Композиция для улучшения состояния кожи, содержащая в качестве активного ингредиента гормоны роста человека

Композиция для улучшения состояния кожи, содержащая в качестве активного ингредиента гормоны роста человека

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к улучшающим состояния кожи композициям для поверхностного нанесения на кожу, которые содержат в качестве активного компонента гормон роста человека, и к способу улучшения состояний кожи человека.

Уровень техники

В данной области в основном известно, что макромолекулы, такие как гормон роста человека (молекулярный вес около 22 кДа), не могут проникать сквозь роговичный слой кожи. Обычно считается, что молекулярный вес веществ, способных эффективно переноситься через эпидермис кожи, не превышает приблизительно 500 Да или не более 2 кДа, даже с помощью усилителей проницаемости кожи. Поэтому нанесение макромолекул таких, как гормон роста человека, на поверхность интактной (неповрежденной) кожи и косметическое или медицинское воздействие макромолекул считались безуспешными.

Делались некоторые попытки доставлять белки в дермальный слой кожи путем местного нанесения липосом со включенными в них белками. Было отмечено, что инкапсулированные внутрь липосом белки проходят в дермис или в волосяные фолликулы. Отмечалось, что для доставки сквозь волосяные фолликулы требуется либо система доставки в форме липосом, либо липидная композиция, содержащая липиды такие, как жирные кислоты. Кроме того, для доставки сквозь волосяные фолликулы в качестве способствующей среды испытывались также водные растворы, содержащие органический растворитель такой, как этанол, или содержащие полимер такой, как полиэтиленгликоль, хотя эффективности доставки были намного ниже. Что касается эффективностей доставки белков сквозь кожу с помощью несущих белки липосом, общий принцип пока не был определен, поскольку случаев доставки липосомных форм белков пока было мало, и даже в этих редких случаях эффективности доставки белков различались в широких пределах в зависимости от эмпирического выбора целевых белков и природы использованных липосом. Заслуживает упоминания то, что хотя идея доставки белков сквозь волосяные фолликулы получает большее одобрение, даже когда белок доставляется в инкапсулированной в липосомы форме, липосомы не могут проходить интактными сквозь воронкообразную часть волосяных фолликул. Скорее всего они могут претерпевать различные морфологические преобразования или фазовые переходы, благодаря, во-первых, характеристикам фосфолипидов, создающих рН снаружи и внутри, и зарядовые валентности липосом, во-вторых, в зависимости от белков, прикрепленных к липосомам или инкапсулированных в липосомы, и, в-третьих, в зависимости от составных ингредиентов окружающих волосяные фолликулы тканей. Поэтому эти три фактора и их сложные взаимоотношения определяют, по-видимому, в целом эффективность доставки содержащих целевые белки липосом в волосяные фолликулы. Однако в настоящий момент здесь работают скорее эмпирические соотношения, а не общий руководящий принцип. В отношении настоящего изобретения особого внимания заслуживает наличие сообщения о том, что рецепторы гормона роста человека располагаются на слоях живых клеток эпидермиса и на всех вспомогательных органах и тканях, составляющих и окружающих волосяные фолликулы.

