Способ лечения хронических рецидивирующих аллергических заболеваний слизистой носа и околоносовых пазух методом эндоназальной аутолимфоцитотерапии

Способ лечения хронических рецидивирующих аллергических заболеваний слизистой носа и околоносовых пазух методом эндоназальной аутолимфоцитотерапии

Реферат

Изобретение относится к медицине, а именно к лечению хронических аллергических заболеваний лор-органов - аллергического ринита.

Аллергический ринит является очень распространенным заболеванием. Распространенность его в различных странах мира составляет от 4 до 32%. Наиболее частыми причинами аллергических ринитов являются пыльцевые аллергены, домашняя пыль и содержащиеся в ней клещи, затем - аллергены низших грибов, эпидермальные аллергены (шерсть животных), реже - пищевые и лекарственные аллергены (Ильина Н.И. Эпидемиология аллергического ринита // Российская ринология. 1999. № 1. С.23-25; Лопатина А.С. Клинические рекомендации по диагностике и лечению аллергического ринита. Пособие для врачей. - С.П.б. РИА-АМИ, 2003 г., 48 стр.).

Аллергический ринит - IgE-обусловленное воспалительное заболевание, характеризующееся затруднением дыхания или заложенностью носа, выделением обильного водянистого слизистого секрета, отеком слизистой оболочки носа, чиханием и ощущением жжения в глотке, нередко в процесс вовлекаются слизистые оболочки придаточных пазух носа (Аллергология под редакцией P.M.Хаитова, 2006 г., 227 стр.).

Заболевание вызывается контактом аллергенов со слизистой оболочкой носа организма, ранее сенсибилизированного данным аллергеном. Обычно сенсибилизация происходит аэроаллергенами пыльцы растений (деревьев, луговых и сорных трав, реже пыльцой домашних растений), клещей домашней пыли, шерсти, эпидермиса животных, спорами низших грибов, сухого корма для рыб и др.

Сенсибилизация происходит в результате первичного контакта организма с аллергеном, выработки аллергенспецифических IgE и их связывания с высокоаффинными рецепторами (FceRI), расположенными на тучных клетках и базофилах. Повторное поступление аллергена приводит к перекрестному связыванию его с FcdRI тучных клеток слизистой оболочки и выделению ими медиаторов аллергического воспаления, вызывающих симптомы ринита. В аллергическом воспалении принимают участие тучные клетки, базофилы, Т_н2 - лимфоциты, эозинофилы, и эндотелиальные клетки. Цитокины, обусловленные Т_н2 иммунным ответом, усиливают продукцию IgE плазматическими клетками (ИЛ-4, ИЛ-13), а также способствуют усилению тканевой базофилии и эозинофилии (ИЛ-3, ИЛ-5, ГМ-КСФ). Тучные клетки запускают раннюю фазу аллергической реакции. Поздняя фаза аллергической реакции вызвана продолжающимся увеличением количества эозинофилов и базофилов в собственном слое слизистой оболочки. Активированные эозинофилы способствуют персистенции аллергического воспаления, продуцируя ИЛ-3, ИЛ-5, ИЛ-6, ИЛ-8 и ГМ-КСФ.

В патогенезе аллергического ринита основное значение имеет реакция гиперчувствительности немедленного типа, вследствие которой происходит IgE-зависимая активация тучных клеток в слизистой оболочке полости носа, возникают зуд, чихание, водянистые выделения из носа (Иммунология и аллергология под редакцией А.А.Воробьева и соавторов. 2006 г., 280 стр.).

Основная клиническая симптоматика аллергического ринита:

- ринорея - водянистые выделения из носа;

- чихание, нередко приступообразное, преимущественно в утренние часы (пароксизмы чихания могут возникать спонтанно);

- зуд, реже чувство жжения в носу, иногда сопровождается зудом неба и глотки. Внешне может проявляться «аллергическим салютом» - постоянным почесыванием кончика носа ладонью руки движением снизу вверх, в результате чего у части пациентов, особенно у детей, появляется поперечная носовая складка, расчесы, царапины на носу;

- заложенность носа, характерное дыхание ртом, сопение, храп, гнусавость голоса, снижение обоняния.

Дополнительные симптомы аллергического ринита:

- отечность, гиперемия и мацерация кожи над верхней губой и в области крыльев носа;

- носовые кровотечения вследствие форсированного сморкания и ковыряния в носу;

- боль в горле, осиплость голоса, покашливание из-за сопутствующего аллергического фарингита и/или ларингита;

- боль и треск в ушах, особенно при глотании, нарушение слуха вследствие аллергического тубоотита;

- глазные симптомы как проявление сопутствующего аллергического конъюнктивита в виде слезотечения, зуда, инъекции склер и конъюнктивы, фотофобии, темных кругов под глазами, вызванных венозным застоем из-за отека слизистой оболочки носа и придаточных пазух.

