Стимулятор регенерации панкреатических бета-клеток и продуцирования инсулина в панкреатических бета-клетках

Стимулятор регенерации панкреатических бета-клеток и продуцирования инсулина в панкреатических бета-клетках

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к фармацевтическому средству для стимуляции неогенеза или регенерации панкреатических β-клеток, продуцирующих инсулин. Настоящее изобретение также относится к способу снижения или лечения гипергликемии посредством стимуляции неогенеза или регенерации панкреатических β-клеток.

Предшествующий уровень техники

Диабет, также называемый гипергликемией, представляет собой метаболическое расстройство, главным образом нарушение метаболизма глюкозы, вызываемое, например, недостаточной секрецией инсулина или пониженной чувствительности клеток-мишеней к инсулину и характеризующееся высоким уровнем сахара в крови. Если высокий уровень сахара поддерживается в течение длительного периода времени, то в различных органах и в нервных тканях могут возникать серьезные осложнения, такие как ретинопатия, нефропатия и невропатия, обусловленные главным образом ангиопатией. Поэтому регуляция и поддержание нормальных уровней сахара в крови имеют очень важное значение для лечения диабета, и в настоящее время проводятся исследования в целях получения подходящих средств для регуляции уровней сахара в крови.

Для диагностики диабета (гипергликемии) проводят тест на толерантность к глюкозе (пероральное введение 75 г глюкозы). Для проведения такой диагностики у индивидуума берут кровь натощак для измерения уровней инсулина и сахара в крови, а затем через некоторый период времени после употребления этим индивидуумом воды, содержащей растворенные в ней 75 г глюкозы, снова берут кровь для измерения уровней инсулина и сахара в крови. Если величина (ΔIRI/ΔBG) “разности уровней инсулина в крови за 30 минут до употребления глюкозы и через 30 минут после употребления глюкозы” (ΔIRI), деленная на “разность уровней сахара в крови за 30 минут до употребления глюкозы и через 30 минут после употребления глюкозы” (ΔBG) не превышает 0,4, то это указывает на высокий риск серьезного обострения гипергликемии.

Диабет подразделяется главным образом на два класса, диабет типа 1 и диабет типа 2. Диабет типа 1 развивается при полном отсуствии секреции инсулина, вызываемом нарушением функции или гибелью панкреатических β-клеток, которая приводит к прекращению или к сильному снижению секреции инсулина. Это может быть вызвано вирусной инфекцией или аутоиммунной патологией, возникающей вследствие вирусной инфекции. Диабет типа 2 развивается вследствие снижения секреции инсулина из панкреатических β-клеток (количественной недостаточности инсулина) или вследствие снижения функции инсулина в клетках, поглощающих глюкозу (инсулинорезистентности), и по мере повышения инсулинорезистентности относительное количество инсулина становится недостаточным и уровни сахара в крови начинают повышаться. В последнем случае, из панкреатических β-клеток начинает секретироваться избыточное количество инсулина, что приводит к его относительной недостаточности, и когда избыточная секреция инсулина достигает максимального уровня и поддерживается в течение длительного периода времени, панкреатические β-клетки полностью истощаются и секреция инсулина из этих клеток снижается.

Поэтому считается, что основной причиной диабета (гипергликемии) является дефицит панкреатических β-клеток и снижение уровня продуцирования или недостаточная секреция инсулина в этих клетках.

Хотя в настоящее время для снижения уровней сахара в крови используются инсулиновые препараты, бигуанид-содержащие средства; средства, содержащие сульфонилмочевину, тиазолидиндион-содержащие средства и т.п., однако применяемые в настоящее время гипогликемические средства пока еще не удовлетворяют современным требованиям из-за их побочных эффектов и т.п. Кроме того, поскольку эти средства были разработаны в целях снижения уровней сахара в крови, то такие средства могут быть использованы для симптоматического лечения, направленного на регуляцию уровней сахара в крови, и пока еще являются недостаточными для проведения лечебной терапии, позволяющей устранить основные причины диабета, описанные выше, то есть дефицит самих β-клеток и снижение уровня продуцирования или недостаточную секрецию инсулина в этих клетках.

