Применение производных 3,5-втор-4-норхолестана для получения лекарственного средства - цитопротектора

Применение производных 3,5-втор-4-норхолестана для получения лекарственного средства - цитопротектора

Реферат

Настоящее изобретение относится к применению производных 3,5-втор-4-норхолестана для получения лекарственного средства-цитопротектора, за исключением лекарственного средства-нейропротектора.

Клеточные дегенеративные процессы характеризуются дисфункцией клеток, часто вызывающей нежелательную клеточную активность и клеточную смерть.

Клетки развили адаптационные механизмы в ответ на стресс, которые продлевают их жизнь или замедляют или препятствуют клеточной смерти (цитопротекторные механизмы).

Однако эти цитопротекторные механизмы иногда бывают недостаточными, неадекватными или запускаются слишком поздно, чтобы быть эффективными, и клетки гибнут. Таким образом, существует потребность в новых лекарственных средствах-цитопротекторах, которые способствуют цитопротекторному действию. В этом заключается одна из целей настоящего изобретения.

Термин «цитопротектор» обозначает способность веществ, природных или нет, защищать клетку от клеточной смерти, в частности, от патологической клеточной смерти, и/или от клеточных дисфункций, ведущих к клеточной смерти. Эти клеточные дисфункции могут, например, иметь митохондриальное происхождение, такие как снижение способности генерировать АТР, неспособность захватывать и/или удерживать кальций или образование свободных радикалов.

Из основных механизмов клеточной смерти различают главным образом некроз, апоптоз и некроптоз.

Некроз - это клеточная смерть, называемая «случайной», которая происходит в процессе повреждения тканей. Больше всего затрагивается плазменная мембрана клетки, вызывая изменение гомеостаза клетки. Клетки наполняются водой настолько, что это вызывает лизис их плазменной мембраны. Этот клеточный лизис приводит к изливанию в окружающую среду цитоплазменного содержимого. Некроз лежит в основе воспалительного процесса.

Некроз может поражать группу клеток или ткань, тогда как другие соседние части остаются живыми. Происходящая в результате трансформация является умерщвлением клеток или тканей.

Иными словами, некроз определяется морфологическими изменениями, происходящими, когда жизнь клетки подходит к концу вследствие событий, таких как тяжелая травма, например, остановка или уменьшение кровообращения в органе, гипертермия (значительное повышение температуры), интоксикация химическим продуктом, физический стресс и т.д. Один из наиболее известных видов некроза - это некроз миокарда при инфаркте (прекращение кровоснабжения сердечной мышцы), связанный с облитерацией (закупоркой) коронарной артерии.

Апоптоз является неотъемлемой частью нормальной физиологии организма. Это физиологическая форма клеточной смерти с высокой регуляцией и она необходима для выживания многоклеточных организмов. Апоптоз - это процесс, который играет главную роль в эмбриогенезе.

Клетки в апоптозе или апоптотические клетки изолируются от других клеток. В апоптозе участвуют обычно индивидуальные клетки ткани и он не вызывает воспаления. Одной из характерных морфологических фаз апоптоза является значительное одновременное уплотнение ядра и цитоплазмы, что индуцирует существенное уменьшение клеточного объема. Далее, ядро распадается на фрагменты, каждый фрагмент окружен двойной оболочкой. Апоптотические тела (цитоплазменные и ядерные элементы) затем высвобождаются и абсорбируются фагоцитами соседних клеток.

Апоптоз может быть вызван разными причинами. Например, облучение, присутствие химического соединения или гормона являются стимулами, способными вызвать каскад апоптотических событий в клетке. Внутриклеточные сигналы, такие как неполный митоз или повреждение ДНК, могут также вызвать апоптоз.

Апоптоз происходит также при генотоксическом воздействии или во время болезни. Некоторые патологии характеризуются анормальным апоптозом, приводящим к потере некоторых клеточных популяций, как, например, гепатотоксичность, ретинопатия, кардиотоксичность.

Таким образом, различают физиологический апоптоз и патологический апоптоз. Изобретение относится главным образом к патологическому апоптозу.

Существуют другие механизмы клеточной смерти, например некроптоз, который имеет характеристики некроза и апоптоза. Гибнущая от некроптоза клетка имеет признаки, подобные признакам клетки, гибнущей от некроза, но биохимические фазы этого механизма больше подобны фазам апоптоза. Этот механизм клеточной смерти имеет место, например, при ишемии.

Таким образом, одной из целей настоящего изобретения являются новые лекарственные средства, которые позволили бы предупредить и/или лечить некроз, и/или патологический апоптоз, и/или некроптоз (противонекротические, и/или противоапоптотические, и/или противонекроптотические лекарственные средства).

Клеточные дегенеративные процессы могут, кроме того, являться следствием патологических ситуаций, которые охватывает термин болезни или дегенеративных нарушений, травм или воздействия различных факторов.

К этим травмам или факторам можно отнести воздействие излучения (УФ, гамма), гипоксию или отсутствие кислорода, недостаток питания, отсутствие факторов роста, яды, клеточные токсины, отходы, токсины, содержащиеся в окружающей среде, свободные радикалы, реактивный кислород или некоторые другие события и/или медицинские процедуры, например хирургические вмешательства, включающие в себя трансплантацию клеток, тканей или органов. Можно также назвать химические или биологические агенты, используемые в качестве терапевтических средств в контексте медицинского лечения, например цитостатические средства или противовоспалительные средства.

