за полостью рта

Наполнители с экстрактом коры магнолии для ухода за полостью рта

Реферат

Родственные заявки США

Утверждается приоритет временной заявки США с серийным номером №60/742,363, поданной 2 декабря 2005 года.

Техническая область

Настоящее изобретение в основном касается составов продуктов, предназначенных для гигиены полости рта, более конкретно оно касается составов указанных продуктов для ухода за полостью рта, содержащих экстракт коры магнолии, а также способов получения и использования указанных продуктов для гигиены полости рта.

Предпосылки настоящего изобретения

Продукты для гигиены полости рта (ухода за полостью рта) используют столетиями. Наиболее типичные из этих продуктов, зубные пасты, обычно содержат умеренный абразив, диспергированный в геле или в основе для пасты, причем в целях содействия очистки зубов присутствует добавка детергента, а для уменьшения разрушения зубов - фтор. Хотя присутствующие в настоящее время на рынке продукты для гигиены полости рта адекватно отвечают требованиям чистки зубов и введения фтора, однако не все имеющиеся в торговле продукты обладают полным преимуществом, состоящим в способности продукта доставлять в полость рта лекарственные средства, которые должны быть максимально полезны субъектам, страдающим заболеваниями десен и разрушением зубов.

Существует значительный потребительский спрос на продукты, которые освежают дыхание и уничтожают бактерии в полости рта. Продукт для ухода за полостью рта, обладающий эффектом освежения дыхания и бактерицидным эффектом, представляет собой удобный способ доставки в целях дезинфекции полости рта и освежения дыхания. Бактерии полости рта, в частности бактерии, находящиеся на языке, продуцируют летучие серные соединения, которые являются причиной неприятного дыхания. Освежение дыхания, безусловно, представляет собой очень важную часть будничной жизни.

Для того чтобы поддерживать необходимую гигиену полости рта, на протяжении всего дня следует неоднократно проводить дезинфекцию полости рта, а также освежение дыхания. Однако проведение дезинфекции полости рта или освежения дыхания может быть трудным или неудобным, это зависит от характера требуемого освежения, а также от той ситуации, в которой этот процесс должен происходить. Общеизвестными способами ухода за полостью рта, которые пригодны в домашних условиях, являются: чистка зубной щеткой, использование нитей для очистки зубов (флоссов), очистка языка или полоскание горла с применением разнообразных приспособлений и составов. Однако такие приспособления и составы менее удобны вне дома, где «удобства» ванной и туалета могут быть недостаточны, недоступны или негигиеничны.

Зубной налет представляет собой микробные отложения, образующиеся на зубах при коротком времени их чистки щеткой. Исследователи описывают этот налет как мягкую, плотную массу, которая в основном содержит разнообразные бактерии, а также определенное количество остатков клеток, образующихся за то непродолжительное время, в течение которого воздерживаются от чистки зубов щеткой. При полоскании водой зубной налет не удаляется. Зубной налет описывают как разнотипное сообщество микроорганизмов, находящихся на поверхности зубов в виде биологической пленки. Эта биологическая пленка встроена во внеклеточную матрицу полимеров, создаваемую как поверхностью зуба, так и микроорганизмами. Общепризнано, что уменьшению зубного налета способствуют чистка зубов, свежесть дыхания, а также здоровые десны. Однако биологическая пленка зубного налета очень стойка к воздействию противомикробных средств.

Снижение активности бактерий в полости рта - очень важная задача, поскольку указанная активность является основной причиной большинства проблем, относящихся к гигиене полости рта. Противомикробные средства, продемонстрировавшие способность уменьшать зубной налет, включают в себя хлоргексидин, цетилпиримидинхлорид (СРС), триклозан и дельмопинол. Все они представляют собой лекарственные и синтетические средства. Было также обнаружено, что эфирные масла, типа тимола, эвкалиптового масла, метилсалицилата и ментола, уменьшают налет, так же как и другие эфирные масла в наполнителе на основе спирта. Несмотря на то, что тимол наиболее эффективен в уменьшении налета, однако у него неприятный вкус. Обычно полезное действие этих масел определяется присутствием спирта, увеличивающего растворимость указанных масел, а также проницаемость их сквозь пленку налета. Хотя высокие концентрации спирта пригодны для гигиены полости рта (например, в виде средств для очистки полости рта), при их применении в оральных составах (типа жевательных резинок, съедобных пленок и кондитерских изделий и т.п.) может оставаться горькое послевкусие.