Гормон роста человека секретируется из передней доли гипофиза и циркулирует в крови, оказывая влияние на все органы тела человека. На стадии роста человека он главным образом участвует в росте скелета, увеличении мышечной массы, разрушении жира, росте внутренних органов, половом созревании и т.п. Кроме того, высказано предположение, что если вводить гормон роста человека взрослым в количествах, соответствующих физиологической концентрации в крови, он проявит различное действие - такое, как усиление сердечной системы циркуляции, улучшение способности к обучению, усиление мышц, уменьшение отложения жира на животе, повышение либидо, снижение атеросклероза и ослабление старческой депрессии. Известно, что воздействие гормона роста человека на его организм - это не действие самого гормона роста человека, оно скорее определяется действием инсулино-подобного фактора роста 1 (IGF-1), экспрессию которого стимулирует фактор роста человека и который продуцируется в основном в печени и секретируется в кровь. Это определяется тем, что время полужизни гормона роста человека в крови составляет около 15 мин, тогда как время полужизни IGF-1 в крови составляет около 20 ч. Поэтому IGF-1 может сохраняться намного дольше, чем гормон роста человека. В реальности секретированный из гипофиза гормон роста человека связывается с имеющимся в крови связывающим гормон роста человека белком, мигрирует вместе с кровотоком и встречается с рецепторами гормона роста человека, имеющимися во всех тканях человека. В этот момент гормон роста человека высвобождается из комплекса со связывающим гормон роста человека белком, связывается с рецептором гормона роста человека, и это связывание дает сигнал для стимуляции синтеза и секреции IGF-1. Затем секретируемый в кровь IGF-1 связывается со связывающим IGF-1 белком, циркулирует в кровотоке и связывается с рецепторами для IGF-1, имеющимися в каждой ткани человеческого тела, что обеспечивает различные физиологические эффекты, вызванные секрецией гормона роста человека. Поэтому если действительно будет продемонстрировано действие на кожу инъекции средства с гормоном роста человека, это будет эффект, вызванный действием IGF-1, и он будет неизбежно зависеть от присутствия или отсутствия рецептора для IGF-1 на поверхности клеток кожи, которые могут вступить в непосредственный контакт с кровью. Даже если считать, что на кожу воздействует непосредственно гормон роста человека, а не IGF-1, его влияние будет неизбежно опосредовано рецепторами для гормона роста человека, имеющимися в тех местах, которые контактируют с кровью. Таким образом, полагают, что оценка любого воздействия на кожу при нанесении гормона роста человека (имеющего такой молекулярный вес, что он не может проходить сквозь кожу) вместе с косметическими средствами на поверхность нормальной кожи, которая не имеет непосредственного контакта с кровью, вообще не имеет смысла. Настоящее изобретение является первым свидетельством того, что с помощью способа нанесения гормона роста человека в форме косметического препарата на поверхность нормальной кожи, которая не находится в непосредственном контакте с кровью, но не с помощью способа передачи действия гормона роста человека через кровь, гормон роста человека может оказать на кожу косметическое и лечебное действие такое, как избавление от угрей, морщин, излечение аллергической кожи, вызванных УФ-облучением повреждений кожи, удаление темных пятен, веснушек, излечение сухой и жирной кожи, уменьшение волосяных фолликул и стимуляция роста волос.

Ткань кожи состоит из эпидермиса, дермиса и гиподермиса. Эпидермис определяет свойства кожи и часто подвержен повреждению при прямом воздействии внешних факторов, поэтому залечивание и восстановление эпидермиса очень важны. Эпидермис состоит из слоя эпидермальных клеток. Эпидермальные клетки кожи называются также «кератиноцитами», так как эпидермальные клетки кожи в ходе их дифференцировки синтезируют промежуточный фибриллярный белок кератин, усиливающий эпидермис. Эти клетки в ходе дифференцировки образуют слои, мигрируя в сторону эпидермиса, становятся плоскими по мере того, как постепенно исчезают внутриклеточные органеллы, и превращаются в мертвые клетки. Слой клеток, расположенный в самой глубинной части эпидермиса, прилегает к базальному слою и называется «базальным слоем» (stratum basale), а образующие слой клетки называют «базальными клетками», среди которых присутствуют стволовые клетки эпидермиса. Клетки базального слоя дифференцируют в эпидермис, при этом они последовательно образуют stratum spinosum, stratum granulosum, stratum lucidum и stratum corneum, причем эти слои разделяются на слой живых клеток в нижнем положении по отношению к stratum granulosum и слой мертвых клеток в верхнем положении. Уплощенные чешуйчато-подобные ткани вне базального слоя называют также «чешуйками» (squames), они плотно заполнены кератином. Расположенные между внешней стороной stratum granulosum и stratum corneum клетки усилены слоем сшитого белка, и их плазматическая мембрана тонкая и плотная. Поскольку клетки эпидермиса пролиферируют из стволовых клеток эпидермиса и дифференцируются в stratum corneum, они усилены изнутри сшитыми кератинами и связаны также кератинами с десмосомами, плотно сцепленными с другими клетками того же слоя, так что они поддерживают всю структуру слоя. Клетки эпидермиса дифференцируют во внешний эпидермис, продуцируют и секретируют липид, формируя на плазматической мембране двухслойную ткань, ороговевшую вследствие наличия белка, что защищает, подобно оболочке («покрывало Сары») поверхность кожи от внешнего окружения. Поскольку человеческий эпидермис обновляется с двухнедельным интервалом, способность формирующих эпидермис стволовых клеток кожи можно считать очень высокой.