Современная классификация аллергического ринита учитывает интенсивность и продолжительность симптомов заболевания и характер его течения (Классификация «Аллергический ринит и его влияние на астму» (2001) (Allergic Rhinitis and its Impact on Asthma Initiative - ARIA, WHO, 2001).

Различают следующие клинические формы:

По частоте обострения аллергического ринита:

- интермиттирующий (симптомы беспокоят пациента менее 4 дней в неделю);

- персистирующий (симптомы беспокоят пациента более 4 дней в неделю).

По степени тяжести аллергического ринита:

- легкое течение (нормальные сон, дневная активность, работоспособность и учеба, отсутствие мучительных симптомов);

- средней тяжести течение и тяжелое течение характеризуется: нарушения сна, дневной активности, работоспособности и учебы, мучительные симптомы

По характеру течения аллергического ринита:

- круглогодичный аллергический ринит;

- сезонный аллергический ринит;

- профессиональный ринит.

По стадии течения аллергического ринита:

- обострение;

- ремиссия.

Согласительный документ по аллергическому риниту Европейской академии аллергологии и клинической иммунологии (2001).

Круглогодичный аллергический ринит (КАР) сопровождается клинической симптоматикой на протяжении календарного года. В развитии КАР ведущая роль принадлежит аллергенам домашней пыли, особенно клещам рода Dermatophagoides. Определенное значение имеют аллергены домашних животных (собаки, кошки), тараканов, пера, пуха, а также некоторых видов плесени. Для КАР характерна более постоянная клиническая симптоматика, которая отмечается на протяжении всего года. Сезонности, как правило, не наблюдается. Наиболее частым и типичным клиническим признаком при хроническом течении КАР является заложенность носа, более выраженная ночью. Пациенты в таких случаях вынуждены прибегать к частому приему сосудосуживающих капель, длительное и бесконтрольное применение которых утяжеляет течение аллергического ринита, а в некоторых случаях приводит к развитию медикаментозного ринита.

Сезонные аллергические риниты обусловлены сенсибилизацией к плесневым грибам, распространенным в основном вне жилища (Cladosporium, Alternaria). Концентрация спор этих микрогрибов повышается в воздухе весной и осенью, вызывая сезонные обострения ринита.

Наиболее распространенной формой сезонного ринита является аллергический ринит, как одно из проявлений пыльцевой аллергии, обусловленной сенсибилизацией к пыльце деревьев, злаковых и сорных трав. В зависимости от спектра пыльцевой сенсибилизации симптомы появляются весной, летом или ранней осенью. В большинстве случаев сезонному риниту сопутствует аллергический конъюнктивит, реже - пыльцевая астма.

Распространенность поллиноза в различных регионах варьирует в зависимости от климато-экологических факторов и колеблется от 2 до 20%. Заболевание имеет четко повторяющуюся сезонность, совпадающую с периодом цветения тех или иных растений (амброзия, тимофеевка, овсяница, мятлик, полынь, лебеда, тополь, береза, ольха, орешник, липа, багульник).

Среди основных нозологических форм, которыми, главным образом, проявляется поллиноз, отмечаются: поражения глаз (конъюнктивит, кератит, увеит), поражения лор-органов (ринит, синусит, ларингит), поражения дыхательных путей (бронхит, трахеит, бронхиальная астма).

Развитию поллиноза способствует наследственная предрасположенность (в 50-70% случаев), которая определяет повышенную продукцию IgE в ответ на воздействие пыльцевых аллергенов. Важную роль в задержке пыльцы на слизистых оболочках верхних дыхательных путей играют конституциональные нарушения барьеров (нарушение функции мерцательного эпителия, дефицит секреторного IgA, нарушение функций макрофагов и гранулоцитов).

Основу патогенеза поллиноза составляет отмена специфического супрессорного эффекта иммунорегуляторных клеток, контролирующих синтез антител класса Е (Адо А.Д. Общая аллергология. - М.: Медицина, 1978, главы 4, 5, 6, с.167-273).

Исключительно важным представляется вопрос взаимосвязи аллергического ринита (АР) и бронхиальной астмы (БА). Взаимосвязь аллергического ринита и бронхиальной астмы - важнейшая проблема в современной клинической аллергологии.

Установлены следующие факты, указывающие на взаимосвязь этих заболеваний:

- высокая частота встречаемости бронхиальной астмы и аллергического ринита у одних и тех же пациентов.

