Комбинированные вакцины с антигеном коклюша цельных клеток

Комбинированные вакцины с антигеном коклюша цельных клеток

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Все цитируемые документы включены в полном объеме в виде ссылки.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Данное изобретение относится к области комбинированных вакцин, которые представляют собой вакцины, содержащие смесь иммуногенов из более чем одного патогена, так что введение вакцины может одновременно иммунизировать человека против более чем одного патогена.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Комбинированные вакцины предоставляют пациентам преимущество получения меньшего числа инъекций, которое приводит к клиническому эффекту большего соответствия требованиям (например, см. главу 29 ссылки 1).

Шесть патогенов, представляющих особый интерес, особенно у детей, Corynebacterium diphtheriae (возбудитель дифтерии), Clostridium tetani (возбудитель столбняка/тризма), Bordetella pertussis (коклюш), вирус гепатита В (“гепатит В”, вирусный гепатит), Haemophilus influenzae тип b ('Hib', возбудитель бактериального менингита и пневмонии) и Neisseria meningitidis (менингококковый менингит и сепсис).

Известны вакцины против каждого из указанных патогенов, а также GlaxoSmithKline представляет на рынке пентавалентную вакцину под названием TRITANRIX-HepB/Hib, включающую в себя все пять компонентов 'D', 'T', 'P', 'HepB' и 'Hib' для одновременного комбинированного введения. Компонент 'P' в данной пентавалентной вакцине основан на антигене коклюша цельных клеток ('Pw'). Компоненты данной вакцины DTP и HepB находятся в комбинированном растворе в пузырьке (и данная тетравалентная DTPw-HepB комбинация продается отдельно как продукт TRITANRIX-HepB), но Hib-компонент является лиофилизированным и содержится в отдельном флаконе. Раствор DTPw-HepB используют для восстановления Hib-компонента во время применения, формируя пентавалентную вакцину в пузырьке для немедленного приема.

TRITANRIX-HepB/Hib не предохраняет против менингококковой инфекции.

Пример 3 ссылки 2 раскрывает результаты клинических испытаний на пациентах, в которых тетравалентный продукт TRITANRIX-HepB смешивали экстемпорально с конъюгированными капсулярными сахаридами из Hib и из серогрупп А и С менингококков ('MenA' и 'MenC'). Авторы сообщают, что данная гептавалентная смесь вызывает хороший иммунный ответ против каждого антигена и хорошо переносится детьми. Полное описание компонентов Hib, MenA и MenC не представлено. Сходная информация дана в ссылках 3 и 4.

Целью изобретения является предоставить другую и улучшенную комбинацию вакцин для защиты против всех шести инфекций: Corynebacterium diphtheriae, Clostridium tetani, Bordetella pertussis, вирус hepatitis B, Haemophilus influenzae типа b и Neisseria meningitidis.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение основано на исследованиях вакцины, которая включает в себя антигены D-T-Pw-HepB-Hib (как в продукте TRITANRIX-HepB/Hib), а также включает в себя один или более менингококковых конъюгированных антигенов. Исследовано некоторое количество усовершенствований и вариантов данных вакцин, которые и являются предметом обсуждения в данном изобретении.

Вакцины согласно изобретению включают в себя

(i) дифтерийный анатоксин 'D';

(ii) анатоксин столбняка 'T';

(iii) клеточный антиген коклюша 'wP';

(iv) поверхностный антиген вируса гепатита В 'HBsAg';

(v) капсулярный сахарид Haemophilus influenzae типа b, конъюгированный с белком-носителем;

(vi) по меньшей мере один капсулярный сахарид Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем.

Менингококковый сахарид(ы) может быть одного или более серотипов А, С, W135 и Y. Согласно общепринятой номенклатуре, данные четыре серогруппы обозначаются как 'MenA', 'MenC', 'MenW135' и 'MenY'. Конъюгированные антигены обозначаются в данном документе в общем виде как 'MenA-X' и т.д., где 'X' представляет собой белок-носитель конъюгата. Конъюгаты со специфическими белками-носителями обозначаются как 'MenA-CRM' или 'MenC-D' и т.д.

Предпочтительные вакцины содержат менингококковые конъюгаты по меньшей мере серогруппы С и предпочтительно обеих серогрупп А и С. Таким образом, предпочтительные вакцины являются гептавалентными (D-T-Pw-HBsAg-Hib-MenC) или пентавалентными (D-T-Pw-HBsAg-Hib-MenA-MenC).

В дополнение к антигенам (i)-(vi), перечисленным выше, могут быть представлены другие антигены, например, для получения 8-валентной, 9-валентной, 10-валентной вакцины и т.д.