Исходя из вышеописанного, очевидно, что для снижения или лечения гипергликемии крайне необходимо разработать средства, способные стимулировать неогенез или регенерацию панкреатических β-клеток, предотвращать истощение или гибель панкреатических β-клеток и, кроме того, стимулировать продуцирование инсулина в панкреатических β-клетках.

С другой стороны, в 1999 году в желудке крыс был обнаружен гормон грелин, который представляет собой пептид, имеющий совершенно уникальную химическую структуру, где 3-я N-концевая аминокислота ацилирована жирной кислотой (Nature, 402, pp.656-660, 1999). Было показано, что грелин обладает активностью, стимулирующей секрецию гормона роста из гипофиза, и недавно проведенные исследования также показали, что этот гормон обладает такими функциями, как стимуляция потребления пищи или накопление жира, что приводит к увеличению массы тела и нарушению сердечной функции (Nature, 409, pp.194-198, 2001; Endocr. Rev., 25, pp.426-457, 2004; Front Neuroendocrinol., 25, pp.27-68, 2004).

Грелин был выделен у крыс и очищен как эндогенный фактор, стимулирующий секрецию гормона роста (GHS), для секреторного рецептора гормона роста (GHS-R). Помимо крысиного грелина, известны также аминокислотные последовательности грелина других позвоночных, таких как, например, человек, мышь, свинья, курица, угорь, корова, лошадь, овца, лягушка, форель и собака, у которых этот гормон имеет аналогичные первичные структуры.

Человек:

GSS(н-октаноил)FLSPEHQRVQQRKESKKPPAKLQPR (последовательность No.1)

GSS (н-октаноил)FLSPEHQRVQRKESKKPPAKLQPR (последовательность No. 2)

Крыса:

GSS(н-октаноил)FLSPEHQKAQQRKESKKPPAKLQPR (последовательность No. 3)

GSS(н-октаноил)FLSPEHQKAQRKESKKPPAKLQPR (последовательность No. 4)

Мышь:

GSS(н-октаноил)FLSPEHQKAQQRKESKKPPAKLQPR (последовательность No. 5)

Свинья:

GSS(н-октаноил)FLSPEHQKVQQRKESKKPAAKLKPR (последовательность No. 6)

Корова:

GSS(н-октаноил)FLSPEHQKLQRKEAKKPSGRLKPR (последовательность No. 7)

Овца:

GSS(н-октаноил)FLSPEHQKLQRKEPKKPSGRLKPR (последовательность No. 8)

Собака:

GSS(н-октаноил)FLSPEHQKLQQRKESKKPPAKLQPR (последовательность No. 9)

Угорь:

GSS(н-октаноил)FLSPSQRPQGKDKKPPRV-NH₂ (последовательность No. 10)

Форель:

GSS(н-октаноил)FLSPSQKPQVRQGKGKPPRV-NH₂ (последовательность No. 11)

GSS(н-октаноил)FLSPSQKPQGKGKPPRV-NH₂ (последовательность No. 12)

Курица:

GSS(н-октаноил)FLSPTYKNIQQQKGTRKPTAR (последовательность No. 13)

GSS(н-октаноил)FLSPTYKNIQQQKDTRKPTAR (последовательность No. 14)

GSS(н-октаноил)FLSPTYKNIQQQKDTRKPTARLH (последовательность No. 15)

Лягушка-бык:

GLT(н-октаноил)FLSPADMQKIAERQSQNKLRHGNM (последовательность No. 16)

GLT(н-деканоил)FLSPADMQKIAERQSQNKLRHGNM (последовательность No. 16)

GLT(н-октаноил)FLSPADMQKIAERQSQNKLRHGNMN (последовательность No. 17)

Тилапия:

GSS(н-октаноил)FLSPSQKPQNKVKSSRI-NH₂ (последовательность No. 18)

Зубатка:

GSS(н-октаноил)FLSPTQKPQNRGDRKPPRV-NH₂ (последовательность No. 19)

GSS(н-октаноил)FLSPTQKPQNRGDRKPPRVG (последовательность No. 20)

Лошадь:

GSS(н-бутаноил)FLSPEHHKVQHRKESKKPPAKLKPR (последовательность No. 21)

(В вышеуказанных последовательностях аминокислотные остатки представлены однобуквенными кодами).

