Новые композиции вакцин

Новые композиции вакцин

Реферат

Родственные заявки

Настоящая заявка заявляет приоритет заявки США №11/107000, поданной 15 апреля 2005 г., содержание которой включено в настоящую заявку путем ссылки.

Ссылки

Предшествующие заявки и все документы, которые цитируют в этих заявках или во время их рассмотрения («документы, цитируемые в заявке»), и все документы, на которые ссылаются или которые цитируют в «документах, цитируемых в заявке», и все документы, на которые ссылаются здесь или которые цитируют здесь («цитируемые здесь документы»), все документы, на которые ссылаются или которые цитируют в «цитируемых здесь документах», вместе с любыми инструкциями изготовителя, описаниями, спецификациями продуктов и технологическими картами для любых продуктов, упомянутых здесь или в любом документе, включенным сюда путем ссылки и тем самым включенным в настоящую заявку путем ссылки, могут использоваться в практике изобретения.

Область техники

Настоящее изобретение относится к эмульсиям типа «масло-в-воде», их применению в качестве адъювантов и к фармакологическим иммунологическим композициям и композициям вакцин, содержащих упомянутые эмульсии.

Предшествующий уровень техники

Применение адъювантов в вакцинах хорошо известно. Адъювант представляет собой соединение, которое при объединении с иммуногеном вакцины усиливает иммунный ответ на иммуноген. Среди методов, которые усиливают иммуногенность белка, гликопротеина или пептида, имеются методы, в которых эмульгируют иммуногены [Nossal 1999, In: Fundamental Immunology. Paul (Ed.), Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, Pa.; Vofiel and Powell, 1995, In: Vaccine Design. The Subunit and Adjuvant Approach. Powell and Newman (Eds.), Plenum Press, NY, N.Y. p.141]. Благодаря значительной роли, которую адъюванты играют в повышении иммуногенности иммуногенов вакцин, применение адъювантов в рецептурах вакцин является практически повсеместным [Nossal, 1999, supra: Vogel and Powell. 1995, supra; идеи вышеупомянутых 2 работ включены в данную заявку путем ссылки]. Общепринятые адъюванты, хорошо известные в данной области техники, различны по своей природе. Они могут состоять, например, из нерастворимых в воде неорганических солей, липосом, мицелл или эмульсий, т.е. адъювант Фрейда. Другие адъюванты можно найти в вышеупомянутой работе [Vogel and Powell, 1995, supra]. Хотя единого механизма действия адъювантов не существует, важной характеристикой адъювантов является их способность значительно усиливать иммунный ответ на иммуноген вакцины по сравнению с ответом, индуцированным только иммуногеном вакцины [Nossal 1999, supra; Vogel and Powell, 1995, supra]. При этом некоторые адъюванты более эффективны в случае нарастающих гуморальных иммунных ответов, другая группа адъювантов более эффективна при усилении иммунных клеточных ответов. [Vogel and Powell, 1995, supra] и еще одна группа адъювантов усиливает как гуморальный, так и клеточный иммунные ответы против антигенов, используемых для приготовления вакцин [Vogel and Powell, 1995, supra].

Эмульсии, используемые в рецептуре вакцин, содержат смесь масла, водного раствора и поверхностно-активных веществ. Некоторые эмульсии включают липофильное поверхностно-активное вещество, такое как Span 80® и гидрофильное поверхностно-активное вещество, такое как Tween 80®. Упомянутые эмульсии могут также содержать такие соединения, как лецитин или сапонин, которые, как известно, обладают свойствами ионогенных поверхностно-активных веществ.

Однако при работе с эмульсиями, используемыми в качестве адъювантов вакцин, могут возникать проблемы, связанные со стабильностью эмульсий. Ферментативная активность липазы или эстеразы, находящихся в растворе или суспензии иммуногена, может вызывать гидролиз поверхностно-активных веществ эмульсии 2Xnidi, что приводит к потере стабильности адъюванта. Липазы и эстеразы могут поступать, например, из клеточной культуры, используемой для выращивания вирусов или бактерий. Эти утверждения особенно справедливы тогда, когда указанные композиции содержат концентрированные иммуногены, конкретно неочищенные концентрированные иммуногены. Обычно это имеет место в случае адъювантов, используемых в инактивированных (убитых) вакцинах. Вышеуказанная проблема является еще более важной для композиций поливалентных вакцин, так как в том же объеме разбавителя выше концентрация иммуногенов.

Еще одна проблема применения адъювантов связана с риском нежелательных явлений, таких как токсичность или локальное воспаление в месте инъекции. Например, после инъекции возможен локальный воспалительный ответ и/или образование гранулем. Для того чтобы ограничить такую нежелательную реакцию, можно уменьшать содержание поверхностно-активных веществ и других компонентов в эмульсии; однако, такое уменьшение может привести к понижению стабильности композиции вакцины. Следовательно, существует потребность в новых адъювантах и композициях вакцин, содержащих такие адъюванты, обладающих повышенной стабильностью и безвредностью.