Вакцины согласно изобретению могут быть приготовлены в жидком формате (где все антигены находятся в водном растворе или суспензии) при производстве, или они могут быть приготовлены по мере необходимости во время использования путем смешивания двух компонентов: (а) первого компонента, включающего в себя антигены D, T, wP и HBsAg; и (b) второго компонента, включающего в себя Hib и менингококковые конъюгаты. Указанные два компонента находятся предпочтительно в разных контейнерах (например, пузырьках или шприцах), и изобретение обеспечивает набор, включающий в себя компоненты (a) и (b). Содержимое первого контейнера предпочтительно является растворенным в воде, и содержимое второго контейнера предпочтительно является лиофилизированным, так что вакцины согласно изобретению могут быть приготовлены путем восстановления лиофилизированного компонента водным компонентом D-T-wP-HBsAg.

(1) Весовое соотношение Hib-конъюгата

Hib-конъюгаты хорошо известны, однако они представлены в разных формах. Например, в таблице 14-7 ссылки 1 даны характеристики 4 различных Hib-конъюгатов. В данной таблице показано, что соотношение веса сахарид:носитель варьируется от 1,4:1 в 'PRP-D' (избыточный сахарид) до 0,06:1 в 'PRP-OMP' (избыточный белок). Все указанные конъюгаты используют в комбинированных вакцинах, но один из аспектов изобретения связан с выбором специфического диапазона весового соотношения для применения в комбинированных вакцинах, которые включают в себя менингококковые конъюгаты.

Показано, что весовое отношение белка-носителя к сахариду в Hib-конъюгатах играет важную роль в эффективности комбинированных вакцин. Согласно ссылке 5, в комбинированных вакцинах, где белок-носитель выступает также и в качестве антигена (например, где анатоксин столбняка используют и как носитель, и как антиген, как в настоящем изобретении), Hib-конъюгат должен иметь весовое отношение сахарид:носитель от 1:0,3 до 1:2.

И напротив, согласно настоящему изобретению весовое отношение сахарида к носителю должно быть выше данного диапазона и должно находиться в диапазоне между 1:2 и 1:4. Hib-конъюгаты в данном диапазоне проявляют отличную иммуногенность, когда они объединены с менингококковыми конъюгатами в комбинированных педиатрических вакцинах, и не отличаются никаким иммунным взаимодействием, даже если белок-носитель является свободным антигеном (например, белок-носитель представляет собой анатоксин столбняка или анатоксин дифтерии). Несомненно, экстра-белок-носитель может способствовать иммунности, например, против столбняка или дифтерии.

Таким образом, настоящее изобретение предоставляет комбинированную вакцину, включающую в себя (i) анатоксин дифтерии, (ii) анатоксин столбняка, (iii) клеточный антиген коклюша, (iv) поверхностный антиген вирусного гепатина В, (v) капсулярный сахарид Haemophilus influenzae типа b, конъюгированный с белком-носителем, (vi) по меньшей мере один капсулярный сахарид Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, характеризующийся тем, что конъюгат H. influenzae имеет весовой избыток носителя по отношению к сахариду, где весовое соотношение носителя к сахариду составляет от 2:1 до 4:1.

Изобретение также связано со способом получения комбинированной вакцины, которая включает в себя (i) анатоксин дифтерии ('D'), (ii) анатоксин столбняка ('T'), (iii) клеточный антиген коклюша ('Pw'), (iv) поверхностный антиген вируса гепатита В ('HBsAg'), (v) капсулярный сахарид Haemophilus influenzae типа b, конъюгированный с белком-носителем, (vi) по меньшей мере один капсулярный сахарид Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, характеризующийся тем, что способ включает в себя стадии (а) совмещения трехвалентного D-T-Pw-компонента с моновалентным HВsAg-компонентом, с получением тетравалентного компонента D-T-Pw-HBsAg; (b) совмещение конъюгатов H. influenzae и N. meningitidis, с получением компонента смешанного конъюгата, где конъюгат H. influenzae имеет избыток веса носителя по отношению к сахариду с весовым отношением носителя к сахариду между 2:1 и 4:1; и (с) смешивание компонента D-T-Pw-HBsAg с компонентом конъюгатов, с получением комбинированной вакцины.

Hib-конъюгат имеет избыток по весу белка-носителя. Весовое соотношение составляет от 2:1 до 4:1 и предпочтительно составляет от 2,5:1 до 3,5:1. Можно использовать весовое соотношение от 2,8:1 до 3,2:1, а предпочтительным является соотношение 3:1. Следовательно, в обычной дозе 10 мкг (измеренной по сахариду) композиция согласно изобретению будет включать в себя 20-40 мкг, предпочтительно 30 мкг носителя. Данное соотношение является прямо противоположным таковому, указанному в ссылке 5.