- понижение порога чувствительности к аналогу ацетилхолина - карбахолину и к причинно-значимому аллергену при проведении провокационных ингаляционных тестов, что отмечается даже у больных аллергическим ринитом, протекающим без приступов удушья.

- в период обострения аллергического ринита у больных отмечается также снижение показателей проходимости бронхов.

- повышено содержание аллергенспецифического IgE в назальном смыве у больных бронхиальной астмой, у которых нет клинических признаков аллергического ринита.

- введение причинно-значимого аллергена и медиаторных веществ в полость носа вызывает нарушение бронхиальной проходимости у больных, страдающих бронхиальной астмой.

У больных, длительно страдающих патологией носа и придаточных пазух, нередко впоследствии развивается бронхиальная астма. Отсюда не подлежит сомнению важность своевременной рациональной терапии больных аллергическим ринитом.

Кроме того, можно предположить, что существует так называемый воспалительный рефлекс: клетки, презентирующие антиген, стимулируются и попадают в регионарные лимфатические узлы, контактируя с Т- и В-клетками, которые после этого мигрируют как в нижние, так и в верхние дыхательные пути.

Существование взаимосвязи АР и БА служит еще одним обоснованием проведения специфической иммунотерапии у больных АР.

Следует отметить, что АР не является столь безобидным заболеванием, как считалось ранее, поскольку, во-первых, симптомы ринита причиняют неудобства пациенту, снижают его работоспособность, жизненный тонус, во-вторых, заставляют покупать дорогостоящие препараты, которые обладают рядом побочных действий, и, в-третьих, АР нередко осложняется другими заболеваниями, среди которых самым грозным является БА. Все это доказывает необходимость своевременной и правильной диагностики и лечения этого аллергического заболевания (Клиническая аллергология под редакцией P.M.Хаитова, Москва, МЕД пресс.-информ., 2002 г., 650 стр.).

Основные направления в лечении аллергического ринита и риносинусита

- Элиминация причинно значимых аллергенов. При бытовой сенсибилизации рекомендуется максимально уменьшить контакт с домашней пылью, проводить ежедневную уборку квартиры, заменить подушки на синтепоновые. При эпидермальной сенсибилизации - удалить из квартиры животных, не носить шерстяной одежды. При пыльцевых АР - прекратить контакт с пыльцой. Во время пыления аллергенных растений выезжать в другую климатическую зону, применять различные воздухоочистители, маски, респираторы, фильтрационные системы, так называемые «безаллергенные палаты».

- Аллергенспецифическая иммунотерапия (АСИТ) (специфическая гипосенсибилизация - то есть введение специфического аллергена в минимальных, но постоянно возрастающих количествах). Аллерген может быть применен либо местно (ингаляционная, пероральная, интраназальная, сублингвальная иммунотерапия), либо в виде подкожных введений. Специфическая иммунотерапия показана пациентам, страдающим аллергическим ринитом с доказанным участием IgE в механизме заболевания, при невозможности избежать контакта с аллергеном. Своевременно проведенная специфическая иммунотерапия, помимо угнетения клинической симптоматики ринита, позволяет уменьшить потребность больных в фармакологических средствах и снизить вероятность трансформации аллергического ринита в бронхиальную астму. Клинически эффективная специфическая иммунотерапия приводит к уменьшению проницаемости слизистой носа, уменьшению чувствительности гистаминовых и серотониновых рецепторов, некоторому снижению уровня аллергенспецифического IgE в сыворотке крови и в слизистой носа, к нормализации профиля цитокинов и восстановлению нормальной продукции гамма-интерферона. Важно и то, что при специфической иммунотерапии организм вырабатывает особые, защитные, «блокирующие» антитела (принадлежащие к IgG), конкурирующие за аллерген с IgE.

- Рациональная фармакотерапия. Фармакотерапия аллергических ринитов заключается в использовании противоаллергических средств, принадлежащих к различным группам соединений. Одной из самых распространенных групп являются антигистаминные препараты. Наиболее распространены антигистаминные препараты, являющиеся антагонистами гистаминовых рецепторов (типа H1-рецепторов).

Сейчас предлагаются H1-антагонисты нового поколения, которые имеют целый ряд преимуществ:

- Их можно применять в относительно низких дозировках, так как они имеют высокое сродство к названным рецепторам.

- Они обладают пролонгированным действием и поэтому их можно принимать один раз в сутки.

- Они избирательно блокируют только H1 рецепторы гистамина, избавляя пациента от целого ряда нежелательных эффектов, характерных для препаратов I поколения; не приводят к сухости слизистых оболочек (желудочно-кишечного тракта, глаз, мочевыводящих путей).

