Способ диагностики увеита при ревматоидном артрите и болезни бехтерева

Способ диагностики увеита при ревматоидном артрите и болезни бехтерева

Реферат

Настоящее изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано в медицинской практике для диагностики увеита ревматической этиологии.

Известны различные формы увеитов при ревматических заболеваниях (синдроме Рейтера, анкилозирующем спондилоартрите - болезни Бехтерева, ревматоидном артрите и других). Проведение диагностических мероприятий этих увеитов носит достаточно сложный характер. Постановка диагноза занимает длительный период и включает такие мероприятия, как сбор жалоб, анамнеза, проведение различных лабораторных исследований и консультацию ревматолога, в то время как больному необходима своевременная помощь. К тому же нередко ревматические заболевания впервые (иногда за несколько лет) проявляются поражениями глаз, однако объективные признаки для постановки диагноза ревматологом отсутствуют.

Существует способ диагностики увеита ревматоидной этиологии путем определения аутоантител к нативной ДНК (нДНК) и к IgG (РФ) (Катаргина Л.А. и соавторы «Клинические вариации и иммунологические особенности ревматоидных увеитов у детей разного возраста», Вестник офтальмологии, 2001, №1, с.30-33). Способ заключается в том, что исследуют состояние межорганного иммунитета у детей с ревматоидным увеитом, включающий определение РФ, антинуклеарных антител, в том числе антител к нативной и денатурированной ДНК, в сыворотке крови и слезной жидкости. Недостатком данного метода следует считать низкую частоту диагностики ревматических увеитов: частота обнаружения аутоантител к нДНК составила 21,2%, а к IgG - 9%. А выявленные в 60% случаев общие антинуклеарные аутоантитела наблюдаются при многих ревматических заболеваниях, что не позволяет диагностировать нозологические формы ревматических увеитов.

При постановке диагноза ревматического увеита (Азнабаев М.Т., Мамбеткулова Г.К., 2001; Дроздова Е.А., 2006) диагностическое значение имеет повышение содержания циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК). В то же время авторами не связывается величина их уровня с тем или иным видом ревматического увеита.

Трудности в диагностике увеитов при ревматических заболеваниях связаны с возможностью выявления не только различных видов аутоантител, но и с обнаружением одних и тех же аутоантител при различных заболеваниях (Потехин О.Е., Малышев B.C., 2005).

Прототипом изобретения является способ диагностики ревматических увеитов, заключающийся в том, что в острый период болезни в сыворотке крови больного увеитом определяют аутоантитела к IgG и к нативной ДНК, а также уровень циркулирующих иммунных комплексов. При обнаружении аутоантител к IgG на фоне отсутствия аутоантител к нативной ДНК или при обнаружении аутоантител к IgG на фоне уровня циркулирующих иммунных комплексов от 190 до 335 усл.ед. диагностируют ревматоидный увеит. При выявлении аутоантител к нативной ДНК на фоне отсутствия аутоантител к IgG или выявлении аутоантител к нативной ДНК на фоне уровня циркулирующих иммунных комплексов от 65 до 189 усл.ед. - увеит при болезни Бехтерева (патент RU 2314534, 2008 г.).

Задачей изобретения является расширение арсенала средств диагностики ревматических увеитов.

Техническим результатом изобретения является повышение частоты диагностики ревматических увеитов.

Технический результат достигается тем, что в способе диагностики увеита при ревматоидном артрите и болезни Бехтерева, включающем определение иммунологического показателя в сыворотке крови в острый период заболевания, согласно изобретению в качестве иммунологического показателя определяют уровень простагландина Е₂ и дополнительно его определяют в слезной жидкости, после чего определяют показатель соотношения уровней как отношение уровня простагландина E₂ в сыворотке крови к уровню простагландина Е₂ в слезной жидкости и при его значении в пределах 0,54-2,95 диагностируют увеит ревматоидной этиологии, а в пределах 8,3-26,0 - увеит при болезни Бехтерева.