Белок-носитель для Hib-конъюгата предпочтительно представляет собой анатоксин столбняка, и, следовательно, для 10 мкг Hib-сахарида композиция может включать в себя 20-40 мкг анатоксина столбняка из Hib-конъюгата плюс другой анатоксин столбняка в качестве 'T'-антигена для защиты против инфекции C. tetani.

В предпочтительных композициях и способах используют менингококковые конъюгаты серогруппы С. В более предпочтительных композициях и способах используют отдельные менингококковые конъюгаты обеих серогрупп А и С. Их предпочтительно конъюгируют с белком D - носителем H. influenzae, однако они также могут быть конъюгированы с носителем-анатоксином столбняка, носителем-анатоксином дифтерии или носителем CRM197.

(2) Связь носитель/сахарид в Hib-конъюгате

Как показано в таблице 14-7 ссылки 1, несколько разных по химическому составу связей используют для создания Hib-конъюгатов. Конъюгаты создают путем активации сахарида, активации носителя и активации обоих компонентов - и сахарида, и носителя. Для активации сахарида используют периодат и цианоборогидрат в продукте 'HbOC', и ADH, CNB и карбодиимид HCl в продукте 'PRP-T'. В комбинированных вакцинах используют все указанные конъюгаты, но согласно одному из аспектов настоящего изобретения выбирают специфический тип связи для использования в комбинированных вакцинах, которые включают в себя менингококковые конъюгаты.

Согласно настоящему изобретению, полисахарид может быть активирован бромистым цианом, затем соединен со связывающим агентом - адипиновой кислотой, и затем данная субстанция линкер-сахарид реагирует с белком-носителем, в частности с белком-носителем анатоксином столбняка.

Первая стадия включает в себя цианилирование свободной -OH-группы на Hib-сахариде, и она показана следующим образом:

Данную реакцию проводят бромистым цианом (CNBr). Вкратце, CNBr реагирует с сахаридом в кислых условиях (обычно рН 10-12). При данном высоком рН образуются эфиры циановой кислоты с гидроксильными группами сахаридов. Высокое значение рН ионизирует гидроксильную группу, что делает возможной нуклеофильную атаку гидроксильного иона на ион цианата. Из-за высокого рН могут происходить различные побочные реакции, но только образование эфира циановой кислоты является предметом обсуждения в данном изобретении.

Эфир циановой кислоты реагирует с бифункциональным реагентом (гетеробифункциональным или предпочтительно с гомобифункциональным) с целью обеспечения спейсера для связывания носителя. Согласно изобретению может быть использован адипин-гидразидный спейсер. Для этого удобно использовать дигидразид адипиновой кислоты (AADH)

Механизм реакции AADH с эфиром циановой кислоты (с образованием имидокарбаминовой связи) может быть проиллюстрирован следующим образом:

Активированный сахарид затем реагирует с носителем - анатоксином столбняка - в присутствии EDAC (1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид)

EDAC обычно используют в виде соли его гидрохлорида:

(CH₃)₂N(CH₂)₃-N=C=N-CH₂CH₃· HCl.

EDAC позволяет карбоксильной группе адипиновой кислоты на свободном конце линкера реагировать с белком-носителем (обычно со свободными -SH, -NH₂ или -OH на аминокислотной боковой цепи) с образованием конъюгата, что можно проиллюстрировать следующим образом, где -X- представляет собой -S-, -O- или -NH-, в зависимости от носителя.

В водных условиях C=NH может превращаться в C=O, давая карбамат:

Таким образом, изобретение предоставляет комбинированную вакцину, включающую в себя (i) дифтерийный анатоксин, (ii) анатоксин столбняка, (iii) клеточный антиген коклюша, (iv) поверхностный антиген вируса гепатита В, (v) капсулярный сахарид Haemophilus influenzae типа b, конъюгированный с белком-носителем, и (vi) по меньшей мере один капсулярный сахарид Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, характеризующийся тем, что конъюгат H. influenzae получен способом, включающим в себя стадии (а) активации капсулярного сахарида Haemophilus influenzae типа b бромистым цианом, с получением эфира циановой кислоты; (b) добавления адипин-гидразидного спейсера к эфиру циановой кислоты, с получением активированного сахарида; и (c) соединения активированного сахарида с белком-носителем путем карбодиимидной конденсации.

