Сополимеры 2-метил-5-винилпиридина и n-винилпирролидона, активирующие продуцирование интерлейкина-1, и их применение в качестве противораковых агентов

Сополимеры 2-метил-5-винилпиридина и n-винилпирролидона, активирующие продуцирование интерлейкина-1, и их применение в качестве противораковых агентов

Реферат

Область техники

Изобретение относится к области химии биологически активных полимеров. Более конкретно, изобретение относится к сополимеру на основе N-винилпирролидона, представленному общей формулой (I):

где мономерное звено М представляет фрагмент 2-метил-5-винилтетразола (МВТ) или 2-метил-5-винилпиридина (МВП):

и содержание мономерных звеньев n составляет 25-50 мольн.%, а средневязкостная молекулярная масса М_µ сополимера зависит от природы М: если М представляет МВТ, то М_µ=30-50 кДа; если М представляет МВП, то М_µ=15-28 кДа, а также к смесям таких сополимеров. Сополимер в соответствии с настоящим изобретением, а также смесь таких сополимеров способны активировать продуцирование интерлейкина-1, что может быть полезно в случае применения заявленных соединений в качестве противораковых агентов.

Уровень техники

В авторском свидетельстве СССР 1578143 (C08F 226/10, А61К 31/785, опубл. 15.07.1990) описан сополимер N-винилпирролидона и 5-изопропенил-тетразола с молекулярной массой, определенной методом светорассеяния, равной 85 кДа, в котором содержание 5-изо-пропенилтетразольных звеньев составляет 0,40-0,74 мольн. доли, обладающий свойствами иммуноадъюванта поверхностного антигена вирусного гепатита В.

В патенте РФ 2000004 (C08F 226/10, А61К 31/79, опубл 15.02.1993) раскрыт способ получения и свойства сополимеров N-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина со средневязкостной молекулярной массой в диапазоне 30-45 кДа, содержащих 25-40 мольн.% 2-метил-5-винилпиридиновых звеньев. У этих сополимеров выявлена иммуностимулирующая активность, а также показано их лечебно-профилактическое и пролонгирующее действие при классической чуме свиней и сибирской язве в комплексе с антибиотиками фторхинолонового ряда и химиопрепаратами.

В патенте РФ 2015993 (C08F 226/10, А61К 31/79, опубл. 15.07.1994) описаны сополимеры N-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина, содержащие 35 мольн.% 2-метил-5-винилпиридиновых звеньев, со средневязкостной молекулярной массой приблизительно 40 кДа. Для этих сополимеров описано противоопухолевое действие на животных моделях (крысы, мыши) в отношении различных сарком (саркома Иенсена, саркома М-1, саркома-45) и аденокарциномы толстого кишечника. В ходе исследований in vivo, включающих перевивку солидной опухоли под кожу левой подмышечной впадины животного, было установлено, что сополимеры со средневязкостной молекулярной массой около 40 кДа проявляют довольно высокую активность только в отношении саркомы Иенсена (торможение роста опухоли 76%). Таким образом, спектр противоопухолевой активности известных аналогов весьма ограничен.

Указанные сополимеры получают радикальной сополимеризацией N-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина в присутствии динитрила азобис-изомасляной кислоты в качестве инициатора сополимеризации, пероксида водорода и циклогексана в качестве регулятора молекулярной массы, а целевой продукт выделяют осаждением в диэтиловый эфир.

Целью данного изобретения является преодоление недостатнов существующего уровня техники с целью расширения арсенала биологически активных соединений на основе сополимеров N-винилпирролидона, пригодных в качестве активаторов продуцирования интерлейкина-1 и противораковых агентов.

Описание изобретения

В соответствии с первым воплощением данного изобретения получают сополимер формулы (I), в котором мономерное звено М представляет МВТ. Для этого проводят радикальную сополимеризацию N-винилпирролидона (N-ВП) и 2-метил-5-винилтетразола (2-М-5-ВТ) в присутствии динитрила азобис-изомасляной кислоты (ДАК) в качестве инициатора сополимеризации в индифферентном растворителе, таком как диметилформамид (ДМФА) с последующим выделением продукта диэтиловым эфиром (ДЭ) или смесью бутилацетата (БА) и циклогексана (ЦГ).