Цитирование или идентификация любого документа в настоящей заявке не является признанием того, что такой документ предлагается в качестве предшествующего уровня техники в отношении настоящего изобретения.

Краткое описание изобретения

В первом варианте осуществления настоящее изобретение относится к новой эмульсии типа «масло-в-воде» (O/W), обладающей повышенной стабильностью в присутствии суспензий бактерий, паразитов или вирусов, особенно концентрированных, неочищенных или плохо очищенных суспензий.

Еще один вариант осуществления настоящего изобретения относится к стабильной, безвредной и легко вводимой O/W эмульсии (конкретно вводимой путем инъекций), действующей в качестве среды для доставки фармацевтической композиции, содержащей, по меньшей мере, один активный ингредиент, который, более конкретно может представлять собой иммуноген.

Еще один вариант осуществления настоящего изобретения относится к стабильной, безвредной и легко вводимой путем инъекции O/W эмульсии, действующей в качестве адъюванта для усиления иммунного ответа, индуцированного иммуногеном. Конкретно, настоящее изобретение относится к новому адъюванту, который при использовании композиции вакцины, содержащей иммуноген, усиливает клеточный иммунный ответ вакцинированного субъекта, гуморальный иммунный ответ или предпочтительно оба типа ответа на иммуноген.

Еще один вариант осуществления настоящего изобретения относится к стабильной, безопасной и иммуногенной композиции или вакцине, содержащей O/W эмульсию.

Еще один вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу изготовления композиции вакцины с использованием адъюванта по настоящему изобретению, композиции вакцины, полученной таким способом, и к способам ее применения.

Еще один вариант осуществления настоящего изобретения относится к набору, содержащему иммуноген или другой фармацевтический продукт в первом флаконе и адъювант, приготовленный по настоящему изобретению, во втором флаконе, причем подразумевается, что перед использованием адъювант смешивают с иммуногеном или другим продуктом вакцины.

Настоящее изобретение в одном варианте осуществления изобретения относится к эмульсии типа «масло-в-воде» (O/W), которая может включать:

(1) водный раствор, содержащий иммуноген,

(2) минеральное масло,

(3) неионногенный гидрофильный этоксилированный спирт жирного ряда,

(4) неионогенное гидрофильное поверхностно-активное вещество, выбранное из группы этоксилированного спирта жирного ряда, блок-сополимера полиоксиэтилен-полиоксипропилен и/или любой их комбинации.

Настоящее изобретение в еще одном варианте осуществления изобретения относится к эмульсии типа «масло-в-воде» (O/W), которая может включать:

(1) водный раствор, содержащий иммуноген,

(2) неионогенное липофильное поверхностно-активное вещество, выбранное из группы этоксилированного спирта жирного ряда, блок-сополимера полиоксиэтилен-полиоксипропилен и/или любой их комбинации,

(3) минеральное масло,

(4) неионогенный гидрофильный этоксилированный спирт жирного ряда.

Эмульсии, изготовленные по настоящему изобретению, базируются на комбинировании, по меньшей мере, двух поверхностно-активных веществ, выбранных из членов двух различных групп поверхностно-активных веществ (липофильных и гидрофильных поверхностно-активных веществ), и возможно использование одного или нескольких поверхностно-активных веществ, относящихся к каждой группе.

В еще одном предпочтительном варианте осуществления изобретения настоящее изобретение относится к композиции вакцины, включающей новую эмульсию, которая может содержать, по меньшей мере, один иммуноген, подходящий для индуцирования иммунного ответа у вакцинированного субъекта. Кроме того, изобретение относится к таким композициям, в которых эмульсия действует в качестве адъюванта для усиления иммунного ответа, индуцированного иммуногеном, конкретно для усиления клеточного иммунного ответа, гуморального иммунного ответа или предпочтительно и того и другого.

В предпочтительном варианте осуществления изобретения антиген или иммуноген представляет собой Mycoplasma, предпочтительно Mycoplasma hyopneumoniae, свиной цирковирус, предпочтительно свиной цирковирус-2 или Helicobacter, предпочтительно Helicobacter cerdo или Helicobacter pylori, или их производные.

В еще одном предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу приготовления композиции вакцины, где иммуноген, особенно иммуноген в лиофилизованной форме или в водном растворе, смешивают с адъювантом по рассматриваемому изобретению. Иммуноген может быть выбран из группы, состоящей из инактивированных патогенов, ослабленных патогенов, субъединиц антигенов ослабленных патогенов, субъединиц антигенов, рекомбинантных экспрессирующих векторов, включающих плазмиды, и т.п. Патоген может иметь бактериальное вирусное, протозоальное, паразитическое или грибковое происхождение или иммуноген может представлять собой токсоид.

