Ингибиторы гиперсекреции муцина и способы их применения

Ингибиторы гиперсекреции муцина и способы их применения

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область техники

Изобретение главным образом относится к композициям, включающим пептиды, и способам их применения.

Уровень техники

Слизь является биологической жидкостью, способной к образованию гелей. Она представляет собой смесь компонентов, включающих воду и продукты секреции из различных клеток. Муцины, также называемые гликопротеинами слизи или эпителиальными гликопротеинами, являются основным компонентом слизи и представляют собой гликоконъюгаты, которые характеризуются многочисленными боковыми олигосахаридными цепями, связанными с остовом пептида посредством N- и O-связей. Гиперсекреция муцина (гликопротеиновый компонент слизи) наблюдается при некоторых респираторных заболеваниях, включающих астму, хронический бронхит и кистозный фиброз (CF), и является фактором риска смерти пациентов с этими заболеваниями.

В дыхательных путях муцины высвобождаются на поверхность дыхательных путей из клеток Гоблета на поверхности эпителия и из клеток слизи подслизистой железы. Общее количество поверхностной жидкости (слизи) в дыхательных путях является результатом скорости секреции слизи в сочетании со скоростью ее удаления (путем эпителиальной реабсорбции, испарения, цилиарного транспорта и кашлевого транспорта), то есть результатом различия между скоростью секреции слизи и скоростью ее удаления. При «нормальных» условиях скорость секреции и удаления слизи сбалансированы настолько, что трахеобронхиальное дерево покрыто только тонким поверхностным слоем жидкости. Гиперсекреция слизи (если она не сопровождается одновременным увеличением процесса удаления слизи) приводит к общему увеличению количества слизи по отношению к нормальным условиям, что ведет к накоплению слизи дыхательных путей, которое может в свою очередь привести к обструкции дыхательных путей и увеличению задержки вдыхаемых частиц и микробных компонентов.

Гиперсекреция слизи вносит вклад в патогенез большого числа воспалительных заболеваний дыхательных путей как у людей, так и у животных, отличных от людей. Увеличенная секреция слизи проявляется в состояниях хронических заболеваний, таких как астма, хроническое обструктивное легочное заболевание (COPD) и хронический бронхит; в генетических заболеваниях, таких как кистозный фиброз; при аллергических состояниях (атопии, аллергическом воспалении); при бронхоэктазии; а также в ряде острых инфекционных респираторных заболеваний, таких как пневмония, ринит, грипп и простуда.

Во многих из этих респираторных заболеваний гиперсекреция слизи сопровождается увеличенным присутствием в дыхательных путях воспалительных клеток. Эти клетки вносят большой вклад в патологию этих заболеваний посредством повреждения и разрушения тканей, произведенного воспалительными медиаторами, высвобождаемыми из этих клеток. Один пример такого разрушения посредством хронического воспаления наблюдается у пациентов с кистозным фиброзом, где высвобождаемые из нейтрофилов медиаторы (т.е. миелопероксидаза) индуцируют десквамацию эпителиальных тканей дыхательных путей.

Дыхательные пути млекопитающих покрыты линиями из тонкого слоя слизи, продуцируемой и секретируемой эпителиальными клетками дыхательных путей (клетками Гоблета) и подслизистыми железами. При таких заболеваниях, как астма, COPD, хронический бронхит и кистозный фиброз, гиперсекреция слизи является общим поражением. Избыток слизи может вносить вклад в обструкцию, восприимчивость к инфекции и даже в разрушение стенок дыхательных путей и прилегающих тканей. Основными компонентами слизи являются муциновые гликопротеины, которые синтезируются секреторными клетками (т.е. клетками Гоблета и клетками слизи) и аккумулируются внутри гранул, связанных с цитоплазматической мембранной. Муцины представляют собой семейство гликопротеинов, которые секретируются эпителиальными клетками, включая клетки респираторного, желудочно-кишечного и женского репродуктивного трактов. Муцины ответственны за вязкоупругие свойства слизи, причем известно по меньшей мере восемь генов муцина. См. Патентную заявку США 10/180,753 (Публикация № U.S. 2003/0013652). Мукоцилиарные повреждения, вызванные гиперсекрецией муцина, и/или гиперплазия клеток слизи ведет к закупорке дыхательных путей слизью, что содействует хронической инфекции, обструкции дыхательных путей и иногда смерти. Многие заболевания дыхательных путей, такие как хронический бронхит, хроническое обструктивное легочное заболевание, бронхоэктазия, астма, кистозный фиброз и бактериальные инфекции, характеризуются сверхпродукцией муцина. См. патентную заявку США № 10/180,753 (Публикация No. U.S. 2003/0013652). При подходящей стимуляции муциновые гранулы высвобождаются посредством процесса экзоцитоза, в котором гранулы транслоцируются к периферии клетки, где мембраны гранулы сливаются с плазматической мембраной, приводя к секреции содержимого в просвет.