У людей, носящих зубные протезы, всегда существует проблема их чистки. Общепринятым способом такой чистки является помещение протеза на ночь в контейнер со специально приготовленным раствором, который размягчает зубной налет и частицы пищи настолько, что их можно смыть при вынимании зубного протеза из контейнера и промыть протез перед его дальнейшим использованием. После приема пищи, когда продолжительное отмокание невозможно, протез можно вынуть, почистить щеткой и вернуть на свое место, однако это - трудоемкая работа и большинство людей, использующих зубные протезы, не испытывают удовольствия от мыслей об этом.

Следовательно, существует потребность в активно действующем ингредиенте, или в их комбинации, полезное действие которой может заключаться или в удалении налета, предотвращении или замедлении его образования, или в противовоспалительном действии, которое должно помогать поддерживать здоровое состояние десен и способствовать их оздоровлению, а также освежению дыхания. Известно, что активнодействующие агенты входят в составы продуктов для гигиены полости рта, они предназначены для того, чтобы обеспечить полезные для полости рта эффекты, включая освежение дыхания и бактерицидные свойства. Такие системы обладают преимуществами, обеспечивая быстрый, эффективный и удобный способ доставки.

Краткое содержание настоящего изобретения

Настоящее изобретение ориентировано на продукты для гигиены полости рта (ухода за полостью рта), содержащие противомикробное средство на основе экстракта коры магнолии и поверхностно-активного агента. Указанное противомикробное средство можно использовать в различных наполнителях средств для ухода за полостью рта, включая (но ими не ограничиваясь) аэрозоль для полости рта, раствор для полоскания рта, зубную пасту, средства для очистки зубов, нити для очистки зубов, зубочистки, зубной порошок и зубную пасту, средства для очистки зубных протезов.

Следует понимать, что настоящее изобретение касается не только способов доставки представляемых продуктов для гигиены в полость рта человека, однако также способов доставки указанных составов в полость пасти других животных, например комнатных или домашних животных, или животных, содержащихся в неволе. Например, способ использования может включать чистку человеком зубов кошки с помощью зубной щетки и одного из продуктов для гигиены полости рта. Другой пример может включать промывание пасти собаки каким-либо продуктом для ухода за полостью рта, проводимое в течение достаточного количества времени вплоть до достижения полезного эффекта. Продукты для ухода за комнатными животными, типа жвачек и игрушек, могут быть изготовлены таким образом, чтобы в них содержались активные ингредиенты продуктов гигиены полости рта. Например, экстракт коры магнолии и поверхностно-активный агент в сочетании с кремнийсодержащим абразивом могут быть включены в сравнительно мягкий, но прочный и надежный материал (типа тросов), изготовленный из природных или синтетических волокон, а также в полимерные изделия из нейлона, полиэфира или термопластичного полиуретана. Когда животное жует, грызет или лижет такой продукт, то включенные в него активно действующие элементы высвобождаются в пасть животного, попадая в среду, содержащую слюну, что сравнимо с эффективной чисткой зубной щеткой или с полосканием.

В соответствии с настоящим изобретением неожиданно было обнаружено, что экстракт коры магнолии в сочетании с определенными поверхностно-активными агентами обладает синергическим действием, подавляя рост бактерий, вызывающих образование зубного налета. Сочетание экстракта коры магнолии с отобранными поверхностно-активными агентами демонстрирует усиление активности против роста налета, указанное усиление происходит как при избытке экстракта коры магнолии, так и при избытке поверхностно-активного вещества.

Настоящее изобретение касается также продуктов для гигиены полости рта, содержащих экстракт коры магнолии в сочетании с поверхностно-активным агентом и предназначенных для бактерицидного действия и обладающих свойствами освежать дыхание. Более конкретно, настоящее изобретение касается таких средств доставки в полость рта, как аэрозоль для полости рта, раствор для полоскания полости рта, зубная паста, средства для очистки зубов, нить для очистки зубов, зубочистки, зубной порошок и зубная паста, средства для очистки зубных протезов, или других продуктов для гигиены полости рта. Эти продукты содержат эффективное количество экстракта коры магнолии и поверхностно-активного агента и при их потреблении заявляемый состав эффективно инактивирует или уничтожает микробы в полости рта, а также освежает дыхание. В состав продукта для гигиены полости рта дополнительно, в целях синергического увеличения эффективности экстракта коры магнолии, добавляют поверхностно-активное вещество.