Ввиду большого различия в константах сополимеризации N-ВП и 2-М-5-ВТ, последний быстро расходуется в процессе сополимеризации, поэтому синтез сополимера заданного состава обеспечивается поддержанием постоянного соотношения N-ВП и 2-М-5-ВТ путем компенсации расхода мономеров подпиточной смесью.

Исходная смесь содержит 40-55 масс.% N-ВП, 2-15 масс.% 2-М-5-ВТ, 0,6-1% ДАК и 29-57 масс.% ДМФА. Подпиточная смесь содержит 12-15 масс.% N-ВП, 8-25 масс.% 2-М-5-ВТ и 60-80 масс.% ДМФА. Объем подпиточной смеси вычисляют каждые 15-20 минут по результатам анализа соотношения концентраций мономеров в реакционной смеси. Экспрессность анализа достигается за счет применения автоматизированного анализатора (АА), в качестве которого может быть использован, например, высокоэффективный жидкостный хроматограф.

В одном варианте изобретения подпиточную смесь готовит и добавляет оператор (аппаратчик), основываясь на данных анализа и регламента синтеза. В другом варианте добавление подпиточной смеси осуществляется автоматически с помощью системы контроля и управления синтезом. Такая система объединяет АА, управляющее устройство и исполнительные устройства. В качестве управляющего устройства может быть использована ЭВМ, реализующая алгоритм управления синтезом, построенный на основе математической модели процесса. В качестве исполнительных устройств могут быть использованы управляемые запорные устройства, например, клапаны с пневматическим или электромеханическим приводом.

Реакцию сополимеризации проводят при температуре 60-70°С. По достижении степени конверсии по мономерам около 20% реакционную массу охлаждают до 20°С и осаждают в диэтиловый эфир.

В соответствии со вторым воплощением данного изобретения сополимер формулы (I) на стадии выделения подвергают фракционированию осаждением диэтиловым эфиром из реакционной массы, дополнительно разбавленной ДМФА после окончания полимеразации. Для этого в реакционную массу последовательно добавляют объемы ДЭ таким образом, что каждый последующий объем в 2…3,5 раза превосходит предыдущий. Последнюю фракцию выделяют выпариванием раствора, оставшегося после осаждения всех предшествующих фракций. Таким образом, можно получить от 2 до 5 фракций сополимера, имеющих более узкое распределение средневязкостных молекулярных масс.

Строение полученного продукта характеризуется, в частности, числом мономерных звеньев МВТ (n). В одном варианте изобретения его вычисляют по данным элементного анализа с учетом стехиометрии сополимера. Получение необходимых для этого расчетных формул доступно среднему специалисту в данной области. В другом варианте изобретения строение полученного продукта определяют по данным ЯМР-спектрометрии, например ¹H-, ¹³С- или ¹⁵N-ЯМР, по соотношениям интегральных интенсивностей сигналов определенных ядер. Решение данной задачи также доступно среднему специалисту в данной области.

Полученный сополимер характеризуется средневязкостной молекулярной массой, которую вычисляют по характеристической вязкости сополимеров. Выбор методики и подбор условий измерения вязкости является рутинной процедурой, доступной среднему специалисту в данной области. В одном варианте изобретения характеристическую вязкость определяют в растворителе, состоящем из 85 об.% ДМФА и 15 об.% 0,1М водного раствора LiBr.

В соответствии с третьим воплощением данного изобретения получают сополимер формулы (I), в котором мономерное звено M представляет МВП. Для этого проводят радикальную сополимеризацию N-винилпирролидона (N-ВП) и 2-метил-5-винилпиридина (2-М-5-ВТ) в присутствии динитрила азобис-изомасляной кислоты (ДАК) в качестве инициатора сополимеризации, пероксида водорода и циклогексана в качестве регулятора молекулярной массы. Продукт выделяют осаждением в диэтиловый эфир (ДЭ).