Несмотря на очевидную патофизиологическую важность этого процесса, внутриклеточные сигнальные механизмы, связывающие стимуляцию на поверхности клетки с высвобождением муциновых гранул, были освещены только недавно. См. Li et al., Journal of Biological Chemistry, 276: 40982-40990 (2001). Полагают, что миристоилированный, богатый аланином белок субстрата С-киназы (MARCKS) требуется для секреции слизи бронхиальными эпителиальными клетками человека. Предположили, что MARCKS связывается по различным сайтам с мембранами секреторных гранул и с актиновым цитоскелетом, чтобы служить в качестве физической связи между сокращением цитоскелета и муциновыми гранулами, и может играть роль в направлении секреторных гранул к связывающим сайтам на клеточной мембране. См. Singer et al., “A MARCKS-related peptide blocks mucus hypersecretion in a mouse model of asthma”, Nature Medicine, 10: 193-196 (2004). MANS пептид (myr-пептид 1) представляет собой миристоилированную N-концевую аминокислотную последовательность из 24 аминокислот белка, называемого «Миристоилированный богатый аланином субстрат С-киназы», который обычно обозначается как MARCKS белок. Показано, что фрагмент MARCKS из 24 аминокислот, миристоилированная N-концевая последовательность пептида (MANS), ингибирует высвобождение муцина in vitro, а также блокирует гиперсекрецию слизи в мышиной модели астмы. См. Li et al. and Singer et al., выше.

Известна важность миристоилирования для содействия транслокации пептидов через мембраны сквозь липидный бислой. В недавнем исследовании продемонстрировали эту важность, показав, что немиристоилированные пептиды не проходят сквозь клеточную мембрану по сравнению с миристоилированными пептидами. См. A.Harishchandran et al., “Interaction of a Pseudosubstrate Peptide of Protein Kinase C and its Myristoylated Form with Lipid Vesicles. Only the Myzistoylated Form Translocates into Lipid Bilayer.” Biochem. Biophys. Acta, 1713: 73-82 (2005).

Сущность изобретения

В одном аспекте представлен пептид, который состоит менее чем из 24 аминокислот и имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из: (a) аминокислотной последовательности, имеющей от 4 до 23 последовательно расположенных аминокислот из эталонной аминокислотной последовательности, определенной как ПЕПТИД 1, который также известен как MANS пептид, и (b) аминокислотной последовательности, по существу идентичной аминокислотной последовательности, определенной в (a). Одна или более аминокислот пептида необязательно независимо химически модифицированы, и пептид имеет муцин-ингибирующий эффект при введении млекопитающему в муцин-ингибирующем количестве.

В другом аспекте представлен пептид, который состоит менее чем из 24 аминокислот и имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из: (a) аминокислотной последовательности, имеющей от 4 до 23 последовательно расположенных аминокислот из эталонной аминокислотной последовательности, определенной как ПЕПТИД 1; и (b) аминокислотной последовательности, по существу идентичной последовательности, определенной в (a). N-концевая и C-концевая аминокислоты пептида необязательно независимо химически модифицированы. Пептид имеет муцин-ингибирующий эффект при введении млекопитающему в муцин-ингибирующем количестве и имеет больший муцин-ингибирующий эффект у млекопитающего, чем MANS пептид, при введении в равных концентрациях.

В следующем аспекте представлен пептид, который состоит менее чем из 24 аминокислот и имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из: (a) аминокислотной последовательности, имеющей от 4 до 23 последовательно расположенных аминокислот из эталонной аминокислотной последовательности, определенной как ПЕПТИД 1; и (b) аминокислотной последовательности, по существу идентичной аминокислотной последовательности, определенной в (a). N-концевая и C-концевая аминокислоты пептида необязательно независимо химически модифицированы. Пептид имеет большую растворимость в воде, чем MANS пептид, и имеет муцин-ингибирующий эффект при введении млекопитающему в муцин-ингибирующем количестве.

