Способы и композиции для повышения эффективности антител для лечебных целей с использованием соединений, потенциирующих nk-клетки

Способы и композиции для повышения эффективности антител для лечебных целей с использованием соединений, потенциирующих nk-клетки

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится, вообще, к способам и композициям для повышения эффективности антител для лечебных целей. Конкретнее, изобретение относится к применению антител для лечебных целей в сочетании с соединением, которое блокирует ингибирующий рецептор или стимулирует активирующий рецептор естественных клеток-киллеров (NK-клеток), причем посредством этого создается возможность потенциирования цитотоксичности естественных клеток-киллеров у млекопитающих, для того, чтобы повысить эффективность лечения людей, в частности через усиление ADCC механизма.

Уровень техники

Различные лечебные стратегии для человеческого организма основаны на применении антител для лечебных целей (therapeutic antibodies). К ним относятся, например, применение антител для лечебных целей, разработанных для устранения клеток-мишеней, в частности пораженных клеток, таких как клетки, зараженные вирусом, опухолевые клетки или другие патогенные клетки. Такие антитела типично представляют собой моноклональные антитела, виды IgG, типично, Fc-участки человеческого IgGI или IgG3. Такие антитела могут быть нативными или рекомбинантными антителами и часто являются "гуманизированными" мышиными антителами [т.е., содержащими функциональные области различного вида, типично, Fc-участок человеческого происхождения или происходящий от примата, не являющегося человеком, и вариабельная область антител или гипервариабельная область антигенсвязывающих участков антител, определяющих их комплементарность (CDR, complementary determining region), мышиного происхождения]. С другой стороны, моноклональные антитела могут быть полностью человеческими, полученными с помощью иммунизации трансгенной мыши, имеющей локус человеческого Ig, или полученными из библиотеки кДНК из клеток человека.

Конкретным примером таких антител для лечебных целей является ритуксимаб (rituximab, Mabthera®, Rituxan®), который представляет собой химерные моноклональные антитела против CD20, полученные из человеческих γ1 и к константных областей (поэтому с Fc-участком человеческого IgGI), соединенных с мышиными вариабельными областями, придающими специфичность к CD20, В последние несколько лет ритуксимаб существенно изменил лечебную стратегию против В-лимфопролиферативных злокачественных состояний, в частности неходжкинских лимфом (NHL). Другими примерами гуманизированных IgGI антител являются алемтузумаб (alemtuzumab, кампат, Campath-1H®), который применяют при лечении В-клеточных злокачественных состояний, и трастузумаб (trastuzumab, Herceptin®), который применяют при лечении рака молочной железы. В технике раскрываются другие примеры антител, разрабатываемых для лечебных целей.

Механизм действия антител для лечебных целей пока является предметом для обсуждения. Инъекция антител ведет к исчезновению клеток, содержащих антиген, специфически узнаваемый антителом. Такое исчезновение может быть опосредовано, по меньшей мере, тремя механизмами: опосредованной антителами клеточной цитотоксичности (ADCC, antibody-dependent cellular cytotoxicity), комплемент-зависимьм лизисом клеток и прямым противоопухолевым ингибированием роста опухоли через сигналы, подаваемые антигенами, направляемые антителами.

Хотя указанные антитела представляют новый и эффективный подход к лечению людей, в частности к лечению опухолей, они не всегда проявляют устойчивую эффективность. Например, хотя показано, что ритуксимаб, один или в сочетании с химиотерапией, является эффективным при лечении NHL как низкой, средней, так и высокой степени, от 30% до 50% пациентов с NHL низкой степени не имеют клинической реакции на ритуксимаб. Предполагается, что уровень экспрессии CD20 на клетках лимфомы, наличие высокой опухолевой массы в момент лечения или низких концентраций ритуксимаба в сыворотке могут объяснить недостаточную эффективность ритуксимаба для некоторых пациентов. Тем не менее, фактические причины неудачи лечения остаются большей частью неизвестными.

Кроме того, применение антител для лечебных целей может ограничиваться побочным действием, вызываемым их введением. Например, у пациентов могут проявиться такие побочные действия как лихорадка, головная боль, тошнота, гипотензия, стерторозное (шумное) дыхание, сыпь, инфекции и ряд других побочных действий, потенциально ограничивающих возможное количество или частоту, с которой можно вводить антитела.

