Способ улучшения цвета мяса лосося
Патент 2413429
Авторы
Правообладатели
Классы МПК
Способ улучшения цвета мяса лосося
Иллюстрации
Изобретение относится к изменению цвета мяса лосося. Способ предусматривает выращивание лосося на кормовом продукте, смешанном с каротиноидным красителем. Каротиноидный краситель включает, по меньшей мере, астаксантин, фоеникоксантин, кантаксантин и адониксантин. Содержание астаксантина в корме составляет от 20 до 100 мг/кг. Содержание фоеникоксантина в корме составляет от 5 до 80 мг/кг. Изобретение позволяет выращивать лосося, имеющего натуральный красновато-оранжевый цвет мяса при добавлении доступного натурального красителя в корм. 6 н. и 21 з.п. ф-лы, 14 табл.
Реферат
Настоящее изобретение относится к способу улучшения цвета мяса лосося и корму для улучшения цвета мяса лосося, который используют при выращивании лосося, т.е. рыб семейства лососевых с умеренным красновато-оранжевым цветом мяса, близким к цвету мяса дикой рыбы, и также лососю и мясу, полученным при использовании этого способа.
Дикий лосось получает и накапливает каротиноидный краситель, содержащийся в мелких креветках, крупных креветках, лобстерах или крабах, в дикой природе, и таким образом мясо дикого лосося приобретает красновато-оранжевый цвет. При выращивании лосося в корм, как правило, добавляют каротиноидный краситель, чтобы мясо имело цвет, близкий к цвету мяса дикого лосося.
В качестве каротиноидного красителя, добавляемого в корм, широко используют химически синтезированный астаксантин (Critical Reviews in Food Science and Nutrition, 46: 185-196 (2006)). Известны примеры натуральных каротиноидных красителей, используемых для улучшения цвета мяса лосося, включающие астаксантин, полученный Phaffia rhodozyma (опубликованная заявка Японии № 8-508885), астаксантин, полученный из морских водорослей Haematococcus pluvialis (патент США 4,871,551), и капсайцин, который является компонентом красного перца (опубликованная заявка Японии № 2005-27662). Хотя и не для лосося, известно применение каротиноидного красителя, продуцируемого штаммом бактерии Paracoccus carotinifaciens E-396 (FERM BP-4283), для тестирования улучшения цветового тона поверхности красноморского леща (опубликованная заявка Японии № 9-308481). Также известно вещество, содержащее краситель, добавляемое в корм, которое образовано осадком, полученным как результат культивирования микроорганизма, осадок содержит соединение каротиноида (опубликованная заявка Японии № 2001-95500).
Мясо лосося, выращенного на кормовом продукте с добавлением синтетического астаксантина, имеет светло-красный цвет, но периодически красный цвет оказывается слишком насыщенным. Такой чрезмерно насыщенный красный цвет вызывает проблемы, связанные со знанием того, что краситель является химически синтезированным, что может оказывать не благоприятное впечатление на потребителей. Каротиноидные красители, производимые Phaffia rhodozyma, или полученные из морских водорослей Haematococcus pluvialis, могут быть благосклонно приняты потребителями, предпочитающими пищевой продукт, направленный на охрану природы. Однако каротиноидные красители, полученные такими дрожжами и из морских водорослей, главным образом содержат астаксантин, и цветовой тон мяса рыбы, полученной при использовании таких каротиноидных красителей, аналогичен таковому, полученному при использовании синтетического астаксантина. В качестве источника красного красителя используют красный перец. Однако получение красного перца, который является натуральным продуктом, зависит от климата, и трудно обеспечить такой стабильный краситель.
Следовательно, продолжает существовать необходимость в способе выращивания лосося, имеющего натуральный красновато-оранжевый цвет мяса рыбы при добавлении стабильно доступного, натурального красителя в корм.
При решении вышеуказанных проблем авторы настоящего изобретения установили, что получение корма, содержащего каротиноидный краситель, который содержит астаксантин, фоеникоксантин (также называемый «андонирубин»), кантаксантин и адониксантин, позволяет вырастить лосося, имеющего более мягкий и более натуральный красновато-оранжевый цвет мяса по сравнению с лососем, выращенным с использованием синтетического астаксантина; и решение полностью достигнуто настоящим изобретением.
Настоящее изобретение относится к следующему способу, корму и лососю.
(1) Способ получения лосося, имеющего умеренный красновато-оранжевый цвет мяса, включающий выращивание лосося на кормовом продукте, включающем смешанный с ним каротиноидный краситель, каротиноидный краситель включает, по меньшей мере, астаксантин, фоеникоксантин, кантаксантин и адониксантин, в котором содержание астаксантина в корме составляет от 20 до 100 мг/кг и содержание фоеникоксантина в корме составляет от 5 до 80 мг/кг.