Еще в другом аспекте представлен способ ингибирования гиперсекреции муцина у млекопитающих. Способ включает введение пептида млекопитающим в муцин-ингибирующем количестве, которое ингибирует секрецию муцина. Пептид состоит менее чем из 24 аминокислот и имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из: (a) аминокислотной последовательности, имеющей от 4 до 23 последовательно расположенных аминокислот из эталонной аминокислотной последовательности, определенной как ПЕПТИД 1; и (b) аминокислотной последовательности, по существу идентичной последовательности, определенной в (a). Одна или более аминокислот пептида необязательно независимо химически модифицированы.

В следующем аспекте представлен способ ингибирования гиперсекреции муцина у млекопитающего. Способ включает введение млекопитающему пептида в муцин-ингибирующем количестве, которое ингибирует секрецию муцина. Пептид состоит менее чем из 24 аминокислот и имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из: (a) аминокислотной последовательности, имеющей от 4 до 23 последовательно расположенных аминокислот из эталонной аминокислотной последовательности, определенной как ПЕПТИД 1; и (b) аминокислотной последовательности, по существу идентичной последовательности, определенной в (a). N-концевая и C-концевая аминокислоты пептида необязательно независимо химически модифицированы, и пептид имеет больший муцин-ингибирующий эффект у млекопитающего, чем MANS пептид, при введении в равных концентрациях.

Еще в следующем аспекте представлен способ ингибирования гиперсекреции муцина у млекопитающего. Способ включает введение пептида млекопитающему в муцин-ингибирующем количестве, которое ингибирует секрецию муцина. Пептид состоит менее чем из 24 аминокислот и имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из: (a) аминокислотной последовательности, имеющей от 4 до 23 последовательно расположенных аминокислот из эталонной аминокислотной последовательности, определенной как ПЕПТИД 1; и (b) аминокислотной последовательности, по существу идентичной последовательности, определенной в (a). N-концевая и C-концевая аминокислоты пептида необязательно независимо химически модифицированы, и пептид имеет большую растворимость в воде, чем MANS пептид.

В другом аспекте представлен пептид, который состоит менее чем из 24 аминокислот и имеет аминокислотную последовательность, состоящую из варианта аминокислотной последовательности, имеющей от 4 до 23 последовательно расположенных аминокислот эталонной аминокислотной последовательности, определенной как ПЕПТИД 1. N-концевая и C-концевая аминокислоты пептида необязательно химически модифицированы. Пептид имеет муцин-ингибирующий эффект при введении млекопитающему в муцин-ингибирующем количестве, имеет большую растворимость в воде, чем MANS пептид, и имеет больший муцин-ингибирующий эффект у млекопитающего, чем MANS пептид, при введении в равных концентрациях.

Пептиды настоящего изобретения используют для уменьшения и/или ингибирования гиперсекреции муцина (т.е. уменьшения до нормального уровня или меньшего, чем нормальные уровни) при лечении заболеваний и при лечении симптомов заболеваний, в которых проявляется гиперсекреция муцина, так, как это видно в состояниях хронических заболеваний, таких как астма, хроническое обструктивное легочное заболевание (COPD) и хронический бронхит; в генетических заболеваниях, таких как кистозный фиброз; при аллергических состояниях (атопии, аллергическом воспалении); при бронхоэктазии; а также в ряде острых инфекционных респираторных заболеваний, таких как пневмония, ринит, грипп и простуда.

В следующем воплощении представлен пептид, который состоит из последовательности, выбранной из группы, состоящей из: (а) аминокислотной последовательности, имеющей последовательность GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA (SEQ ID NO. 1); и (b) аминокислотной последовательности по существу идентичной последовательности, определенной в (а); в которой N-концевая аминокислота пептида не миристоилирована и C-концевая аминокислота пептида необязательно независимо химически модифицирована, причем пептид имеет эффект ингибирования гиперсекреции муцина при введении млекопитающему в количестве, которое ингибирует гиперсекрецию муцина. Этот пептид используют для лечения гиперсекреции муцина при легочных заболеваниях.