Описанный выше пептид имеет специфическую структуру, где сериновый остаток (S) или треониновый остаток (Т) в 3-м положении имеет боковую гидроксильную группу, ацилированную жирной кислотой, такой как октановая кислота или декановая кислота. За исключением грелина, не имеется каких-либо других примеров выделенного из организма биологически активного пептида, который имел бы такую же гидрофобную модифицированную структуру. Известно, что этот пептид обладает сильной активностью, направленной на высвобождение гормона роста, и участвует в регуляции секреции гормона роста (публикация Международной заявки WO 01/07475).

Поскольку грелин и его рецептор (GHS-R) также экспрессируются в поджелудочной железе (Endocrinology, 145, pp.3813-3820, 2004; Brain Res. Mol. Brain Res., 48, pp.23-29, 1997; J.Clin. Endocrinol. Metab., 87, pp.1300-1308, 2002), то были проведены исследования метаболизма глюкозы или секреции инсулина, которые показали, что грелин регулирует уровень инсулина и глюкозы в крови, а также сообщалось, что грелин повышает уровень сахара в крови и подавляет или стимулирует секрецию инсулина (Pancreas, 27, pp.161-166, 2003; Endocrinology, 144, pp.916-921, 2003; Eur. J. Endocrinol., 146, pp.241-244, 2002; Endocrinology, 143, pp.185-190, 2002; J.Neuroendcrinol., 14, pp.555-560, 2002). Однако не было высказано каких-либо предположений о том, что грелин стимулирует неогенез или регенерацию панкреатических β-клеток.

Кроме того, хотя в публикации Международной заявки WO2001/56592 (и в публикациях патентных заявок США 2001/0020012A1 и 2004/0063636A1) высказываются предположения о возможности применения лиганда для рецептора GHS-R 1A, включая грелин, в качестве фармацевтического средства для лечения диабета типа 2, однако в этих публикациях нигде не указыватся на возможность применения грелина в качестве лекарственного средства для лечения диабета типа 2, и специалистам не известно, является ли такое средство действительно эффективным, как это предполагается в указанной публикации. Кроме того, хотя в публикации Международной заявки WO2002/60472 описано действие грелина, способствующее ожирению, однако его эффективность в лечении диабета не была продемонстрирована.

Что касается взаимосвязи между панкреатическими β-клетками и действием грелина, то известен феномен, заключающийся в том, что при подавлении дифференцировки β-клеток панкреатические β-клетки заменяются грелин-продуцирующими клетками (ε-клетками) (Proc. Natl. Acad. Sci., 101, pp. 2924-2929, 2004). Хотя было высказано предположение о вероятности того, что клетки этих двух типов могут происходить от одной и той же клетки-предшественника и что в будущем продуцирование группы чистых β-клеток из стволовых клеток или т.п. с использованием грелин-продуцирующих клеток позволит лечить диабет на клеточном уровне, однако такая вероятность остается лишь предположением и пока не нашла своего подтверждения. Кроме того, в этой публикации не высказывается какого-либо предположения или утверждения, что действие грелина стимулирует неогенез или регенерацию β-клеток или стимулирует продуцирование инсулина в панкреатических β-клетках.

Описание изобретения

Проблемы, решаемые с помощью настоящего изобретения

Целью настоящего изобретения является разработка способа стимуляции неогенеза или регенерации панкреатических β-клеток, продуцирующих и секретирующих инсулин, и получение фармацевтического препарата для снижения или лечения гипергликемии путем стимуляции неогенеза или регенерации панкреатических β-клеток, продуцирующих и секретирующих инсулин при гипергликемии, вызываемой отсутствием секреции инсулина или очень низким уровнем секреции инсулина, обусловленными нарушением функций или гибелью панкреатических β-клеток, или при гипергликемии, вызываемой снижением уровня секреции инсулина в β-клетках.

Способы решения указанных проблем

В результате самого тщательного исследования, проводимого в целях решения вышеуказанных проблем, авторами настоящего изобретения было обнаружено, что грелин в значительной степени стимулирует неогенез или регенерацию панкреатических β-клеток и что грелин обладает активностью, стимулирующей продуцирование инсулина в панкреатических β-клетках. И эти данные были положены в основу разработки настоящего изобретения.