В еще одном предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу индуцирования иммунного ответа у вакцинированного против патогена субъекта, включающему введение субъекту композиции вакцины по настоящему изобретению.

В еще одном предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к наборам, содержащим, по меньшей мере, два флакона, в первом флаконе находится иммуноген, главным образом иммуноген в лиофилизированной форме или в растворе в водной среде, а во втором флаконе находится адъювант или эмульсия по настоящему изобретению.

Отметим, что в настоящем описании и конкретно в формуле изобретения термины, такие, как «содержит», «содержащийся» и «содержащий» и т.п. могут иметь значения, приписанные таким терминам в Патентном законе США, например, они могут означать «включает», «включенный», «включающий» и т.п.; термины, такие как «состоящий по существу из» и «состоит по существу из» имеют значение, приписываемое им Патентным законом США, например, они предусматривают элементы, излагаемые не в прямой форме, но исключают элементы, которые обнаружены на предшествующем уровне техники или которые влияют на основную или новую характеристику изобретения.

Упомянутые варианты осуществления изобретения и другие варианты раскрываются в нижеследующем подробном описании или являются очевидными и включены в подробное описание.

Подробное описание изобретения

Для удобства здесь приводятся некоторые термины, которые используются в описании, примерах и дополнениях и в формуле изобретения.

Термин «животное», используемый здесь, включает в себя всех позвоночных животных, в том числе человека. Он также включает особь животного на всех стадиях развития, включая эмбриональную и фетальную стадии. Конкретно термин «позвоночное животное» включает (но не ограничивается перечисленным ниже) человека, семейство псовых (например, собаки), семейство кошачьих (например, кошки), семейство лошадей (например, лошади), жвачных животных (например, крупный рогатый скот), семейство свиней (например, свиньи), семейство овец (например, овцы), семейство коз (например, козы), кроликов, а также птиц. Термин «птицы» используют здесь для обозначения любых видов или подвидов таксономического класса Aves, например кур (племенных, мясных и несушек), индюков, уток, гусей, перепелов, фазанов, попугаев, певчих птиц, ворон и бескилевых птиц, включая страуса, эму и казуара.

Используемый здесь термин «свинья» или «поросенок» относится к животному, которое происходит из семейства свиней, тогда как термин «свиноматка» относится к самке свиньи в репродуктивном возрасте и способной к репродукции.

Используемый здесь термин «вирулентный» относится к изоляту, который сохраняет свою способность инфицировать в животном-хозяине.

Используемый здесь термин «инактивированная вакцина» относится к композиции вакцины, содержащей инфекционный организм или патоген, который более не способен к репликации или росту. Патоген может быть бактериального, вирусного, протозойного, паразитического или грибкового происхождения. Инактивация может быть осуществлена множеством методов, включающих высокое давление, химическую обработку (например, обработка тимеросалом или формалином), разрушение ультразвуком, облучение, нагревание или любые другие общепринятые средства, достаточные для того, чтобы не допустить репликации или роста организма при сохранении его иммуногенности.

Используемый здесь термин «иммуногенность» означает способность продуцировать иммунный ответ в животном-хозяине против иммуногена или иммуногенов. Указанный иммунный ответ создает основу защитного иммунитета, вызываемого вакциной против конкретного инфекционного организма.

Используемый здесь термин «иммунный ответ» относится к ответу, вызываемому в животном. Иммунный ответ может относиться к клеточному иммунитету (CMI), гуморальному иммунитету или может включать оба типа. Настоящее изобретение также рассматривает ответ, ограниченный частью иммунной системы. Например, композиция вакцины по настоящему изобретению может конкретно вызывать увеличенный ответ гамма-интерфероном.

Используемый здесь термин «антиген» или «иммуноген» означает вещество, которое индуцирует специфический иммунный ответ в животном-хозяине. Антиген может содержать целый организм, убитый, ослабленный или живой; субъединицу или порцию организма, рекомбинантный вектор, содержащий вставку с иммуногенными свойствами, кусок фрагмента ДНК, способный индуцировать иммунный ответ при нахождении в животном-хозяине, белок, гликопротеин, липопротеин, полипептид, пептид, эпитоп, гаптен или любую их комбинацию. Альтернативно иммуноген или антиген могут содержать токсин или антитоксин.

Термин «поливалентный» здесь используют для обозначения вакцины, содержащей более одного антигена либо одного и того же вида (например, различные изоляты Mycoplasma hyopneitmoniae}, либо различных видов (например, изоляты как из Pasteurella hemolytica, так и из Pasteurella multocida), или вакцины, содержащей комбинацию антигенов различных родов (например, вакцины, содержащей антигены из Pasteurella multocida, Salmonella, Escherichia соli, Haemophilus somnus и Clostridium).