- Очень часто отсутствует нежелательный седативный эффект, потому что они не проходят через гематоэнцефалический барьер.

- Их можно применять независимо от времени приема пищи (за исключением астемизола).

К этим антигистаминным препаратам - антагонистам H1-рецепторов последнего поколения относятся лоратидин, цетиризин, фексофенадин, эбастин. В настоящее время применяются местно так называемые топические антигистаминные средства, являющиеся H1-антагонистами, такие как левокебастин, ацеластин.

Среди средств, стабилизирующих мембраны тучных клеток, можно выделить два препарата. Во-первых, это хорошо зарекомендовавший себя кромогликат натрия, представленный на отечественном фармацевтическом рынке лекарственными формами для интраназального применения под различными торговыми названиями; во-вторых, современное средство, не нашедшее пока широкого применения в клинике, - интраназальная форма недокромила натрия.

- Неспецифическая терапия аллергического ринита может включать в себя также рациональное применение глюкокортикостероидов (чаще местно, в ингаляционной форме). В качестве примера можно назвать препараты беклометазона, будезонида, мометазона, флюнизолида. Следует отметить, что данные лекарства достаточно эффективны, но, к сожалению, не лишены нежелательного воздействия - вызывают сухость слизистой, иногда назальные кровотечения, реже - грибковые осложнения. Следует помнить о других общеизвестных возможных осложнениях и применять эту группу препаратов при тщательном контроле со стороны врача-аллерголога. Применение таких препаратов возможно только после обучения их использованию (Клиническая аллергология под редакцией P.M. Хаитова, Москва, МЕДпресс.-информ., 2002 г., 650 стр.).

Глюкокортикостероиды (ПСС) подавляют воспалительную реакцию, уменьшая экссудацию и пролиферацию; снижают проницаемость капилляров; повышают экспрессию β-адренергических рецепторов гладкомышечных клеток. ГКС уменьшают число тучных клеток, эозинофилов и секрецию медиаторов, тормозят пролиферацию лимфоцитов, макрофагов, эпителиальных клеток и снижают секрецию цитокинов.

Преимуществами фармакологического эффекта ГКС является одновременное торможение как ранней, так и поздней фазы аллергического ответа и угнетение всех симптомов аллергического воспаления.

- Кортикостероидная терапия.

Глюкокортикостероиды давно и широко используются в лечении полипозного риносинусита (ПРС). Эти препараты обладают выраженным и быстро проявляющимся противовоспалительным и иммуносупрессивным действием (Holmgren К., Karlsson G. // Eur. Resp. Rev. 1994. V.4. № 20. P.260.; Mygind N. et al. // Clin. Allergy. 1975. V.5. P.159; Лопатин A.C. Полипозный риносинусит. Consilium Medicum, т.2, № 2, 2002 г.), особенно при ассоциировании ПРС с бронхиальной астмой, а также в случае непереносимости нестероидных воспалительных препаратов, назальной и бронхиальной гиперреактивности. Системная КС-терапия широко используется в сочетании с хирургическим лечением. В этих ситуациях выполняются вмешательство на фоне короткого курса системной КС-терапии, назначая преднизолон по 30-40 мг/сут в два приема (20-30 мг в 8 ч утра + 10 мг в обед) в течение 3 дней до и 3 дней после операции. Лечение КС перед операцией уменьшает размер полипов, снижает отек и кровоточивость тканей и позволяет хирургу выполнить вмешательство с минимальной травмой, сохраняя анатомические структуры и здоровую слизистую оболочку.

Преднизолон один из наиболее изученных и широко используемых в клинической практике кортикостероидов. Имеет различные формы выпуска:

- Prednisolon 30 мг -1,0 мл для внутривенного и внутримышечного введения,

- Prednisolon 5 мг таблетированная форма для системного применения, а также для местного применения: Prednisolon 10,0 (глазные капли) и Prednisolon 0,5-10,0 (мазь).

Показания к применению при аллергических заболеваниях:

- Острые и хронические аллергические заболевания: повышенная чувствительность к лекарственным препаратам, сывороточная болезнь, крапивница, аллергический ринит, повышенная чувствительность к химическим веществам, отек Квинке;

- Бронхиальная астма

Фармакологическое действие.

При кратковременном парентеральном применении стабилизирует клеточные мембраны, тормозит высвобождение ферментов, повреждающих клетки: уменьшает движение лейкоцитов и тучных клеток, снижает проницаемость капилляров, улучшает микроциркуляцию. Взаимодействует со специфическими цитоплазматическими рецепторами, ингибирует фосфолипазу А2, уменьшает синтез лейкотриенов и Pg. Обладает противовоспалительным, противоаллергическим, иммунодепрессивным, антипролиферативным, противошоковым (восстановление чувствительности рецепторов к катехоламинам и задержка Na+ и воды в организме за счет МКС активности) действием.