Подробное описание предпочтительных вариантов осуществления изобретения

Настоящее изобретение относится к способам и композициям, предназначенным для различных целей, включающих ингибирование гиперсекреции муцина (т.е. ингибирование высвобождения муцина) и ингибирование продуцирования слизи (иногда обозначается здесь, как ингибирование секреции слизи) у млекопитающего. Однако, перед описанием дальнейших деталей этого изобретения, сначала будут определены следующие термины.

Определения

«Муцин-ингибирующий эффект», «муцин-ингибирующая активность» или «ингибирование секреции муцина» означает уменьшение количества секреции муцина (т.е. высвобождения муцина) и необязательно означает полное прекращение секреции муцина. Введение композиции, имеющей муцин-ингибирующий эффект, приводит к уменьшенной секреции муцина по сравнению с той, какая могла бы наблюдаться или могла бы ожидаться в отсутствие такой композиции. В одном аспекте количество уменьшения секреции муцина может составлять примерно от 5% количества, которое секретируется или гиперсекретируется выше нормальных уровней, до примерно 100% количества, которое секретируется или гиперсекретируется выше нормальных уровней секреции. В другом аспекте количество уменьшения секреции муцина может составлять примерно от 5% количества, которое секретируется или гиперсекретируется выше нормальных уровней (т.е. примерно от 5% количества, секретирующегося выше нормальных уровней), до количества, которое ниже нормального уровня секреции, такого как примерно 50% количества, секретируемого при нормальных уровнях секреции.

«Слизь-ингибирующий эффект», «слизь-ингибирующая активность» или «ингибирование продуцирования слизи» означает уменьшение количества продуцирования слизи и необязательно означает полное прекращение продуцирования слизи. Введение композиции, имеющей слизь-ингибирующий эффект, приводит к уменьшению количества продуцирования слизи по сравнению с тем, какое могло бы наблюдаться или могло бы ожидаться в отсутствие такой композиции.

«Муцин-ингибирующее количество» композиции это количество, которое уменьшает или ингибирует секрецию муцина (т.е. высвобождение муцина) по сравнению с той, какая могла бы наблюдаться или могла бы ожидаться в отсутствие такой композиции, такое количество, которое уменьшает секрецию муцина примерно от 5% до примерно 100% от количества муцина, которое гиперсекретируется выше нормальных уровней.

«Слизь-ингибирующее количество» композиции - это такое количество, которое уменьшает или ингибирует продуцирование слизи по сравнению с тем, какое могло бы наблюдаться в отсутствие такой композиции.

В эталонном пептиде GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA (SEQ ID NO. 1) в N-концевом положении эталонного пептида G находится в положении 1; A в положении 2 прилегает к G в положении 1; Q в положении 3 прилегает к A в положении 2; F в положении 4 прилегает к Q в положении 3; S в положении 5 прилегает к F в положении 4; K в положении 6 прилегает к S в положении 5; T в положении 7 прилегает к K в положении 6; A в положении 8 прилегает к T в положении 7; A в положении 9 прилегает к A в положении 8; K в положении 10 прилегает к A в положении 9; G в положении 11 прилегает к K в положении 10; E в положении 12 прилегает к G в положении 11; A в положении 13 прилегает к E в положении 12; A в положении 14 прилегает к A в положении 13; A в положении 15 прилегает к A в положении 14; E в положении 16 прилегает к A в положении 15; R в положении 17 прилегает к E в положении 16; P в положении 18 прилегает к R в положении 17; G в положении 19 прилегает к P в положении 18; E в положении 20 прилегает к G в положении 19; A в положении 21 прилегает к E в положении 20; A в положении 22 прилегает к A в положении 21; V в положении 23 прилегает к A в положении 22; A в положении 24 прилегает к V в положении 23, в котором положение 24 это C-концевое положение эталонного пептида.