Термин «адъювант» здесь используют для обозначения вещества, которое прибавляют к вакцине для увеличения ее иммуногенности. Механизм действия адъюванта плохо понятен. Полагают, что некоторые адъюванты усиливают иммунный ответ, медленно высвобождая антиген, тогда как другие адъюванты могут опосредовать их эффекты по любому из следующих ниже механизмов: увеличением клеточной инфильтрации, воспалением и переносом к месту инъекции, конкретно для антигенпрезентирующих клеток (АРС), промотированием состояния активации АРС путем повышения регуляции состимулирующих сигналов или экспрессии главного комплекса гистосовместимости (МНС), увеличением презентации антигенов или индуцированном высвобождения цитокинов для непрямого действия. Наиболее подходящий адъювант для данного иммуногена вакцины будет в большой степени зависеть от типа иммунного ответа, который требуется для защитного иммунитета. Возможно, выбор адъюванта является до некоторой степени эмпирическим. Известные адъюванты для вакцин включают (но не ограничиваются перечисленными ниже) масляные и водные эмульсии (например, полный адъювант Фрейда и неполный адъювант Фрейда), конкретно эмульсии типа «масло-в-воде», эмульсии типа «вода-в-масле», эмульсии типа «вода-в-масле-в-воде». Они также включают, например, сапонин, гидроксид алюминия, сульфат декстрана, карбомер, альгинат натрия, "AVRIDINE" (N,N-диоктадецил-N',N'-бис(2-гидроксиэтил)пропандиамин), парафиновое масло, мурамилдипептид, катионные липиды (например, DMRIE, DOPE и их комбинации) и т.п.

Используемые здесь термины «фармацевтически приемлемый носитель» и «фармацевтически приемлемая основа (среда)» являются взаимозаменяемыми и относятся к жидкой основе (среде) для иммуногенов вакцины, которые можно вводить хозяину без значительных неблагоприятных эффектов. Подходящие фармацевтически приемлемые носители, известные в данной области техники, включают (но не ограничиваются ими) стерильную воду, физиологический раствор, глюкозу или буферные растворы. Носители могут включать вспомогательные вещества, включающие (но не ограничивающиеся перечисленными ниже) разбавители, стабилизаторы (например, сахара и аминокислоты), консерванты, увлажняющие вещества, эмульгаторы, буферы, регулирующие рН, добавки, увеличивающие вязкость, красители и т.п. Фармацевтически приемлемые или приемлемые для ветеринарии носители или среды или эксципиенты хорошо известны специалисту в данной области техники. Например, фармацевтически приемлемым или приемлемым для ветеринарии носителем или средой или эксципиентом может быть 0,9% раствор NaCl (например, физиологический раствор) или фосфатный буфер. Дозы и объемы доз обсуждаются здесь в описании настоящей заявки и также могут быть определены специалистом из указанного описания в сочетании со знаниями в данной области без проведения соответствующих экспериментов.

Термин «композиция вакцины» здесь используют для обозначения композиции, которая включает, по меньшей мере, один антиген или иммуноген в фармацевтически приемлемом носителе (среде) для индуцирования иммунного ответа в хозяине. Композиции вакцин можно вводить в дозах и по методикам, хорошо известным специалистам в медицине и ветеринарии, принимая во внимание такие факторы, как возраст, пол, массу тела, вид и состояние животного-реципиента и путь введения. Путь введения может быть чрезкожным, введением через слизистую (например, пероральный, назальный, глазной) или парентеральным (например, внутрикожный, внутримышечный, подкожный). Для парентерального введения продукта хозяину можно использовать или шприц с иглой, или безыгольное устройство для инъекций. Композиции вакцины можно вводить отдельно или их можно вводить совместно или последовательно с другими препаратами и видами лечения. Формы для введения могут включать суспензии и препараты для парентерального, подкожного, интрадермального или внутримышечного введения (например, введение путем инъекции), такие как стерильные суспензии и эмульсии. Композиции вакцин можно вводить в виде спрея или в смеси с пищей и/или водой или доставлять в смеси с подходящим носителем, разбавителем или эксципиентом, таким как стерильная вода, физиологический раствор, глюкоза или т.п. Композиции могут содержать вспомогательные вещества, такие как увлажняющие вещества или эмульгаторы, буферные агенты, регулирующие рН, адъюванты, гелеобразователи или агенты, увеличивающие вязкость, консерванты, вещества, придающие вкус и аромат, красители и т.п. в зависимости от пути введения и требуемого препарата.

Можно обратиться за справкой к нормативным фармакологическим руководствам, таким, например, как "Remington's Pharmaceutical Sciences" (1990) для того, чтобы получить подходящие препараты без излишнего экспериментирования.