(2) Способ по п.(1), в котором содержание кантаксантина в корме составляет от 0,5 до 25 мг/кг.
(3) Способ по п.(1) или (2), в котором содержание адониксантина в корме составляет от 0,2 до 40 мг/кг.
(4) Способ по любому из п.п.(1)-(3), в котором мясо выращенного лосося содержит астаксантин и фоеникоксантин.
(5) Способ по любому из п.(4), в котором мясо выращенного лосося содержит кантаксантин и/или адониксантин.
(6) Способ по любому из п.п.(4) или (6), в котором отношение содержания фоеникоксантина к содержанию астаксантина в мясе выращенного лосося составляет от 5 до 80%.
(7) Способ по любому из п.п.(4)-(6), в котором отношение содержания кантаксантина к содержанию астаксантина в мясе выращенного лосося составляет от 0,5 до 20%.
(8) Способ по любому из п.п.(4)-(7), в котором отношение содержания адоникоксантина к содержанию астаксантина в мясе выращенного лосося составляет от 0,2 до 40%.
(9) Способ по любому из п.п.(1)-(8), в котором каротиноидный краситель корма включает натуральный каротиноидный краситель.
(10) Способ по любому из п.п.(1)-(8), в котором каротиноидный краситель корма включает натуральный каротиноидный краситель и химически синтезированный каротиноидный краситель.
(11) Способ по любому из п.п.(9) или (10), в котором натуральный каротиноидный краситель получают ферментацией бактериями.
(12) Способ по п.(11), в котором бактерии принадлежат к роду Paracoccus.
(13) Способ по п.(11), в котором бактерии содержат ДНК, соответствующую 16S рибосомальной РНК, ДНК содержит последовательность оснований, которая, по меньшей мере, на 98% гомологична последовательности оснований, представленной SEQ ID NO: 1.
(14) Способ по п.(11), в котором бактерии представляют собой штамм E-396 (FERM BP-4283) или его мутант.
(15) Способ по любому из п.п.(1)-(14), в котором лосось представляет собой, по меньшей мере, один вид, выбранный из группы, состоящей из семги, радужной форели, кижуча, чавычи, нерки, горбуши, симы, кеты, амаго и кумжи.
(16) Способ по п.(15), в котором лосось представляет собой, по меньшей мере, один вид, выбранный из группы, состоящей из семги, радужной форели, кижуча и чавычи.
(17) Корм для выращивания лосося способом по любому из п.п.(1)-(16).
(18) Корм для выращивания лосося, включающий смешанный с ним каротиноидный краситель, каротиноидный краситель включает, по меньшей мере, астаксантин, фоеникоксантин, кантаксантин и адониксантин.
(19) Корм по п.(18), в котором содержание астаксантина составляет от 20 до 100 мг/кг и содержание фоеникоксантина составляет от 5 до 80 мг/кг.
(20) Корм по п.п.(18) или (19), в котором содержание кантаксантина в корме составляет от 0,5 до 25 мг/кг.
(21) Корм по п.п.(18)-(20), в котором содержание адониксантина составляет от 0,2 до 40 мг/кг.
(22) Лосось, его мясо или икра, причем лосось выращен способом по п.п.(1)-(16).
(23) Лосось, его мясо или икра по п.(22), в котором отношение содержания фоеникоксантина к содержанию астаксантина в мясе выращенного лосося составляет от 5 до 80%.
(24) Лосось, его мясо или икра по п.(22) или (23), в котором отношение содержания кантаксантина к содержанию астаксантина в мясе выращенного лосося составляет от 0,5 до 20%.
(25) Лосось, его мясо или икра по любому из п.п.(22)-(24), в котором отношение содержания адоникоксантина к содержанию астаксантина в мясе выращенного лосося составляет от 0,2 до 40%.
Настоящее изобретение относится к корму, включающему каротиноидный краситель, который включает, по меньшей мере, астаксантин, фоеникоксантин, кантаксантин и адониксантин. При выращивании лосося на кормовом продукте по настоящему изобретению получают лосося, мясо которого имеет натуральный красновато-оранжевый цвет.
ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫЕ ВАРИАНТЫ ВЫПОЛНЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Далее будут описаны варианты выполнения настоящего изобретения. Эти варианты приведены только для иллюстрации, но не для ограничения объема изобретения. Настоящее изобретение может быть осуществлено в различных вариантах, не выходящих из объема настоящего изобретения.
Все приведенные здесь публикации, включая документы, приведенные в уровне техники, предшествующем изобретению, опубликованные для ознакомления патентные заявки, патентные публикации и другие патентные документы, приведенные ссылкой, приведены здесь ссылкой в полном объеме. В описании приведено содержание заявки Японии № 2006-282085, по которой испрашивается приоритет для настоящей заявки.