«Вариант» эталонного пептида или вариант 4-23 аминокислотного сегмента эталонного пептида представляет собой пептид, который имеет аминокислотную последовательность, которая отличается от аминокислотной последовательности эталонного пептида или от аминокислотной последовательности сегмента эталонного пептида, соответственно, по меньшей мере в одном положении аминокислоты эталонного пептида или аминокислотной последовательности сегмента эталонного пептида, соответственно, но который сохраняет муцин- или слизь-ингибирующую активность, которая обычно варьируется между 0,1- и 10-кратной активностью эталонного пептида или сегмента, соответственно, предпочтительно между 0,2- и 6-кратной активностью эталонного пептида или сегмента, соответственно, более предпочтительно между 0,3- и 5-кратной активностью эталонного пептида или сегмента, соответственно. «Вариант» эталонной аминокислотной последовательности или вариант 4-23 аминокислотного сегмента эталонной аминокислотной последовательности представляет собой аминокислотную последовательность, которая отличается по меньшей мере одной аминокислотой от эталонной аминокислотной последовательности или от сегмента эталонной аминокислотной последовательности, соответственно, но имеет аминокислотную последовательность пептида, который сохраняет муцин- или слизь-ингибирующую активность пептида или сегмента, соответственно, кодируемого эталонной аминокислотной последовательностью, активность которого обычно варьируется между 0,1- и 10-кратной активностью пептида или сегмента эталонной последовательности, соответственно, предпочтительно между 0,2- и 6-кратной активностью пептида или сегмента эталонной последовательности, соответственно, более предпочтительно между 0,3- и 5-кратной активностью пептида или сегмента эталонной последовательности, соответственно. Вариант пептида с заменами аминокислот или вариант аминокислотной последовательности с заменами аминокислот может варьироваться (т.е. отличаться) от эталонного пептида или эталонной аминокислотной последовательности одной или более аминокислотными заменами в эталонной аминокислотной последовательности; делеционный вариант пептида или делеционный вариант аминокислотной последовательности может варьироваться (т.е. отличаться) от эталонного пептида или эталонной аминокислотной последовательности одной или более аминокислотными делециями в эталонной аминокислотной последовательности; и вариант пептида со вставками аминокислот или вариант аминокислотной последовательности со вставками аминокислот может варьироваться (т.е. отличаться) от эталонной последовательности пептида или эталонной аминокислотной последовательности одной или более аминокислотными вставками в эталонную последовательность. Вариант пептида или вариант аминокислотной последовательности может получиться путем замены одной или более аминокислот (например, заменой, по меньшей мере, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 аминокислот) в эталонной последовательности, или может получиться путем делеции одной или более аминокислот (например, делеции, по меньшей мере, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 аминокислот) в эталонной последовательности, или может получиться путем вставки одной или более аминокислот (например, вставки, по меньшей мере, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 аминокислот) в эталонную последовательность, или путем их комбинации в любом порядке. Вариант 4-23 аминокислотного пептидного сегмента с заменами аминокислот или вариант 4-23 аминокислотной последовательности сегмента с заменами аминокислот может варьироваться (т.е. отличаться) от эталонного 4-23 аминокислотного пептидного сегмента или от эталонной 4-23 аминокислотной последовательности сегмента одной или более аминокислотными заменами в эталонной аминокислотной последовательности сегмента; делеционный вариант 4-23 аминокислотного пептидного сегмента или 4-22 аминокислотный делеционный вариант аминокислотной последовательности сегмента может варьироваться (т.е. отличаться) от 5-23 аминокислотного эталонного пептидного сегмента или 5-23 аминокислотной эталонной последовательности сегмента одной или более аминокислотными делециями в эталонной аминокислотной последовательности сегмента; и 4-23 аминокислотный вариант пептида со вставками аминокислот или 4-23 аминокислотный вариант аминокислотной последовательности со вставками аминокислот может варьироваться (т.е. отличаться) от 4-22 аминокислотной эталонной последовательности пептида или 4-22 аминокислотной эталонной аминокислотной последовательности одной или более аминокислотными вставками в эталонную последовательность. 4-23 аминокислотный вариант пептида или 4-23 аминокислотный вариант аминокислотной последовательности может получиться путем замены одной или более аминокислот (например, заменой, по меньшей мере, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 аминокислот) в 4-23 аминокислотном сегменте эталонной аминокислотной последовательности, или может получиться путем делеции одной или более аминокислот (например, делецией, по меньшей мере, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 аминокислот), соответственно, в большей эталонной аминокислотной последовательности, или может получиться путем вставки одной или более аминокислот (например, вставкой, по меньшей мере, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 аминокислот), соответственно, в меньшую эталонную последовательность или путем их комбинации. Предпочтительно вариант пептида или аминокислотной последовательности отличается от эталонного пептида или от сегмента эталонного пептида, или от эталонной аминокислотной последовательности, или от сегмента эталонной аминокислотной последовательности, соответственно, менее чем на 10 аминокислотных замен, делеций и/или вставок; более предпочтительно менее чем на 8 аминокислотных замен, делеций и/или вставок; даже еще более предпочтительно менее чем на 6 аминокислотных замен, делеций и/или вставок; и даже еще более предпочтительно менее чем на 5 аминокислотных замен, делеций и/или вставок; и даже еще более предпочтительно менее чем на 4 аминокислотных замены, делеции и/или вставки. Наиболее предпочтительно вариант аминокислотной последовательности отличается от эталонного пептида или сегмента аминокислотной последовательности одной или двумя, или тремя аминокислотами.