Настоящее изобретение в одном варианте осуществления изобретения относится к новому адъюванту или эмульсии типа «масло-в-воде» (O/W), которая может содержать:

(1) водный раствор, содержащий антиген или иммуноген вакцины, способные индуцировать иммунный ответ в хозяине,

(2) неионногенный липофильный этоксилированный спирт жирного ряда,

(3) минеральное масло,

(4) неионогенное гидрофильное поверхностно-активное вещество, выбранное из группы этоксилированного спирта жирного ряда, блок-сополимера полиоксиэтилен-полиоксипропилен (блок-сополимер РОЕ-РОР) и/или любой их комбинации.

Настоящее изобретение в еще одном варианте осуществления изобретения относится к новому адъюванту или эмульсии типа «масло-в-воде» (O/W), которая может содержать:

(1) водный раствор, содержащий антиген, используемый для приготовления вакцины, или иммуноген, способные индуцировать иммунный ответ в хозяине,

(2) неионогенное гидрофильное поверхностно-активное вещество, выбранное из группы этоксилированного спирта жирного ряда, блок-сополимера полиоксиэтилен-полиоксипропилен (блок-сополимер РОЕ-РОР) и/или любой их комбинации,

(3) минеральное масло,

(4) неионогенный липофильный этоксилированный спирт жирного ряда.

Эмульсии, изготовленные по настоящему изобретению, базируются на комбинации, по меньшей мере, двух поверхностно-активных веществ, выбранных из двух различных групп поверхностно-активных веществ (липофильных и гидрофильных поверхностно-активных веществ), и возможно использование одного или нескольких поверхностно-активных веществ, относящихся к каждой группе.

Липофильный этоксилированный спирт жирного ряда может представлять собой этоксилированный спирт жирного ряда, который может содержать приблизительно 43% молекулярной массы (мас./мас.) или меньше этиленоксида (ЕО). Липофильный блок-сополимер полиоксиэтилен-полиоксипропилен (блок-сополимер РОЕ-РОР) представляет собой сополимер, который может содержать приблизительно 35% (мас./мас.) или меньше этиленоксида.

Гидрофильный этоксилированный спирт жирного ряда может представлять собой этоксилированный спирт жирного ряда, содержащий больше приблизительно 43% (мас./мас.) этиленоксида (ЕО). Гидрофильный блок-сополимер полиоксиэтилен- полиоксипропилен (блок-сополимер РОЕ-РОР) представляет собой сополимер, который может содержать приблизительно 55% (мас./мас.) или меньше этиленоксида.

Для неионогенных гидрофильных поверхностно-активных веществ этоксилированный спирт жирного ряда представляет собой С9-С22 спирт жирного ряда и предпочтительно выбран из группы, состоящей из олеилового, цетилового, стеарилового, изостеарилового, лаурилового спирта и их комбинаций, предпочтительно олеилового спирта и более предпочтительно олеилового спирта, этоксилированного 5-21 ЕО. MM блок-сополимера РОЕ-РОР составляет от приблизительно 3000 до приблизительно 16000.

Группа неионогенных гидрофильных поверхностно-активных веществ включает (но не ограничивается перечисленными ниже) этоксилированные спирты жирного ряда: Brij® 76 [Steareth-10], Brij® 56 [Ceteth-10], Brij® 96/97 [Oleth-10], Brij® 98 [Oleth-20], Brij® 721 [Steareth-21], Brij® 58 [Ceteth-20], Brij® 35 [Laureth-23], Brij® 78 [Steareth-20], (Uniqema) Volpo® N5 [Oleth-5], Volpo® CS6 [Ceteareth-6], Volpo® CS12 [Ceteareth-12], Volpo® CS20 [Ceteareth-20], Volpo® CS25 [Ceteareth-25], Volpo® CS23 [Ceteareth-23] (Croda), BL9-EX [Laureth-9], BC-7 [Ceteth-7], BT-5 [C12-14 Pareth- 5], BT-7 [C12-14 Pareth-7], BT-9 [C12-14 Pareth-9], BT-12 [C12-14 Pareth-12], BD-IO [C12-15 Pareth-10], BO-7V [Oleth-7], BC5,5 [Ceteht-6], BL-21 [Laureth-21], BL-25 [Laureth-25], BC-15TX [Ceteth-15], ВС-23 [Ceteth-23], BC-25TX [Ceteth-25], BO-15V [Oleth-15], BO-50V [Oleth-50], BB-20 [Beheneth-20], (Nikko Chemicals) и их комбинации; блок-сополимеры РОЕ-РОР: Lutrol® F127 [Poloxamer 407], Lutrol® F68 [Poloxamer 188], Lutrol® F108 [Poloxamer 338], Lutrol® F98 [Poloxamer 278], Lutrol ®F87 [Poloxamer 227], Lutrol® F88 [Poloxamer 228], Lutrol® F77 [Poloxamer 207], Lutrol® F38 [Poloxamer 108] (BASF), Tetronics®T1307, Tetronics®T1107, Tetronics®T908 (BASF) и их комбинации.