Далее настоящее изобретение будет описано детально.
Настоящее изобретение относится к корму для лосося, который включает каротиноидный краситель, содержащий, по меньшей мере, астаксантин, фоеникоксантин, кантаксантин и адониксантин, позволяющему вырастить лосося, имеющего умеренный красновато-оранжевый цвет мяса. Также настоящее изобретение относится к способу выращивания и получения лосося, имеющего умеренный красновато-оранжевый цвет мяса, при использовании такого корма.
Используемый в настоящем изобретении термин «лосось» относится к рыбам, принадлежащим к семейству лососевых или роду настоящих лососей (Salmo) семейства лососевых. Лососи, принадлежащие к роду тихоокеанских лососей (Oncorhynchus), включают, например, радужную форель (Oncorhynchus mykiss), серебристого лосося (Oncorhynchus kisutch), королевского лосося (Oncorhynchus tshawytscha), нерку (Oncorhynchus nerka), горбушу (Oncorhynchus gorbuscha), кету (Oncorhynchus keta), симу (Oncorhynchus masou), и красно-пятнистую форель (Oncorhynchus masou macrostomus). Лососи, принадлежащие к роду настоящих лососей (Salmo genus), включают, например, семгу (Salmo salar) и кумжу (Salmo trutta). Предпочтительными по настоящему изобретению являются семга (Salmo salar), радужная форель (Oncorhynchus mykiss) и чавыча (Oncorhynchus tshawytscha). Лосось по настоящему изобретению может представлять собой морскую форму, используемую для марикультуры, или пресноводную форму, используемую для марикультуры, без конкретных ограничений по форме выращивания.
Согласно настоящему изобретению предпочтительно применение натурального каротиноидоного красителя, но натуральный каротиноидный краситель может быть смешан с химически синтезированным каротиноидным красителем. Нет конкретных ограничений по корму по настоящему изобретению, кроме того, что корм содержит, по меньшей мере, натуральный астаксантин, фоеникоксантин, кантаксантин и адониксантин. Например, может быть использован каротиноидный краситель, полученный бактериями, дрожжами или из морских водорослей, каротиноидный краситель, полученный из растений, или каротиноид, полученный из ракообразных, таких как мелкие креветки, крупные креветки, лобстеры или крабы, как по отдельности, так и в комбинации из двух или более. Предпочтительный натуральный каротиноидный краситель получают ферментацией бактериями.
Каротиноидный краситель, полученный бактериями, является предпочтительно эффективным при применении ввиду тонких клеточных стенок. Предпочтительным является каротиноидный краситель, полученный бактериями, принадлежащими к роду Paracoccus genus, ввиду их высокой продуктивности. Также предпочтительно применение красителя, полученного бактериями, содержащими ДНК, соответствующую 16S рибосомальной РНК, ДНК содержит последовательность оснований, по существу гомологичную последовательности оснований, представленной SEQ ID NO: 1.
Здесь и далее фраза «по существу гомологичных» означает имеющих гомологичность 98% или выше с учетом ошибок при определении последовательности оснований ДНК или аналогичной рассматриваемой. Наиболее предпочтительно применение, например, каротиноидного красителя, полученного штаммом Paracoccus carotinifaciens E-396 (FERM BP-4283) или его мутантом.
Штамм E-396 депонирован, как международный депозит в Национальном Институте Передовых Промышленных Знаний и Технологий в соответствии с международной процедурой депонирования микроорганизмов.
Международная Депозитарная Организация: Международный Депозитарий Патентуемых Микроорганизмов, Национальный Институт Передовых Промышленных Знаний и Технологий (бывший ранее Национальным Институтом Биологических Наук и Технологий, связанных с человеком, Агенство по Науке и технологии, Министерство Международной торговли и промышленности)
Central 6, Higashi 1-1-1, Tsukuba-shi, Ibaraki-ken, 305-8566
Идентификационный номер: E-396
Депозитарный номер: FERM BP-4283
Дата депонирования оригинала: 27 апреля, 1993
Нет конкретных ограничений по способу получения мутанта, если только способ индуцирует мутацию. Могут быть использованы, например, химический способ с использованием мутирующего агента, такого как N-метил-N'-нитро-N-нитрозогуанидин (NTG), этилметансульфонат (EMS) или аналогичное; физический способ с использованием ультрафиолетового излучения, рентгеновского излучения или аналогичного; или биологический способ с использованием генной рекомбинации, транспозона или аналогичного. Мутация может быть проведена в одну стадию или, по меньшей мере, две стадии. В последнем случае, например, мутантный микроорганизм, продуцирующий астаксантин, полученный на первой стадии, затем дополнительно обрабатывают другим способом мутирования, получая мутант.