Постоянство соотношения N-ВП и 2-М-5-ВП обеспечивают, компенсируя расход мономеров подпиточной смесью. Исходная смесь содержит 76,5-89,5 масс.% N-ВП, 1,5-10 масс.% 2-М-5-ВП, 0,1-0,5 масс.% пероксида водорода, 8-10 масс.% циклогексана и 1-3 масс.% ДАК. Подпиточная смесь содержит 68-79 масс.% N-ВП и 19-28 масс.% 2-М-5-ВП, 0,1-0,3 масс.% пероксида водорода и 2-4 масс.% ДАК. Объем подпиточной смеси вычисляют каждые 15-20 минут по результатам анализа соотношения концентраций мономеров в реакционной смеси. Реакцию сополимеризации проводят при температуре 65-70°С. По достижении степени конверсии по мономерам около 20% реакционную массу охлаждают до 20°С и осаждают в диэтиловый эфир. Для проведения реакции и исследований, необходимых для контроля ее протекания, а также для определения физико-химических характеристик продукта, применяют средства и методы, описанные выше для первого воплощения изобретения.

Сополимер в соответствии с любым из воплощений настоящего изобретения является нетоксичным. В качестве признаков токсического воздействия сополимера на подопытных животных могут рассматриваться, например, гибель, снижение массы тела, изменения походки и поведения, цвета мочи, консистенции экскрементов, состояния глаз и ушей, выпадение зубов и шерсти, а также раздражение и шелушение кожи.

В соответствии со следующим воплощением настоящего изобретения предлагается применение сополимеров в качестве активаторов продуцирования интерлейкина-1. Среди белков семейства ИЛ-1 главным эндогенным медиатором защитных реакций организма служит интерлейкин-1β (ИЛ-1β). В частности, различные типы клеток синтезируют и секретируют ИЛ-1β в ответ на повреждение тканей, например, под воздействием ионизирующих излучений, тогда как ИЛ-1α существует, в основном, в виде мембранной формы. Одно из главных свойств обоих типов ИЛ-1 заключается в способности стимулировать функциональную активность многих типов лейкоцитов и лимфоцитов в ходе развития иммунного ответа на воспаление и пролиферацию злокачественных клеток. Кроме того, ИЛ-1 стимулирует костномозговое кроветворение и воздействует на функции фибробластов и эндотелиальных клеток.

Благодаря своим свойствам рекомбинантный ИЛ-1β человека находит применение в клинической практике. Например, медицинский препарат «Беталейкин» разрешен к медицинскому применению в РФ (Приказ Минздрава РФ №51 от 18.02.1997 г.б рег. №97/51/6) в качестве иммуностимулятора и как средство восстановления костномозгового кроветворения у раковых больных после интенсивных курсов химио- и радиотерапии. Его применение ведет к значительному сокращению сроков нейтропении, снижению частоты суперинфекций и увеличению выживаемости, что подтверждается результатами сравнений с данными медицинской статистики за предшествующие десятилетия. Кроме того, «Беталейкин» используется как гемостимулирующее средство при пересадках костного мозга.

Таким образом, сополимеры настоящего изобретения могут найти применение в качестве агентов, повышающих терапевтическую эффективность обеих форм интерлейкина-1 при лечении онкологических заболеваний, особенно с применением лучевой терапии, а также как средства, улучшающие общее состояние больного, за счет восстановления показателей гемопоэза. К указанным онкологическим заболеваниям относятся, в первую очередь, злокачественные поражения печени, почек, мочевого пузыря, костного мозга и молочной железы.

Одной из моделей, позволяющих получить прогностически важную информацию об эффективности препарата, является модель подострого радиационного поражения α-излучающим изотопом ²³⁹Pu. Исследования в рамках данной модели можно проводить на различных животных, например, на белых мышах или беспородных белых крысах. Указанный изотоп при внутривенном или внутрибрюшинном введении накапливается в печени (до 40% от введенного количества), скелете (до 30%), в почках и молочных железах (до 15%). Подострая форма поражения наступает при введении растворимых солей ²³⁹Pu в количестве, соответствующем удельной активности от 400 до 510 кБк/кг (LD_50\260 составляет 410 кБк/кг).