В одном аспекте настоящего изобретения зубной порошок или зубную пасту следует приготавливать из эффективного количества экстракта коры магнолии в сочетании с поверхностно-активным агентом, используя стандартный порошок или пастообразный носитель. При этом указанный носитель содержит в требуемых пропорциях ингредиенты, включая (но ими не ограничиваясь) гидрофильную основу, эмульгаторы, ароматизаторы, душистые средства, а также консерванты. Такой зубной порошок или зубная паста может содержать эффективные количества абразивных компонентов для механического разрушения/удаления винного камня и/или фторида. Конкретный пример зубной пасты содержит противомикробное средство, включающее синергическое соотношение экстракта коры магнолии и поверхностно-активного агента, причем указанное синергическое соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 1 часть экстракта коры магнолии на 1 часть поверхностно-активного агента. Указанное противомикробное средство присутствует (в сочетании с другими компонентами зубной пасты) в количестве, составляющем от приблизительно 0,2 весовых % до приблизительно 5 весовых %.

Пригодные поверхностно-активные агенты включают соли калия, аммония или натрия. Соли натрия включают анионактивные ПАВ, типа алкилсульфатов, включая натрий лаурилсульфат, натрий лауретсульфат и т.п. Другие соли натрия включают натрий лауроилсаркосинат, натрий брасслат и им подобные. Подходящие соли аммония включают аммоний лаурилсульфат, аммоний лауретсульфат, аммоний лауроилсаркосинат, аммоний брасслат, аммоний кокамидопропилбетаин и им подобные. Другие пригодные поверхностно-активные агенты включают эмульгаторы, которыми могут быть жирные кислоты (например, стеариновая кислота, пальмитиновая кислота, олеиновая кислота и линолевая кислота), их соли, глицеролмоностеарат, глицеролтриацетат, лецитин, моно- и триглицериды, а также ацетилированные моноглицериды. Как будет описано ниже, некоторые подходящие поверхностно-активные агенты демонстрируют также индивидуальные бактерицидные (уничтожающие микроорганизмы) свойства.

В другом аспекте настоящего изобретения изготавливают продукт для гигиены полости рта, включающий (но ими не ограничиваясь): аэрозоль для полости рта, раствор для полоскания рта, средства для очистки зубов, нить для очистки зубов, средства для очистки зубных протезов, зубочистки, зубной порошок и зубную пасту. Продукт для ухода за полостью рта, предназначенный для освежения дыхания потребителя указанного продукта, содержит водорастворимую часть, нерастворимую в воде часть, а также эффективное количество противомикробного средства, включающего синергическое соотношение экстракта коры магнолии и поверхностно-активного средства. Указанное синергическое соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 1 часть экстракта коры магнолии на 1 часть поверхностно-активного агента.

В другом аспекте настоящего изобретения способ поддержания гигиены полости рта включает помещение продукта для ухода за полостью рта в полость рта, причем указанный продукт для ухода за полостью рта содержит эффективное количество противомикробного средства. Указанное противомикробное средство содержит синергическое соотношение экстракта коры магнолии и поверхностно-активного агента, составляющее по меньшей мере приблизительно 1 часть экстракта коры магнолии на 1 часть поверхностно-активного агента.

Подробное описание настоящего изобретения

Известно, что продукты для ухода за полостью рта используют в качестве носителей для доставки в полость рта компонентов, обеспечивающих такие полезные свойства, как освежение дыхания и бактерицидные действия в полости рта. Преимущество таких систем состоит в том, что на протяжении всего дня потребитель обеспечен удобным и недорогим способом поддержания гигиены полости рта и свежего дыхания.

Настоящее изобретение ориентировано на обладающие противомикробными свойствами продукты для ухода за полостью рта. Указанные продукты содержат экстракт коры магнолии и поверхностно-активный агент. Настоящее изобретение ориентировано также на способ снижения или уничтожения находящихся в ротовой полости микроорганизмов. Способ реализуется путем абсорбции в полости рта продукта для ухода за полостью рта, содержащего экстракт коры магнолии и поверхностно-активный агент. Настоящее изобретение ориентировано также на процесс получения указанных продуктов для ухода за полостью рта.