Недавно было установлено, что мультипотентные стволовые клетки кожи располагаются в области расширения, которая лежит непосредственно ниже сальных желез волосяных фолликул. Эти стволовые клетки расширения служат основой для образования стволовых клеток эпидермиса, стволовых клеток матрикса волос и стволовых клеток сальных желез. Стволовые клетки расширения располагаются только в области расширения и экспрессируют специальную комбинацию белков, сохраняя свою специфичность стволовых клеток. Стволовые клетки эпидермиса в ходе пролиферации и дифференцировки поддерживают эпидермис. Когда волос выпадает, стволовые клетки матрикса волос пролиферируют и дифференцируют, создавая новый волос. Однако стволовые клетки эпидермиса, стволовые клетки матрикса волос или стволовые клетки сальных желез ограничены в их способности к пролиферации или в способности сохранять специфику стволовых клеток. Поэтому, например, большинство стволовых клеток эпидермиса дифференцируют после 3-6 актов пролиферации. С другой стороны, хотя стволовые клетки расширения пролиферируют медленнее других трех типов стволовых клеток, эти стволовые клетки могут, по-видимому, пролиферировать бесконечно в течение жизни человеческих существ, создавая стволовые клетки эпидермиса, стволовые клетки матрикса волос и стволовые клетки сальных желез, сохраняя в то же время свою специфику стволовых клеток. В ходе разработки настоящего изобретения был впервые установлен тот факт, что экспрессия и действие гормона роста человека происходят в месте локализации стволовых клеток расширения, и этот новый факт чрезвычайно важен, так как означает, что гормон роста человека проявляет действие по улучшению различных состояний кожи.

Детальное описание настоящего изобретения

Авторы настоящего изобретения провели интенсивные исследования, разрабатывая вещество, способное улучшать состояния кожи, и в результате установили, что поверхностное нанесение гормона роста человека на кожу может существенно улучшить состояния кожи, что формирует в полном объеме настоящее изобретение.

В соответствии с этим цель настоящего изобретения заключается в том, чтобы предоставить композицию для поверхностного нанесения на кожу, улучшающую состояния кожи.

Другая цель настоящего изобретения состоит в том, чтобы предоставить способ улучшения состояния кожи.

Другие цели и преимущества настоящего изобретения станут очевидными из следующего далее детального описания в сочетании с приложенной формулой изобретения.

В одном из аспектов настоящего изобретения предлагается композиция для улучшения состояний кожи, содержащая в качестве активного ингредиента гормон роста человека, рецептура которой предназначена для поверхностного нанесения на кожу.

В другом аспекте настоящего изобретения предлагается способ улучшения состояний кожи человека, включающий поверхностное нанесение на кожу человека композиции, содержащей в качестве активного ингредиента гормон роста человека.

Авторы настоящего изобретения провели исследования и предприняли усилия для обнаружения нового применения гормона роста человека. В результате они установили, что поверхностное нанесение на кожу гормона роста человека может существенно улучшить состояния кожи. Применяемая в настоящее время терапия с применением гормона роста человека использует способ инъекции и направлена в основном на лечение карликовости и дефицита гормона роста человека. В данной области к настоящему времени не было отмечено, что поверхностное нанесение гормона роста человека на нормальную кожу позволяет ожидать его действия. Это мнение было основано на высоком молекулярном весе гормона роста человека и на предубежденном мнении о пути действия гормона роста человека. Настоящее изобретение в значительной степени преодолевает это общепринятое мнение или знание в данной области и характеризуется тем, что впервые было обнаружено действие поверхностного нанесения на нормальную кожу гормона роста человека. Настоящее изобретение является первым изобретением, рассматривающим нанесение гормона роста человека на кожу двумя путями: через волосяные фолликулы и через эпидермис.

Настоящее изобретение впервые показывает, что при способе нанесения гормона роста человека на поверхность нормальной кожи, противоположную участку, находящемуся в контакте с кровью, но не при способе перенесения действия гормона роста человека кровью, гормон роста человека может оказывать косметическое и лечебное действие на кожу - такое, как избавление от угрей, морщин, излечение аллергической кожи, вызванных УФ-облучением повреждений кожи, удаление темных пятен, веснушек, излечение сухой и жирной кожи, уменьшение волосяных фолликул и стимуляция роста волос.