Авторы настоящего изобретения провели интенсивные исследования и установили, что смертность самок беспородных белых крыс, получивших 407 кБк/кг нитрата ²³⁹Pu внутрибрюшинно, от онкологических заболеваний на момент времени 420 суток после введения снижается в 2,5-3 раза при внутримышечном введении сополимеров в соответствии с настоящим изобретением по следующей схеме: первый месяц - 0,5 мл 1 раз в неделю, второй месяц - 0,5 мл 1 раз в 2 недели, третий месяц - 0,5 мл 1 раз в 4 недели. Также были исследованы показатели периферической крови (количество лейкоцитов, эритроцитов, уровень гемоглобина) и содержание белка в моче. Полученные данные статистически достоверно свидетельствуют о терапевтической эффективности предлагаемых сополимеров.

Для выяснения наиболее вероятного механизма действия сополимеров в соответствии с настоящим изобретением на раковые клетки были проведены дополнительные иммунологические исследования. Авторами было установлено, что предложенные сополимеры активируют продуцирование обеих форм интерлейкина-1, но при этом не оказывают существенного влияния на продуцирование интерлейкина-2 и фактора некроза опухоли-альфа. Таким образом, предполагается, что предложенные сополимеры опосредованно препятствуют пролиферации раковых клеток, задействуя, в частности, механизм фагоцитоза. Кроме того, сополимеры в соответствии с настоящим изобретением могут быть полезны в комбинированной терапии в сочетании с другими соединениями, повышающими продуцирование ИЛ-1, а также с лекарственными формами самого ИЛ-1.

Кроме того, авторы настоящего изобретения провели сравнительное исследование противораковой активности соединений в соответствии с данным изобретением и соединений, раскрытых в описании изобретения к патенту РФ 2015993, по методике испытания, приведенной в указанном патенте, и установили, что предлагаемые соединения более активны против саркомы М-1, саркомы 45, карциносаркомы Уокера и аденокарциномы толстого кишечника (АКАТОЛ). Результаты исследований торможения роста опухолей приведены в таблице 1.

Таблица 1
Тип саркомы Процент торможения роста опухоли
	В соотв. с. пат. РФ 2015993	Продигиозан	Соединения настоящего изобретения
Саркома М-1	40	52	76
Саркома 45	54	50	81
Карциносаркома Уокера	47	33	78
Аденокарцинома толстого кишечника (АКАТОЛ)	50	-	65

Далее приведены иллюстративные примеры осуществления изобретения, способствующие более точному и полному пониманию его сути. Специалисту в данной области очевидны возможные модификации и замены, например, относящиеся к протоколам исследований, которые не выходят за рамки объема изобретения, определяемые его формулой.

Пример 1. Получение сополимера N-винилпирролидона и 2-метил-5-винилтетразола с выделением продукта диэтиловым эфиром

В реактор загружают исходную реакционную смесь, содержащую 13,24 г N-ВП (51,2%), 0,625 г 2-М-5-ВТ (2,4%), 12,5 мл (11,8 г) ДМФА (45,6%) и 0,2 г ДАК(0,8%). Реакционную массу нагревает до 65-70°С и ведут синтез при данной температуре, периодически отбирая пробы для хроматографического анализа (ВЭЖХ, Сферисорб С-18, 5 мкм, 4,6×250 мм, EtOH/H₂O 6:94, 2,5 мл/мин (50°С), 254 нм) и подавая подпиточную смесь, содержащую 1,2 мл N-ВП (12%), 0,8 мл 2-М-5-ВТ (8%), 8,0 мл ДМФА (80%). По достижении степени конверсии по мономерам 20% реакционную массу охлаждают до 20°С и осаждают в 300 мл диэтилового эфира. Целевой продукт выделяют фильтрацией и сушат: сначала при атмосферном давлении при 40-60°С, а затем - в вакуумном сушильном шкафу при 80-90°С. Получают 1,26 г аморфного порошка белого цвета, растворимого в воде, с содержанием звеньев МВТ 48 мольн.%.