Таким образом, может быть весьма интересным повышение эффективности антител для лечебных целей или возможность достижения лечебной эффективности с использованием уменьшенных доз антител, которые с меньшей вероятностью вызывают побочное действие. Настоящее изобретение направлено на указанные и другие потребности.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение раскрывает новые подходы к повышению эффективности антител для лечебных целей. Не ограничиваясь изложенной далее теорией, полагают, что неожиданные результаты, достигаемые с применением способов настоящего изобретения, имеют место вследствие способности антител для лечебных целей, когда их инъецируют, усиливать механизм ADCC in vivo. Безусловно, настоящее изобретение относится к новым композициям и способам, которые преодолевают трудности, связанные с эффективностью антител для лечебных целей. Настоящее изобретение показывает, что NK-клетки индивидуума (natural killer cells, естественные клетки-киллеры, которые проявляют цитотоксичность по отношению к клеткам собственного организма) могут иметь плохое лечебное опосредованное mAb (monoclonal antibody, моноклональными антителами) ADCC из-за недостаточной активации NK-клеток, например, путем ингибирования ингибирующих рецепторов NK-клеток. Предпочтительно усиление механизма ADCC достигается введением соединений, блокирующих ингибирующие рецепторы или стимулирующих активирующие рецепторы на естественных клетках-киллерах, причем посредством этого промотируется потенциирование цитотоксичности естественных клеток-киллеров в организме млекопитающих. Предпочтительно соединение представляет собой антитело или его фрагмент.

Указанные антитела или другие соединения могут взаимодействовать, например, с ингибирующими рецепторами NK-клеток - молекулами ингибирующего рецептора киллера (KIR, killer inhibitory receptor, или NKG2A/C) или с активирующими рецепторами NK-клеток, например NCR, такими как NKp30, NKp44 или NKp46, причем посредством этого нейтрализуется ингибирование клеток и повышается активность их ADCC.

Конкретнее, изобретение относится к лечению субъекта, при котором соединение, предпочтительно антитела или его фрагменты, блокирующее ингибирующий рецептор или стимулирующие активирующий рецептор NK-клетки, вводят субъекту совместно с антителами для лечебных целей. В данном описании демонстрируется, что эффективность антител для лечебных целей можно существенно усилить совместным введением, например, совместной инъекцией, такого соединения, предпочтительно антител или их фрагментов, которое преодолевает ингибирование NK-клеток, например, блокированием ингибирующего рецептора или стимулированием активирующего рецептора NK-клетки.

Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим антитела для лечебных целей и соединение, предпочтительно антитела или их фрагменты, блокирующее ингибирующий рецептор или стимулирующее активирующий рецептор NK-клетки. Изобретение также относится к наборам, содержащим антитела для лечебных целей и соединение, предпочтительно антитела или их фрагменты, блокирующее ингибирующий рецептор или стимулирующее активирующий рецептор NK-клетки.

Изобретение также относится к применению соединения, предпочтительно антител или их фрагментов, блокирующего ингибирующий рецептор или стимулирующего активирующий рецептор NK-клетки, для повышения эффективности лечения антителами для лечебных целей или для усиления ADCC у субъекта, которого лечат антителами для лечебных целей.

Изобретение также относится к применению соединения, предпочтительно антител или их фрагментов, блокирующего ингибирующий рецептор или стимулирующего активирующий рецептор NK-клетки, и антител для лечебных целей для получения лекарственного средства для лечения заболевания. Конкретнее, для лечения заболевания требуется устранение клеток-мишеней, предпочтительно зараженных клеток, таких как клетки, зараженные вирусом, опухолевые клетки или другие патогенные клетки. Предпочтительно заболевание представляет собой рак, инфекции или иммунопатологию. Предпочтительнее заболевание выбирают из группы, состоящей из рака, аутоиммунного заболевания, воспалительного заболевания и вирусного заболевания. К заболеванию также относится отторжение трансплантата, в частности отторжение аллотрансплантата, и болезнь "трансплантат против хозяина" (GVHD, graft versus host disease).

Настоящее изобретение также относится к способу снижения дозировки антител для лечебных целей, например антител, которые связываются Fcy-рецептором, предпочтительно CD 16 (FcyRIIIa). Например, совместное введение антител для лечебных целей и соединения, блокирующего ингибирующий рецептор или стимулирующего активирующий рецептор NK-клетки, позволяет применять более низкую дозу антител для лечебных целей. Такие антитела можно использовать в дозе, составляющей 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% дозы, рекомендованной в отсутствие соединения, или в более низкой дозе.