Натуральный каротиноидный краситель, добавляемый в корм по настоящему изобретению, может быть применен в оригинальной форме или может быть применен в порошкообразной форме, полученной сушкой красителя вместе с организмом. «Порошок, полученный сушкой красителя вместе с организмом» может быть получен, например, сушкой красителя, полученного культивированием микроорганизма, продуцирующего краситель, и культурального раствора, содержащего микроорганизмы, как они есть, или сушкой и обработкой с получением порошкообразной формы растения, от природы содержащего краситель. Организм или культуральный раствор, содержащий каротиноидный краситель, могут быть высушены и обработаны с получением порошкообразной формы, как есть; краситель может быть экстрагирован из них с использованием органического растворителя или аналогичного; или экстракт может быть дополнительно отделен и очищен, чтобы иметь высокий уровень чистоты.
Нет конкретных ограничений по форме корма по настоящему изобретению, если только корм содержит астаксантин, фоеникоксантин, кантаксантин и адониксантин. Примеры форм корма включают пеллеты, порошок, замешиваемый корм и дополнительно включают пеллеты, отформованные экструзией, влажные пеллеты, пюреообразную форму и тому подобное. Размер корма может быть изменен на нескольких стадиях по мере роста лосося, но без конкретных ограничений. В качестве добавок могут быть использованы компоненты иные, чем каротиноидный краситель. Например, в основной компонент корма, такой как порошкообразное мясо рыбы или аналогичное, может быть добавлена добавка, такая как мука, осадок соевого масла, кукурузная глютеновая мука, витамины, минеральные вещества, рыбий жир или аналогичное. Нет конкретного ограничения по типу или количеству этих добавок, если только тип добавки используется в, как правило, используемом количестве. Каротиноидный краситель может быть добавлен с учетом термического деактивирования, которое происходит в процессе получения корма. В случае пеллет, отформованных экструзией, каротиноидный краситель может быть добавлен перед или после формования экструзией.
Нет конкретных ограничений по количеству астаксантина, фоеникоксантина, кантаксантина и адониксантина, добавляемых в корм по настоящему изобретению. Например, для выращивания лосося с умеренным красновато-оранжевым цветом мяса содержание астаксантина в корме регулируют предпочтительно до содержания, по меньшей мере, 20 мг/кг, более предпочтительно, по меньшей мере, 30 мг/кг, еще более предпочтительно, по меньшей мере, 40 кг/мг и предпочтительно максимально 100 мг/кг, более предпочтительно максимально 90 мг/кг и еще более предпочтительно максимально 80 мг/кг.
Для получения красновато-оранжевого цвета мяса содержание фоеникоксантина в корме регулируют предпочтительно до содержания, по меньшей мере, 5 мг/кг, более предпочтительно, по меньшей мере, 10 мг/кг, еще более предпочтительно, по меньшей мере, 15 кг/мг и предпочтительно максимально 80 мг/кг, более предпочтительно максимально 70 мг/кг и еще более предпочтительно максимально 60 мг/кг.
Содержание кантаксантина в корме регулируют предпочтительно до содержания, по меньшей мере, 0,5 мг/кг, более предпочтительно, по меньшей мере, 1,0 мг/кг, еще более предпочтительно, по меньшей мере, 1,5 кг/мг и предпочтительно максимально 25 мг/кг, более предпочтительно максимально 20 мг/кг и еще более предпочтительно максимально 15 мг/кг. Содержание адониксантина в корме регулируют предпочтительно до содержания, по меньшей мере, 0,2 мг/кг, более предпочтительно, по меньшей мере, 1,0 мг/кг, еще более предпочтительно, по меньшей мере, 2,0 кг/мг и предпочтительно максимально 40 мг/кг, более предпочтительно максимально 30 мг/кг и еще более предпочтительно максимально 20 мг/кг.
Нет конкретного ограничения по способу выращивания лосося по настоящему изобретению. Согласно способу, приведенному в качестве примера, выращиваемые мальки имеют массу от около 100 до 300 г при выпуске из пресной воды в садки для живой рыбы в море, получают корм один раз в день до насыщения до достижения рыбой размера, подходящего для продажи. Корм по настоящему изобретению предпочтительно используют в течение всего периода выращивания рыбы в морском садке, но он может быть использован часть периода с другим кормом, используемым в оставшийся период времени. Корм по настоящему изобретению также может быть использован для выращивания рыбы в пресной воде. Способ по настоящему изобретению также может быть использован для выращивания пресноводных форм лосося в пресной воде.