Пример 2. Получение сополимера N-винилпирролидона и 2-метил-5-винилтетразола с последующим фракционированием осаждением

В реактор загружают исходную реакционную смесь, содержащую 13,24 г N-ВП (51,2%), 0,625 г 2-М-5-ВТ (2/4%), 12,5 мл (11,8 г) ДМФА (45,6%) и 0,2 г ДАК (0,8%). Реакционную массу нагревают до 65-70°С и ведут синтез при данной температуре, периодически отбирая пробы для хроматографического анализа (ВЭЖХ, Сферисорб С-18, 5 мкм, 4,6×250 мм, EtOH/H₂O 6:94, 2,5 мл/мин (50°С), 254 нм) и подавая подпиточную смесь, содержащую 1,2 мл N-ВП (12%), 0,8 мл 2-М-5-ВТ (8%), 8,0 мл ДМФА (80%). По достижении степени конверсии по мономерам 20% реакционную массу охлаждают до 20°С и добавляют 1450 мл (1370 г) ДМФА. В полученный раствор добавляют 15 мл диэтилового эфира в качестве осадителя, оставляют на 4 часа в закрытой емкости для формирования осадка. Осадок отделяют декантацией, промывают на фильтре минимальным объемом диэтилового эфира и сушат: сначала при атмосферном давлении при 40-60°С, а затем - в вакуумном сушильном шкафу при 80-90°С. В оставшийся раствор продукта синтеза в ДМФА добавляют следующую порцию (35 мл) диэтилового эфира и повторяют операции фильтрования и сушки. Цикл осаждения повторяют еще раз, добавляя 100 мл диэтилового эфира, с последующими фильтрованием и сушкой. Последнюю фракцию получают испарением жидкости. Получают четыре порции аморфного порошка белого цвета, растворимого в воде, с содержанием звеньев МВТ в диапазоне 40-50 мольн.%. Средневязкостная масса приблизительно составляет: для первой фракции продукта - от 47 до 52 кДа, для второй фракции - от 42 до 48 кДа, для третьей фракции - от 37 до 46 кДа, для четвертой фракции - от 29 до 39 кДа.

Пример 3. Получение сополимера N-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина с выделением продукта диэтиловым эфиром

В реактор загружают исходную реакционную смесь, содержащую 3,00 кг (2,88 л) N-ВП (85,94%), 50,4 г (52,8 мл) 2-М-5-ВП (1,44%), 4,70 г (5,04 мл) 30% водного раствора пероксида водорода (0,13%), 327,6 г (420 мл) циклогексана (9,39%) и 108 г ДАК (3,10%). Реакционную массу нагревают до 65-70°С и ведут синтез при данной температуре, периодически отбирая пробы для хроматографического анализа (ВЭЖХ, Сферисорб С-18, 5 мкм, 4,6×250 мм, EtOH/H₂O 6:94, 2,5 мл/мин (50°С), 254 нм) и подавая подпиточную смесь, содержащую 450 г (433 мл) N-ВП (69,7%), 172 г (164 мл) 2-М-5-ВП (26,6%), 1,54 г (1,4 мл) 30% водного раствора пероксида водорода (0,2%) и 22,5 г ДАК (3,5%). По достижении степени конверсии по мономерам 20% реакционную массу охлаждают до 20°С и осаждают в 65 л диэтилового эфира. Целевой продукт промывают на фильтре 2 л ДЭ, выделяют фильтрацией и сушат: сначала при атмосферном давлении при 40-60°С, а затем - в вакуумном сушильном шкафу при 80-90°С. Получают 490 г аморфного порошка белого цвета, растворимого в воде, с содержанием звеньев МВП 25 мольн.%. Средневязкостная масса приблизительно составляет: для первой фракции продукта - от 15 до 19 кДа, для второй фракции - от 20 до 24 кДа, для третьей фракции - от 25 до 28 кДа.

Пример 4. Исследование острой токсичности сополимеров in vivo

Исследование проводят в группе из 5 здоровых беспородных белых мышей массой 18-20 г. Соединение, полученное в соответствии с каждым из примеров, растворяют в стерильном изотоническом растворе NaCl из расчета 10 масс.% и вводят каждому животному 0,4 мл этого раствора. Соединение считают выдержавшим испытание, если через 7 суток наблюдения в группе не погибло ни одно животное. В данном исследовании гибели животных не отмечено.

Пример 5. Исследование противораковой активности сополимеров в соответствии с изобретением.