Изобретение также предоставляет комбинированную вакцину, включающую в себя (i) дифтерийный анатоксин, (ii) анатоксин столбняка, (iii) клеточный антиген коклюша, (iv) поверхностный антиген вируса гепатита В, (v) капсулярный сахарид Haemophilus influenzae типа b, конъюгированный с белком-носителем, и (vi) по меньшей мере один капсулярный сахарид Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, характеризующийся тем, что конъюгат H.influenzae (v) включает в себя сшивающий агент, имеющий одну из следующих двух структур:

где -Х- выбран из группы, состоящей из -О-, -S- или -NH-. Карбамат является предпочтительным. Белок-носитель для Hib-конъюгата представляет собой предпочтительно анатоксин столбняка.

В предпочтительных композициях и способах используют менингококковый конъюгат серогруппы С, а в более предпочтительных композициях и способах используют раздельные менингококковые конъюгаты обеих серогрупп А и С. Их предпочтительно конъюгируют с белком-носителем D H.influenzae.

Смесь конъюгатов Hib, MenА и MenC используют или для смешивания с другими вакцинами или как собственно вакцину. Таким образом, изобретение также предоставляет смесь конъюгатов, включающую в себя (i) капсулярный сахарид Haemophilus influenzae типа b, конъюгированный с белком-носителем, и (ii) капсулярный сахарид серогруппы А Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, и (iii) капсулярный сахарид серогруппы С Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, характеризующийся тем, что конъюгат H. influenzae получают способом, включающим в себя стадии (а) активации капсулярного сахарида Haemophilus influenzae типа b бромистым цианом, с получением эфира циановой кислоты; (b) добавления адипин-гидразидного спейсера к эфиру циановой кислоты, с получением активированного сахарида; и (c) соединения активированного сахарида с белком-носителем путем карбодиимидной конденсации.

Изобретение также предоставляет смесь конъюгатов, включающую в себя (i) капсулярный сахарид Haemophilus influenzae типа b, конъюгированный с белком-носителем, и (ii) капсулярный сахарид серогруппы А Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, и (iii) капсулярный сахарид серогруппы С Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, характеризующийся тем, что конъюгат H. influenzae (i) включает в себя связывающий агент, имеющий одну из следующих двух структур:

где -Х- выбран из группы, состоящей из -О-, -S-, или -NH-. Карбамат является предпочтительным.

(3) Прямое связывание носитель-сахарид в менингококковых конъюгатах

Hib-конъюгат, описанный выше, связывается с белком-носителем посредством спейсера. В отличие от этого, в менингококковых конъюгатах предпочтительно использовать прямое связывание. Установлено, что прямое связывание подходит, в частности, для менингококковых конъюгатов, особенно если в качестве носителя используют белок D и если в Hib-конъюгате не применяли прямое связывание (чтобы избежать связывающих агентов из-за превышения пороговых значений, при которых они могут стать иммуногенными).

В ситуации прямого связывания -ОН-группа в менингококковом сахариде цианилируется первой (например, как описано выше), с получением эфира циановой кислоты. Группа -OCN затем используется для прямого связывания с боковой цепью носителя, такой как свободная -NH₂-группа, свободная -SH-группа или свободная -OH-группа. Связывание со свободной -NH₂-группой в боковой цепи лизина является предпочтительным.

Механизм прямого связывания можно проиллюстрировать следующим образом:

и конъюгированный продукт данной реакции можно изобразить следующим образом:

В водных условиях C=NH может превращаться в C=O, давая карбамат:

Вместо использования бромистого циана в качестве цианилирующего агента реакцию цианилирования предпочтительно проводить, используя органический цианилирующий реагент, такой как реагент 1-циано-4-(диметиламино)пиридиний ('CDAP'). Органический цианилирующий реагент может быть выбран из группы, состоящей из 1-циано-4-(диметиламино)пиридиния тетрафторбората, р-нитрофенилцианата ('pNPC'), N-цианотриэтиламмоний тетрафторбората ('CTEA'). Использование данных реагентов подразумевает, что реакция активации может быть проведена при нейтральном рН, который помогает сохранять стабильность и целостность полисахарида. В частности, это может помочь сохранить OAc группы (см. ниже). В предпочтительных способах цианилирующий реагент используют при рН 6-8 в ненуклефильном буфере, например в физиологическом растворе, HEPES, фосфатном буфере, воде и некоторых органических растворителях [6]. CDAP можно растворить в ацетонитриле и добавить к водному раствору сахарида. После конъюгации реакция может быть подавлена добавлением глицина, который блокирует все непрореагировавшие циановые группы.