Кроме того, изобретение относится к способу определения терапевтически эффективной пониженной дозы антител для лечебных целей, например антител, связываемых CD 16, включающему

i) совместную инкубацию антител для лечебных целей в первой концентрации с клетками-мишенями и NK-клетками и в отсутствие соединения, блокирующего ингибирующие рецепторы или стимулирующего активирующие рецепторы NK-клеток;

ii) совместную инкубацию антител для лечебных целей во второй, меньшей концентрации с клетками-мишенями, с NK-клетками и в присутствии соединения, блокирующего ингибирующие рецепторы или стимулирующего активирующие рецепторы NK-клеток;

iii) определение, является ли исчезновение клеток-мишеней, наблюдаемое на стадии (ii), настолько же значительным как на стадии (i).

Если наблюдают, что стадия (ii) так же эффективна, как стадия (i), тогда относительные концентрации соединения и антител для лечебных целей можно изменять и наблюдать за исчезновением клеток-мишеней для того, чтобы идентифицировать различные условия, которые могут подходить для применения к данному пациенту, например максимизацию исчезновения клеток-мишеней, пониженную дозу антител для лечебных целей или пониженную дозу соединения, в зависимости от конкретных потребностей пациента.

В частном аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения заболевания у человека, нуждающегося в этом, включающему

a) введение указанному субъекту соединения, блокирующего ингибирующий рецептор или стимулирующего активирующий рецептор NK-клетки; и

b) введение указанному субъекту антител для лечебных целей, которые могут связываться CD 16.

В одном воплощении антитела для лечебных целей и соединение вводят субъекту одновременно. В другом воплощении соединение вводят субъекту в пределах одной недели, в пределах 4 дней, в пределах 3 дней или того же дня (например, в пределах примерно 24 часов) после введения антител для лечебных целей. В другом воплощении заболеванием является рак, инфекции или иммунопатология.

В одном воплощении способ также включает дополнительную стадию, на которой оценивают активность или число NK-клеток до или после введения соединения. В другом воплощении дополнительная стадия включает

i) получение NK-клеток от субъекта до введения;

ii) инкубацию NK-клеток в присутствии одной или нескольких клеток-мишеней, узнаваемых антителами для лечебных целей, в присутствии или в отсутствие соединения;

iii) оценку воздействия соединения на способность NK-клеток устранять клетки-мишени; где выявление того, что соединение усиливает способность NK-клеток устранять клетки-мишени, указывает на то, что соединение подходит для применения в способе, и что способ подходит для применения к субъекту.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей антитела для лечебных целей, например, которые могут связываться CD 16, соединение, блокирующее ингибирующие рецепторы или стимулирующее активирующие рецепторы NK-клеток, и фармацевтически приемлемый носитель. В другом аспекте настоящее изобретение относится к набору, содержащему антитела для лечебных целей, например, которые могут связываться CD 16, и одно или несколько соединений, блокирующих ингибирующие рецепторы или стимулирующих активирующие рецепторы NK-клеток.

Для любого из вышеуказанных способов, композиций или наборов в одном воплощении антитела для лечебных целей содержат Fc-участок человеческого IgG1 или IgG3. В другом воплощении соединение представляет собой антитело или его фрагмент. В еще одном воплощении антитела для лечебных целей представляют собой моноклональные антитела или их фрагменты. В другом воплощении антитела для лечебных целей не являются конъюгированными с радиоактивной или токсичной группой. В другом воплощении соединение ингибирует ингибирующий рецептор NK-клетки. В другом воплощении соединение стимулирует активирующий рецептор NK-клетки. В другом воплощении соединение представляет собой человеческое, гуманизированное или химерное антитело или его фрагмент. В одном воплощении антитела для лечебных целей или соединения могут представлять собой фрагменты или производные антител, такие как, среди прочего, Fab фрагмент, Fab'2 фрагмент, CDR и ScFv.

В одном воплощении антитела для лечебных целей представляют собой человеческие, гуманизированные или химерные антитела или их фрагменты. В другом воплощении антитела для лечебных целей представляют собой ритуксимаб или кампат (Campath). В другом воплощении антитела представляют собой ритуксимаб, и указанные антитела вводят в дозировке менее чем 375 мг/м² в неделю. В другом воплощении антитела представляют собой кампат, и антитела вводят в дозировке менее чем 90 мг в неделю.