В группе контроля (практически здоровых лиц) значение изучаемого показателя для сыворотки крови, по нашим данным, составляет 340,0±47,4 пг/мл, для слезной жидкости - 175,8±21,7 пг/мл.

Преимуществом предлагаемого способа диагностики ревматических увеитов является высокая эффективность предлагаемого метода: у 3 из 4 больных (75%) по показателю соотношения уровня ПГЕ₂ в интервале 0,54-2,95 диагностируют увеит ревматоидной этиологии, а у 4 из 4 больных (100%) при показателе соотношения уровня ПГЕ₂ 8,3-26,0 пг/мл - увеит при болезни Бехтерева, то есть в целом диагноз был правилен в 87,5% случаев.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. В острый период болезни взятие крови у всех пациентов осуществляют натощак из локтевой вены в строго стерильных условиях, слезную жидкость пациентов собирают с помощью микрокапилляра из конъюнктивальной полости, не касаясь роговой и слизистой оболочек глазного яблока. Определение содержания простагландина Е₂ в сыворотке крови и слезной жидкости больных увеитом проводят с помощью твердофазного иммуноферментного анализа с использованием тест-системы «PGE₂» (фирма R & D Systems, США). В лунки микропланшета вносят по 100 мкл стандартов ПГЕ₂ в разведении (концентрация 39-2500 пг/мл). В остальные лунки микропланшета вносят по 100 мкл исследуемых образцов сыворотки крови и слезной жидкости, затем в эти лунки добавляют по 50 мкл первых антител к ПГЕ₂ и по 50 мкл конъюгата. Планшет инкубируют 2 часа при комнатной температуре на шейкере (500±50 об/мин), затем жидкость из лунок удаляют, и планшет 5 раз промывают буфером. Проводят полную аспирацию оставшейся жидкости.

В каждую лунку вносят по 200 мкл раствора субстрата. Планшет инкубируют в течение 30 мин при комнатной температуре. Во все лунки планшета вносят по 50 мкл стоп-раствора.

Учет концентрации осуществляют с помощью анализатора «Multisсаn» при длине волны 450 нм через 30 минут после внесения стоп-раствора. Количественное содержание ПГЕ₂ выражают в пг/мл. Общее время постановки исследования 3 часа.

Нами проведено исследование сыворотки крови и слезной жидкости в разгар заболевания: определены уровни ПГЕ₂ у 8 больных увеитом ревматической этиологии, у 3 из которых в анамнезе имелся ревматоидный артрит, у 3 - болезнь Бехтерева. У 2 пациентов был увеит, предположительно ревматической этиологии.

В острый период болезни взятие крови у всех пациентов осуществляли натощак из локтевой вены в строго стерильных условиях, слезную жидкость пациентов собирали с помощью микрокапилляра из конъюнктивальной полости, не касаясь роговой и слизистой оболочек глазного яблока. Определение содержания простагландина Е₂ в слезной жидкости больных увеитом проводили с помощью твердофазного иммуноферментного анализа с использованием тест-системы «PGE₂» (фирма R&D Systems, США).

В лунки микропланшета вносили по 100 мкл стандартов ПГЕ₂ в разведении (концентрация 39-2500 пг/мл). В остальные лунки микропланшета вносили по 100 мкл исследуемых образцов сыворотки крови и слезной жидкости, затем в эти лунки добавляли по 50 мкл первых антител к ПГЕ₂ и по 50 мкл конъюгата. Планшет инкубировали 2 часа при комнатной температуре на шейкере (500±50 об/мин), затем жидкость из лунок удаляли, и планшет 5 раз промывали буфером. Проводили полную аспирацию оставшейся жидкости.

В каждую лунку вносили по 200 мкл раствора субстрата. Планшет инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре. Во все лунки планшета вносили по 50 мкл стоп-раствора.

Учет концентрации осуществляли с помощью анализатора «Multisсаn» при длине волны 450 нм через 30 минут после того, как внесли стоп-раствор. Количественное содержание ПГЕ₂ выражали в пг/мл. Общее время постановки исследования 3-3,5 часа.