Вместе с тем, как и прочие кортикостероидные препараты системного применения, преднизолон оказывает катаболическое действие, повышает уровень глюкозы в крови, вызывает перераспределение жировой ткани. Препарат тормозит синтез и секрецию АКТГ и вторично - кортикостероидов надпочечниками.

Эндоназальная аутолимфоцитотерапия с использованием аутологичных лимфоцитов крови больного, активированных in vitro раствором преднизолона в дозе - 30 мг в 1,0 мл, сводит до минимума побочные действия фармпрепарата. После отмывания суспензии лимфоцитов клетки отмываются шестикратно в 10,0 мл физиологического раствора, который добавляется к суспензии лимфоцитов при каждом их центрифугировании.

Таким образом, препарат практически не попадает в организм больного в фармакологически действующих дозах, так как после окончательной обработки аутолимфоцитов его доза не превышает 0,000003 мг.

В заключение следует отметить, что аллергические риниты являются очень серьезной проблемой вследствие большой распространенности, а также из-за возможности трансформации в бронхиальную астму - еще более опасное аллергическое заболевание, а также возможность развития других осложнений.

Разработка новых подходов терапии АР, позволяет свести к минимуму клинические проявления и предотвратить возможные неблагоприятные последствия этого серьезного аллергического заболевания. Совершенствование методов иммунотерапии и фармакотерапии аллергических ринитов является важной проблемой в современной клинической аллергологии.

Эндоназальная аутолимфоцитотерапия может рекомендоваться в качестве лечения круглогодичного аллергического ринита и обострения риносинусита в период цветения растений у пациентов с тяжелым длительным течением поллиноза при резистентности пациентов к воздействию антигистаминных препаратов и эндоназальных стероидных аэрозолей.

В данном случае соблюдается принцип индивидуализированного подхода к каждому пациенту, а также уменьшается количество нежелательных побочных эффектов, т.к. используются аутологичные иммунокомпетентные клетки самого пациента, которые вводятся в орган, подлежащий лечению.

Образно это можно сравнить со специализированным действием активированных иммунных клеток непосредственно в очаге «конфликта». В этом случае иммунокомпетентные клетки обеспечивают не только высокую эффективность и специализированную направленность иммунных реакций, но их действие не сопровождается побочными, нежелательными эффектами, т.е. иммунными процессами генерализированной формы. К ним относятся: повышение температуры тела, обострение сопутствующих хронических инфекций, активация аллергических и аутоиммунных процессов в организме.

Таким образом, предполагается способ лечения хронических рецидивирующих аллергических заболеваний слизистой носа и околоносовых пазух методом эндоназальной аутолимфоцитотерапии, включающий предварительное получение аутологичных лимфоцитов из венозной крови больного, культивирование полученных лимфоцитов совместно с кортикостероидным фармпрепаратом и последующее поочередное введение в правую и левую верхнечелюстные пазухи, в дозах от 0,1 до 3,0 мл, взвеси лимфоцитов в приемлемой среде при их концентрации 10⁶-10⁷ кл./мл, с интервалом между введениями от двух до шести дней.

Предпочтительно, что культивирование полученных лимфоцитов совместно с кортикостероидным фармпрепаратом осуществляют в течение 1-6 часов.

Предпочтительно, что в качестве кортикостероидного фармпрепарата используется преднизолон.

Предпочтительно, что введение взвеси лимфоцитов осуществляют методом синус - катетеризации с использованием ЯМИК катетера, после предварительного эвакуирования содержимого.

Показания к использованию эндоназальной аутолимфоцитотерапии:

- тяжелое течение круглогодичного аллергического ринита и неэффективность традиционных терапевтических приемов;

- лечение сезонного аллергического ринита при сенсибилизации к низшим грибам;

- купирование и профилактика обострения поллиноза (пыльцевой аллергии) в сезон цветения растений, когда применение классического метода аллерген-специфической иммунотерапии противопоказан.

Возможные осложнения при использовании медицинской технологии и способы их устранения.

Эндоназальная аутолимфоцитотерапия аллергического ринита в большинстве случаев не сопровождается какими-либо осложнениями, однако, как при любом виде иммунофармакотерапии, возможны индивидуальные реакции на введение смеси аутолимфоцитов, индуцированных преднизолоном, которые могут проявляться незначительной манифестацией симптомов: кратковременные приступы ринореи и заложенности носа, а также в виде чувства дискомфорта при катетеризации носовых ходов.