Сосредотачиваясь на конъюгате менингококка серогруппы А, изобретение предоставляет комбинированную вакцину, включающую в себя (i) дифтерийный анатоксин, (ii) анатоксин столбняка, (iii) клеточный антиген коклюша, (iv) поверхностный антиген вируса гепатита В, (v) капсулярный сахарид Haemophilus influenzae типа b, конъюгированный с белком-носителем, и (vi) капсулярный сахарид серогруппы А Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, характеризующийся тем, что конъюгат серогруппы А получают способом, включающим в себя стадии (а) цианилирование капсулярного сахарида серогруппы А, с получением эфира циановой кислоты; и (b) присоединение эфира циановой кислоты прямо к белку-носителю. Вакцина может также включать в себя (vii) капсулярный сахарид серогруппы С Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем.

Изобретение также предоставляет способ приготовления смеси конъюгатов, включающей в себя (i) капсулярный сахарид Haemophilus influenzae типа b, конъюгированный с белком-носителем, (ii) капсулярный сахарид серогруппы А Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, и (iii) капсулярный сахарид серогруппы С Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, характеризующийся тем, что конъюгат серогруппы А получают способом, включающим в себя стадии (а) цианилирование капсулярного сахарида серогруппы А, с получением эфира циановой кислоты; (b) присоединение эфира циановой кислоты прямо к белку-носителю.

Обращаясь к конъюгату менингококка серогруппы С, изобретение предоставляет комбинированную вакцину, включающую в себя (i) дифтерийный анатоксин, (ii) анатоксин столбняка, (iii) клеточный антиген коклюша, (iv) поверхностный антиген вируса гепатита В, (v) капсулярный сахарид Haemophilus influenzae типа b, конъюгированный с белком-носителем, и (vi) капсулярный сахарид серогруппы С Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, характеризующийся тем, что конъюгат серогруппы С получают способом, включающим в себя стадии (а) цианилирования капсулярного сахарида серогруппы С, с получением эфира циановой кислоты; и (b) присоединения эфира циановой кислоты прямо к белку-носителю. Вакцина может также включать в себя (vii) капсулярный сахарид серогруппы А Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем.

Изобретение также предоставляет способ приготовления смеси конъюгатов, включающей в себя (i) капсулярный сахарид Haemophilus influenzae типа b, конъюгированный с белком-носителем, (ii) капсулярный сахарид серогруппы А Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, и (iii) капсулярный сахарид серогруппы С Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, характеризующийся тем, что конъюгат серогруппы C получают способом, включающим в себя стадии (а) цианилирования капсулярного сахарида серогруппы C, с получением эфира циановой кислоты; (b) присоединения эфира циановой кислоты прямо к белку-носителю.

Изобретение также предоставляет вакцины и способы, в которых конъюгаты обоих серогруппы А и серогруппы С приготовлены таким образом и затем совмещены. Hib-конъюгат также может быть добавлен для получения смеси конъюгатов, включающей в себя Hib, MenA и MenC.

(4) О-ацетилирование конъюгата серогруппы С

Капсулярный сахарид менингококка серогруппы С представляет собой α2→9 связанный гомополимер сиаловой кислоты (N-ацетил-нейраминовая кислота), обычно с О-ацетил (ОАс) группами в С-7- или С-8-остатках:

→9)-Neu p NAc 7/8 OAc-(α2→

Некоторые штаммы MenC (~12% инвазивных изолятов) продуцируют полисахарид, котрый имеет недостаток указанных групп ОАс+. Наличие или отсутствие ОАс групп создает уникальные эпитопы, и специфичность связывания антител с сахаридом может влиять на его бактериальную активность против О-ацетилированных (ОАс-) и де-О-ацетилированных (ОАс+) штаммов [7-9]. Лицензированные MenC конъюгированные вакцины включают в себя оба сахарида ОАс- (NeisVac-C^TM) и ОАс+ (Menjugate^TM & Meningitec^TM).

Согласно изобретению могут быть использованы или штаммы ОАс+, или ОАс-.

Таким образом, изобретение предоставляет комбинированную вакцину, включающую в себя (i) дифтерийный анатоксин, (ii) анатоксин столбняка, (iii) клеточный антиген коклюша, (iv) поверхностный антиген вируса гепатита В ('HBsAg'), (v) капсулярный сахарид Haemophilus influenzae типа b, конъюгированный с белком-носителем, и (vi) капсулярный сахарид серогруппы С Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, характеризующийся тем, что по меньшей мере 50% остатков сиаловых кислот в капсулярном сахариде серогруппы С из (vi) являются О-ацетилированными в С-7- и С-8-положениях.