Подходящие продукты гигиены полости рта (продукты для ухода за полостью рта) человека включают (но ими не ограничены): аэрозоль для полости рта, раствор для полоскания рта, зубную пасту, средства для очистки зубов, нить для очистки зубов, зубочистки, зубной порошок, а также средства для очистки языка, средства для очистки зубных протезов; указанные продукты гигиены содержат экстракт коры магнолии и поверхностно-активный агент по настоящему изобретению. Пригодные продукты гигиены пасти животного включают (но ими не ограничены): аэрозоль для полости рта, раствор для полоскания, зубную пасту, средства для очистки зубов, нить для очистки зубов, зубочистки, зубной порошок и зубную пасту, средства для очистки зубных протезов, съедобные пленки, средства для очистки языка, а также жевательные игрушки, которые содержат экстракт коры магнолии и поверхностно-активный агент по настоящему изобретению.

В одном аспекте настоящего изобретения обеспечивается специальная рецептура соединений, содержащих не только наиболее стандартно используемые витамины и минералы, но также и полезные растительные ингредиенты, которые, действуя совместно с другими лекарственными ингредиентами, уменьшают и предотвращают основные хронические заболевания полости рта. Такая рецептура обеспечивается в форме, которая может непосредственно абсорбироваться во рту, при этом исключается необходимость усвоения через пищеварительную систему.

В одном аспекте настоящего изобретения при практическом использовании такая рецептура включена в носители, типа зубной пасты или раствора для полоскания рта, таким образом субъект может приобрести преимущество, заключающееся в отсутствии необходимости принимать таблетки. В другом аспекте настоящего изобретения такая рецептура при ее практическом использовании в стоматологическом кабинете может быть объединена в носители, типа профилактической зубной пасты, жидкости для поддесневого орошения рта, или в биологически рассасываемые и нерассасываемые волокнистые матрицы, таким образом полезность этих лекарственных средств может стать частью современного оснащения стоматологов и стоматологов-гигиенистов.

Термином «зубной порошок и зубная паста» обозначают такой продукт для ухода за полостью рта, который следует использовать в сочетании с зубной щеткой для чистки доступных поверхностей зубов, языка и полости рта.

Термин «абсорбция» включает действия, при которых продукт для ухода за полостью рта полностью или частично поглощается при его удерживании во рту, таком как продолжительное полоскание, прожевывание, рассасывание или растворение. Ожидается, что удерживание указанного продукта во рту в течение более продолжительного времени сочетается с более значительным уменьшением микроорганизмов, присутствующих в полости рта. Эффективное время абсорбции продуктов для ухода за полостью рта составляет от 3-5 мин до 20-30 мин, и оно должно меняться в зависимости от конкретного типа указанного продукта.

Носителем компонентов представленных составов может быть приемлемый для рта наполнитель, пригодный для использования в полости рта. Такие наполнители включают стандартные компоненты аэрозолей для полости рта, раствора для полоскания полости рта, зубной пасты, зубного порошка, твердых и жидких паст и порошков (более полно они описаны ниже).

Настоящее изобретение включает экстракт коры магнолии в качестве активного компонента, имеющего бактерицидное действие в полости рта. Известно, что экстракт коры магнолии обладает бактерицидными свойствами и противогрибковым действием. Например, магнолол и гонокиол являются двумя компонентами экстракта коры магнолии, обладающими противомикробной активностью.

Используемый в настоящем изобретении экстракт коры магнолии может быть получен от O'Laughlin Industries Co., LTD, Guang Zhou Masson Pharmaceutical Co., Honsea Sunshine Bioscience and Technology Co. Экстракт коры магнолии получают в виде порошка. Указанный экстракт растворяют вместе с ароматизатором, и, перед тем, как приготовить продукт для ухода за полостью рта, в целях растворения его можно нагреть. Из экстракта коры магнолии, используя стандартную технологию составления рецептур, можно приготовить разнообразные продукты для ухода за полостью рта.