Гормон роста человека (ГРЧ), используемый в настоящем изобретении в качестве активного ингредиента, может быть любым полипептидом, проявляющим активность гормона роста человека. Например, может быть использован любой представитель, выбранный из группы, состоящей из зрелого ГРЧ, Мет-ГРЧ, вариантов ГРЧ, модифицированного ГРЧ, фрагментов ГРЧ и аналогов ГРЧ. Предпочтительны зрелый ГРЧ или Мет-ГРЧ. Зрелый ГРЧ представляет собой гормон роста человека, имеющий аминокислотную последовательность основного гормона роста человека, присутствующего в крови человека; Мет-ГРЧ относится к гормону роста человека, имеющему добавленный к N-концу зрелого ГРЧ метионин; варианты ГРЧ относятся к гормонам роста человека, имеющим аминокислотную последовательность гормонов роста человека, отличающихся от основного гормона роста человека, присутствующего в теле человека; модифицированный ГРЧ относится к гормону роста человека, модифицированному введением добавки - такой, как пептидогликан или гликан, по меньшей мере в один аминокислотный остаток гормона роста человека; фрагменты ГРЧ обозначают гормоны роста человека, полученные делецией части аминокислотных последовательностей методом генетической инженерии или биохимическим методом; а аналог ГРЧ относится к гормону роста человека, полученному преобразованием методом генетической инженерии аминокислотной последовательности гормона роста человека в другую аминокислотную последовательность, имеющую аналогичные свойства. Фраза «имеющий активность гормона роста человека», как она использована здесь, может быть точно определена в соответствии с одним из следующих двух методов. В одном из методов она может быть определена в соответствии с тем, вызывает ли гормон роста человека передачу сигнала при связывании с белком, связывающимся с гормоном роста человека, или с рецептором для гормона роста человека. В другом методе она может быть определена в соответствии с тем, проявляются ли биологические эффекты, вызванные действием гормона роста человека.

В настоящем изобретении гормон роста человека может быть нанесен на кожу в виде водного раствора или вместе с носителем. Одна из неожиданных характеристик настоящего изобретения состоит в том, что, как показано в примере XII и на фиг.10б, даже в том случае, когда непосредственно на кожу наносится водный раствор самого гормона роста человека, до некоторой степени может быть достигнут эффект улучшения состояний кожи. Даже если водный раствор самого гормона роста человека наносится поверхностно на кожу, гормон роста человека достигает расположения стволовых клеток расширения в волосяных фолликулах и может обеспечить эффект улучшения состояний кожи.

Согласно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения композиция согласно настоящему изобретению представляет собой фосфолипидную или липосомную композицию, предпочтительно липосомную композицию. Предпочтительно, чтобы гормон роста человека, как активный ингредиент, был инкапсулирован в липосомы и нанесен на кожу. Согласно более предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения настоящая композиция представляет собой нанолипосомную композицию. Термин «нанолипосомы», как он использован здесь, относится к липосомам, имеющим форму обычных липосом и средний диаметр частиц от 20 до 1000 нм. Согласно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения средний диаметр частиц нанолипосом составляет 50-500 нм, более предпочтительно 50-350 нм и наиболее предпочтительно 50-250 нм.

Липосому определяют как сферическую фосфолипидную везикулу из коллоидных частиц, ассоциированных друг с другом, причем липосомы, составленные из бифильных молекул, каждая из которых имеет водорастворимую головку (гидрофильную группу) и водонерастворимый хвост (гидрофобную группу), имеют структуру, выстроенную путем их спонтанного соединения за счет взаимодействий между ними. Их классифицируют, в соответствии с их размером и слоистостью, как малые однослойные везикулы (small unilamellar vesicle, SUV), крупные однослойные везикулы (large unilamellar vesicle, LUV) и многослойные везикулы (multi lamellar vesicle, MLV). Липосомы с различной степенью слоистости, как они описаны выше, имеют двухслойную структуру мембраны, подобную структуре клеточной мембраны.

(Нано)липосомы согласно настоящему изобретению могут быть приготовлены с использованием фосфолипида, полиола, поверхностно-активного вещества, жирной кислоты, соли и/или воды.

Фосфолипид, используемый как компонент в приготовлении данных (нано)липосом, применяется в виде бифильного липида, и его примеры включают природные фосфолипиды (например, лецитин яичного желтка, лецитин соевых бобов и сфингомиелин) и синтетические фосфолипиды (например, дипальмитоилфосфатидилхолин или гидрированный лецитин), причем предпочтителен лецитин. Более предпочтительно, чтобы лецитин был ненасыщенным или насыщенным лецитином природного происхождения, выделенным из соевых бобов или яичного желтка.