Изобретение также предоставляет комбинированную вакцину, включающую в себя (i) дифтерийный анатоксин, (ii) анатоксин столбняка, (iii) клеточный антиген коклюша, (iv) поверхностный антиген вируса гепатита В ('HBsAg'), (v) капсулярный сахарид Haemophilus influenzae типа b, конъюгированный с белком-носителем, и (vi) капсулярный сахарид серогруппы С Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, характеризующийся тем, что капсулярный сахарид серогруппы С из штамма ОАс+.

Изобретение также предоставляет комбинированную вакцину, включающую в себя (i) дифтерийный анатоксин, (ii) анатоксин столбняка, (iii) клеточный антиген коклюша, (iv) поверхностный антиген вируса гепатита В ('HBsAg'), (v) капсулярный сахарид Haemophilus influenzae типа b, конъюгированный с белком- носителем, и (vi) капсулярный сахарид серогруппы С Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, характеризующийся тем, что остатки сиаловой кислоты в капсулярном сахариде серогруппы С из (vi) являются не О-ацетилированными.

Изобретение также предоставляет комбинированную вакцину, включающую в себя (i) дифтерийный анатоксин, (ii) анатоксин столбняка, (iii) клеточный антиген коклюша, (iv) поверхностный антиген вируса гепатита В ('HBsAg'), (v) капсулярный сахарид Haemophilus influenzae типа b, конъюгированный с белком- носителем, и (vi) капсулярный сахарид серогруппы С Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, характеризующийся тем, что капсулярный сахарид серогруппы С из штамма ОАс-.

Указанные вакцины могут также включать в себя (vii) капсулярный сахарид серогруппы А Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем.

Изобретение также предоставляет способ приготовления комбинированной вакцины, которая включает в себя (i) анатоксин дифтерии ('D'), (ii) анатоксин столбняка ('T'), (iii) клеточный антиген коклюша ('Pw'), (iv) поверхностный антиген вируса гепатита В ('HBsAg'), (v) капсулярный сахарид Haemophilus influenzae типа b, конъюгированный с белком-носителем, и (vi) капсулярный сахарид серогруппы С Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, характеризующийся тем, что способ включает в себя стадии (а) совмещения трехвалентного D-T-Pw-компонента с моновалентным HBsAg-компонентом для получения тетравалентного компонента D-T-Pw-HBsAg; (b) совмещение конъюгатов H. influenzae и N. meningitidis для получения компонента смешанного конъюгата, где, по меньшей мере, 50% остатков сиаловой кислоты в капсулярном сахариде серогруппы С из (vi) являются О-ацетилированными в С-7- и С-8-положениях.

Изобретение также предоставляет способ приготовления комбинированной вакцины, которая включает в себя (i) анатоксин дифтерии ('D'), (ii) анатоксин столбняка ('T'), (iii) клеточный антиген коклюша ('Pw'), (iv) поверхностный антиген вируса гепатита В ('HBsAg'), (v) капсулярный сахарид Haemophilus influenzae типа b, конъюгированный с белком-носителем, и (vi) капсулярный сахарид серогруппы С Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, характеризующийся тем, что способ включает в себя стадии (а) совмещения трехвалентного D-T-Pw-компонента с моновалентным HBsAg-компонентом, с получением тетравалентного компонента D-T-Pw-HBsAg; (b) совмещения конъюгатов H. influenzae и N. meningitidis для получения компонента смешанного конъюгата, где остатки сиаловой кислоты в капсулярном сахариде серогруппы С из (vi) не являются О-ацетилированными.

Изобретение также предоставляет способ приготовления комбинированной вакцины, которая включает в себя (i) анатоксин дифтерии ('D'), (ii) анатоксин столбняка ('T'), (iii) клеточный антиген коклюша ('Pw'), (iv) поверхностный антиген вируса гепатита В ('HBsAg'), (v) капсулярный сахарид Haemophilus influenzae типа b, конъюгированный с белком-носителем, и (vi) капсулярный сахарид серогруппы С Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, характеризующийся тем, что способ включает в себя стадии (а) совмещения трехвалентного D-T-Pw-компонента с моновалентным HBsAg-компонентом для получения тетравалентного компонента D-T-Pw-HBsAg; (b) совмещения конъюгатов H. influenzae и N. meningitidis для получения компонента смешанного конъюгата, где капсулярный сахарид серогруппы С из штамма ОАс-.