Цвет мяса выловленного лосося может быть оценен с использованием L*a*b* цветовой координатной системы для измерения цвета с использованием спектрометра. L* представляет собой свечение, a* представляет собой хроматичность красного и b* представляет собой хроматичность желтого. Более высокий показатель a*/b* указывает на то, что цвет более красноватый, чем оранжеватый, и более низкий показатель a*/b* указывает на то, что цвет более оранжеватый, чем красноватый. Цвет мяса выращенного лосося способом по настоящему изобретению имеет тенденцию к более низкому показателю a*/b* и, следовательно, имеет более натуральный красновато-оранжевый цвет по сравнению с лососем, выращенным на кормовом продукте с добавлением синтетического астаксантина.
Согласно другому не прямому способу количественной оценки цвета мяса лосося каротиноидный краситель экстрагируют из мяса рыбы и анализируют. Каротиноидный краситель имеет отличающийся цветовой тон в зависимости от соединений, включенных в него. Четыре соединения каротиноида, используемые в настоящем изобретении, распределяются как астаксантин, фоеникоксантин, кантаксантин и адониксантин от одного, который имеет самый высокий уровень хроматичности по красному, до другого, имеющего самый высокий уровень по хроматичности оранжевого. Цвет мяса рыбы может быть оценен при проведении анализа содержания каждого из этих соединений каротиноидного красителя в мясе.
Мясо лосося, выращенного способом по настоящему изобретению, предпочтительно содержит астаксантин и фоеникоксантин. Мясо лосося, выращенного способом по настоящему изобретению предпочтительно содержит каждый из или оба, как кантаксантин, так и адониксантин дополнительно к астаксантину и фоеникоксантину. Здесь фраза «мясо рыбы» относится к мясу рыбы, традиционно потребляемому в пищу человеком, и в объем понятия входят как мясо свежей рыбы, так и мясо консервированной рыбы. Примеры прошедшего обработку мяса рыбы включают рыбу, нарезанную ломтиками, сушеную рыбу, копченый лосось, соленый лосось, слабосоленый лосось, консервированную рыбу и тому подобное. Икра лосося, выращенного способом по настоящему изобретению, имеет умеренный красновато-оранжевый цвет и, следовательно, промышленно применима.
Отношение содержания фоеникоксантина к содержанию астаксантина в мясе рыбы или икре составляет предпочтительно, по меньшей мере, 5%, более предпочтительно, по меньшей мере, 10%, еще более предпочтительно, по меньшей мере, 15%, и предпочтительно максимально 80%, более предпочтительно максимально 70%, еще более предпочтительно максимально 60%. Отношение содержания кантоксантина к содержанию астаксантина в мясе рыбы или икре составляет предпочтительно, по меньшей мере, 0,5%, более предпочтительно, по меньшей мере, 1,0%, еще более предпочтительно, по меньшей мере, 1,5%, и предпочтительно максимально 20%, более предпочтительно максимально 15%, еще более предпочтительно максимально 10%. Отношение содержания адоникоксантина к содержанию астаксантина в мясе рыбы или икре составляет предпочтительно, по меньшей мере, 0,2%, более предпочтительно, по меньшей мере, 1,0%, еще более предпочтительно, по меньшей мере, 2,0%, и предпочтительно максимально 40%, более предпочтительно максимально 30%, еще более предпочтительно максимально 20%.
ПРИМЕРЫ
Далее настоящее изобретение будет описано более детально на примерах. Настоящее изобретение не ограничивается этими примерами.
В примерах количество каротиноидного красителя определяли с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Использовали две колонки Wakosil-II 5 SIL-100 φ4,6×250 мм (производимые Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), соединенные одна с другой. В качестве мобильной фазы использовали смешенный раствор n-гексан:тетрагидрофуран:метанол (40:20:1). Анализ проводили при постоянной комнатной температуре и скорости потока 1,0 мл/мин. Определение проводили при длине волны 470 нм. Корм или мясо рыбы измельчали и затем экстрагировали краситель с использованием смешенного раствора тетрагидрофуран:метанол (20:1). Краситель соответствующим образом разводили с мобильной фазой и анализировали с использованием ВЭЖХ.
Пример 1
100 мл среды с композицией, приведенной в Таблице 1, помещали в 500 мл пробирки с ватной пробкой и нагревали до температуры 121°C в течение 15 минут для стерилизации. Одну платиновую петлю штамма Paracoccus carotinifaciens E-396 (FERM BP-4283) инокулировали в среду и культивировали при встряхивании при температуре 28°C в течение 2 дней.