Для неионогенных липофильных поверхностно-активных веществ этоксилированный спирт жирного ряда представляет собой С9 - С22 спирт жирного ряда и предпочтительно выбран из группы, состоящей из олеилового, цетилового, стеарилового, изостеарилового, лаурилового спирта и их комбинаций, предпочтительно и более предпочтительно олеилового спирта, этоксилированного 1-4 ЕО. MM блок-сополимера РОЕ-РОР составляет от приблизительно 1000 до приблизительно 8000.

Группа неионогенных липофильных поверхностно-активных веществ включает (но не ограничивается перечисленными ниже) этоксилированные спирты жирного ряда: Brij® 30 [Laureth-4], Brij® 92/93 [Oleth-2], Brij® 72 [Steareth-2], Brij® 52 [Ceteth-2] (Uniqema), Volpo® L3 [C12-13 Pareth-3], Volpo® N3 [Oleth-3], Volpo® L4 [C12-13 Pareth-4] (Croda), BS-4 [Steareth-4], BD-2 [C12-15 Pareth-2], BD-4 [C12-15 Pareth-4], BT-3 [C12-14 Pareth-3] (Nikko Chemicals), их комбинации; блок-сополимеры POE-POP: Pluronic® L121 [Poloxamer 401], Pluronic® L101 [Poloxamer 331], Pluronic® L81 [Poloxamer 221], Pluronic® L62 [Poloxamer 182], Pluronic® L43 [Poloxamer 123], Pluronic® P103 [Poloxamer 333], Pluronic® L123 [Poloxamer 403], Lutrol® L63 [Poloxamer 183], Lutrol® P122 [Poloxamer 402], Lutrol® L92 [Poloxamer 272], Lutrol® L72 [Poloxamer 202], Lutrol® L42 [Poloxamer 122], Lutrol® L61 [Poloxamer 181] (BASF), Tetronics®T1301, Tetronics®T701, Tetronics®T901 (BASF) их комбинации.

Поверхностно-активные вещества по изобретению могут содержать спирты жирного ряда животного и растительного происхождения. Изменение вещества одного типа происхождения на вещество другого типа происхождения можно осуществить просто путем только незначительного регулирования состава эмульсии.

Общая концентрация поверхностно-активных веществ в эмульсии по изобретению (по массе на объем эмульсии) составляет от приблизительно 0,2% до приблизительно 6,5%, конкретно от приблизительно 1% до приблизительно 6%, предпочтительно от приблизительно 1,5% до приблизительно 5%, более предпочтительно от приблизительно 2% до приблизительно 3%.

Такие эмульсии обладают низкой вязкостью и их легко вводить путем инъекций.

В предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к эмульсии типа «масло-в-воде» (О/W), которая может содержать:

(1) водный раствор, содержащий антиген или иммуноген вакцины, способный индуцировать иммунный ответ в хозяине;

(2) неионогенный липофильный этоксилированный спирт жирного ряда;

(3) минеральное масло;

(4) неионогенный гидрофильный этоксилированный спирт жирного ряда, содержащий больше приблизительно 43% и меньше приблизительно 71% (мас./мас.) этиленоксида;

(5) неионогенный гидрофильный этоксилированный спирт жирного ряда, содержащий приблизительно 71% (мас./мас.) или больше этиленоксида.

Этоксилированный спирт жирного ряда, содержащий больше приблизительно 43% и меньше приблизительно 71% (мас./мас.) этиленоксида представляет собой предпочтительно олеиловый спирт, этоксилированный (5-14 ЕО). Спирт жирного ряда, содержащий приблизительно 71% (мас./мас.) или больше этиленоксида, представляет собой предпочтительно олеиловый спирт, этоксилированный 15 ЕО или больше.

В указанном предпочтительном варианте осуществления изобретения концентрация неионогенного гидрофильного этоксилированного спирта жирного ряда обычно составляет от приблизительно 1,0% до приблизительно 5,0%, конкретно от приблизительно 1,5% до приблизительно 4,5%, более предпочтительно от приблизительно 2,0% до приблизительно 3,5%, выражаемая в процентах массы к объему эмульсии (мас./об.). Для неионогенных высокогидрофильных этоксилированных спиртов жирного ряда концентрация обычно составляет от приблизительно 0,01% до приблизительно 3,0%, конкретно от приблизительно 0,05% до приблизительно 2,5%, более предпочтительно от приблизительно 0,1% до приблизительно 2,0% (мас./об.). Концентрация неионогенного липофильного этоксилированного спирта жирного ряда составляет обычно от приблизительно 0,1% до приблизительно 2,5%, конкретно от приблизительно 0,2% до приблизительно 2,0%, предпочтительно от приблизительно 0,2% до приблизительно 1,5%, более предпочтительно от приблизительно 0,2% до приблизительно 1,2% (мас./об.).

