Способ снижения уровня 2 антиплазмина у новорожденных поросят с анемией

Способ снижения уровня 2 антиплазмина у новорожденных поросят с анемией

Реферат

Изобретение относится к биологии и ветеринарии, а именно к гематологии.

Аналогов предлагаемого способа нормализации уровня α₂ антиплазмина у новорожденных поросят с анемией не существует.

Имеются сведения о применении при анемии у поросят ферроглюкина (Внутренние незаразные болезни сельскохозяйственных животных./Под ред. В.М.Данилевского. М.: Агропромиздат, 1991, 576 с.).

В качестве эффективных стимуляторов жизнедеятельности растущего организма в современной ветеринарии применяются полизон - фосфорнокислая соль 2-амино-4-метилтио-(S-оксо-S-амино)-масляной кислоты, представляет собой слабо растворимый в воде порошок от белого до кремового цвета (Овчинников А. и др. Полизон - стимулятор роста // Птицеводство, 2006. - №12. - с.14-15.) и крезацин - производное ароксиалкилкарбоновых кислот. Он представляет собой белый кристаллический порошок, хорошо растворимый в воде, со слабым специфическим запахом, сладковато-горьковатого вкуса. Он проявляет эффективное стимулирующее действие на живые организмы, повышая выживаемость человека и животных в неблагоприятных и экстремальных условиях, стимулируя или нормализуя жизненные процессы (Байматов В.Н., Латыпов М.М. Влияние крезацина на состояние птицы. Ветеринария, 2006, №11, с.49-51).

Однако никогда ранее лечебный комплекс, состоящий из ферроглюкина, полизона и крезацина, не применялся у новорожденных поросят с анемией с целью нормализации уровня α₂ антиплазмина.

Целью изобретения является повышение эффективности коррекции уровня α₂ антиплазмина у новорожденных поросят с анемией.

Сущность заявляемого способа заключается в том, что для оптимизации уровня α₂ антиплазмина новорожденным поросятам с анемией назначаются ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 10 дней, полизон 4 мг/кг и крезацин 4 мг/кг, включенных в схему выпаивания на 10 суток.

Способ позволяет нормализовать уровень α₂ антиплазмина у новорожденных поросят с анемией через 3 дня после завершения лечения, переводя его на уровень, близкий к таковому для здоровых поросят. При соблюдении рекомендаций заявляемого способа возможно поддержание в последующем активности уровня α₂ антиплазмина в оптимальном состоянии, что позволит у новорожденных поросят существенно снизить риск тромботических осложнений, оздоровить стадо, увеличить привесы, снизить падеж и повысить качество и объем получаемой мясной продукции.

Заявляемый способ осуществляется следующим образом.

Для диагностики у новорожденных поросят с анемией нарушения уровня α₂ антиплазмина проводится его оценка по следующей методике.

α₂-антиплазмин (α₂-АП) является наиболее важным ингибитором фибринолиза, в присутствии которого происходит быстрое формирование необратимого, лишенного активности комплекса "плазмин-α₂-АП". Метод основан на определении способности α₂-АП исследуемого образца плазмы инактивировать добавляемый в плазму очищенный плазмин. Содержание остаточного плазмина определяется по степени гидролиза хромогенного субстрата, специфичного по отношению к этому ферменту.

α₂-АП_{образец}+плазмин_{избыток}=[α₂-АП-плазмин]+плазмин_{остаток}

Используются реактивы: 1. Плазмин свиньи, лиофилизированный. Разводится в буфере до концентрации 0,1 СТА Е/мл. 2. Хромогенный субстрат D-Norvalylcyclohexylalanil-lysil-p-nitroanilide. Разводится в дистиллированной воде до концентрации 3 ммоль/л. 3. Раствор буфера: KH₂PO₄ (100 ммоль/л), NaCl 9 г/л, глицерин (250 г/л), pH 7,5.

Для выполнения исследования необходима также стандартная или контрольная нормальная плазма с известным содержанием α₂-АП или пулированная (взятая не менее чем от 10 здоровых поросят), активность α₂-АП, в которой принимается за 100%.

Применяется следующее оборудование: спектрофотометр с термостатируемой кюветой. Температура реакции +37°C. Используемая длина волны 405 нм. Ширина оптического пути кюветы - 1 см.

Материалом для исследования служит цитратная бедная тромбоцитами плазма.

Предварительно все смешиваемые реагенты подогреваются до +37°C. Ход определения приводится в таблице.

