Способ прогнозирования устойчивости мембран эритроцитов периферической крови при обострении герпес-вирусной инфекции у беременных

Способ прогнозирования устойчивости мембран эритроцитов периферической крови при обострении герпес-вирусной инфекции у беременных

Реферат

Цель изобретения заключается в прогнозировании изменения протеина полосы 4.1 в мембранах эритроцитов периферической крови беременных в зависимости от увеличения в них лизофосфатидилхолина при герпесной инфекции.

Прототипом избран способ выявления белкового каркаса мембран и его взаимодействия с фосфолипидами в мембранах эритроцитов периферической крови. Отмечено, что интегральные белки (протеин полосы 4.1) составляют около 6% мембранных протеинов (Алексеев Н.А., 1998; Goodman S.P., Whitfield С., 1982; Воробьев А.И., 2007), являясь фосфопротеином. Спектрин, актин, протеин 4.1 образуют основу скелета мембраны эритроцита, имеющего прочную, жесткую структуру. Основная роль белка 4.1 - связывание комплекса спектрин-актин с фракцией протеина полосы 3 и липидным слоем (Воробьев А.И., 2007). Цитоскелетные аномалии локализуются на участках взаимодействия между цитоплазматическими белками, особенно спектрином, а также спектрином и протеином 4.1. В результате образуются эритроциты овальной либо эллиптической формы (Schiffman F., 2001). Однако в литературе нет сведений, отражающих, какой из фосфолипидов мембран эритроцитов взаимодействует активнее при насыщении периферической крови вирусным антигеном (вирус простого герпеса) с интегральным белком полосы 4.1 в крови беременных.

В отличие от описанных прототипов проводится подробный анализ динамики содержания в мембранах эритроцитов беременных как фосфолипидов, так и белков стромы при герпес-вирусной инфекции, когда токсины возбудителя активно действуют на мембранную структуру эритроцитов (титр антител к вирусу герпеса составлял 1:12800). Цель достигается тем, что оценка изменения фосфолипидного состава мембран эритроцитов периферической крови в период вспышки герпес-вирусной инфекции проводится на основании определения спектра фосфолипидов мембран эритроцитов с одновременным учетом белков каркаса мембран (анкирин, гликофорин, спектрин, протеин полосы 3 и 4.1) с последующей обработкой методом дискриминантного анализа.

Материалом для исследования послужила кровь, полученная у 15 беременных при вспышке герпес-вирусной инфекции в III триместре. Контролем служила кровь от 15 беременных, не болевших во время гестации. Исследования проводились на базе стационара гинекологического отделения клиники Дальневосточного научного центра физиологии и патологии дыхания СО РАМН. Исследования выполнялись с рекомендациями Хельсинской декларации Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с учетом человека» с поправками 2000 г. и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. № 266.

Таблица 1
Статистическая обработка результатов.	Дискриминантный анализ.
Имя выбор-ки	Объем выборки	Кол-во парам,	Расстоян. Махалан.	Критерий Фишера различия выборок	Вероят. различия выборок, %	Гранич. значение дискрим. функции	Вероятн. ошибочн. классив., %
493	15	2	3,47	43,44	100,000	-24,86	5,294
OOR	15	2					5,294
D=-6,790 × полос 4.1+0,609 × Лизофосфатидилхолин
D=-6,790×3,47+{+0,609×7,47}
D=-23,561+{4,549}
D=-19,01
D(-19,01) > граничного значения (-24,86)
Примечание: 493 - вариационный ряд показателей при герпесе
OOR - здоровые беременные (контроль)

Заявленный способ имеет следующие приемы:

а) С помощью двумерной тонкослойной хроматографии на силикагеле определяют фосфолипидный состав мембран эритроцитов у беременных в момент обострения герпес-вирусной инфекции (Rouser G., Siakotos A., Fleischer S., 1966).

б) Одновременно в этой же порции крови в мембранах эритроцитов методом диск-электрофореза в ступенчатом градиентном полиакриламидном геле (10%) с додецилсульфатом натрия были выявлены следующие фракции каркаса мембран эритроцитов: α-спектрин, β-спектрин, протеин полосы-3, протеин полосы-4.1, гликофорин, анкирин.

в) Титр антител к вирусу герпеса определялся иммуноферментным методом на спектрофотометре «Stat-Fax-2100» (USA).

г) Интегральную оценку взаимодействия фосфолипидов и белковых фракций у здоровых и беременных, испытавших обострение герпес-вирусной инфекции (титр антител - 1:12800) подсчитывали путем составления дискриминантного уравнения, при выполнении которого было установлено, что наиболее реальным было в этой ситуации действие фосфолипида лизофосфатидилхолина, увеличение которого в мембранах эритроцитов при обострении герпес-вирусной инфекции (титр - 1:12800) с 4,5±0,6% (контроль) до 7,47±0,33% (р<0,001) приводило к снижению протеина полосы 4.1 с 5,19±0,62 усл.ед. (контроль) до 3,47±0,18 усл.ед. (р<0,001). Дискринимантный анализ, выполненный при этом, показал (табл.1), что дискриминантная функция (-19,01) больше граничного значения (-24,86). Поскольку дискриминантная функция больше граничного значения, прогнозируется неустойчивость эритроцитарной мембраны в силу снижения протеина 4.1 в каркасе мембран эритроцитов беременной.

Полученные данные позволяют считать, что при дискриминантном показателе, меньшем -19,01, развивается дезинтеграция мембран эритроцитов, способствуя формированию анемии беременной.

Литература

1. Алексеев Н.А. Гематология детского возраста / Н.А.Алексеев. - Санкт-Петербург: Гиппократ. - 1998. - 543.

2. Воробьев А.И. Руководство по гематологии / А.И.Воробьев. - М. - Изд. - Ньюдиамед. - 2007. - 1275.

3. Goodman S.R., Schiffer K.A., Casoria L.A. et. all. Identification of the molecular defect in the erythrocyte membrane skeleton of some kindereds with hereditary spherocytosis // Blood. - 1982. - 60 (3). - 772-784.

4. Goodman S.R., Whitfield C.F., Culp E.N. Erythrocyte membrane skeletal protein bands 4.1 a and 4.1 b are sequence - related phosphoproteins // J. Biol. Chem. - 1982. - 257 (8). - 4564-4569.

5. Schiffman F. Hematologic pathophysiology. Philadelphia - New York. - «Lippincott - Raven». - 2001. - 423.

Способ прогнозирования устойчивости мембран эритроцитов периферической крови при обострении герпес-вирусной инфекции у беременных, характеризующийся тем, что на силикагеле с помощью двухмерной тонкослойной хроматографии определяют в фосфолипидном составе мембран эритроцитов содержание лизофосфатидилхолина, одновременно в этой же порции крови в мембранах эритроцитов методом дискэлектрофореза в ступенчатом градиентном полиакриламидном 10%-ном геле с додецилсульфатом натрия определяют содержание протеина полосы 4.1; интегральную оценку взаимосвязи между исследуемыми параметрами у здоровых беременных и беременных, испытавших обострение герпес-вирусной инфекции, решают, определяя дискриминантную функцию (D) с помощью дискриминантного уравнения по формуле:D=-6,790 × полос 4.1+{+0,609xLph}, при значении D, равном или меньше 19,01, прогнозируют неустойчивость мембран эритроцитов.