В одном воплощении соединение связывается, по меньшей мере, с одним из человеческих рецепторов NKG2, KIR2DL или KIR3DL и ингибирует соответствующее, опосредованное NKG2, KIR2DL или KIR3DL, ингибирование цитотоксичности NK-клеток. В другом воплощении соединение блокирует ингибирующий рецептор NK-клетки, выбранный из группы, состоящей из KIR2DL1, KIR2DL2/3, KIR2DL4, KIR2DL5A, KIR2DL5B, KIR3DL1, KIR3DL2, KIR3DL3, LILRB1, NKG2A, NKG2C, NKG2E и LILRB5. В другом воплощении соединение связывается с общей детерминантой человеческих рецепторов KIR2DL и ингибирует опосредованное KIR2DL ингибирование цитотоксичности NK-клеток. В другом воплощении соединение связывается с общей детерминантой человеческих рецепторов KIR2DL1, KIR2DL2 и KIR2DL3 и ингибирует опосредованное KIR2DL1, KIR2DL2 и KIR2DL3 ингибирование цитотоксичности NK-клеток. В другом воплощении соединение ингибирует связывание аллельного варианта молекулы HLA-C, содержащей остаток Lys в позиции 80, с человеческим рецептором KIR2DL1, и связывание аллельного варианта молекулы HLA-C, содержащей остаток Asn в позиции 80, с человеческими рецепторами KIR2DL2 и KIR2DL3. В другом воплощении соединение связывается с тем же эпитопом, что и моноклональные антитела DF200, продуцируемые гибридомой DF200. В другом воплощении соединение конкурирует с моноклональными антителами DF200, продуцируемыми гибридомой DF200, за связывание с рецептором KIR на поверхности человеческой NK-клетки. В другом воплощении соединение представляет собой моноклональное антитело DF200, продуцируемое гибридомой DF200, или его фрагмент.

В одном воплощении соединение связывается с рецептором, выбранным из группы, состоящей из NKp30, NKp44, NKp46 и NKG2D. В другом воплощении соединение происходит от, или конкурирует с моноклональными антителами, выбранными из группы, состоящей из AZ20, А76, Z25, Z231 и ВАВ281.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу отбора соединения для введения в сочетании с антителами для лечебных целей, причем указанный способ включает

i) обеспечение тестируемого соединения, ингибирующего ингибирующие рецепторы или стимулирующего активирующие рецепторы NK-клеток;

ii) инкубацию антител для лечебных целей с клетками-мишенями, специфически узнаваемыми антителами для лечебных целей, в присутствии NK-клеток и в присутствии или в отсутствие испытываемого соединения; и

iii) оценку действия соединения на способность NK-клеток устранять клетки-мишени; где обнаружение того, что соединение усиливает способность NK-клеток устранять клетки-мишени, указывает на то, что соединение подходит для применения в способе.

В одном воплощении соединение усиливает способность антител для лечебных целей разрушать клетки-мишени на 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% или более. В другом воплощении соединение выбирают из группы, состоящей из антитела, фрагмента антитела, моноклонального антитела, фрагмента моноклонального антитела, гуманизированного антитела, химерного антитела и человеческого антитела. В другом воплощении клетки-мишени представляют собой раковые клетки, клетки, зараженные вирусом, или клетки, поддерживающие аутоиммунное расстройство. В другом воплощении антителами для лечебных целей являются ритуксимаб или кампат.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу повышения эффективности лечения, включающему введение субъекту антител для лечебных целей, которые могут связываться CD 16, причем указанный способ включает введение указанному субъекту до, одновременно или после введения указанных антител для лечебных целей, терапевтически эффективного количества соединения, блокирующего ингибирующий рецептор или стимулирующего активирующий рецептор NK-клетки. В одном воплощении соединение повышает эффективность лечения, усиливая ADCC у указанного субъекта.

Краткое описание фигур

Фигура 1. Моноклональные антитела DF200 связываются с общей детерминантой различных человеческих рецепторов KIR2DL.

Фигура 2. Восстановление лизиса mAb (моноклональными антителами) против KIR2DL на мишени C1R Cw4 при соотношении эффектор/мишень 4/1. Моноклональные антитела DF200 ингибируют опосредованное KIR2DL ингибирование цитотоксичности KIR2DL1-положительных NK-клеток (восстановленный лизис) на Суу4-положительных клетках-мишенях.