Более конкретно, настоящее изобретение относится:

(1) к фармацевтической композиции для снижения или лечения гипергликемии, где указанная композиция содержит в качестве эффективного компонента пептид, выбранный из группы, состоящей из пептидного или не-пептидного соединения, обладающего активностью, направленной на повышение концентрации ионов внутриклеточного кальция посредством связывания с рецептором вещества, стимулирующего секрецию гормона роста (GHS-R); пептида, имеющего аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No.1, где 3-й аминокислотный остаток от амино-конца является модифицированным аминокислотным остатком, содержащим жирную кислоту, введенную в его боковую цепь; пептида, имеющего аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No.1 и включающую делецию, замену и/или добавление одной или нескольких аминокислот в аминокислотной последовательности в 5-28-положениях аминокислот от амино-конца, где 3-й аминокислотный остаток от амино-конца является модифицированным аминокислотным остатком, содержащим жирную кислоту, введенную в его боковую цепь; и пептида, обладающего активностью, направленной на повышение концентрации ионов внутриклеточного кальция посредством связывания с GHS-R, или их фармацевтически приемлемой соли;

(2) к фармацевтической композиции по вышеуказанному пункту (1), где гипергликемия вызывается отсутствием секреции инсулина или очень низким уровнем секреции инсулина, обусловленными нарушением функции или гибелью панкреатических β-клеток, либо она вызывается снижением уровня секреции инсулина в панкреатических β-клетках;

(3) к фармацевтической композиции по вышеуказанному пункту (2), где гипергликемия вызывается отсутствием секреции инсулина или очень низким уровнем секреции инсулина, обусловленными нарушением функции или гибелью панкреатических β-клеток;

(4) к фармацевтической композиции по вышеуказанному пункту (2), где гипергликемия вызывается снижением секреции инсулина в панкреатических β-клетках;

(5) к фармацевтической композиции по любому из вышеуказанных пунктов (1)-(4), где величина ΔIRI/ΔBG при гипергликемии не превышает 0,4;

(6) к фармацевтической композиции по любому из вышеуказанных пунктов (1)-(5), где указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1, и где сериновый остаток в 3-положении от амино-конца является модифицированным аминокислотным остатком, имеющим жирную кислоту, введенную в гидроксильную группу боковой цепи указанного остатка;

(7) к фармацевтической композиции по вышеуказанному пункту (6), где указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1, а гидроксильная группа боковой цепи серинового остатка в 3-положении от амино-конца ацилирована н-октаноильной группой;

(8) к фармацевтической композиции для стимуляции неогенеза или регенерации панкреатических β-клеток, где указанная композиция содержит в качестве эффективного компонента: пептид, выбранный из группы, состоящей из пептидного или не-пептидного соединения, обладающего активностью, направленной на повышение концентрации ионов внутриклеточного кальция посредством связывания с GHS-R; пептида, имеющего аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1, где 3-й аминокислотный остаток от амино-конца является модифицированным аминокислотным остатком, содержащим жирную кислоту, введенную в его боковую цепь; пептида, имеющего аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1 и включающую делецию, замену и/или добавление одной или нескольких аминокислот в аминокислотной последовательности в 5-28-положениях аминокислот от амино-конца, где 3-й аминокислотный остаток от амино-конца является модифицированным аминокислотным остатком, имеющим жирную кислоту, введенную в его боковую цепь; и пептида, обладающего активностью, направленной на повышение концентрации ионов внутриклеточного кальция посредством связывания с GHS-R, или их фармацевтически приемлемой соли;

(9) к фармацевтической композиции по вышеуказанному пункту (8), где указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1, и где сериновый остаток в 3-положении от амино-конца является модифицированным аминокислотным остатком, имеющим жирную кислоту, введенную в гидроксильную группу боковой цепи указанного остатка;

(10) к фармацевтической композиции по вышеуказанному пункту (9), где указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1, а гидроксильная группа боковой цепи серинового остатка в 3-положении от амино-конца ацилирована н-октаноильной группой;