В то время как уничтожить бактерии в растворе сравнительно легко, биологическая пленка в виде зубного налета представляет собой сложную среду, обеспечивающую защиту от окружающей угрозы как отдельным бактериям, так и синергическим объединением различных видов бактерий (Sharma A. et al., 2005, Oral Microbiology and Immunology, 20: 39-42). Поэтому по сравнению с простым тестом на уничтожение микроорганизмов показать реальную эффективность противомикробного средства в отношении зубного налета, закончившего начальный рост, намного труднее. Диффузия в биологическую пленку ограничена, а бактерии внутри объема этой пленки защищены от воздействия противомикробного средства внеклеточным веществом, типа глюкана и полисахаридов декстрана. Поэтому, вероятно, легче предотвратить образование налета, чем удалить уже сформировавшийся налет по окончании его начального роста.

В соответствии с настоящим изобретением противомикробное действие экстракта коры магнолии усиливается за счет объединения с поверхностно-активным агентом. Несмотря на то, что не подразумевается, что настоящее изобретение ограничено какой-либо определенной теорией, предполагается, что сочетание поверхностно-активного вещества с эффективным количеством экстракта коры магнолии способно обеспечить такой продукт для ухода за полостью рта, который способствует уменьшению биологической пленки налета на зубах, а также в других зонах полости рта, типа языка. Предполагается, что комбинация экстракта коры магнолии с подходящим поверхностно-активным агентом может предотвратить прикрепление бактерий к пелликуле. Такой продукт для ухода за полостью рта способен замедлить или предотвратить увеличение налета. Далее, продукт для ухода за полостью рта по настоящему изобретению, объединенный с ферментами, дополнительными поверхностно-активными агентами, абразивами и их комбинациями, может быть эффективен в удалении уже существующего зубного налета.

Предпочтительным поверхностно-активным агентом является такое средство, которое увеличивает растворимость экстракта коры магнолии и которое можно использовать в качестве пищевой добавки. Пригодные поверхностно-активные агенты включают (но ими не ограничены): стандартные ПАВ, мыла, смачивающие средства, а также эмульгаторы. Некоторые примеры ПАВ включают (но ими не ограничены): соли калия, аммония или натрия. Соли натрия включают анионактивные ПАВ, типа алкилсульфатов, включая натрий лаурилсульфат, натрий лауретсульфат и т.п. Другие соли натрия включают натрий лауроилсаркосинат, натрий брасслат и им подобные. Подходящие соли аммония включают аммоний лаурилсульфат, аммоний лауретсульфат, аммоний лауроилсаркосинат, аммоний брасслат, аммоний кокамидопропилбетаин и им подобные. Другие пригодные поверхностно-активные агенты включают эмульгаторы, которые могут представлять собой жирные кислоты (например, стеариновую кислоту, пальмитиновую кислоту, олеиновую кислоту и линолевую кислоту), их соли, глицеролмоностеарат, глицеролтриацетат, лецитин, моно- и триглицериды, а также ацетилированные моноглицериды. Как это будет описано ниже, некоторые подходящие поверхностно-активные агенты демонстрируют также индивидуальные бактерицидные (уничтожающие микробов) свойства.

Продукт для гигиены полости рта по настоящему изобретению может также включать в себя дополнительные ингредиенты, освежающие дыхание, и ингредиенты, оздоравливающие полость рта, которые могут быть противомикробными по своей природе. Помимо этого указанные дополнительные ингредиенты, освежающие дыхание и осуществляющие гигиену полости рта, могут содержать приемлемые с пищевой точки зрения соли цинка или меди, охлаждающие агенты, пирофосфаты или полифосфаты, а также им подобные.

Настоящее изобретение включает также способ лечения, осуществляемый в целях снижения количества или активности бактерий в полости рта, обеспечивая продукт для ухода за полостью рта. Указанный продукт содержит экстракт коры магнолии в таком количестве, которое, в сочетании с поверхностно-активным агентом, достаточно для уничтожения или дезактивирования бактерий, находящихся в полости рта потребителя такого продукта. При этом у потребителей указанного продукта, нуждающихся в лечении, благодаря этому лечению снижается количество бактерий в полости рта или они инактивируются.

В одной форме продукт для гигиены полости рта готовят со средством доставки в полость рта таким образом, чтобы в полость рта доставлялось по меньшей мере от приблизительно 0,001% до приблизительно 2,0% экстракта коры магнолии. В другой форме продукт для ухода за полостью рта готовят со средством доставки в полость рта таким образом, чтобы в полость рта доставлялось по меньшей мере 0,01% экстракта коры магнолии. Для того, чтобы увеличить эффективность продукта для ухода за полостью рта, в качестве средства доставки в него дополнительно вводят одно или более поверхностно-активных агентов.