Изобретение также предоставляет способ приготовления комбинированной вакцины, которая включает в себя (i) анатоксин дифтерии ('D'), (ii) анатоксин столбняка ('T'), (iii) клеточный антиген коклюша ('Pw'), (iv) поверхностный антиген вируса гепатита В ('HBsAg'), (v) капсулярный сахарид Haemophilus influenzae типа b, конъюгированный с белком-носителем, и (vi) капсулярный сахарид серогруппы С Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, характеризующийся тем, что способ включает в себя стадии (а) совмещения трехвалентного компонента D-T-Pw с моновалентным компонентом HBsAg для получения тетравалентного компонента D-T-Pw-HBsAg; (b) совмещения конъюгатов H. influenzae и N. meningitidis для получения компонента смешанного конъюгата, где капсулярный сахарид серогруппы С из штамма ОАс+.

Вакцины, изготовленные данными способами, могут также включать в себя (vii) капсулярный сахарид серогруппы А Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем.

Изобретение также предоставляет смесь конъюгатов, включающую в себя (i) капсулярный сахарид Haemophilus influenzae типа b, конъюгированный с белком-носителем, (ii) капсулярный сахарид серогруппы А Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, и (iii) капсулярный сахарид серогруппы С Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, характеризующийся тем, что остатки сиаловой кислоты в конъюгате MenC не являются О-ацетилированными.

Изобретение также предоставляет смесь конъюгатов, включающую в себя (i) капсулярный сахарид Haemophilus influenzae типа b, конъюгированный с белком-носителем, (ii) капсулярный сахарид серогруппы A Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, и (iii) капсулярный сахарид серогруппы С Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем характеризующийся тем, что MenC капсулярный сахарид из штамма ОАс-.

Изобретение также предоставляет смесь конъюгатов, включающую в себя (i) капсулярный сахарид Haemophilus influenzae типа b, конъюгированный с белком-носителем, (ii) капсулярный сахарид серогруппы A Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, и (iii) капсулярный сахарид серогруппы С Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, характеризующийся тем, что по меньшей мере 50% остатков сиаловой кислоты в конъюгате MenC являются О-ацетилированными в С-7- и С-8-положениях.

Изобретение также предоставляет смесь конъюгатов, включающую в себя (i) капсулярный сахарид Haemophilus influenzae типа b, конъюгированный с белком-носителем, (ii) капсулярный сахарид серогруппы A Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, и (iii) капсулярный сахарид серогруппы С Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, характеризующийся тем, что капсулярный сахарид MenC из штамма ОАс+.

Где, по меньшей мере, 50% остатков сиаловой кислоты в конъюгате серогруппы С являются О-ацетилированными, минимальный процент может быть выше, например 60%, 70%, 80%, 90% и выше.

Предпочтительными штаммами для производства конъюгатов серогруппы С являются штаммы ОАс+, предпочтительно серотип 16, предпочтительно сероподтип Р1.7а,1. Таким образом С:16:Р1.7а,1 штаммы ОАс+ являются предпочтительными.

(5) О-ацетилирование конъюгата серогруппы А

Капсулярный сахарид менингококка серогруппы А представляет собой гомополимер N-ацетилманнозаминфосфат, соединенный α1→6 с частичным ацетилированием в С-3- и С-4-положениях:

R= -H или СOOH₃

Ацетилирование в С-3-положении может достигать 70-95%. Условия, используемые для очистки сахарида, могут приводить к де-О-ацетилированию (например, при основных условиях), но настоящее изобретение обращено к сохраненным ОАс.

Таким образом, изобретение предоставляет комбинированную вакцину, включающую в себя (i) анатоксин дифтерии, (ii) анатоксин столбняка, (iii) клеточный антиген коклюша, (iv) поверхностный антиген вируса гепатита В ('HBsAg'), (v) капсулярный сахарид Haemophilus influenzae типа b, конъюгированный с белком-носителем, и (vi) капсулярный сахарид серогруппы А Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, характеризующийся тем, что по меньшей мере 50% маннозаминных остатков капсулярного сахарида серогруппы А являются О-ацетилированными в С-3-положении. Вакцина может также включать в себя (vii) капсулярный сахарид серогруппы С Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем.

Изобретение также предоставляет способ приготовления комбинированной вакцины, которая включает в себя (i) анатоксин дифтерии ('D'), (ii) анатоксин столбняка ('T'), (iii) клеточный антиген коклюша ('Pw'), (iv) поверхностный антиген вируса гепатита В ('HBsAg'), (v) капсулярный сахарид Haemophilus influenzae типа b, конъюгированный с белком-носителем, и (vi) капсулярный сахарид серогруппы А Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, характеризующийся тем, что способ включает в себя стадии (а) совмещения трехвалентного компонента D-T-Pw с моновалентным компонентом HBsAg для получения тетравалентного компонента D-T-Pw-HBsAg; (b) совмещение конъюгатов H. influenzae и N. meningitidis для получения компонента смешанного конъюгата, где по меньшей мере 50% маннозаминных остатков капсулярного сахарида серогруппы А являются О-ацетилированными в С-3-положении.