Полиолы, которые можно использовать для приготовления данных (нано)липосом, никак специально не ограничены и предпочтительно включают пропиленгликоль, дипропиленгликоль, 1,3-бутиленгликоль, глицерин, метилпропан-диол, изопренгликоль, пентиленгликоль, эритритол, ксилитол и сорбитол.

Поверхностно-активное вещество, которое можно использовать для приготовления данных (нано)липосом, может быть любым известным в данной области поверхностно-активным веществом, и его примеры включают анионные поверхностно-активные вещества (например, алкилацил-глутамат, алкилфосфат, алкиллактат, диалкилфосфат и триалкилфосфат), катионные поверхностно-активные вещества, амфотерные поверхностно-активные вещества и неионные поверхностно-активные вещества (например, алкоксилированный алкильный простой эфир, алкоксилированный алкильный сложный эфир, алкилполигликозид, полиглицерильный сложный эфир и сахарный сложный эфир).

Жирные кислоты, которые можно использовать для приготовления данных (нано)липосом, представляют собой высшие жирные кислоты, предпочтительно насыщенные или ненасыщенные жирные кислоты, имеющие С_12-22 алкильную цепь. Их примеры включают лауриловую кислоту, миристоиловую кислоту, пальмитиновую кислоту, стеариновую кислоту, олеиновую кислоту и линолевую кислоту.

Соль, используемая для приготовления данных (нано)липосом, может быть любой известной в данной области солью, ее примеры включают фосфатную соль, сульфатную соль, нитратную соль, хлоридную соль, соль гидроксида, натриевую соль, калиевую соль, кальциевую соль, аммонийную соль, соль аминокислоты и аминокислоту.

Используемая для приготовления данных (нано)липосом вода - это обычно деионизованная дистиллированная вода.

Согласно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения данные (нано)липосомы приготовлены только из фосфолипида, соли и воды, как детально описано далее в примерах.

Согласно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения данные нанолипосомы, содержащие гормон роста человека (ГРЧ), готовят путем процесса, включающего следующие этапы: (а) растворение фосфолипида, способного образовать липосомы (предпочтительно лецитин яичного желтка или лецитин соевых бобов), в буферном водном растворе соли, содержащем гормон роста человека; и (б) пропускание содержащего гормон роста человека и фосфолипид водного раствора через гомогенизатор высокого давления при постепенном повышении с увеличением числа пропусканий содержания фосфолипида и давления в гомогенизаторе высокого давления; таким путем получают нанолипосомы, содержащие гормон роста человека.

Водный раствор, содержащий гормон роста человека, предпочтительно представляет собой буферный раствор, имеющий рН в диапазоне от 6 до 8, более предпочтительно около 7. Это, например, буферный раствор фосфата натрия. Если используют буферный раствор фосфата натрия, его концентрация предпочтительно составляет 5-100 мМ, более предпочтительно - 5-60 мМ, еще предпочтительнее - 10-30 мМ и наиболее предпочтительно - около 20 мМ.

Наиболее выдающейся особенностью данного процесса является то, что смесь фосфолипида и содержащего ГРЧ водного раствора пропускают через гомогенизатор высокого давления несколько раз, причем по мере увеличения числа пассажей количество фосфолипида и давление в гомогенизаторе повышают ступенчато. Согласно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения давление в гомогенизаторе повышают ступенчатым образом от 0 до 1000 бар, предпочтительно от 0 до 800 бар. Давление может повышаться ступеньками по 50 бар или по 100 бар, предпочтительно по 100 бар. Согласно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения количество фосфолипида ступенчато повышают от 5 до 40% (вес к объему), более предпочтительно - от 5 до 30% (вес к объему).

В ходе процесса пропускания через гомогенизатор высокого давления, включающего эти ступенчатые повышения содержания фосфолипида и давления, получают содержащие ГРЧ нанолипосомы, предпочтительно жидкие содержащие ГРЧ нанолипосомы.

Композиция согласно настоящему изобретению полезна для улучшения различных состояний кожи. Предпочтительно данная композиция эффективна для улучшения состояний кожи, в том числе для избавления от угрей, морщин, темных пятен, повышения эластичности кожи, усиления роста волос, предотвращения старения кожи, усиления способности кожи к удержанию влаги или стимуляции пролиферации стволовых клеток кожи. Более предпочтительно улучшаемые настоящим изобретением состояния кожи включают угри, морщины или рост волос.

Данная композиция может быть предоставлена как косметическая или фармакологическая композиция.