Фигура 3. Опосредованное ритуксаном усиление ADCC KIR2DL1-положительного NK-клона на Сw4-положительной клеточной линии EBV путем блокирования взаимодействия KIR/HLA. Цитолиз NK-клона, содержащего KIR2DL1, тестировали против Сw4-положительной трансформированной EBV (СD20-положительной) клеточной линии-мишени при разных соотношениях эффектор/мишень (от 1 до 4) в присутствии 5 мкг/мл антител против CD20 (ритуксан) и 10 мкг/мл антител ЕВ6 (против KIR2DL1); одного ритуксана; одних ЕВ6 или без каких-либо антител. ADCC существенно усиливается в присутствии антител против KIR2DL1 (ЕВ6).

Фигура 4. Опосредованное кампатом усиление ADCC KIR2DL1-положительного NK-клона на Сw4-положительной клеточной линии EBV путем блокирования взаимодействия KIR/HLA. Цитолиз NK-клона, содержащего KIR2DL1, тестировали против Сw4-положительной трансформированной EBV (CD20-пoлoжитeльнoй) клеточной линии-мишени в присутствии кампата и 100 мкг/мл антител ЕВ6 (против KIR2DL1); одного кампата; одних ЕВ6 или без каких-либо антител. ADCC существенно усиливается в присутствии антител против KIR2DL1 (ЕВ6).

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение относится к способу повышения эффективности антител для лечебных целей. Конкретнее, изобретение раскрывает, что применение соединения, предпочтительно антител или их фрагментов, потенциирующего NK-клетки, предпочтительно путем блокирования ингибирующего рецептора или активирования активирующего рецептора NK-клетки, может существенно повысить эффективность антител для лечебных целей путем совместного введения антител, направленных против NK-клеточного рецептора, например ингибирующего рецептора.

Следовательно, изобретение относится к способу лечения заболевания у субъекта, нуждающегося в таком лечении, включающему

a) введение указанному субъекту соединения, предпочтительно антител или их фрагментов, блокирующего ингибирующий рецептор или стимулирующего активирующий рецептор NK-клетки; и

b) введение указанному субъекту антител для лечебных целей.

Указанные антитела для лечебного применения могут связываться CD 16 NK-клеток, предпочтительно через Fc-участок.

Предпочтительно указанные антитела для лечебных целей содержат Fc-участок человеческого IgG1 или IgG3, в частности моноклональные антитела или их фрагменты, также предпочтительно гуманизированные, человеческие или химерные антитела или их фрагменты, например ритуксимаб.

Подразумевается, что соединения, предпочтительно антитела или их фрагменты, блокирующие ингибирующий рецептор NK-клетки, можно вводить субъекту до, одновременно или после введения антител для лечебного применения. Способ введения различных антител зависит от их биологической доступности и фармакокинетики. Предпочтительно антитела для лечебных целей вводят в пределах недели относительно введения соединений, предпочтительно антител или их фрагментов, блокирующих ингибирующий рецептор NK-клетки, предпочтительнее в пределах периода в 5 или 2 дня. Предпочтительно антитела для лечебных целей вводят до или одновременно с соединениями, предпочтительно антителами или их фрагментами, блокирующими ингибирующий рецептор NK-клетки.

В другом аспекте изобретение относится к способу усиления ADCC у субъекта, получающего лечение антителами для лечебных целей, причем указанный способ включает введение указанному субъекту до, одновременно или после введения указанных антител для лечебных целей достаточное для усиления ADCC количество соединения, предпочтительно антител или их фрагментов, блокирующего ингибирующий рецептор NK-клетки. Указанные антитела для лечебных целей могут связываться CD 16 NK-клеток, предпочтительно через Fc-участок. Предпочтительно указанные антитела для лечебных целей содержат Fc-участок человеческого IgG1 или IgG3, в частности моноклональные антитела или их фрагменты, также предпочтительно гуманизированные, человеческие или химерные антитела или их фрагменты, например ритуксимаб.

В другом аспекте изобретение относится к способу повышения эффективности лечения субъекта антителами для лечебных целей, причем указанный способ включает введение указанному субъекту до, одновременно или после введения указанных антител для лечебных целей достаточного для повышения эффективности указанных антител для лечебных целей количества соединения, предпочтительно антител или их фрагментов, блокирующего ингибирующий рецептор NK-клетки. Указанные антитела для лечебных целей могут связываться CD 16NK-клеток, предпочтительно через Fc-участок. Предпочтительно указанные антитела для лечебных целей содержат Fc-участок человеческого IgG1 или IgG3, в частности моноклональные антитела или их фрагменты, также предпочтительно гуманизированные, человеческие или химерные антитела или их фрагменты, например, ритуксимаб.