Самок беспородных белых крыс с массой тела 250-300 г разделили на 6 групп по 50 крыс в каждой группе. Животным первой группы по схеме вводили изотонический раствор (негативный контроль), вторая группа получала по схеме сополимеры в соответствии с настоящим изобретением внутримышечно, третья группа получала по схеме сополимеры перорально. Животным четвертой группы по схеме вводили изотонический раствор после введения дозы нитрата плутония-239, достаточной для индуцирования подострого поражения (407 кБк/кг, позитивный контроль). Крысам пятой группы была введена такая же доза нитрата плутония-239, после чего они получали по схеме сополимеры в соответствии с настоящим изобретением внутримышечно. Крысам шестой группы, также получившим нитрат плутония-239 в дозе, соответствующей 407 кБк/кг, по схеме вводили сополимеры в соответствии с настоящим изобретением перорально. Схема введения сополимеров: первый месяц - 0,5 мл 1 раз в неделю, второй месяц - 0,5 мл 1 раз в 2 недели, третий месяц - 0,5 мл 1 раз в 4 недели.

Через 420 суток после начала исследования в группе негативного контроля (группа 1) осталось 26 крыс (смертность: 13%). В группах 2 и 3 осталось 27 и 28 крыс соответственно (смертность: 10 и 7%). В группе позитивного контроля выжило 2 крысы (смертность: 93%), тогда как в группах 4 и 5, получавших сополимеры внутримышечно и перорально, выжило по 5 крыс (смертность: 83%).

Показатели периферической крови по группам крыс приведены в таблице 2 [(МВП) - сополимер 2-метил-5-винилпиридина; (МВТ) - сополимер 2-метил-5-винилтетразола].

Таблица 2
Общий анализ крови крыс различных групп через 430 суток после начала исследования
№	Тип воздействия	Лейкоциты, тыс./мм3	Эритроциты, млн./мм3	Гемоглобин
1	Негативный контроль	8,8±1,0	4,736	181
2	Сополимеры внутримышечно	(МВП): 7,7±0,7	(МВП): 4,508	(МВП): 174
(МВТ): 8,5±0,8	(МВТ): 4,817	(МВТ): 169
3	Сополимеры перорально	(МВП): 8,9±1,3	(МВП): 4,604	(МВП): 178
(МВТ): 9,7±1,4	(МВТ):4,902	(МВТ): 173
4	Позитивный контроль	22,6±3,2	5,130	159
5	239Pu + сополимеры внутримышечно	(МВП): 15/2±2,2	(МВП): 4,863	(МВП): 164
(МВТ): 16,7±2,1	(МВТ): 5,011	(МВТ): 161
6	239Pu + сополимеры перорально	(МВП): 10,5±2,0	(МВП): 4,786	(МВП): 173
(МВТ): 11,3±2,1	(МВТ): 5,032	(МВТ): 167

Таким образом, пероральное введение сополимеров в соответствии с настоящим изобретением, способствует улучшению состояния подопытных животных по показателям общего анализа крови (существенно менее выраженная лейкопения, снижение содержания эритроцитов, повышение уровня гемоглобина).

Уровень белка в моче, характеризующий почечную функцию, спустя 210 суток (7 месяцев) после начала исследования значимо не отличается от показателя для негативного контроля, но был в 1,5 раза меньше, чем в случае позитивного контроля (таблица 3). На более поздних стадиях четкой закономерности не прослеживается. Причиной тому может служить существенное уменьшение числа животных в группах 4-6.

Таблица 3
Содержание белка в моче крыс в различные моменты времени после начала исследования
[(МВП) - сополимер 2-метил-5-винилпиридина;
(МВТ) - сополимер 2-метил-5-винилтетразола]
№	Тип воздействия	Срок наблюдения
7 месяцев	8 месяцев	14 месяцев
1	Негативный контроль	20,5±4,2	18,5±3,5	20,5±4,1
2	Сополимеры внутримышечно	(МВП): 20,3±5,4	(МВП): 29,1±2,3	(МВП): 25,9±5,0
(МВТ): 20,6±5,3	(МВТ): 31,3±4,9	(МВТ): 26,1±5,1
3	Сополимеры перорально	(МВП): 20,5±3,3	(МВП): 19,4±3,7	(МВП): 21,1±3,9
(МВТ): 20,7±5,3	(МВТ): 20,1±4,4	(МВТ): 21,3±4,1
4	Позитивный контроль	32,0±5,7	24,0±3,9	29,2±3,1
5	239Pu + сополимеры внутримышечно	(МВП): 21,2±3,8	(МВП): 31,2±3,2	(МВП): 25,6±1,3
(МВТ): 21,3±4,2	(МВТ): 30,7±3,4	(МВТ): 26,1±1,5
6	239Pu + сополимеры перорально	(МВП): 18,2±3,0	(МВП): 20,2±5,1	(МВП): 21,7±3,4
(МВТ): 18,7±3,1	(МВТ): 20,6±5,2	(МВТ): 22,3±4,4