В соответствии с одним вариантом настоящего изобретения в продукте для ухода за полостью рта присутствует одно или более поверхностно-активных агентов, их концентрация составляет от приблизительно 0,001% до приблизительно 2,0%. В продукте для ухода за полостью рта экстракт коры магнолии объединен с поверхностно-активным агентом в таком синергическом соотношении, которое обеспечивает увеличение эффективности уничтожения микроорганизмов. Указанное синергическое соотношение меняется от приблизительно 1 части экстракта коры магнолии на 1 часть поверхностно-активного агента до приблизительно 4 частей экстракта коры магнолии на 1 часть поверхностно-активного агента. Одним особенно эффективным поверхностно-активным агентом является натрий лаурилсульфат, а особенно эффективным с синергической точки зрения является состав, содержащий 2 части экстракта коры магнолии на 1 часть натрий лаурилсульфата.

Принимая во внимание, что экстракт коры магнолии представляет собой гидрофобное соединение, имеется несколько средств доставки в полость рта, которые можно использовать для того, чтобы усилить высвобождение экстракта коры магнолии из продукта для ухода за полостью рта. Например, в составе типа зубной пасты, ее рецептура включает основу зубной пасты, являющейся гидрофобной, а это также препятствует высвобождению экстракта коры магнолии. В различных вариантах изобретательских составов продуктов для ухода за полостью рта экстракт коры магнолии, объединенный с поверхностно-активным веществом, можно инкапсулировать, высушить распылением, или включить в состав покрытия; это делается для того, чтобы облегчить и ускорить высвобождение указанного экстракта в полость рта.

В целях оценки эффективности экстракта коры магнолии проводился in vitro анализ трех поддесневых бляшкообразных вирусных бактерий, связанных с наличием дурного запаха изо рта. Порядок определения минимальной ингибирующей концентрации (MIC) был следующим. В качестве положительного эталона использовали хлоргексидин, а в качестве отрицательного - стерильную воду. В качестве растворителя экстракта коры магнолии использовался ментол и Твин 80. Твин 80 известен под стандартным названием Polysorbate 80. Для описанного анализа использовали микротитровальные пластины с 96 ячейками. В каждой из ячеек находились бактерии в количестве 5×10⁵ колониеобразующих единиц/мл (КОЕ/мл), периодически разбавляемые адаптогенами, а также среда для роста бактерий. Все бактериальные культуры стационарно инкубировали при 37°С. Рост бактерий оценивали спустя 48 ч, используя для этого спектрофотометрический анализ при 660 нм. Минимальная ингибирующая концентрация для каждой из анализируемых бактерий определялась как такая минимальная концентрация испытуемого соединения, при которой мутность ограничивается поглощением, составляющим менее 0,05 при 660 нм.

Минимальные бактерицидные концентрации (МВС) определяли с использованием микротитровальных пластин с 96 ячейками, при этом периодически проводилось разбавление, описанное выше для определения MIC. Периодическое разбавление культур в ячейках продемонстрировало, что никакого видимого роста не произошло, и 10 мкл культуры поместили на три одинаковые пластины с кровяным агаром. После проведения на этих пластинах инкубирования в течение 48 ч при 37°С был сделан подсчет жизнеспособных колоний. В первичном инокуляте для каждой из испытуемых бактерий была определена величина KOE/мл. Значение МВС определялось как такая самая низкая концентрация испытуемого соединения, при которой уничтожается по крайней мере 99,9% клеток, находящихся в первичном инокуляте.

Результаты проведенных исследований по определению минимальной ингибирующей концентрации (MIC) и минимальной бактерицидной концентрации (МВС) для экстракта коры магнолии были следующими. Значение MIC для 90% экстракта коры магнолии в случае Streptococcus mutans составило 15,62 мкг/мл. В случае Porphyromonas gingivalis величина MIC для 90% экстракта коры магнолии равна 3,91 мкг/мл, а для 65% экстракта коры магнолии - 7,82 мкг/мл. В случае Fusobacterium nucleatum значение MIC для 90% экстракта коры магнолии составило 3,91 мкг/мл, а величина МВС - 7,82 мкг/мл. В отношении того же самого микроорганизма значения MIC и МВС для 65% экстракта коры магнолии составили 7,82 мкг/мл. Хлоргексидин использовался как положительный эталон, величина MIC и МВС в хлоргексидине для всех трех указанных типов бактерий составила 1,25 мкг/мл. Растворитель, представляющий собой воду с 10% добавкой метанола и 3,8% добавкой Твин 80, не оказал существенного влияния ни на один из трех исследуемых микроорганизмов.