(11) к фармацевтической композиции для стимуляции продуцирования инсулина в панкреатических β-клетках, где указанная композиция содержит в качестве эффективного компонента: пептид, выбранный из группы, состоящей из пептидного или не-пептидного соединения, обладающего активностью, направленной на повышение концентрации ионов внутриклеточного кальция посредством связывания с GHS-R; пептида, имеющего аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1, где 3-й аминокислотный остаток от амино-конца является модифицированным аминокислотным остатком, содержащим жирную кислоту, введенную в его боковую цепь; пептида, имеющего аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1 и включающую делецию, замену и/или добавление одной или нескольких аминокислот в аминокислотной последовательности в 5-28-положениях аминокислот от амино-конца, где 3-й аминокислотный остаток от амино-конца является модифицированным аминокислотным остатком, имеющим жирную кислоту, введенную в его боковую цепь; и пептида, обладающего активностью, направленной на повышение концентрации ионов внутриклеточного кальция посредством связывания с GHS-R, или их фармацевтически приемлемой соли;

(12) к фармацевтической композиции по вышеуказанному пункту (11), где указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1, и где сериновый остаток в 3-положении от амино-конца является модифицированным аминокислотным остатком, имеющим жирную кислоту, введенную в гидроксильную группу боковой цепи указанного остатка;

(13) к фармацевтической композиции по вышеуказанному пункту (12), где указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1, а гидроксильная группа боковой цепи серинового остатка в 3-положении от амино-конца ацилирована н-октаноильной группой;

(14) к способу снижения или лечения гипергликемии, включающему стадию введения индивидууму, страдающему гипергликемией, пептида, выбранного из группы, состоящей из пептидного или не-пептидного соединения, обладающего активностью, направленной на повышение концентрации ионов внутриклеточного кальция посредством связывания с GHS-R; пептида, имеющего аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1, где 3-й аминокислотный остаток от амино-конца является модифицированным аминокислотным остатком, содержащим жирную кислоту, введенную в его боковую цепь; пептида, имеющего аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1 и включающую делецию, замену и/или добавление одной или нескольких аминокислот в аминокислотной последовательности в 5-28-положениях аминокислот от амино-конца, где 3-й аминокислотный остаток от амино-конца является модифицированным аминокислотным остатком, имеющим жирную кислоту, введенную в его боковую цепь; и пептида, обладающего активностью, направленной на повышение концентрации ионов внутриклеточного кальция посредством связывания с GHS-R, или их фармацевтически приемлемой соли;

(15) к способу по вышеуказанному пункту (14), где гипергликемия вызывается отсутствием секреции инсулина или очень низким уровнем секреции инсулина, обусловленными нарушением функции или гибелью панкреатических β-клеток, либо она вызывается снижением уровня секреции инсулина в панкреатических β-клетках;

(16) к способу по вышеуказанному пункту (15), где гипергликемия вызывается отсутствием секреции инсулина или очень низким уровнем секреции инсулина, обусловленными нарушением функции или гибелью панкреатических β-клеток;

(17) к способу по вышеуказанному пункту (15), где гипергликемия вызывается снижением секреции инсулина в панкреатических β-клетках;

(18) к способу по любому из вышеуказанных пунктов (14)-(17), где величина ΔIRI/ΔBG при гипергликемии не превышает 0,4;

(19) к способу по любому из вышеуказанных пунктов (14)-(18), где указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1, и где сериновый остаток в 3-положении от амино-конца является модифицированным аминокислотным остатком, имеющим жирную кислоту, введенную в гидроксильную группу боковой цепи указанного остатка;

(20) к способу по вышеуказанному пункту (19), где указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1, а гидроксильная группа боковой цепи серинового остатка в 3-положении от амино-конца ацилирована н-октаноильной группой;

(21) к способу стимуляции неогенеза или регенерации панкреатических β-клеток, включающему стадию введения индивидууму пептида, выбранного из группы, состоящей из пептидного или не-пептидного соединения, обладающего активностью, направленной на повышение концентрации ионов внутриклеточного кальция посредством связывания с GHS-R; пептида, имеющего аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1, где 3-й аминокислотный остаток от амино-конца является модифицированным аминокислотным остатком, содержащим жирную кислоту, введенную в его боковую цепь; пептида, имеющего аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1 и включающую делецию, замену и/или добавление одной или нескольких аминокислот в аминокислотной последовательности в 5-28-положениях аминокислот от амино-конца, где 3-й аминокислотный остаток от амино-конца является модифицированным аминокислотным остатком, имеющим жирную кислоту, введенную в его боковую цепь; и пептида, обладающего активностью, направленной на повышение концентрации ионов внутриклеточного кальция посредством связывания с GHS-R, или их фармацевтически приемлемой соли;