В случае кратковременной манифестации симптомов аллергического ринита назначаются антигистаминные препараты.

Противопоказания к использованию эндоназальной аутолимфоцитотерапии:

- онкологические заболевания;

- тяжелые психические расстройства;

- тяжелые заболевания органов сердечно-сосудистой системы;

- беременность;

- хронические заболевания внутренних органов в стадии, выраженной декомпенсации;

Материально-техническое обеспечение медицинской технологии.

Для осуществления эндоназальной аутолимфоцитотерапии необходимы следующие средства:

1. Шприцы стерильные одноразовые инъекционные двухкомпонентные с канюлями (иглами): BD ТМ 2РС SYRINGE 2, 5 и 10 мл фирмы «Becton Dickinson», регистрационное удостоверение МЗ РФ № 2002/702.

2. Раствор натрия хлорида для инфузий изотонический 0,9%, № гос. регистрации Р002134/01-2003.

3. Раствор натрия хлорида для инъекций изотонический 0,9%, №гос.регистрации Р71/3 80/5.

4. Раствор фиколл-урографина стерильный, плотность 1,077, производитель ООО «Научно-производственное предприятие ПанЭко».

5. Кортикостероидный фармпрепарат, например, Преднизолон - 30 мг в 1,0 мл, или Дексаметозон - 4 мг в 1,0 мл, или Гидрокортизон - 125 мг в 1,0 мл.

6. Центрифуга ЭЛЕКОН настольная лабораторная с ротором на 10 пробирок, ТУ 9443-001-245.235.30-97.

7. Пробирки стерильные на 10 мл.

8. Ламинарный шкаф для стерильной работы.

9. Термостат.

10. Синус ЯМИК - катетер.

Описание медицинской технологии.

Методика выделения лимфоцитов.

1. У больного из локтевой вены берут 20 мл крови в стерильную вакуумную пробирку с гепарином.

2. В стерильных условиях из гепаринизированной крови выделяют лимфоциты на растворе фиколла (плотность 1,077 г/см).

3. Выделенные лимфоциты переносят в стерильную центифужную пробирку и четырежды отмывают стерильной средой RPMI 1640 путем центрифугирования в течение 7 минут при 200 g (1500 об/мин).

4. Проводят подсчет клеток в камере Горяева и проверку препарата на чистоту клеточной популяции и жизнеспособность клеток.

5. После четвертой отмывки к суспензии лимфоцитов в концентрации 1×10⁷ добавляют кортикостероидный фармпрепарат (например, 1 мл преднизолона) и инкубируют в течение трех часов при температуре 37°С, затем двукратно отмывают. 1-й раз - RPMI 1640, 2-й раз - изотоническим раствором натрия хлорида (0,9%).

6. После последней отмывки клетки ресуспензируют в 1 мл стерильного изотонического раствора натрия хлорида (0,9%).

7. Проводят подсчет клеток в камере Горяева и проверку препарата на чистоту клеточной популяции и жизнеспособность клеток (концентрацию лимфоцитов доводят до 1×10⁷ кл./мл, чистота клеточной суспензии по лимфоцитам не должна быть менее 95%, а жизнеспособность в тесте с трипановым синим - не менее 90%.)

Кроме физиологического раствора суспензия аутолимфоцитов содержит лишь следовые количества кортикостероидного фармпрепарата (преднизолона, дексаметозона, гидрокортизона).

Эндоназальная аутолимфоцитотерапия проводится по различным схемам, в зависимости от формы патологического процесса.

Разработано несколько схем лечения, в которых варьирует количество вводимых лимфоцитов, частота их введения и продолжительность курса.

Схема № 1 применяется в лечении круглогодичного аллергического ринита.

Суспензия аутологичных лимфоцитов крови больного, активированных in vitro кортикостероидным фармпрепаратом, вводится врачом отоларингологом с помощью специального катетера - Синус ЯМИК поочередно в правую и левую верхнечелюстные пазухи: 1-е введение 0,5×10⁶ клеток, 2-е введение 1×10⁷ клеток, 3-е и 4-е введение 2×10⁷ клеток, 5-е и 6-е введение 3×10⁷ клеток, интервал введений: 1-е и 2-е, 3-е, 4-е введение - два раза в неделю; 5-е и 6-е введение - один раз в неделю.

Схема № 2 применяется для купирования и профилактики обострений поллиноза и лечение сезонного аллергического ринита, обусловленного сенсибилизацией грибковым аллергеном.