Известно также, что экстракт коры магнолии эффективен в отношении Actinobacillus actinomyecetemcomintans, Prevotella intermedia, Micrococcus luteus и Bacillus subtilis, Veilonella disper, Capnocytophaga gingivalis, а также в отношении микроорганизмов периодонта (Chang В. et al., 1998, Planta Medica 64: 367-369). Многие патогенные микроорганизмы человека связаны с заболеваниями периодонта (Schreiner Н.С. et al., 2003, PNAS 100:7295-7300). Известно также, что многие указанные выше виды микроорганизмов группируются вместе, образуя биологическую пленку (Richard A.H. et al., 2003, Trends in Microbiology 11:94-100).

Помимо описанных выше результатов действие экстракта коры магнолии на формирование биологической пленки и на ее удаление сравнивали с действием различных травяных и природных ингредиентов. Сравнительные исследования проводились с использованием экстракта зеленого чая, экстракта чая оолонг, лакричника и экстракта коры магнолии. Указанное сравнительное исследование включало в себя: определение растворимости в воде, этаноле, смеси вода:этанол и других растворителях (например, твина в воде); величин MIC для роста S.mutans и MIC для формирования биологической пленки S.mutans в пластинах с 96 ячейками; а также действие S.mutans на отслойку биологической пленки.

Зеленый чай растворим в воде; все другие вещества, как было обнаружено, растворяются в смеси вода:этанол=2:1. Экстракт коры магнолии также был растворим в 0,01 мкл 50% раствора Твин 80 в воде.

Для оценки влияния Streptococcus mutans на формирование биологической пленки использовались микротитровальные пластины с 96 ячейками. Каждую из ячеек, содержащую S.mutans (5×10⁶ КОЕ/мл), периодически разбавляли исследуемыми соединениями и питательной средой (BHI с 5% сахарозой). Контрольные образцы включали питательную среду, но не содержали исследуемых соединений. Все пластины инкубирования в течение 48 ч при 37°С в аэробных условиях, рост оценивали спустя 48 ч спектрофотометрически (660 нм), используя для этого считывающее устройство для микротитровальных пластин. После этого супернатант, содержащий неприкрепленные клетки, удалили из каждой ячейки методом аспирации, а массу прикрепившейся биологической пленки растворили в 200 мкл 1 N NaOH. Оптическую плотность измеряли при 660 нм, используя для этого считывающее устройство для микротитровальных пластин. В качестве положительного эталона применяли хлоргексидин (40 мкг/мл).

Для дальнейшей оценки влияния S. mutans на отслойку биологической пленки использовались стерильные микротитровальные пластины с 96 ячейками, в каждую из которых был инокулирован S. mutans (5×10⁶ КОЕ/мл). Добавили питательную среду (бульон экстракта мозг-сердце, BHI с 5% сахарозой) и в целях формирования биологической пленки в течение 48 ч проводили инкубирование при 37°С в аэробных условиях. Спустя 48 ч неприкрепленный супернатант подвергли аспирации, а потом периодически разбавляли. К полученной сформировавшейся биологической пленке добавили исследуемые соединения и провели инкубирование в течение 48 ч при 37°С в аэробных условиях. Контрольные образцы содержали растворитель, но не содержали исследуемых соединений. Спустя 30 мин супернатант аспирировали из ячеек, а оставшуюся биологическую пленку растворили в 200 мкл IN NaOH. Количественную оценку проводили спектрофотометрически при 660 нм, используя для этого считывающее устройство для микротитровальных пластин. В качестве положительного эталона применяли хлоргексидин. Если под действием исследуемых соединений произошла отслойка биологической пленки, то спектрофотометрическое поглощение или оптическая плотность (OD) должны уменьшиться по сравнению с необработанными контрольными образцами.