(22) к способу по вышеуказанному пункту (21), где указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1, и где сериновый остаток в 3-положении от амино-конца является модифицированным аминокислотным остатком, имеющим жирную кислоту, введенную в гидроксильную группу боковой цепи указанного остатка;

(23) к способу по вышеуказанному пункту (22), где указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1, а гидроксильная группа боковой цепи серинового остатка в 3-положении от амино-конца ацилирована н-октаноильной группой;

(24) к способу стимуляции продуцирования инсулина в панкреатических β-клетках, включающему стадию введения индивидууму пептида, выбранного из группы, состоящей из пептидного или не-пептидного соединения, обладающего активностью, направленной на повышение концентрации ионов внутриклеточного кальция посредством связывания с GHS-R; пептида, имеющего аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1, где 3-й аминокислотный остаток от амино-конца является модифицированным аминокислотным остатком, содержащим жирную кислоту, введенную в его боковую цепь; пептида, имеющего аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1 и включающую делецию, замену и/или добавление одной или нескольких аминокислот в аминокислотной последовательности в 5-28-положениях аминокислот от амино-конца, где 3-й аминокислотный остаток от амино-конца является модифицированным аминокислотным остатком, имеющим жирную кислоту, введенную в его боковую цепь; и пептида, обладающего активностью, направленной на повышение концентрации ионов внутриклеточного кальция посредством связывания с GHS-R, или их фармацевтически приемлемой соли;

(25) к способу по вышеуказанному пункту (24), где указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1, и где сериновый остаток в 3-положении от амино-конца является модифицированным аминокислотным остатком, имеющим жирную кислоту, введенную в гидроксильную группу боковой цепи указанного остатка;

(26) к способу по вышеуказанному пункту (25), где указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1, а гидроксильная группа боковой цепи серинового остатка в 3-положении от амино-конца ацилирована н-октаноильной группой;

(27) к применению пептидного или не-пептидного соединения в целях получения фармацевтических композиций для снижения или лечения гипергликемии, где:

указанный пептид выбран из группы, состоящей из: пептидного или не-пептидного соединения, обладающего активностью, направленной на повышение концентрации ионов внутриклеточного кальция посредством связывания с GHS-R; пептида, имеющего аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1, где 3-й аминокислотный остаток от амино-конца является модифицированным аминокислотным остатком, содержащим жирную кислоту, введенную в его боковую цепь; пептида, имеющего аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1 и включающую делецию, замену и/или добавление одной или нескольких аминокислот в аминокислотной последовательности в 5-28-положениях аминокислот от амино-конца, где 3-й аминокислотный остаток от амино-конца является модифицированным аминокислотным остатком, имеющим жирную кислоту, введенную в его боковую цепь; и пептида, обладающего активностью, направленной на повышение концентрации ионов внутриклеточного кальция посредством связывания с GHS-R;

(28) к применению по вышеуказанному пункту (27), где гипергликемия вызывается отсутствием секреции инсулина или очень низким уровнем секреции инсулина, обусловленными нарушением функции или гибелью панкреатических β-клеток, либо она вызывается снижением уровня секреции инсулина в панкреатических β-клетках;

(29) к применению по вышеуказанному пункту (28), где гипергликемия вызывается отсутствием секреции инсулина или очень низким уровнем секреции инсулина, обусловленными нарушением функции или гибелью панкреатических β-клеток;

(30) к применению по вышеуказанному пункту (28), где гипергликемия вызывается снижением секреции инсулина в панкреатических β-клетках;

(31) к применению по любому из вышеуказанных пунктов (27)-(30), где величина ΔIRI/ΔBG при гипергликемии не превышает 0,4;

(32) к применению по любому из вышеуказанных пунктов (27)-(31), где указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1, и где сериновый остаток в 3-положении от амино-конца является модифицированным аминокислотным остатком, имеющим жирную кислоту, введенную в гидроксильную группу боковой цепи указанного остатка;