Все количество полученного культурального раствора помещали в 50 л танк для ферментации, содержащий 30 л среды с композицией, приведенной в Таблице 1, и затем культивировали при перемешивании при температуре 28°C в течение 1 дня при скорости перемешивания 200 оборотов в минуту. Затем 10 л полученного культурального раствора помещали в 600 л танк для ферментации, содержащий 300 л среды с композицией, приведенной в Таблице 2, и штамм культивировали при температуре 28°C при объеме воздуха 1,0 vvm в течение 120 часов, при этом скорость вращения при перемешивании автоматически контролируется для поддержания концентрации растворенного кислорода в пределах, как минимум, 2,5 части на миллион, также при этом показатель pH автоматически контролируется на уровне 7,1 или выше с использованием каустической соды. Сахарозу, которую штамм потребляет для роста, добавляют по 4,5 кг каждый первый и второй день культивирования. Концентрат получают непрерывной обработкой культурального раствора с использованием центрифуги и сушат в распылительной сушилке с получением ферментированного продукта, содержащего каротиноидный краситель. Ферментированный продукт смешивают с порошком из рыбы и тому подобным и затем гранулируют с получением пеллет и покрывают рыбьим жиром с получением корма для лосося. Для сравнения получают корм, содержащий коммерчески доступный синтетический астаксантин. В Таблице 3 приведена композиция каротиноидного красителя, установленная при анализе каждого корма с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).
300 кижучей, каждый весом около 200 г, выращивали, как экспериментальную группу, на корме с вышеуказанным ферментированным продуктом, и другие 300 кижучей, каждый весом 200 г, выращивали, как экспериментальную группу, на корме с вышеуказанным синтетическим продуктом. Лососей кормили до насыщения при содержании в морских садках в течение 6 месяцев. После 6 месяцев выращивания 10 рыб из каждой экспериментальной группы взвешивали. В Таблице 4 приведен средний показатель для 10 рыб из каждой экспериментальной группы. Рыбу сразу же умерщвляли, перерезая спинной мозг, и замораживали для сохранения. Затем оттаивали и измельчали мясо рыбы с использованием кофемолки и часть его помещали в полиэтиленовый пакет для измерения цветового тона с использованием спектрометра CM-508i (Minolta). В Таблице 4 приведен средний показатель для 10 рыб из каждой экспериментальной группы. Из части измельченного мяса рыбы экстрагировали каротиноидный краситель и анализировали на содержание каждого из каротиноидных соединений с использованием ВЭЖХ. В Таблице 5 приведен средний показатель для 10 рыб из каждой экспериментальной группы.
Мясо рыб из экспериментальной группы на корме с синтетическим продуктом имело не натуральный красный цвет, в то время как мясо рыб из экспериментальной группы на корме с ферментированным продуктом имело умеренный красновато-оранжевый цвет.
| Таблица 1 | |
| Композиция | Количество г/л |
| Кукурузный сироп | 10 |
| Сахароза | 50 |
| KH2PO4 | 1,5 |
| Na2HPO4･12H2O | 3,8 |
| MgSO4･7H2O | 0,5 |
| FeSO4･7H2O | 0,01 |
| CaCl2･2H2O | 0,01 |
| Na2CO3 | Количество, необходимое, чтобы pH среды составлял 7,1 |
| Таблица 2 | |
| Композиция | Количество г/л |
| Кукурузный сироп | 40 |
| Сахароза | 50 |
| KH2PO4 | 1,5 |
| Na2HPO4･12H2O | 3,8 |
| MgSO4･7H2O | 0,5 |
| FeSO4･7H2O | 0,2 |
| CaCl2･2H2O | 1,0 |
| Na2CO3 | Количество, необходимое, чтобы pH среды составлял 7,1 |
| Таблица 3 | ||
| Каротиноидное соединение | Содержание в корме (мг/кг) | |
| Корм с ферментированным продуктом | Корм с синтетическим продуктом | |
| Астаксантин | 43,2 | 44,3 |
| Фоеникоксантин | 9,8 | 0,1 или менее |
| Кантаксантин | 1,6 | 0,1 или менее |
| Адониксантин | 12,8 | 0,1 или менее |
| Астероиденон | 2,2 | 0,1 или менее |
| Я-каротин | 2,3 | 0,1 или менее |
| Эквиненон | 2,0 | 0,1 или менее |
| 3-гидроксиэквиненон | 1,9 | 0,1 или менее |
| Таблица 4 | ||
| Корм с ферментированным продуктом | Корм с синтетическим продуктом | |
| Масса рыбы (г) | 1,586 | 1,550 |
| Показатель на спектрометре | ||
| Показатель L* свечения | 56,7 | 55,6 |
| Показатель a* (хроматичность по красному) | 25,3 | 26,0 |
| Показатель b* (хроматичность по желтому) | 26,8 | 26,2 |