Определения

Используемые в данном описании следующие далее термины имеют приписываемые им значения, если не указано иное.

Используемый в данном описании термин "NK"-клетки относится к субпопуляции лимфоцитов, которая вовлекается в нестандартный иммунитет. NK-Клетки можно идентифицировать на основании некоторых характеристик и биологических свойств, таких как экспрессия специфических поверхностных антигенов, в том числе CD 16, CD56 и/или CD57, отсутствие альфа/бета- или гамма/дельта-TCR комплекса на поверхности клетки, способность связываться с и убивать клетки, которые не в состоянии экспрессировать "собственные" антигены MHC/HLA, путем активации специфических цитолитических ферментов, способность убивать опухолевые клетки или другие пораженные клетки, экспрессирующие лиганд для активирующих рецепторов NK, и способность высвобождать белковые молекулы, называемые цитокинами, которые стимулируют или ингибируют иммунную реакцию. Любую из указанных характеристик и активностей можно использовать для идентификации NK-клеток с использованием способов, хорошо известных в технике.

Термин "антитело", используемый в данном описании, относится к поликлональным и моноклональным антителам. В зависимости от типа константной области в тяжелых цепях антитела относят к одному из пяти основных классов: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM. Некоторые их них также подразделяют на подклассы или изотипы, такие как IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 и т.д. Пример структурной единицы иммуноглобулинов (антител) включает тетрамер. Каждый тетрамер состоит из двух идентичных пар полипептидных цепей, причем каждая пара имеет одну "легкую" (L, light, примерно 25 кД) и одну "тяжелую" (Н, heavy, примерно 50-70 кД) цепь. N-конец каждой цепи определяет вариабельную область в примерно 100-110 или более аминокислот, которая в первую очередь ответственна за распознавание антигенов. Термины "вариабильная область легкой цепи" (V_L) и "вариабильная область тяжелой цепи" (V_H) относятся к таким легким и тяжелым цепям соответственно. Константные области тяжелых цепей, соответствующие различным классам иммуноглобулинов, называют "альфа", "дельта", "эпсилон", "гамма" и "мю", соответственно. Структуры субъединиц и трехмерные конфигурации различных классов иммуноглобулинов хорошо известны. IgG и/или IgM являются предпочтительными классами антител, используемых в данном изобретении, причем IgG являются особенно предпочтительными, поскольку они являются наиболее обычными антителами в физиологической ситуации, поскольку их легче всего получать в лаборатории, и поскольку IgG специфически распознаются Fc-гамма рецепторами. Предпочтительно антитела данного изобретения являются моноклональными антителами.

Особенно предпочтительными являются гуманизированные, химерные, человеческие или иные подходящие для человека антитела.

В контексте данного изобретения термин "антитело или антитела для лечебных целей" (therapeutic antibody) предназначен, конкретнее, для любых антител, которые функционируют как устраняющие у пациента клетки-мишени. В частности, антитела для лечебных целей специфически связываются с антигенами, присутствующими на поверхности клеток-мишеней, например опухолевыми специфическими антигенами, присутствующими преимущественно или исключительно на опухолевых клетках. Предпочтительно антитела для лечебных целей включают человеческие Fc-участки или способны взаимодействовать с человеческими Fc-рецепторами. Антитела для лечебных целей могут метить клетки любыми способами, например ADCC или иначе, и могут быть "голыми", т.е. без конъюгированных частиц, или могут быть конъюгированы с такими соединениями, как радиоактивные метки или токсины.

Термин "специфически связываются с" означает, что антитела могут связываться предпочтительно в конкурентно-связывающем анализе с партнером по связыванию, например активирующим рецептором NK, таким как NKp30, NKp44 или NKp46, или человеческим Fc-гамма рецептором, при оценке с использованием или рекомбинантных форм белков, их эпитопов, или нативных белков, присутствующих на поверхности изолированных NK или соответствующих клеток-мишеней. Конкурентно-связывающие анализы и другие способы также описываются ниже и хорошо известны в технике.