(33) к применению по вышеуказанному пункту (32), где указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1, а гидроксильная группа боковой цепи серинового остатка в 3-положении от амино-конца ацилирована н-октаноильной группой;

(34) к применению пептидного или не-пептидного соединения в целях получения фармацевтических композиций для стимуляции неогенеза или регенерации панкреатических β-клеток, где:

указанный пептид выбран из группы, состоящей из: пептидного или не-пептидного соединения, обладающего активностью, направленной на повышение концентрации ионов внутриклеточного кальция посредством связывания с GHS-R; пептида, имеющего аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1, где 3-й аминокислотный остаток от амино-конца является модифицированным аминокислотным остатком, содержащим жирную кислоту, введенную в его боковую цепь; пептида, имеющего аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1 и включающую делецию, замену и/или добавление одной или нескольких аминокислот в аминокислотной последовательности в 5-28-положениях аминокислот от амино-конца, где 3-й аминокислотный остаток от амино-конца является модифицированным аминокислотным остатком, имеющим жирную кислоту, введенную в его боковую цепь; и пептида, обладающего активностью, направленной на повышение концентрации ионов внутриклеточного кальция посредством связывания с GHS-R;

(35) к применению по вышеуказанному пункту (34), где указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1, и где сериновый остаток в 3-положении от амино-конца является модифицированным аминокислотным остатком, имеющим жирную кислоту, введенную в гидроксильную группу боковой цепи указанного остатка;

(36) к применению по вышеуказанному пункту (35), где указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1, а гидроксильная группа боковой цепи серинового остатка в 3-положении от амино-конца ацилирована н-октаноильной группой;

(37) к применению пептидного или не-пептидного соединения в целях получения фармацевтической композиции для стимуляции продуцирования инсулина в панкреатических β-клетках, где:

указанный пептид выбран из группы, состоящей из: пептидного или не-пептидного соединения, обладающего активностью, направленной на повышение концентрации ионов внутриклеточного кальция посредством связывания с GHS-R; пептида, имеющего аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1, где 3-й аминокислотный остаток от амино-конца является модифицированным аминокислотным остатком, содержащим жирную кислоту, введенную в его боковую цепь; пептида, имеющего аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1 и включающую делецию, замену и/или добавление одной или нескольких аминокислот в аминокислотной последовательности в 5-28-положениях аминокислот от амино-конца, где 3-й аминокислотный остаток от амино-конца является модифицированным аминокислотным остатком, имеющим жирную кислоту, введенную в его боковую цепь; и пептида, обладающего активностью, направленной на повышение концентрации ионов внутриклеточного кальция посредством связывания с GHS-R;

(38) к применению по вышеуказанному пункту (37), где указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1, и где сериновый остаток в 3-положении от амино-конца является модифицированным аминокислотным остатком, имеющим жирную кислоту, введенную в гидроксильную группу боковой цепи указанного остатка;

(39) к применению по вышеуказанному пункту (38), где указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1, а гидроксильная группа боковой цепи серинового остатка в 3-положении от амино-конца ацилирована н-октаноильной группой;

(40) к способу предотвращения нарушения функции, гибели или истощения панкреатических β-клеток, включающему стадию введения индивидууму пептида, выбранного из группы, состоящей из пептидного или не-пептидного соединения, обладающего активностью, направленной на повышение концентрации ионов внутриклеточного кальция посредством связывания с GHS-R; пептида, имеющего аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1, где 3-й аминокислотный остаток от амино-конца является модифицированным аминокислотным остатком, содержащим жирную кислоту, введенную в его боковую цепь; пептида, имеющего аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1 и включающую делецию, замену и/или добавление одной или нескольких аминокислот в аминокислотной последовательности в 5-28-положениях аминокислот от амино-конца, где 3-й аминокислотный остаток от амино-конца является модифицированным аминокислотным остатком, имеющим жирную кислоту, введенную в его боковую цепь; и пептида, обладающего активностью, направленной на повышение концентрации ионов внутриклеточного кальция посредством связывания с GHS-R; или их фармацевтически приемлемой соли;