В предпочтительном варианте осуществления изобретения настоящее изобретение относится к эмульсии типа «масло-в-воде» (O/W), которая может содержать:

(1) водный раствор, содержащий антиген или иммуноген вакцины, способный индуцировать иммунный ответ в хозяине,

(2) неионогенный липофильный этоксилированный спирт жирного ряда,

(3) минеральное масло,

(4) неионогенный гидрофильный этоксилированный спирт жирного ряда.

(5) неионогенный гидрофильный блок-сополимер полиоксиэтилен-полиоксипропилен.

Гидрофильный этоксилированный спирт жирного ряда представляет собой предпочтительно спирт жирного ряда, содержащий больше приблизительно 43% и меньше, чем приблизительно 71% (мас./мас.) этиленоксида, более предпочтительно олеиловый спирт, этоксилированный 5-14 ЕО. Неионогенный блок-сополимер РОЕ-РОР может предпочтительно содержать 70% (мас./мас.) этиленоксида или больше.

В указанном предпочтительном варианте осуществления изобретения концентрация неионогенного гидрофильного этоксилированного спирта жирного ряда, выражаемая в процентах массы на объем эмульсии (мас./об.), составляет обычно от приблизительно 1,0% до приблизительно 5,0%, конкретно от приблизительно 1,5% до приблизительно 4,5%, более предпочтительно от приблизительно 2,0% до приблизительно 3,5%. Для неионогенного блок-сополимера концентрация обычно составляет от приблизительно 0,01% до приблизительно 2,0%, более конкретно от приблизительно 0,1% до приблизительно 1,5% (мас./об.). Концентрация неионогенного липофильного этоксилированного спирта жирного ряда обычно составляет от приблизительно 0,1% до приблизительно 2,5%, конкретно от приблизительно 0,2% до приблизительно 2,0%, предпочтительно от приблизительно 0,2% до приблизительно 1,5%, более предпочтительно от приблизительно 0,2% до приблизительно 1,2% (мас./об.).

Эмульсия по изобретению обычно может иметь температуру инверсии фаз (PIT) больше или равную 25°С, конкретно в интервале от приблизительно 28°С до приблизительно 65°С, более конкретно от приблизительно 33°С до приблизительно 60°С.

PIT представляет собой температуру, при которой эмульсия типа «вода-в-масле» превращается в эмульсию типа «масло-в-воде» или разрушается (разрушение эмульсии и разделение 2 фаз). Величину PIT можно измерить различными средствами, например, визуально или путем измерения проводимости. Эмульсию помещают в водяную баню при температуре ниже, чем PIT данной эмульсии, например, приблизительно 25°С. Температуру постепенно повышают. Наблюдают изменения внешнего вида эмульсии, т.е. изменение текучести, разделение на две фазы, изменение внешнего вида поверхности, обусловленное миграцией масляной фазы к поверхности, и сравнивают с контрольной эмульсией. Температура, для которой визуально наблюдают такое изменение внешнего вида, представляет собой величину PIT эмульсии. Альтернативно PIT определяют быстрым переходом от величины проводимости, равной приблизительно 5-15 миллисименс/сантиметр (mS/cm) (эмульсия типа «масло-в-воде), к величине приблизительно равной 0 mS/cm (эмульсия типа «вода-в-масле») для физиологического раствора в качестве водной фазы, измеряемой зондом, помещенным в эмульсию вблизи ее поверхности. Температура, для которой наблюдается переход, представляет собой PIT для данной эмульсии. Специалист средней квалификации в данной области техники сможет определить комбинации поверхностно-активных веществ и масла, включая их относительные концентрации, для того, чтобы получить эмульсии по изобретению и конкретно эмульсии, имеющие PIT в интервалах, определенных выше, без излишнего экспериментирования.

Как правило, эмульсии по настоящему изобретению могут содержать по объему на объем эмульсии (об./об.) от приблизительно 2% до приблизительно 50% масляной фазы, включающей масло(а) и поверхностно-активные вещества, конкретно от приблизительно 4% до приблизительно 40%, предпочтительно от приблизительно 8% до приблизительно 35% и, более предпочтительно от приблизительно 15% до приблизительно 30% масляной фазы. По определению интервалы значений в настоящем описании всегда включают границу интервала, если не указано иное.