Антитело, "подходящее для человека" (human-suitable), является любым антителом, дериватизированным антителом или фрагментом антитела, которые можно безопасно применять для людей в случае, например, способов лечения, описанных в данном описании. Антитела, подходящие для человека, включают все типы гуманизированных, химерных или полностью человеческих антител или антитела, в которых, по меньшей мере, часть антитела происходит от человека или модифицирована иначе с тем, чтобы достигать иммунной реакции, которая вызывается, когда используют нативные, не являющиеся человеческими, антитела.

Термин "иммуногенный фрагмент" в данном описании обозначает любой полипептидный или пептидный фрагмент, способный выявлять иммунную реакцию, такую как

i) выработка антител, связывающих указанный фрагмент и/или связывающих любую форму молекулы, содержащей указанный фрагмент, включая мембранно-связанный рецептор и происходящие от него мутанты,

ii) стимуляция Т-клеточной реакции, вовлекающей Т-клетки во взаимодействие с бимолекулярным комплексом, содержащим любую молекулу МНС и пептид, образованный от указанного фрагмента,

iii) связывание трансфецированных носителей, таких как бактериофаги или бактерии, экспрессирующие гены, кодирующие иммуноглобулины млекопитающих.

С другой стороны, термин "иммуногенный фрагмент" также относится к любой конструкции, способной выявлять иммунную реакцию, описанную выше, такой как пептидный фрагмент, конъюгированный с белком-носителем ковалентной связью, химерная рекомбинантная полипептидная конструкция, содержащая указанный пептидный фрагмент в своей аминокислотной последовательности, и специфически включает клетки, трансфецированные кДНК, последовательность которой содержит участок, кодирующий указанный фрагмент.

Для целей настоящего изобретения определение антитела как "гуманизированное" относится к антителу, в котором константная область и каркасный участок вариабельной области одного или нескольких человеческих иммуноглобулинов слиты с участком связывания, например CDR, иммуноглобулина животного. Такие гуманизированные антитела создают для того, чтобы сохранить специфичность связывания антител, не являющихся человеческими, от которых происходят участки связывания, но избежать иммунной реакции против антител, не являющихся человеческими.

"Химерное антитело" представляет собой молекулу антитела, в которой

a) константная область или ее часть изменена, заменена или обменена таким образом, что сайт связывания антигена (вариабельная область) связывается с константной областью молекулы другого или измененного класса, эффекторной функции или вида, и или полностью другой молекулой, которая придает новые свойства химерному антителу, например ферментом, токсином, гормоном, фактором роста, лекарственньм средством и т.д.; или

b) вариабельная область или ее часть изменена, заменена или обменена с вариабельной областью с отличной или измененной антиген-специфичностью. В предпочтительных воплощениях настоящего изобретения химерные антитела, тем не менее, сохраняют Fc-участок иммуноглобулина, предпочтительно человеческий Fc-участок, за счет чего возможны взаимодействия с человеческими Fc-рецепторами на поверхности клеток-мишеней.

В контексте данного изобретения термины "потенциированные", "активные" или "активированные" NK-клетки обозначают биологически активные NK-клетки, конкретнее NK-клетки, способные лизировать клетки-мишени. Например, "активные" NK-клетки способны убивать клетки, которые экспрессируют лиганд для активирующих рецепторов NK и не в состоянии экспрессировать "собственные" антигены MHC/HLA (KIR-несовместимые клетки). Примерами подходящих клеток-мишеней для применения в перенацеленных киллинг-анализах (redirected killing assays) являются клетки Р815 и К562, но можно использовать любые клетки из ряда типов клеток, которые хорошо известны в технике (см., например, Sivori et al. (1997), J. Exp. Med., 186:1129-1136; Vitale et al. (1998), J. Exp. Med., 187:2065-2072; Pessino et al. (1998), J. Exp. Med., 188:953-960; Neri et al. (2001), Clin. Diag. Lab. Immun., 8:1131-1135). "Потенциированные", "активные" или "активированные" клетки также можно идентифицировать по любому свойству или активности, известным в технике как связанные с NK-активностью, таким как продуцирование цитокинов (например, IFN-γ и TNF-α) или повышение уровней свободного внутриклеточного кальция. Для целей настоящего изобретения термины "потенциированные", "активные" или "активированные" NK-клетки относятся определенно к NK-клеткам in vivo, которые не подавляются стимуляцией ингибирующего рецептора или в которых такое подавление преодолено, например, через стимуляцию активирующего рецептора.