«Идентичность последовательности» по отношению к аминокислотным последовательностям двух пептидов означает количество положений с идентичными аминокислотами, деленное на количество аминокислот в более короткой из двух последовательностей.

«По существу идентичный» по отношению к сравнению аминокислотных последовательностей двух пептидов или сравнению аминокислотных последовательностей двух пептидных сегментов (например, сегментов эталонной пептидной аминокислотной последовательности) означает, что аминокислотная последовательность пептидов или сегментов пептидов имеет по меньшей мере 75% идентичности последовательности, предпочтительно по меньшей мере 80% идентичности последовательности, более предпочтительно по меньшей мере 90% идентичности последовательности и наиболее предпочтительно по меньшей мере 95% идентичности последовательности.

Термин «пептид», использованный здесь, включает пептид, а также фармацевтически приемлемые соли пептида.

«Выделенный» пептид, использованный здесь, означает природный пептид, который отделили или по существу отделили от клеточных компонентов (например, нуклеиновых кислот и других пептидов), которые естественно сопровождают его, путем очистки, рекомбинантным синтезом или химическим синтезом, а также охватывает не природные рекомбинантно или химически синтезированные пептиды, которые были очищены или по существу очищены от клеточных компонентов, биологических материалов, химических предшественников и других химических веществ.

Следующие трехбуквенные и однобуквенные сокращения аминокислот использованы по всему тексту: Аланин: (Ala) A; Аргинин: (Arg) R, Аспарагин: (Asn) N, Аспарагиновая кислота: (Asp) D, Цистеин: (Cys) C, Глутамин: (Gln) Q, Глутаминовая кислота: (Glu) E, Глицин: (Gly) G, Гистидин: (His) H, Изолейцин: (Ile) I, Лейцин: (Leu) L, Лизин: (Lys) K, Метионин: (Met) M, Фенилаланин: (Phe) F, Пролин: (Pro) P, Серин: (Ser) S, Треонин: (Thr) T, Триптофан: (Trp) W, Тирозин: (Tyr) Y, Валин: (Val) V. Дополнительные трехбуквенные символы аминокислот, применяемые здесь, включают в скобках (Hyp) для гидроксипролина, (Nle) для норлейцина, (Orn) для орнитина, (Pyr) для пироглутаминовой кислоты и (Sar) для саркозина. Условно амино (или N-концевой) конец пептида находится на левом конце написанной аминокислотной последовательности пептида и карбоксильный (или C-концевой) конец находится на правом конце написанной аминокислотной последовательности. Аминокислотная последовательность пептида может быть написана однобуквенными символами, чтобы представить аминокислоты, которые ковалентно связаны в пептиде пептидными амидными связями.

Таблица IХ содержит список аминокислотных последовательностей в формате однобуквенных сокращений соответственно вместе с соответствующим пептидным номером и SEQ ID NO. Эталонная аминокислотная последовательность пептида внесена в список как пептид 1. Аминокислотные последовательности пептидов изобретения, имеющие аминокислотную последовательность от 4 до 23 последовательно расположенных аминокислот из эталонной аминокислотной последовательности, внесены в список как пептиды 2-231 вместе с аминокислотной последовательностью случайной N-концевой последовательности (RNS), включающей аминокислоты MANS пептида, обозначенной как пептид 232. Аминокислотные последовательности иллюстративных вариантов аминокислотных последовательностей пептидов изобретения, как описано здесь, также внесены в список как пептиды 233-245 и 247-251. Подразумевается, что эти внесенные в список варианты пептидов не являются лимитирующей группой пептидов, а представлены только, чтобы служить в качестве иллюстративных примеров вариантов пептидов изобретения. Также представлены иллюстративная обратная аминокислотная последовательность и иллюстративная случайная аминокислотная последовательность пептида по изобретению. Подразумевается, что представленные в таблице обратные и случайные аминокислотные последовательности не являются иллюстративными согласно изобретению.