Косметическая композиция согласно настоящему изобретению для улучшения состояний кожи может быть составлена в более широком разнообразии форм, включая, например, раствор, суспензию, эмульсию, пасту, мазь, гель, крем, лосьон, порошок, мыло, содержащий поверхностно-активное вещество очиститель, масло, порошковая основа, эмульсионная основа, восковая основа и распыляемый раствор.

Содержащийся в данной косметической композиции косметически приемлемый носитель может меняться в зависимости от типа рецептуры. Например, рецептура мази, паст, кремов или гелей может содержать животные или растительные жиры, воски, парафины, крахмал, трагакант, производные целлюлозы, полиэтиленгликоли, силиконы, бентониты, двуокись кремния, тальк, окись цинка или смеси этих веществ. Рецептура порошка или распыляемого раствора может включать лактозу, тальк, двуокись кремния, гидроокись алюминия, силикат кальция, порошок полиамида и смеси этих веществ. Распыляемый раствор может дополнительно содержать обычные распылители, например хлорфтор-углеводороды, пропан/бутан или диметиловый эфир.

Рецептура раствора и эмульсии может включать растворитель, солюбилизатор и эмульгатор, например воду, этанол, изопропанол, этилкарбонат, этилацетат, бензиловый спирт, бензил-бензоат, пропиленгликоль, 1,3-бутилгликоль, масла, в частности масло семян хлопка, масло земляного ореха, масло проростков маиса, оливковое масло, касторовое масло и масло семян кунжута, глицериновые эфиры жирных кислот, полиэтиленгликоль, сорбитановые эфиры жирных кислот или смеси этих веществ. Рецептура суспензии может включать жидкие разбавители, например воду, этанол или пропиленгликоль, суспендирующие агенты, например этоксилированные изостеариновые спирты, полиоксиэтиленовые эфиры сорбитола и полиоксиэтиленовые эфиры сорбитана, микрокристаллическую целлюлозу, метагидроксид алюминия, бентонит, агар, трагакант или смеси этих веществ.

Рецептура мыла может включать соли щелочных металлов и жирных кислот, соли полуэфиров жирных кислот, белковые гидролизаты жирных кислот, изотионаты, ланолин, жирный спирт, растительное масло, глицерин, сахара или смеси этих веществ.

Кроме того, косметические композиции согласно настоящему изобретению могут содержать вспомогательные вещества, а также носитель. Неограничивающие примеры вспомогательных веществ включают консерванты, антиоксиданты, стабилизаторы, солюбилизаторы, витамины, красители, улучшающие запах агенты или смеси этих веществ.

Если данная композиция составлена так, чтобы предоставить фармацевтическую композицию, она может включать фармацевтически приемлемый носитель, в том числе углеводы (например, лактозу, амилозу, декстрозу, сахарозу, сорбитол, маннитол, крахмал, целлюлозу), камедь акации, фосфат кальция, альгинат, желатин, силикат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, воду, солевые растворы, спирты, гуммиарабик, сироп, растительные масла (например, кукурузное масло, масло семян хлопка, масло арахиса, оливковое масло, масло кокосовых орехов), полиэтиленгликоли, метилцеллюлозу, метилоксибензоат, пропилоксибензоат, тальк, стеарат магния и минеральное масло, без ограничения этим перечислением. Фармацевтическая композиция согласно данному изобретению может дополнительно содержать увлажняющий агент, подслащивающий агент, эмульгатор, буфер, суспендирующий агент, консерванты, вкусовые добавки, ароматизаторы, смазку, стабилизатор или смеси этих веществ. Подробные сведения о подходящих фармацевтически приемлемых носителях и рецептурах приведены в справочнике Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995), включенном сюда ссылкой.

Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению составлена для поверхностного нанесения на кожу.

Точная дозировка фармакологических композиций согласно настоящему изобретению будет меняться в зависимости от конкретной рецептуры, способа нанесения, возраста, веса тела и пола пациента, диеты, времени введения, состояния пациента, комбинирования лекарств, чувствительности к воздействию и остроты заболевания. Понятно, что врач с обычным опытом легко определит и пропишет точную дозировку этих фармацевтических композиций. Согласно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения подходящая дозировочная единица подлежит введению один раз в день и составляет 0,001-100 нг/см² (на единицу площади поверхности кожи), наиболее предпочтительно 0,1-2 нг/см².