Схема определения уровня α2 антиплазмина у обследуемого
Последовательность операций	Исследуемый образец	Контроль(плазмин)
1. Внести в кювету или пробирку:
исследуемую плазму	20 мкл (0,02 мл)	-
физиологический (0,15 М) раствор хлорида натрия	-	20 мкл (0,02 мл)
раствор плазмина	1,0 мл	1,0 мл
2. Перемешать и инкубировать при +37°C в течение 1 мин
3. Добавить хромогенный субстрат и включить секундомер	0,1 мл	0,1 мл
В течение 30 сек учитывают показатели поглощения и одновременно включают секундомер. Спустя 60 и 120 сек повторно определяют показатели поглощения.

Вычисляют скорость изменения поглощения за 1 мин (Δ А/мин), которая пропорциональна активности α₂-АП. Для этого рассчитывают разницу поглощения при 405 нм между 0 и 60 секундами инкубации, а также между 60 и 120 секундами. Определяют среднюю величину из двух показателей Δ А/мин.

Каждая серия анализов требует не менее одного значения для раствора плазмина (Δ А/мин_{плазмин}) и одного референтного значения, определяемого с использованием контрольной нормальной плазмы (Δ А/мин_{контроль}) с известным значением α₂-АП. Эти значения используют для вычисления внутрилабораторного коэффициента пересчета (K_п):

Содержание α₂-АП в исследуемом образце плазмы в виде % от нормы в дальнейшем вычисляется по формуле:

α₂-АП_{образец}(% от нормы)=К_п×(Δ А/мин_{плазмин}-Δ А/мин_{образец})

В норме, уровень α₂-АП в плазме крови составляет 80-120%.

Снижение активности α₂-АП может быть определено при активации фибринолиза, его повышение сопряжено с риском тромбоза.

При диагностике у новорожденных поросят с анемией повышения α₂-АП необходимо назначение лечения согласно заявленному способу.

Пример 1. У новорожденного поросенка с анемией №19 была взята кровь и исследована по изложенной выше схеме.

У данного поросенка отмечалось нарушение эритропоэза с признаками снижения уровня содержания железа в его организме, сопровождаясь изменением показателей крови. Так, количество гемоглобина у него составляло 82,0 г/л, эритроцитов 4,10×10¹²/л, сидероцитов 1,1% при уровне железа в сыворотке 13,6 мкмоль/л с повышением общей железосвязывающей способности сыворотки крови до 68,9 мкмоль/л.

При обследовании у поросенка была выявлена повышенная активность α₂-АП (147%). Животному был назначен ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 10 дней.

Через 3 дня после окончания лечения у поросенка нормализовалась красная кровь. Так, количество гемоглобина у него возросло до 118,0 г/л, эритроцитов - до 5,06×10¹²/л, сидероцитов до 7,3% при увеличении железа в сыворотке до 22,6 мкмоль/л и снижении общей железосвязывающей способности сыворотки крови до 39,8 мкмоль/л. Однако у поросенка было достигнуто неполное снижение активности α₂-АП (128%), не достигшее нормальных значений.

Наблюдение за поросенком в последующем зарегистрировало слабую положительную динамику α₂-АП - через 1 месяц после окончания лечения α₂-АП составил 123%.

Пример 2. У новорожденного поросенка с анемией №20 была взята кровь и исследована по изложенной выше схеме.

У данного поросенка отмечалось нарушение эритропоэза с признаками снижения уровня содержания железа в его организме, сопровождаясь изменением показателей крови. Так, количество гемоглобина у него составляло 82,0 г/л, эритроцитов 4,08×10¹²/л, сидероцитов 0,9% при уровне железа в сыворотке 12,2 мкмоль/л с повышением общей железосвязывающей способности сыворотки крови до 68,2 мкмоль/л.

При обследовании у поросенка была выявлена повышенная активность α₂-АП (145%). Животному был назначен ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 10 дней, полизон 4 мг/кг и крезацин 4 мг/кг, включенных в схему выпаивания на 10 суток.

Через 3 дня после окончания лечения у поросенка нормализовалась красная кровь.

Так, количество гемоглобина у него возросло до 122,8 г/л, эритроцитов - до 5,36×10¹²/л, сидероцитов до 8,7% при увеличении железа в сыворотке до 28,9 мкмоль/л и снижении общей железосвязывающей способности сыворотки крови до 33,9 мкмоль/л.

У поросенка была достигнута полная нормализация активности α₂-АП (88%).

Наблюдение за поросенком в последующем не зарегистрировало отрицательной динамики α₂-АП.

Использование предлагаемого способа оптимизации активности α₂-АП в ветеринарии поможет избежать сосудистых нарушений у новорожденных поросят с анемией, оздоровить стадо, снизить падеж, увеличить привесы, повысить качество и объем получаемой мясной продукции и получать в последующем от этих поросят здоровое потомство.

Способ снижения уровня α₂ антиплазмина у новорожденных поросят с анемией осуществляется путем применения ферроглюкина по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 10 дней, полизона 4 мг/кг и крезацина 4 мг/кг, включенных в схему выпаивания на 10 сут.