(41) к способу по вышеуказанному пункту (40), где указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1, и где сериновый остаток в 3-положении от амино-конца является модифицированным аминокислотным остатком, имеющим жирную кислоту, введенную в гидроксильную группу боковой цепи указанного остатка;

(42) к способу по вышеуказанному пункту (41), где указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1, а гидроксильная группа боковой цепи серинового остатка в 3-положении от амино-конца ацилирована н-октаноильной группой;

(43) к способу индуцирования неогенеза или регенерации панкреатических β-клеток посредством воздействия пептида на панкреатические β-клетки или на клетки-предшественники панкреатических β-клеток, выделенных у индивидуума, где указанный пептид выбран из группы, состоящей из пептидного или не-пептидного соединения, обладающего активностью, направленной на повышение концентрации ионов внутриклеточного кальция посредством связывания с GHS-R; пептида, имеющего аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1, где 3-й аминокислотный остаток от амино-конца является модифицированным аминокислотным остатком, содержащим жирную кислоту, введенную в его боковую цепь; пептида, имеющего аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1 и включающую делецию, замену и/или добавление одной или нескольких аминокислот в аминокислотной последовательности в 5-28-положениях аминокислот от амино-конца, где 3-й аминокислотный остаток от амино-конца является модифицированным аминокислотным остатком, имеющим жирную кислоту, введенную в его боковую цепь; и пептида, обладающего активностью, направленной на повышение концентрации ионов внутриклеточного кальция посредством связывания с GHS-R;

(44) к способу по вышеуказанному пункту (43), где указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1, и где сериновый остаток в 3-положении от амино-конца является модифицированным аминокислотным остатком, имеющим жирную кислоту, введенную в гидроксильную группу боковой цепи указанного остатка;

(45) к способу по вышеуказанному пункту (44), где указанный пептид имеет аминокислотную последовательность, описанную как последовательность No. 1, а гидроксильная группа боковой цепи серинового остатка в 3-положении от амино-конца ацилирована н-октаноильной группой.

Краткое описание графического материала

На фиг. 1 представлены результаты анализа на уровни инсулина в поджелудочной железе на 21-й день после рождения. На этой фигуре А представляет собой график, иллюстрирующий экспрессию гена инсулина, на В-D представлены результаты иммуногистологического окрашивания на инсулин (В - контрольная группа; С - n0-STZ-группа; D - группа n0-STZ/грелин, соответственно с увеличением ×100), а на E представлены результаты количественной оценки площади клеток с позитивным окрашиванием на инсулин. В каждом из A и E “Cont” означает

контрольную группу, “STZ” означает n0-STZ-группу, “STZ+G” означает группу n0-STZ/грелин, а величины для каждой группы представляют собой среднюю величину для трех наблюдений ± ср. кв.от. Кроме того, * означает P<0,001, ** означает P<0,01, и *** означает P<0,005.

На фиг. 2 представлены результаты анализа на уровни pdx-1 в поджелудочной железе на 21-й день после рождения. На фигуре А показан уровень экспрессии мРНК, а на B-D представлены результаты иммуногистологического окрашивания (В - контрольная группа; С - n0-STZ-группа; D - группа n0-STZ/грелин, соответственно с увеличением ×500). На фигуре A “Cont” означает контрольную группу, “STZ” означает n0-STZ-группу, “STZ+G” означает группу n0-STZ/грелин, а величины для каждой группы представляют собой среднюю величину для трех наблюдений ± ср. кв.от. Кроме того, * означает P<0,0005, и ** означает P<0,0001.

На фиг. 3 представлены результаты анализа на уровни инсулина на 70-й день после рождения. На этой фигуре А представляет собой график, иллюстрирующий взаимосвязь между концентрациями глюкозы и инсулина в крови, В представляет собой график, иллюстрирующий уровень экспрессии гена инсулина в поджелудочной железе, на С-F представлены результаты иммуногистологического окрашивания на инсулин в поджелудочной железе (С - контрольная группа; D - n0-STZ-группа; и Е - группа n0-STZ/грелин, соответственно с увеличением ×100), а на F представлены результаты количественной оценки площади клеток с позитивным окрашиванием на инсулин. В каждом из В и F “Cont” о