Согласно известной специалистам в данной области обычной технике фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут быть составлены с включением фармацевтически приемлемого носителя и/или наполнителя, как описано выше, и в итоге предоставляют различные формы, в том числе форму единичной дозировки. Наиболее предпочтительно, чтобы фармацевтическая композиция представляла собой раствор, содержащий нанолипосомы.

Данная композиция действует на стволовые клетки эпидермиса, что увеличивает число волосяных фолликул и тем самым стимулирует рост волос, вызывает пролиферацию кератиноцитов эпидермального слоя, значительно подавляя старение кожи, залечивает повреждения кожи и морщины, вызванные УФ-облучением, преобразует соединительную ткань дермального слоя, повышая упругость кожи и разглаживая морщины, и проявляет способность к лечению угрей и удалению темных пятен. Все это вместе показывает, что композиция согласно настоящему изобретению может значительно улучшать состояния кожи. Кроме того, настоящее изобретение в высокой степени безопасно для организма человека и при осуществлении в форме нанолипосом имеет высокую стабильность.

Краткое описание чертежей

Фиг.1 - электронно-микроскопическая фотография препарата крема из липосом, содержащих гормон роста человека (ГРЧ) (рецептура А), полученной в примере 1.

Фиг.2 - гель-проникающая хроматограмма содержащих ГРЧ липосом (липо-ГРЧ) в рецептуре Б, полученной в примере 1.

Фиг.3 - показывает результаты электрофореза в полиакриламидном геле с SDS ГРЧ, инкапсулированного в виде липо-ГРЧ в рецептуре Б, полученной в примере 1.

Фиг.4 - высокоэффективная обратно-фазная жидкостная хроматограмма ГРЧ, инкапсулированного в виде липо-ГРЧ в рецептуре Б, полученной в примере 1.

Фиг.5 - высокоэффективная обратно-фазная жидкостная хроматограмма фосфолипида в составе липо-ГРЧ в рецептуре Б, полученной в примере 1.

Фиг.6 - графическая диаграмма, показывающая результаты испытаний на безопасность липо-ГРЧ в рецептуре Б, полученной в примере 1.

Фиг.7 - графическая диаграмма, показывающая результаты испытаний на безопасность содержащих ГРЧ липосом в соответствии с настоящим изобретением.

Фиг.8 показывает результаты теста на снижающее количество морщин действие данных липосом с инкапсулированным ГРЧ у мышей «nude» с индуцированными УФ морщинами.

Фиг.9 показывает результаты анализа активности гормона роста человека, инкапсулированного в содержащие ГРЧ липосомы согласно настоящему изобретению.

Фиг.10а - фотография, показывающая локализацию гормона роста человека в результате введения данных нанолипосом с инкапсулированным ГРЧ в кожу крыс Sprague Dawley через волосяные фолликулы.

Фиг.10б - фотография, показывающая действие данных нанолипосом с инкапсулированным ГРЧ на дермальный слой и волосяные фолликулы кожи крыс Sprague Dawley.

Фиг.11а - фотография, показывающая действие данных нанолипосом с инкапсулированным ГРЧ на эпидермис и дермальный слой кожи мышей ICR.

Фиг.11б - фотография, показывающая, что данные нанолипосомы с инкапсулированным ГРЧ индуцируют преобразование соединительной ткани дермального слоя мышей ICR.

Фиг.12 - фотография, показывающая действие данных нанолипосом с инкапсулированным ГРЧ на искусственную кожу человека.

Фиг.13 показывает результаты анализа распределения частиц по размерам у нанолипосом с инкапсулированным ГРЧ согласно настоящему изобретению.

Фиг.14 - графическая диаграмма, показывающая эффект снижения количества морщин, оказываемый данными нанолипосомами с инкапсулированным ГРЧ.

Следующие далее конкретные примеры предназначены для иллюстрации изобретения и не должны рассматриваться как ограничивающие область охвата изобретения, определенную прилагаемой формулой изобретения.

Примеры

Пример I. Приготовление различных рецептур, содержащих гормон роста человека (липо-ГРЧ)

Рецептура А (препарат крема): содержащая гормон роста человека рецептура крема

В рецептуре А использовали следующие фосфолипиды: lipoid S100 (Lipoid GmbH, Germany) или lipoid S75 (Lipoid GmbH, Germany).