Суспензия аутологичных лимфоцитов крови больного, активированных in vitro кортикостероидным фармпрепаратом, вводится врачом отоларингологом с помощью специального катетера - Синус ЯМИК поочередно в правую и левую верхнечелюстные пазухи: 1-е введение 0,5×10⁶ клеток, 2-е введение 0,5×10⁶ клеток, 3-е и 4-е введение 1×10⁶ клеток, 5-е введение 2×10⁶ клеток, интервал введений: 1-е, 2-е, 3-е, 4-е, 5-е введение - один раз в неделю.

Таким образом, выбор схемы лечения зависит от тяжести заболевания, остроты процесса и индивидуальной реакции пациента на введение аутолимфоцитов.

Клинический случай № 1.

Больной Г, 36 лет, наблюдался в течение 6 лет по поводу: поллиноза, рино-коньюнктивального синдрома, сенсибилизации к пыльце деревьев и сорных трав, перекрестной пищевой аллергии.

Были проведены 3 курса аллергенспецифической иммунотерапии с аллергенами пыльцы деревьев и сорных трав без видимого клинического эффекта. Несмотря на проведенную АСИТ, присоединилась перекрестная пищевая аллергия, проявляющаяся круглогодично в виде отека слизистой зева, першение в горле, приступообразного сухого кашля при употреблении в пишу косточковых фруктов, подсолнечного и кукурузного масла, орехов. Больной обратился в конце марта месяца с жалобами на выраженную заложенность носа, обильные слизистые выделения из носа, сухой приступообразный кашель, зуд слизистой носа, слезотечение. Данные осмотра: носовое дыхание затруднено, выраженный отек слизистой зева, в легких дыхание везикулярное, хрипов нет, тоны сердца ясные, ритм правильный ЧСС - 72 в мин., АД-120 и 80 мм рт.ст.

При аллергологическом обследовании больного методом кожных проб с различными аллергенами выявлена сенсибилизация к пыльцевым аллергенам: слабо положительные аллерготесты с аллергенами пыльцы луговых трав и резко положительные кожные пробы с аллергенами пыльцы деревьев и сорных трав.

Выявлена также перекрестная пищевая аллергия к яблоку, абрикосу, персику, лесному ореху, томату, подсолнечнику и кукурузе. В связи с выраженным сезонным обострением поллиноза, отсутствием эффекта при приеме антигистаминных препаратов, эндоназальных стероидов, высоким уровнем общего иммуноглобулина Е-686 КЕ/л (норма до 120 КЕ/л), был проведен курс эндоназальной аутолимфоцитотерапии. Эндоназально вводили аутологические лимфоциты, выделенные из собственной крови больного по описанной технологии и активированной in vitro лекарственным препаратом преднизолоном в дозе 25 мг в 1,0 мл.

Лечение проводили по схеме № 2.

Суспензия аутологичных лимфоцитов крови больного, активированных in vitro преднизолоном, вводится врачом отоларингологом с помощью специального катетера - Синус ЯМИК поочередно в правую и левую верхнечелюстные пазухи: 1-е введение 0,5×10⁶ клеток, 2-е введение 0,5×10⁶ клеток, 3-е и 4-е введение 1×10⁶ клеток, 5-е введение 2×10⁶ клеток, интервал введений: 1-е, 2-е,3-е, 4-е, 5-е введение - один раз в неделю.

Активированные преднизолоном аутолимфоциты вводились поочередно в правую и левую верхнечелюстной пазухи методом синус-катетеризации с использованием ЯМИК катетера.

Результаты эффективности эндоназальной аутолимфоцитотерапии оценивались по клиническим симптомам и данным иммуно-аллергологического обследования.

В табл.1 представлены в динамике результаты иммунологического обследования больного до и после курса эндоназальной аутолимфоцитотерапии.