Ниже в таблице 1 приведены результаты сравнительного анализа в виде значений мкг/мл для каждого из соединений. В указанной таблице 1, а также и в следующих таблицах экстракт коры магнолии обозначен МВЕ, а хлоргексидин, используемый в качестве положительного эталона, обозначен СНХ.

Таблица 1
Сравнительное действие на MIC и биопленку, мкг/мл
Эталон	Зеленый чай	Оолонг чай	Лакричник	МВБ	СНХ
Рост MIC	250	1000	250	7,8	2,5
MIC, формирование биопленки	250	250	250	7,8	2,5
MIC, отслойка биопленки	>1000	>1000	>10000	>1000	>10

Из данных, приведенных в таблице 1, видно, что при удалении образовавшейся биологической пленки ни одно из исследуемых соединений не было эффективнее хлоргексидина. Экстракт зеленого чая, экстракт лакричника и экстракт коры магнолии способны сдерживать образование биологической пленки S. mutans, ингибируя рост бактерий, поскольку величины MIC для роста и для формирования биологической пленки идентичны. Оолонг чай не подавляет планктонный рост, но более эффективен в подавлении роста биологической пленки. Экстракт коры магнолии наиболее эффективен для сдерживания как роста, так и формирования биологической пленки, и его эффективность имеет значение в пределах аналогичного параметра для положительного эталона - хлоргексидина.

Несмотря на то, что полезно показать сравнительное действие экстракта коры магнолии на формирование биологической пленки и на рост MIC, приведенный далее тест не способен эффективно имитировать in vivo действие продукта для ухода за полостью рта на возникновение биологической пленки. В ситуации in vivo активнодействующее вещество может воздействовать на налет в течение определенного периода времени с заданной частотой (например, по 5 минут три раза в день). Потому была проведена серия сравнительных экспериментов для имитации использования потенциальных активных ингредиентов in vivo. Для осуществления указанных исследований были приготовлены слюносодержащие композиции, составы которых приведены ниже в таблицах 2 и 3.

Таблица 2
Слюносодержащие буферные композиции (стерилизованы на фильтре после приготовления)
Соединение	мг/л
Хлорид аммония	233
Хлорид кальция, дигидрат	210
Хлорид магния, гексагидрат	43
Хлорид калия	1162
KH2PO4	354
Тиоцианат калия	222
Цитрат натрия	13
Бикарбонат натрия	535
Na2HPO4	375
Мочевина	173

Таблица 3
Среда, содержащая слюну с добавками (стерилизована на фильтре после приготовления)
Ингредиент	Весовые %
Неразбавленная слюна	25
Буфер для слюны	45
Модифицированная среда (MEM)	20
Триптический соевый бульон	10

Была использована смешанная культуральная система с бактериями из свежесобранной стимулированной неразбавленной слюны. Для инокулирования покрытых слюной гидроксиапатитных (S-HA) дисков использовался осадок, полученный в результате центрифугирования клеток слюны. Указанные диски поместили в культуральные планшеты на 24 ячейки, и в течение времени, составляющего до 3 суток, проводили инкубирование. Биологические пленки подвергались воздействию активнодействующих соединений на 2 и 3 день (начиная с 18 ч), а на 4 день была проведена количественная оценка. Количество бактерий определяли по спектрофотометрическому поглощению или оптической плотности (OD) при 600 нм. Эксперимент включал в себя 5 следующих фаз: образование пелликулы, прикрепление бактерий, рост биологической пленки, обработку активнодействующими соединениями и установление численности бактерий.

В целях формирования пелликулы диски НА промывали в деионизированной воде под воздействием ультразвука, а затем высушили на воздухе и обработали в автоклаве. После этого указанные диски на 2 ч поместили в планшет на 24 ячейки, содержащие 1 мл 50% стерильной слюны (1 часть стерильной неразбавленной слюны: 1 часть буфера для слюны, стерилизован на фильтре после приготовления), процесс проводили при медленном перемешивании при комнатной температуре. Осуществили засасывание слюны, а потом диски перенесли в чистые ячейки для того, чтобы произошло прикрепление бактерий.

Для формирования биологической пленки суспензию бактерий удалили, а диски перенесли в чистые ячейки. Добавили 1 мл питательной среды, содержащей слюну с добавками, а планшет поместили в инкубатор для инкуби