Теплообменник гомогенизатора высокого давления (максимальный выход 5 л/ч, наивысшее давление 1200 бар, модель HS-1002; производство фирмы Hwasung Machinery Co., Ltd., South Korea) помещали в ледяную воду так, что температура выхода гомогенизатора не превышала 30°С, затем внутренность гомогенизатора промывали для готовности дистиллированной водой. После этого к 100 мл раствора гормона роста человека (LG Life Sciences, Ltd), растворенного в буферном растворе (20 мМ NaH₂PO₄, рН 6,5-7,5, 1 мМ EDTA) при концентрации 1 мг/мл, добавляли фосфолипид в количестве 5% (вес к объему) и в достаточной степени увлажняли и перемешивали. Перемешанный раствор пропускали три раза или больше через гомогенизатор при комнатной температуре и низком давлении (0 бар). К пропущенному через гомогенизатор раствору добавляли фосфолипид в количестве 6% (вес к объему) и достаточно увлажняли и перемешивали. Перемешанный раствор пропускали три раза или больше через гомогенизатор при давлении 100 бар. Затем к пропущенному через гомогенизатор при давлении 100 бар раствору добавляли фосфолипид в количестве 7% (вес к объему), в достаточной степени увлажняли и перемешивали и пропускали три раза или больше через гомогенизатор при давлении 200 бар. Затем к пропущенному через гомогенизатор при давлении 200 бар раствору добавляли фосфолипид в количестве 8% (вес к объему), в достаточной степени увлажняли и перемешивали, и пропускали три раза или больше через гомогенизатор при давлении 300 бар. К пропущенному через гомогенизатор при давлении 300 бар раствору добавляли фосфолипид в количестве 9% (вес к объему), в достаточной степени увлажняли и перемешивали, и пропускали три раза или больше через гомогенизатор при давлении 400 бар. Затем к пропущенному через гомогенизатор при давлении 400 бар раствору добавляли фосфолипид в количестве 10% (вес к объему), в достаточной степени увлажняли и перемешивали, и пропускали три раза или больше через гомогенизатор при давлении 500 бар. Затем к пропущенному через гомогенизатор при давлении 500 бар раствору добавляли фосфолипид в количестве 11% (вес к объему), в достаточной степени увлажняли и перемешивали, и пропускали три раза или больше через гомогенизатор при давлении 600 бар. Затем к пропущенному через гомогенизатор при давлении 600 бар раствору добавляли фосфолипид в количестве 12% (вес к объему), в достаточной степени увлажняли и перемешивали, и пропускали три раза или больше через гомогенизатор при давлении 800 бар. Таким путем получали рецептуру крема с липосомами, содержащими гормон роста человека (липо-ГРЧ).

На фиг.1 представлена электронно-микроскопическая фотография приготовленной в этом примере рецептуры крема с липосомами, содержащими гормон роста человека. Приготовленную в этом примере рецептуру с липосомами покрывали золотом и обследовали с помощью сканирующего электронного микроскопа (HITACHI S 2500). В результате наблюдения сочтено установленным, что сходящий на нет край и прилегающий фон представляют собой гель, а небольшие сферические зерна являются липосомами наноразмера (0,02-0,3 мкм).

Рецептура Б (препарат липосом): содержащая гормон роста человека (ГРЧ) липосомная рецептура

В приготовлении рецептуры Б использовали следующие фосфолипиды: лецитин соевых бобов (ShinDongBang Corp., South Korea), Metarin P (Degussa Texturant Systems Deutschland GmbH & Co. KG), Nutripur S (Degussa Texturant Systems Deutschland GmbH & Co. KG) или Emultop (Degussa Texturant Systems Deutschland GmbH & Co. KG).

Теплообменник гомогенизатора высокого давления (максимальный выход 5 л/ч, наивысшее давление 1200 бар, модель HS-1002; производство фирмы Hwasung Machinery Co., Ltd., South Korea) помещали в ледяную воду так, что температура выхода гомогенизатора не превышала 30°С, внутренность гомогенизатора промывали для готовности дистиллированной водой. После этого к 100 мл раствора гормона роста человека (LG Life Sciences, Ltd) в буферном растворе (20 мМ NaH₂PO₄, рН 6,5-7,5, 1 мМ EDTA) с концентрацией 1 мг/мл добавляли фосфолипид в количестве 10% (вес к объему) и в достаточной степени увлажняли и перемешивали. Перемешанный раствор пропускали три раза или больше через гомогенизатор при комнатной температуре и низком давлении (0 бар). Затем к пропущенному через гомогенизатор раствору д