Таблица 1
исследования иммунного статуса больного
показатель	норма	до лечения	после лечения
Лейкоциты, × 10^9/л	4-8,8	5,3	7,7
Нейтрофилы, %	48-75	52	56
Нейтрофилы, × 10^9/л	2,1-5,6	2,8	4,3
Лимфоциты, %	19-37	34	35
Лимфоциты, × 10^9/л	1,2-3,0	1,8	2,7
Моноциты, %	3-11	6	8
Моноциты, × 10^9/л	0,09-0,6	0,3	0,6
Эритроциты, × 10^12/л	3,7-4,7	4,0	4,5
Гемоглобин, г/л	120-150	113	152
Гематокрит, %	36-42	34	51
Ср. объем эритроцита, мкм ^3	80-100	85	81
Ср. сод. Гемоглоб. в эритр., пг	26-34	28	29
Ср. конц. Гемогл. в эритр., %	30-38	33	36
Тромбоциты, × 10^9/л	180-320	190	300
CD45/CD3, +% все Т-лимф.	55-75	72	75
CD45/CD3+, × 10^9/л все Т-лимф.	0,9-2,2	1,3	2,0
CD45/CD3+/CD4+, % Т-хелперы	35-65	56	41
CD45/CD3+/CD4+, × 10^9/л Т-хелп.	0,6-1,9	1,0	1,1
CD45/CD3+/CD8+, % цитотокс.ли	12-30	14	27
CD45/CD3+/CD8+, × 10^9/л цитот	0,3-0,8	0,3	0,7
CD4/CD8	1,2-2,5	4,0	1,5
CD45/CD19+, % В-лимфоциты	5-15	16	10
CD45/CD19+, × 10^9/л В-лимф	0,12-0,45	0,29	0,27
CD45/CD3-/ CD16+CD56+, % NK-кл	12-25	10	12
CD45/CD3-/ CD16+CD56+, × 10^9/л	0,3-0,6	0,2	0,3
CD45/CD3+/ CD16+CD56+, % Т-кил	0-5	0	5
CD45/CD3+/ CD16+CD56+, × 10^9/л	0-0,1	0	0,1
Лейк./Т-лимф. индекс	4-7	2,9	2,9

Результаты определения содержания в сыворотке крови общего иммуноглобулина Е и IgE специфических антител к различным аллергенам до и после курса эндоназальной аутолимфоцитотерапии представлены в табл.2.

Таблица 2
Уровень общего и специфического IgE антител в сыворотке крови больного до и после лечения методом эндоназальной аутолимфоцитотерапии (повторное обследование проводилось через три месяца после курса лечения)
	до лечения	после лечения		до лечения	после лечения
* IgE общий	686	138
Домашняя пыль	2	1	Таракан	1	0
Библиотечная пыль	1	0	Табак	2	1
Перо подушки	1	0	Овсяница	4	2
Шерсть кошки	2	1	Полынь	3	1
Шерсть собаки	0	0	Лебеда	3	1
Шерсть овцы	0	0	Береза	4	2
D.pteronissinus	1	0	Лещина	3	1
D.farinae	2	1	Ольха	2	0
Пшеничная мука	2	1
Ржаная мука	0	0
Рис (крупа)	1	1
Апельсин	2	0
Сорные травы	4	2
Луговые травы	2	0
Деревья	3	2
Тимофеевка	2	0
Ежа	2	0
*IgE общий - количественный анализ в КЕ/л,
*IgE специфический - качественный анализ в баллах.

Как видно из табл.1 и 2, эндоназальная аутолимфоцитотерапия не только нормализует показатели иммунного статуса, но и снижает уровень как общего IgE, так и специфических IgE антител к различным причинно значимым аллергенам.

В таблице 3 представлена динамика клинических симптомов и результаты инструментального обследования лор-органов до и после курса аутолимфоцитотерапии.

Таблица 3
Динамика клинических показателей
До лечения	После лечения
Заложенность носа, приступы чихания, ринореи, зуд слизистой глаз, слезотечение, сухой приступообразный кашель.	Жалобы на незначительную заложенность носа во время пребывания в зоне цветущих растений
Инструментальные исследования:Объективно: нос - слизистая обильно отечная, бледная. В носовых ходах слизистое отделяемое. Нижние носовые раковины выраженно гипертрофированны.	Инструментальные исследования: Слизистая носа розового цвета, слегка отечна, в носовых ходах незначительное количество слизи.
Глотка - слизистая задней стенки глотки бледная, отечная. Густое слизистое отделяемое из верхнего отдела носоглотки.	Глотка: слизистая розового цвета, слегка отечна. Небольшое количество слизистого отделяемого верхнего отдела носоглотки.

Как видно из табл. 3, после проведенного курса лечения наблюдалось снижение интенсивности клинических проявлений аллергического ринита и положительная динамика инструментального исследования лор-органов. Наряду с положительным клиническим эффектом купирование обострения поллиноза сопровождалось тенденцией к снижению содержания в сыворотке крови больного IgE антител и нормализацией показателей иммунного статуса.

Результаты иммуно-аллергологического исследования подтверждают высокую степень эффективности данного способа лечения поллиноза, который может применяться для купирования сезонных обострений заболевания.

Клинический случай № 2.

Больная К, 55 лет, наблюдалась с диагнозом: круглогодичный аллергический ринит, интермитирующая форма, средней тяжести течения; поллиноз, риноконьюнктивальный синдром, поливалентная сенсибилизация к бытовым, эпидермальным, пыльцевым аллергенам, перекрестная пищевая аллергия.

Пациентка обратилась в алл