| a*/b* | 0,94 | 0,99 |
| Таблица 5 | |||
| Каротиноидное соединение | Экспериментальная группа на ферментированном продукте | Экспериментальная группа на синтетическом продукте | |
| Содержание в мясе рыбы (мг/кг) | Отношение к астаксантину (%) | Содержание в мясе рыбы (мг/кг) | |
| Астаксантин | 10,4 | 100 | 12,7 |
| Фоеникоксантин | 1,2 | 11,5 | 0,02 или менее |
| Кантаксантин | 0,1 | 1,0 | 0,02 или менее |
| Адониксантин | 2,4 | 23,1 | 0,02 или менее |
| Астероиденон | 0,2 | 1,9 | 0,02 или менее |
| Я-каротин | 0,02 или менее | 0,2 или менее | 0,02 или менее |
| эквиненон | 0,02 или менее | 0,2 или менее | 0,02 или менее |
| 3-гидроксиэквиненон | 0,02 или менее | 0,2 или менее | 0,02 или менее |
Пример 2
Штамм Paracoccus carotinifaciens E-396 (FERM BP-4283) мутировали с использованием N-метил-N'-нитро-N-нитрозогуанидина и выбирали колонию темно-красного цвета. Анализировали каротиноидный краситель в культуральном растворе штамма и выбирали мутантный штамм с улучшенной продуктивностью астаксантина. 100 мл среды с композицией, приведенной в Таблице 1, помещали в 500 мл пробирки с ватной пробкой и нагревали до температуры 121°C в течение 15 минут для стерилизации. Одну платиновую петлю штамма Paracoccus carotinifaciens E-396 (FERM BP-4283) инокулировали в среду и культивировали при встряхивании при температуре 28°C в течение 2 дней.
Все количество полученного культурального раствора помещали в 50 л танк для ферментации, содержащий 30 л среды с композицией, приведенной в Таблице 1, и затем культивировали при перемешивании при температуре 28°C в течение 1 дня при скорости перемешивания 200 оборотов в минуту. Затем 10 л полученного культурального раствора помещали в 600 л танк для ферментации, содержащий 300 л среды с композицией, приведенной в Таблице 2, и штамм культивировали при температуре 28°C при объеме воздуха 1,0 vvm в течение 120 часов, при этом скорость вращения при перемешивании автоматически контролируется для поддержания концентрации растворенного кислорода в пределах, как минимум, 2,5 части на миллион, также при этом показатель pH автоматически контролируется на уровне 7,1 или выше с использованием водного раствора аммония. Сахарозу, которую штамм потребляет для роста, добавляют по 4,5 кг каждый первый и второй день культивирования. Концентрат получают непрерывной обработкой культурального раствора с использованием центрифуги и сушат в распылительной сушилке с получением ферментированного продукта, содержащего каротиноидный краситель. Ферментированный продукт смешивают с порошком из рыбы и тому подобным и затем гранулируют с получением пеллет и покрывают рыбьим жиром с получением корма для форели. Для сравнения получают корм, содержащий коммерчески доступный синтетический астаксантин. В Таблице 6 приведена композиция каротиноидного красителя, установленная при анализе каждого корма с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).
50 радужных форелей (Oncorhynchus mykiss), каждая весом около 100 г, выращивали в емкости с водой, как экспериментальную группу, на корме с вышеуказанным ферментированным продуктом, и другие 50 радужных форелей, каждая весом 200 г, выращивали, как экспериментальную группу, на корме с вышеуказанным синтетическим продуктом. Форелей кормили до насыщения при содержании в пресной воде в течение 3 месяцев. После 3 месяцев выращивания 12 рыб из каждой экспериментальной группы взвешивали. В Таблице 7 приведен средний показатель для 12 рыб из каждой экспериментальной группы. Рыбу сразу же умерщвляли, перерезая спинной мозг, и замораживали для сохранения. В Таблице 7 приведен средний показатель цвета мяса для 12 рыб из каждой экспериментальной группы, измеренный с использованием спектрометра. После оттаивания мясо 12 рыб из каждой экспериментальной группы анализировали на содержание каждого из каротиноидных соединений. В Таблице 8 приведен средний показатель для 12 рыб из каждой экспериментальной группы.
Мясо рыб из экспериментальной группы на корме с синтетическим продуктом имело красновато-оранжевый цвет, близкий к красному цвету, в то время как мясо рыб из экспериментальной группы на корме с ферментированным продуктом имело умеренный натуральный красновато-оранжевый цвет.