Результаты некропсии крыс, умерших до момента окончания исследования, а также животных, умерщвленных по окончании исследования, показывают, что опухоль в подмышечной впадине в группах 5 и 6, в среднем, имеет объем в 2-3 раза меньший, чем в группе позитивного контроля. Злокачественные изменения печени и/или почек в этих группах также зарегистрированы в 2-3 раза реже по сравнению с группой позитивного контроля.

В результате проведенных исследований констатируется, что введение сополимеров в соответствии с настоящим изобретением оказывает статистически значимое подавляющее действие на развитие злокачественных опухолей в печени и почках подопытных животных, а также улучшает общие показатели анализа крови.

Пример 6. Исследование сополимеров в соответствии с изобретением в качестве активаторов продуцирования интерлейкина-1

Эффективность сополимеров 2-метил-5-винилпиридина (МВП) и 2-метил-5-винилтетразола (МВТ) в качестве активаторов продуцирования интерлейкина-1, определенная в соответствии с требованиями Руководства по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ (Минздрав РФ, 2000, с.257-260), подтверждается данными, приведенными ниже (таблица 4).

Таблица 4
Уровни интерлейкина-1-альфа и интерлейкина-1-бета в крови крыс
		Уровень интерлейкина (у.е.) при конц. сополимера:
Сополимер	Интерлейкин	Норма (0)	0,01 мкг/мл	0,1 мкг/мл	1 мкг/мл	10 мкг/мл	100 мкг/мл	1000 мкг/мл
МВП	IL-1α	2,1±1,1	2,2±1,0	5,1±2,2	5,3±2,4	3,7±1,9	3,1±1,5	2,3±1,0
IL-1β	2,7±1,3	3,1±2,1	3,3±2,4	3,8±1,8	2,7±1,7	2,3±1,5	2,1±0,9
МВТ	IL-1α	2,1±1,1	2,0±1,0	4,3±1,7	4,6±1,8	3,1±1,6	2,9±±1,3	2,2±1,0
IL-1β	2,7±1,3	2,9±1,7	3,1±2,3	2,8±1,4	2,5±1,3	2,2±1,2	2,0±1,0

Оба сополимера при введении крысам в концентрациях от 0,01 до 10 мкг/мл крови достоверно повышают продуцирование интерлейкина-1-альфа и интерлейкина-1-бета.

1. Применение сополимера на основе N-винилпирролидона, представленного общей формулой (I): ,где мономерное звено М представляет фрагмент 2-метил-5-винилтетразола (МВТ) или 2-метил-5-винилпиридина (МВП): ,и содержание мономерных звеньев n составляет 25-50 мол.%, а средневязкостная молекулярная масса М_µ сополимера зависит от природы М: если М представляет МВТ, то М_µ=30-50 кДа; если М представляет МВП, то М_µ=15-28 кДа в качестве активатора продуцирования интерлейкина-1-альфа и интерлейкина-1-бета.

2. Применение сополимера на основе N-винилпирролидона, представленного общей формулой (I): ,где мономерное звено М представляет фрагмент 2-метил-5-винилтетразола (МВТ) или 2-метил-5-винилпиридина (МВП): ,и содержание мономерных звеньев n составляет 25-50 мол.%, а средневязкостная молекулярная масса М_µ сополимера зависит от природы М: если М представляет МВТ, то М_µ=30-50 кДа; если М представляет МВП, то М_µ=15-28 кДа в качестве противоракового агента.

3. Применение по п.2, где рак выбран из группы, состоящей из рака печени, почек, мочевого пузыря, костного мозга и молочной железы.