Вакцина, изготовленная данным способом, может также включать в себя (vii) капсулярный сахарид серогруппы С Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем.

Изобретение также предоставляет смесь конъюгатов, включающую в себя (i) капсулярный сахарид Haemophilus influenzae типа b, конъюгированный с белком-носителем, (ii) капсулярный сахарид серогруппы A Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, и (iii) капсулярный сахарид серогруппы С Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, характеризующийся тем, что по меньшей мере 50% маннозаминных остатков капсулярного сахарида серогруппы А являются О-ацетилированными в С-3-положении.

Где по меньшей мере 50% маннозаминных остатков в конъюгате серогруппы А являются О-ацетилированными, минимальный процент может быть выше, например 60%, 70%, 80%, 90% и выше.

(6) Подбор дозы конъюгатов

Производство антигенов Hib-конъюгата является дорогостоящим, и были разработаны различные стратегии для их экономного использования [10-12]. Один подход дает две дозы конъюгата в дозах ниже, чем стандартные 10 мкг/доза (обычно дробные части, например, 1/2, 1/3, 1/4 и так далее) [10,12]. Например, согласно ссылке 12, конъюгаты вводили как 5 мкг/доза или 3,33 мкг/доза, т.е. 1/2 или 1/3 или обычная доза.

Данный подход был перенесен на Hib-конъюгаты в DTP-Hib-вакцинах. Например, в ссылке 13 сравнивают применение полной дозы, половы дозы и трети дозы Hib-конъюгата в комбинации с DТwP-вакциной и несмотря на то, что геометрические средние концентрации антител к PRP были снижены у пациентов, получавших комбинированные DTP-Hib вакцины, по сравнению с раздельным введением DTP и Hib приемлемый защитный анти-Hib иммунный ответ был получен во всех случаях. В ссылке 14 используют 10-кратное разведение дозы Hib-конъюгата при восстановлении одной Hib дозы пузырьком с DTwP на 10 доз. Ссылка 2 раскрывает восстановление лиофилизированного Hib-конъюгата в полной дозе, в половине дозы или в четверти дозы, используя TRITANRIX^TM DTwP-HBsAg-вакцину.

Не сообщалось о подобных исследованиях доз для менингококковых конъюгатов в комбинированных вакцинах.

Для комбинированных вакцин согласно изобретению выбирают Hib и менингококковые конъюгаты в количестве от 8 мкг до 12 мкг (измеренных по сахариду). Данное количество может быть представлено в одной однократной дозы или на миллилитр вакцины.

Таким образом, изобретение предоставляет комбинированную вакцину, включающую в себя (i) анатоксин дифтерии, (ii) анатоксин столбняка, (iii) клеточный антиген коклюша, (iv) поверхностный антиген вируса гепатита В, (v) капсулярный сахарид Haemophilus influenzae типа b, конъюгированный с белком-носителем, и (vi) по меньшей мере один капсулярный сахарид Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, характеризующуюся тем, что вакцина содержит от 8 мкг/мл до 12 мкг/мл капсулярного сахарида Haemophilus influenzae типа b. Предпочтительно, если в состав включены менингококковые конъюгаты обоих серогрупп А и С.

Изобретение также предоставляет комбинированную вакцину, включающую в себя (i) анатоксин дифтерии, (ii) анатоксин столбняка, (iii) клеточный антиген коклюша, (iv) поверхностный антиген вируса гепатита В, (v) капсулярный сахарид Haemophilus influenzae типа b, конъюгированный с белком-носителем, и (vi) капсулярный сахарид серогруппы А Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, характеризуемой тем, что вакцина содержит от 8 мкг/мл до 12 мкг/мл капсулярного сахарида менингококковой серогруппы А. Предпочтительно, вакцина также включает в себя (vii) капсулярный сахарид серогруппы С Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем.

Изобретение также предоставляет комбинированную вакцину, включающую в себя (i) анатоксин дифтерии, (ii) анатоксин столбняка, (iii) клеточный антиген коклюша, (iv) поверхностный антиген вируса гепатита В ('HBsAg'), (v) капсулярный сахарид Haemophilus influenzae типа b, конъюгированный с белком-носителем, и (vi) капсулярный сахарид серогруппы C Neisseria meningitidis, конъюгированный с белком-носителем, характеризующийся тем, что вакцина содержит от 8 мкг/мл до 12 мкг/мл капсулярного сахарида менингококковой серогруп