| Таблица 6 | ||
| Каротиноидное соединение | Содержание в корме (мг/кг) | |
| Корм с ферментированным продуктом | Корм с синтетическим продуктом | |
| Астаксантин | 63,2 | 64,3 |
| Фоеникоксантин | 49,7 | 0,1 или менее |
| Кантаксантин | 15,6 | 0,1 или менее |
| Адониксантин | 2,1 | 0,1 или менее |
| Астероиденон | 1,3 | 0,1 или менее |
| Я-каротин | 7,1 | 0,1 или менее |
| Эквиненон | 6,0 | 0,1 или менее |
| 3-гидроксиэквиненон | 1,9 | 0,1 или менее |
| Таблица 7 | ||
| Корм с ферментированным продуктом | Корм с синтетическим продуктом | |
| Масса рыбы (г) | 205 | 204 |
| Показатель на спектрометре | ||
| Показатель L* свечения | 41,6 | 41,8 |
| Показатель a* (хроматичность по красному) | 8,6 | 9,1 |
| Показатель b* (хроматичность по желтому) | 14,9 | 13,8 |
| a*/b* | 0,58 | 0,66 |
| Таблица 8 | |||
| Каротиноидное соединение | Экспериментальная группа на ферментированном продукте | Экспериментальная группа на синте-тическом продукте | |
| Содержание в мясе рыбы (мг/кг) | отношение к астаксантину (%) | Содержание в мясе рыбы (мг/кг) | |
| Астаксантин | 3,4 | 100 | 6,3 |
| Фоеникоксантин | 2,3 | 67,6 | 0,02 или менее |
| Кантаксантин | 0,4 | 11,8 | 0,02 или менее |
| Адониксантин | 0,1 | 2,9 | 0,02 или менее |
| Астероиденон | 0,1 | 2,9 | 0,02 или менее |
| Я-каротин | 0,02 или менее | 0,6 или менее | 0,02 или менее |
| Эквиненон | 0,02 или менее | 0,6 или менее | 0,02 или менее |
| 3-гидроксиэквиненон | 0,02 или менее | 0,6 или менее | 0,02 или менее |
Пример 3
Ферментированный продукт, содержащий каротиноидный краситель, полученный по существу по Примеру 2. Ферментированный продукт смешивают с порошком из рыбы и тому подобным и затем гранулируют с получением пеллет и покрывают рыбьим жиром с получением корма для лосося. Для сравнения получают корм, содержащий коммерчески доступный синтетический астаксантин. В Таблице 9 приведена композиция каротиноидного красителя, установленная при анализе каждого корма с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).
400 семг, каждая весом около 300 г, выращивали, как экспериментальную группу, на корме с вышеуказанным ферментированным продуктом, и другие 400 семг, каждая весом 300 г, выращивали, как экспериментальную группу, на корме с вышеуказанным синтетическим продуктом. Семгу кормили до насыщения при содержании в морских садках в течение 12 месяцев. После 12 месяцев выращивания 20 рыб из каждой экспериментальной группы взвешивали. В Таблице 10 приведен средний показатель для 20 рыб из каждой экспериментальной группы. Рыбу сразу же умерщвляли, перерезая спинной мозг, и измеряли цветовой тон мяса рыбы с использованием спектрометра. В Таблице 10 приведен средний показатель для 20 рыб из каждой экспериментальной группы. После измерения мясо рыбы замораживали для сохранения в течение 1 месяца. После оттаивания мясо 20 рыб из каждой экспериментальной группы анализировали на содержание каждого из каротиноидных соединений. В Таблице 11 приведен средний показатель для 20 рыб из каждой экспериментальной группы.
Мясо рыб из экспериментальной группы на корме с синтетическим продуктом имело красновато-оранжевый цвет, близкий к красному цвету, в то время как мясо рыб из экспериментальной группы на корме с ферментированным продуктом имело умеренный натуральный красновато-оранжевый цвет.
| Таблица 9 | ||
| Каротиноидное соединение | Содержание в корме (мг/кг) | |
| Корм с ферментированным продуктом | Корм с синтетическим продуктом | |
| Астаксантин | 79,8 | 81,6 |
| Фоеникоксантин | 47,3 | 0,1 или менее |
| Кантаксантин | 19,9 | 0,1 или менее |
| Адониксантин | 4,1 | 0,1 или менее |
| Астероиденон | 1,9 | 0,1 или менее |
| Я-каротин | 7,3 | 0,1 или менее |
| Эквиненон | 6,4 | 0,1 или менее |
| 3-гидроксиэквиненон | 2,3 | 0,1 или менее |
| Таблица 10 | ||
| Корм с ферментированным продуктом | Корм с синтетическим продуктом | |
| Масса рыбы (г) | 5,112 | 5,097 |
| Показатель на спектрометре | ||
| Показатель L* свечения | 50,1 | 50,0 |
| Показатель a* (хроматичность по красному) | 25,7 | 26,2 |
| Показатель b* (хроматичность по желтому) | 28,9 | 27,9 |
| a*/b* | 0,89 | 0,94 |
| Таблица 11 | ||
| Каротиноидное соединение | Экспериментальная группа на ферментированном продукте | Экспериментальная группа на синтетическом продукте |
| Содержание в мясе рыбы (мг/кг) | отношение к астаксантину (%) | Со |