Аминокислотная последовательность пептида, внесенного в список Таблицы IX, может быть химически модифицирована. Например, если аминокислотную последовательность пептида, внесенного в список Таблицы IX, химически модифицируют по N-концевой аминогруппе с образованием амида карбоновой кислоты, то полученный пептид иногда обозначают здесь комбинацией идентификатора карбоновой кислоты, представленного приставкой, которая связана дефисом с пептидным номером. Например, в отношении пептида 79 в качестве примера, N-концевой миристоилированный пептид 79 могут иногда здесь обозначать как «миристоилированный пептид 79» или «myr-пептид 79», N-концевой ацетилированный пептид 79 могут иногда здесь обозначать как «ацетил-пептид 79» или «Ac-пептид 79». Циклический вариант пептида 79 может быть обозначен как «циклический пептид 79» или «cyc-пептид 79». Также, например, если аминокислотную последовательность пептида, внесенного в список Таблицы IX, химически модифицируют по C-концевой карбоксильной группе, например, с помощью амина, такого как аммиак, с образованием C-концевого амида, то полученный пептид иногда обозначают здесь комбинацией идентификатора остатка амина, представленного суффиксом, который связан дефисом с номером пептида. Таким образом, например, C-концевой амид пептида 79 могут иногда обозначать как «пептид-NH₂». Когда N-концевую аминогруппу пептида (например, пептида 79) химически модифицируют, например, миристоильной группой, а также C-концевую карбоксильную группу химически модифицируют, например, аммонийной группой, с образованием амида, как описано выше, то полученный пептид могут иногда обозначать, используя условные обозначения и приставки, и суффикса, как например «myr-пептид 79-NH₂».

Изобретение включает пептиды, имеющие аминокислотные последовательности, включающие менее чем 24 аминокислоты с аминокислотными последовательностями, родственными аминокислотной последовательности MANS пептида (т.е. MANS пептид представляет собой миристоил-ПЕПТИД 1 и эталонная 24-аминокислотная последовательность MANS пептида представляет собой ПЕПТИД 1). Пептиды данного изобретения состоят из аминокислотных последовательностей, содержащих менее чем 24 аминокислоты, и могут состоять из: 8-14, 10-12, 9-14, 9-13, 10-13, 10-14, по меньшей мере, из 9, по меньшей мере, из 10, или из подобного количества аминокислот. Пептиды обычно представляют собой неразветвленные цепи, но также могут быть и циклическими пептидами. Кроме того, пептиды могут быть выделенными пептидами.

В отношении ПЕПТИДА 1, эталонной 24 аминокислотной последовательности, сегмент из 23 последовательно расположенных аминокислот эталонной аминокислотной последовательности иногда обозначают здесь как 23-мер. Аналогично, сегмент из 22 последовательно расположенных аминокислот эталонной последовательности иногда обозначают здесь как 22-мер; последовательность из 21 аминокислоты как 21-мер; последовательность из 20 аминокислот как 20-мер; последовательность из 19 аминокислот как 19-мер; последовательность из 18 аминокислот как 18-мер; последовательность из 17 аминокислот как 17-мер; последовательность из 16 аминокислот как 16-мер; последовательность из 15 аминокислот как 15-мер; последовательность из 14 аминокислот как 14-мер; последовательность из 13 аминокислот как 13-мер; последовательность из 12 аминокислот как 12-мер; последовательность из 11 аминокислот как 11-мер; последовательность из 10 аминокислот как 10-мер; последовательность из 9 аминокислот как 9-мер; последовательность из 8 аминокислот как 8-мер; последовательность из 7 аминокислот как 7-мер; последовательность из 6 аминокислот как 6-мер; последовательность из 5 аминокислот как 5-мер; и последовательность из 4 аминокислот как 4-мер. В одном аспекте любая из этих аминокислотных последовательностей, обозначенных «4-мер-23-мер», которые сами являются пептидами (иногда отмечены здесь как H₂N-пептид-COOH), может быть независимо химически модифицирована, например, химической модификацией, причем химическая модификация может быть выбрана из группы, состоящей из: (i) образования амида на N-концевой аминогруппе (H₂N-пептид-), такого как, например, с С1 или предпочтительно с С2 (уксусной кислотой) и до С22 карбоновой кислотой; (ii) образования амида на С-концевой карбоксильной группе (-пептид-СООН), такого как, например, с аммиаком или с С1-С22 первичным или вторичным амином; и (iii) их комбинации.