Используемый в данном описании термин "NK-активирующий рецептор" относится к любой молекуле на поверхности NK-клеток, которая, когда стимулирована, вызывает поддающееся измерению усиление какого-либо свойства или активности, известных в технике как связанные с NK-активностью, таких как продуцирование цитокинов (например, IFN-γ и TNF-α), повышение уровней свободного внутриклеточного кальция, способность связываться с клетками-мишенями в перенацеленном киллинг-анализе, описанном, например, в другом месте в данном описании, или способность стимулировать пролиферацию NK-клеток. Термин "KIR-активирующий рецептор" включает, но не ограничивается перечисленным, NKp30, NKp44, NKp46, NKG2D, IL-12R, IL-15R, IL-18R и IL-21R. Термин "NK-активирующий рецептор", используемый в данном описании, исключает рецептор IL-2 (IL-2R). Способы определения, является ли NK-клетка активной или профилирующей или не является, описываются подробнее ниже и хорошо известны специалистам в данной области техники.

Используемый в данном описании термин "ингибирующий" или "подавляющий NK-рецептор" относится к любой молекуле на поверхности NK-клеток, которая, когда стимулирована, вызывает поддающееся измерению ослабление какого-либо свойства или активности, известных в технике как связанные с NK-активностью, таких как продуцирование цитокинов (например, IFN-γ и TNF-α), повышение уровней свободного внутриклеточного кальция или способность связываться с клетками-мишенями в перенацеленном киллинг-анализе, описанном, например, в другом месте в данном описании. Примерами таких рецепторов являются KIR2DL1, KIR2DL2/3, KIR2DL4, KIR2DL5A, KIR2DL5B, KIR3DL1, KIR3DL2, KIR3DL3, LILRB1, NKG2A, NKG2C, NKG2E и LILRB5. Способы определения, является ли NK-клетка активной или не является, описываются подробнее ниже и хорошо известны специалистам в данной области техники.

В настоящем изобретении термин "блокирование ингибирующего рецептора или стимуляция активирующего рецептора NK-клетки" относится к способности некоторых соединений, предпочтительно антител, их фрагментов или производных, предпочтительно непосредственно взаимодействовать с, по меньшей мере, одним ингибирующим или активирующим рецептором NK-клетки, например KIR, NKG2A/C, NKp30, NKp44, NKp46 и другими, перечисленными в данном описании, и/или нейтрализовать подавляющие сигналы рецептора (в случае ингибирующих рецепторов) или стимулировать сигналы рецептора (в случае активирующих рецепторов). В случае ингибирующих рецепторов предпочтительно соединение, предпочтительно антитела или их фрагменты, способно блокировать взаимодействие между HLA и рецептором.

Когда соединение представляет собой антитела, они могут быть поликлональными или предпочтительно моноклональными. Они могут продуцироваться гибридомами или рекомбинантными клетками, созданными для экспрессии нужных вариабельных и константных областей. Антитела могут представлять собой одноцепочечные антитела или другие производные антител, сохраняющие антиген-специфичность и нижний шарнирный участок или его фрагмент, такие как Fab-фрагмент, Fab'2-фрагмент, CDR и ScFv. Они могут представлять собой полифункциональные антитела, рекомбинантные антитела, гуманизированные антитела или их варианты.

В контексте данного изобретения термин "общая детерминанта" обозначает детерминанту или эпитоп, являющиеся частью нескольких членов группы родственных рецепторов, например группы человеческих рецепторов KIR2DL. Детерминанта или эпитоп могут представлять пептидный фрагмент или конформационный эпитоп, являющийся частью членов указанной группы. В конкретном воплощении общая детерминанта содержит эпитоп, распознаваемый моноклональными антителами DF200, NKVSF1 или EB6.

В контексте данного изобретения термин "антитело, которое связывается с общей детерминантой", обозначает антитело, которое связывается с указанной детерминантой со специфичностью и/или аффинностью, например, которое, по существу, не связывается с высокой аффинностью или специфичностью с другими неродственными мотивами или детерминантной или структурами на поверхности человеческих NK-клеток. В более частном случае связывание моноклональных антител согласно данному изобретению с указанной детерминантой можно различить по связыванию указанных антител с другими эпитопом или детерминантой.

Соединения, предпочтительно антитела, способные связываться с ингибирующими NK-рецепторами и пр