Применяемое масло может представлять собой минеральное масло, включающее парафиновое масло, такое как изопарафиновое масло и/или нафтеновое масло, сквалан, сквален, пристан, полиизобутен, гидрированный полиизобутен, полидецен, полиизопрен и т.п. Одно предпочтительное минеральное масло, применимое в настоящем изобретении, может включать масло, содержащее линейную или разветвленную углеродную цепь, содержащую более 15 атомов углерода, предпочтительно от 15 до 32, и не содержащее ароматических соединений. Такие масла могут, например, быть маслами, которые позиционированы на рынке под названием MARCOL® 52 или MARCOL® 82 (Esso) или "DRAKEOL® 6VR" (Penreco).

Масло может также представлять собой смесь масел, содержащую, по меньшей мере, 2 масла, выбранных из масел, описанных здесь, и в любом соотношении. Смесь масел может также содержать, по меньшей мере, одно масло, выбранное из масел, описанных выше, и, по меньшей мере, одно растительное масло, и упомянутое растительное масло составляет от приблизительно 0,1% до приблизительно 33% масляной фазы, предпочтительно от приблизительно 5% до приблизительно 15% об./об. Упомянутые растительные масла представляют собой ненасыщенные масла с высоким содержанием олеиновой кислоты, которые способны к биологическому разложению и преимущественно являются жидкими при температуре хранения (примерно +4°С) или, по меньшей мере, позволяют получать эмульсии, которые являются жидкими при указанной температуре. Растительное масло может, например, представлять собой арахисовое масло, ореховое масло, подсолнечное масло, сафлоровое масло, соевое масло, масло энотеры и т.п.

Настоящее изобретение обычно предусматривает применение водного раствора, содержащего подходящие для ветеринарии и фармацевтических целей носитель, эксципиент или разбавитель, включающие стерильную воду, физиологический раствор, глюкозу, буфер и т.п., но не ограниченные ими. Носитель, эксципиент или разбавитель могут также включать полиолы, глюциды или агенты, регулирующие рН. Носитель, эксципиент или разбавитель могут также содержать, например, аминокислоты, пептиды, антиоксиданты, бактерицид, бактериостатические соединения. К маслу прибавляют водный раствор и поверхностно-активные вещества в количестве, необходимом для получения 100% объема эмульсии по изобретению.

Настоящее изобретение предусматривает эмульсию, содержащую парафиновое масло, этоксилированный олеиловый спирт (2-3 ЕО) в качестве неионогенного липофильного поверхностно-активного вещества, этоксилированный олеиловый спирт (5-6 ЕО) в качестве неионогенного гидрофильного поверхностно-активного вещества и блок-сополимер РОЕ-РОР, содержащий приблизительно 70-80% ЕО и имеющий ММ примерно 9800-16000, в качестве неионогенного гидрофильного поверхностно-активного вещества. Конкретно концентрация парафинового масла составляет от приблизительно 5% до приблизительно 50% и предпочтительно от приблизительно 15% до приблизительно 30% (об./об.), концентрация этоксилированного (2-3 ЕО) олеилового спирта составляет от 0,1% до 1,5%, предпочтительно от 0,1% до 1,2% (мас./об.), концентрация этоксилированного (5-6 ЕО) олеилового спирта составляет 1% до 5%, предпочтительно от 1% до 4% (мас./об.) и концентрация блок-сополимера РОЕ-РОР, содержащего приблизительно 70-80% ЕО и имеющего ММ примерно 9800-16000, составляет от 0,01% до 2%, предпочтительно от 0,05% до 1,5% (мас./об.).

Во втором варианте осуществления настоящего изобретения эмульсия включает парафиновое масло, этоксилированный (2-3 ЕО) олеиловый спирт в качестве неионогенного липофильного поверхностно-активного вещества, этоксилированный (10 ЕО) олеиловый спирт в качестве неионогенного гидрофильного поверхностно-активного вещества и блок-сополимер РОЕ-РОР, содержащий приблизительно 70-80% ЕО и имеющий ММ примерно 9800-16000, в качестве неионогенного гидрофильного поверхностно-активного вещества. Конкретно, концентрация парафинового масла составляет от 5% до 50%, предпочтительно от 15% до 30% (об./об.); концентрация этоксилированного (2-3 ЕО) олеилового спирта составляет от 0,2% до 3%, предпочтительно от 0,5% до 3% (мас./об.); концентрация этоксилированного (10 ЕО) олеилового спирта составляет 0,2% до 3%, предпочтительно от 0,5% до 3% (мас./об.) и концентрация блок-сополимера РОЕ-РОР, содержащего приблизительно 70-80% ЕО и имеющего ММ примерно 9800-16000, составляет от 0,01% до 2%, предпочтительно от 0,05% до 1,5% (мас./об.).

В третьем варианте осуществления настоящего изобретения эмульсия включает парафиновое масло, этоксилированный (2-3 ЕО) олеиловый спирт в качестве неионогенного липофильного поверхностно-активного вещества, этоксилированный (5-6 ЕО) олеиловый спирт в к