Предлагаемый способ иллюстрируется следующими клиническими примерами.

Пример 1. Больная Д., 47 лет (и/б 875, 2008 г.), поступила в клинику с диагнозом рецидив вялотекущего увеита, предположительно ревматоидной этиологии. Из анамнеза: периодические боли в суставах. В сыворотке крови, взятой на 10-й день рецидива заболевания, обнаружен уровень ПГЕ₂, равный 2676,200 пг/мл, а в слезной жидкости 911,810 пг/мл. Показатель соотношения составил 2,935. Было высказано предположение о ревматоидной этиологии этого заболевания. Позже ревматологом был выставлен диагноз - ревматоидный артрит. Следовательно, полученные данные о содержании ПГЕ₂ подтвердили ревматоидную этиологию увеита.

Пример 2. Больная И., 69 лет (и/б 501, 2008 г.), находилась на стационарном лечении в Уфимском НИИ глазных болезней по поводу увеита ревматоидной этиологии правого глаза. Из анамнеза: ревматоидный артрит. При проведении исследования сыворотки крови на 8-й день заболевания выявлен уровень ПГЕ₂ 3028,500 пг/мл, а в слезной жидкости 1084,800 пг/мл. Показатель соотношения составил 2,792. Таким образом, предложенный нами способ диагностики ревматического увеита подтвердил правильность поставленного диагноза.

Пример 3. Больной Г., 44 года (и/б 995, 2008 г.), поступил на стационарное лечение в отделение по изучению инфекционных заболеваний глаз Уфимского НИИ глазных болезней с диагнозом увеит левого глаза при болезни Бехтерева. Из анамнеза: болезнь Бехтерева в течение 3-х лет. Согласно предложенному способу на 5-й день болезни проведено исследование сыворотки крови и слезной жидкости. Уровень ПГЕ₂ в сыворотке крови составил 1327,700 пг/мл, а в слезной жидкости - 158,520 пг/мл. Показатель соотношения в этом случае составил 8,375. Таким образом, предложенный нами способ диагностики ревматического увеита подтвердил правильность поставленного диагноза.

Пример 4. Больной Ф., 47 года (и/б 5994, 2007 г.), поступил в отделение по изучению инфекционных заболеваний глаз Уфимского НИИ глазных болезней с диагнозом: острый увеит правого глаза при болезни Бехтерева. Из анамнеза: болезнь Бехтерева в течение 10 лет. Проведено определение содержания ПГЕ₂ в сыворотке крови и слезной жидкости по предлагаемому способу. В разгар заболевания на 14-й день болезни концентрация ПГЕ₂ в сыворотке крови составила 1339,360 пг/мл, а в слезной жидкости 161,320 пг/мл. Показатель соотношения в этом случае составил 8,302. Таким образом, предложенный нами способ диагностики ревматического увеита подтвердил правильность поставленного диагноза.

Таким образом, предлагаемый нами способ делает достоверной диагностику ревматических увеитов, а именно при ревматоидном увеите у 3 больных из 4, а в случае увеита при болезни Бехтерева - у 4 из 4, то есть в целом диагноз правилен у 7 из 8 пациентов (87,5%). Использование данного способа диагностики ревматических увеитов повышает ее частоту и устанавливает нозологическую форму увеита при ревматоидном артрите и при болезни Бехтерева.

Способ диагностики увеита при ревматоидном артрите и болезни Бехтерева, включающий определение иммунологического показателя в сыворотке крови в острый период заболевания, отличающийся тем, что в качестве иммунологического показателя определяют уровень простагландина E₂ и дополнительно его определяют в слезной жидкости, после чего определяют показатель соотношения уровней как отношение уровня простангландина Е₂ в сыворотке крови к уровню простангландина Е₂ в слезной жидкости и при его значении в пределах 0,54-2,95 диагностируют увеит ревматоидной этиологии, а в пределах 8,3-26,0 - увеит при болезни Бехтерева.