Пептиды имеют аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из: (a) аминокислотной последовательности, имеющей от 4 до 23 последовательно расположенных аминокислот эталонной последовательности ПЕПТИД 1; (b) последовательности, по существу подобной аминокислотной последовательности, определенной в (a); и (c) варианта аминокислотной последовательности, определенной в (a), причем вариант выбран из группы, состоящей из варианта с заменами аминокислот, делеционного варианта, варианта со вставками аминокислот и их комбинации. В некоторых воплощениях пептиды имеют аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из: (a) аминокислотной последовательности, имеющей от 8 до 14 последовательно расположенных аминокислот эталонной последовательности ПЕПТИД 1; (b) аминокислотной последовательности, по существу идентичной последовательности, определенной в (a); и (c) варианта аминокислотной последовательности, определенной в (a), причем вариант выбран из группы, состоящей из варианта с заменами аминокислот, делеционного варианта, варианта со вставками аминокислот и их комбинации. В еще одном воплощении пептиды имеют аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из: (a) аминокислотной последовательности, имеющей от 10 до 12 последовательно расположенных аминокислот эталонной последовательности ПЕПТИД 1; (b) аминокислотной последовательности, по существу идентичной последовательности, определенной в (a); и (c) варианта аминокислотной последовательности, определенной в (a), причем вариант выбран из группы, состоящей из варианта с заменами аминокислот, делеционного варианта, варианта со вставками аминокислот и их комбинации. В дальнейших воплощениях пептиды имеют аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере, 9, по меньшей мере, 10, 9-14, 9-13, 10-13, 10-14 или подобное количество последовательно расположенных аминокислот эталонной последовательности ПЕПТИД 1; аминокислотную последовательность, по существу им идентичную; или их вариант, причем вариант выбран из группы, состоящей из варианта с заменами аминокислот, делеционного варианта, варианта со вставками аминокислот и их комбинации. Как объяснено в дальнейшем ниже, одна или более аминокислот пептидов (например, N-концевые и/или C-концевые аминокислоты) могут быть необязательно независимо химически модифицированы; в некоторых воплощениях одна или более аминокислот пептида будут химически модифицированы, тогда как в других воплощениях ни одна из аминокислот пептида не будет химически модифицирована. В одном аспекте предпочтительная модификация может встречаться в амино (H₂N-) группе N-концевой аминокислоты пептида или пептидного сегмента (причем аминогруппа образует пептидную амидную связь, если присутствует внутри пептидной последовательности, а не в N-концевом положении). В другом аспекте предпочтительная модификация может встречаться в карбоксильной (-COOH) группе C-концевой аминокислоты пептида или пептидного сегмента (причем карбоксильная группа образует пептидную амидную связь, если присутствует внутри пептидной последовательности, а не в С-концевом положении). В другом аспекте предпочтительная модификация может встречаться как в N-концевой амино (H₂N-) группе, так и в С-концевой карбоксильной (-COOH) группе.

В некоторых воплощениях аминокислотная последовательность пептида начинается с N-концевой аминокислоты эталонной последовательности ПЕПТИД 1. Например, пептиды могут иметь аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из: (a) аминокислотной последовательности, имеющей от 4 до 23 последовательно расположенных аминокислот эталонной последовательности ПЕПТИД 1, которая начинается с N-концевой аминокислоты эталонной последовательности (т.е. ПЕПТИД 2, ПЕПТИД 4, ПЕПТИД 7, ПЕПТИД 11, ПЕПТИД 16, ПЕПТИД 22, ПЕПТИД 29, ПЕПТИД 37, ПЕПТИД 46, ПЕПТИД 56, ПЕПТИД 67, ПЕПТИД 79, ПЕПТИД 92, ПЕПТИД 106, ПЕПТИД 121, ПЕПТИД 137, ПЕПТИД 154, ПЕПТИД 172, ПЕПТИД 191 или ПЕПТИД 211); (b) аминокислотной последовательности, по существу подобной аминокислотной последовательности, определенной в (a); и (c) варианта аминокислотной последовательности, определенной в (a).

В других воплощениях аминокислотная последовательность пептида заканчивается С-концевой аминокислотой эталонной последовательности ПЕПТИД 1. Например, пептиды могут иметь аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из: (a) аминокислотной после