Способ оценки содержания белка теплового шока hsp70 в плаценте беременной при обострении герпес-вирусной инфекции

Способ оценки содержания белка теплового шока hsp70 в плаценте беременной при обострении герпес-вирусной инфекции

Реферат

Цель изобретения заключается в определении содержания теплового белка Hsp70 в гомогенате плаценты у беременных в зависимости от агрессивности герпес-вирусной инфекции.

Тепловой белок Hsp70 принимает участие в процессах репарации и элиминации неправильно свернутых или денатурированных белков [1, 6, 10]. Воздействие неблагоприятных факторов приводит к повышению экспрессии белков Hsp70 и удерживает цитозоль от повреждения, предотвращая агрегацию частично денатурированных белков [8, 9]. Белки теплового шока принимают участие в регуляции апоптоза.

Строение белков теплового шока Hsp70 может изменяться при воздействии на клетку интерлейкина 1α или TNFα [1].

Однако в литературе отсутствуют данные влияния вирусных воздействий на структуру и содержание в цитоплазме белков теплового шока.

Задачей исследования было изучение содержания белка теплового шока Hsp70 в гомогенате плаценты при поражении организма беременной в третьем триместре вирусом простого герпеса в зависимости от его титра антител.

Материалом для исследования послужила плацента, полученная после родов (20 рожениц) на сроке 38-40 недель. Контролем служили плаценты от 20 рожениц, не болевших во время гестации. Исследования проводились на базе стационара гинекологического отделения клиники Дальневосточного научного центра физиологии и патологии дыхания СО РАМН. Исследования выполнялись с рекомендациями Хельсинской декларации Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с учетом человека» с поправками 2000 г. и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. №266.

Плацента отмывалась физраствором (ФР), кусочки плаценты помещались, слегка подсушивались на фильтровальной бумаге, взвешивались. Затем ее растирали и к полученному гомогенату добавляли ФР в объеме, равном изначальному весу ткани (на 1 г - 1 мл ФР). Гомогенат замораживали при -20°С в течение суток. Затем его размораживали и центрифугировали при 4000 об/мин при температуре +4°С. Надосадочную жидкость разливали мелкими аликвотами и хранили при -20°С до проведения ИФА.

В гомогенате плаценты определяли Hsp70, используя наборы Hsp70 ELISA Kit (USA). Верификация ВПГ-1 проводилась по динамике титров антител IgG в периферической крови с помощью стандартных тест-систем фирмы ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск). Анализ проводили на микропланшетном ридере «Stat-Fax-2100» (USA). Статистическая обработка материала данных проводилась с использованием t-критерия Стьюдента.

Количество белка теплового шока Hsp резко снижалось по мере нарастания титра антител к вирусу герпеса (таблица 1). Если в контроле количество Hsp70 составило 56,1±2,6 нг/мл, то при обострении герпеса во время беременности его содержание при титре антител 1:6000 снижалось до 34,7±1,9 нг/мл (р<0,001), при титре 1:6400 - до 30,4±2,4 нг/мл (р<0,001) и наконец при титре антител 1:12800 количество его уменьшалось до 22,3±2,9 нг/мл (р<0,001).

Таким образом, обострение герпес-вирусной инфекции во время беременности приводит к резкому снижению в гомогенате плаценты белков теплового шока Hsp70 по мере нарастания титра антител к вирусу герпеса.

Таблица 1
Содержание белка Hsp70 в гомогенате плаценты рожениц, перенесших в третьем триместре герпес-вирусную инфекцию (М±m)
Титр антител к вирусу герпеса	Содержание в гомогенате плаценты белка Hsp70 (в нг/мл)
1:1600	34,7±1,9; р<0,001
1:6400	30,4±2,4; р<0,01
1:12800	22,3±2,9; р<0,01
контроль	56,1±2,6
р - по отношению к контролю.

Литература

1. Панасенко О. Структура и свойства малых белков теплового шока / О.Панасенко, М.Ким, Н.Гусев // Успехи биологич. химии. - 2003. - т.43. - С. 59-98.

2. Landry I. Heat shock resistence conferred by expression of the human Hsp27 gene in rodent cells / I. Landry, P. Chretien, Н. Lambert, E. Hickey // The Joum. of Cell Biology. The Rockefeller University Press. - 1989. - vol. 109. - 715 p.

3. Lee G.J. Method for the expression of proteins in vitro translation systems with coexpression of folding helper proteins / G.J. Lee, J. Garrett // J. Biol. Chem. - 1995.- vol.270.- P.1042-1048.

4. Roger J. Translation of some Maire S′mall Heat Shock Proteins is initiated from internal in-frame AuGs. / J.Roger, Н.Frappier, D.B.Walden // Genetics Society America. - 1998. - vol. 148. - P.471-478.

Способ оценки содержания белка теплового шока Hsp70 в плаценте беременной при вспышке герпес-вирусной инфекции в III триместре беременности, включающий определение методом ИФА титра антител к вирусу герпеса, и при титре антител 1:12800 содержание белка теплового шока Hsp70 в плаценте составляет 22,3±2,9 нг/мл, при титре антител 1:6400 - 30,4±2,4, при 1:1600 - 34,7±1,9.