Целью изобретения является не устранение внеклеточных причин патологий или дегенеративных процессов, которые могут привести к клеточной смерти, а устранение последствий на клеточном уровне указанных патологических процессов или указанных патологий и, в частности, защита клетки от указанных последствий.

Из наиболее значительных патологических ситуаций, характеризующихся дегенеративным процессом, кроме неврологических или нейродегенеративных заболеваний, к которым настоящее изобретение не относится, можно назвать:

заболевания костей, суставов, соединительных тканей и хрящей, такие как остеопороз, остеомиелит, артриты, из которых можно назвать, например, остеоартрит, ревматоидный артрит и псориатический артрит, аваскулярный некроз, оссифицирующий прогрессирующий миозит, рахит, синдром Кушинга;

мышечные заболевания, такие как мышечная дистрофия, например мышечная дистрофия Дюшенна, миотоническая дистрофия, миопатии и миастении;

кожные заболевания, такие как дерматиты, экзема, псориаз, старение или ухудшение рубцевания;

сердечно-сосудистые заболевания, такие как сердечная и/или сосудистая ишемия, инфаркт миокарда, ишемическая кардиопатия, хроническая или острая сердечная недостаточность, сердечная аритмия, фибрилляция предсердий, фибрилляция желудочков сердца, пароксизмальная тахикардия, сердечная недостаточность, аноксия, гипоксия, побочное действие, связанное с проведением терапии противораковыми средствами, заболевания системы кровообращения, такие как атеросклероз, склероз артерий и заболевания периферических сосудов, нарушение мозгового кровообращения, аневризм;

гематологические и сосудистые заболевания, такие как анемия, сосудистый амилоидоз, кровотечения, дрепаноцитоз, синдром фрагментации эритроцитов, нейропения, лейкопения, аплазия костного мозга, панцитопения, тромбоцитопения, гемофилия;

заболевания легких, включая пневмонию, астму; обструктивные хронические заболевания легких, как, например, хронические бронхиты и эмфизема;

заболевания желудочно-кишечного тракта, такие как язва;

заболевания печени, как, например, гепатиты, в частности, гепатиты вирусного происхождения или имеющие в качестве причины другие инфекционные возбудители, аутоиммунные гепатиты, молниеносный гепатит, некоторые наследственные нарушения метаболизма, болезнь Вильсона, цирроз, неалкогольный гликогеноз, заболевания печени, вызванные токсинами и лекарственными средствами;

заболевания поджелудочной железы, как например, острые или хронические панкреатиты;

нарушения обмена веществ, такие как сахарный и несахарный диабет, тироидиты;

болезни почек, такие, например, как острые почечные нарушения или гломерулонефрит;

вирусные и бактериальные инфекции, такие как септицемия;

тяжелые интоксикации химическими веществами, токсинами или лекарственными средствами;

дегенеративные заболевания, связанные с синдромом приобретенного иммунодифицита (СПИД);

нарушения, связанные со старением, такие как синдром ускоренного старения;

воспалительные заболевания, такие как болезнь Крона, ревматоидный полиартрит;

аутоимунные заболевания, такие как красная волчанка;

стоматологические заболевания, такие как заболевания, вызывающие разрушение тканей, например, периодонтиты;

офтальмологические болезни или нарушения, включая диабетическую ретинопатию, глаукому, макулярную дегенерацию, ретинальную дегенерацию, пигментный ретинит, отверстия или разрыв сетчатки, отслоение сетчатки, ретинальную ишемию, острую травматическую ретинопатию, воспалительную дегенерацию, послеоперационные осложнения, медикаментозную ретинопатию, катаракту;

болезни органов слуха, такие как отосклероз и глухота, вызванная антибиотиками;

болезни, связанные с митохондриями (митохондриальные патологии), такие как спинальная атаксия Фридрейха, врожденная мышечная дистрофия со структурной митохондриальной аномалией, некоторые виды миопатии (синдром MELAS, синдром MERFF, синдром Пирсона), синдром MIDD (митохондриальный диабет и глухота), синдром Вольфрама, дистония.

Изобретение также относится к защите клеток тканей и/или трансплантированных органов как перед, так и во время (взятие, транспортировка и/или реимплантация) или после трансплантации.

Постоянно ведется поиск фармакологических активных соединений для борьбы с дегенеративными процессами, упомянутыми выше.

Настоящее изобретение отвечает этой потребности в цитопротекторных соединениях. Заявителем было обнаружено, что производные 3,5-втор-4-норхолестана, в частности 3,5-втор-4-норхолестан-5-оноксим-3-ола и один из его сложных эфиров, обладают замечательными цитопротекторными свойствами.

Таким образом, объектом настоящего изобретения является применение по меньшей мере одного соединения формулы I

в которой

- Х и Y вместе обозначают кетогруппу (=О), оксимную группу (=NOH) или метилоксимную группу (=NНOМе) или Х обозначает гидроксил и Y обозначает атом водорода,

- В обозначает гидроксильный радикал и С и D, одинаковые или разные, обозначают атом водорода или радикал алкил, линейный или разветвленный, содержащий от 1 до 4 атомов углерода,

или В и С вместе обозначают кетогруппу и радикал D обозначает метил, гидроксил или метиламин,

или В и С обозначают атом водорода и радикал D обозначает метиламин,

или В и С вместе обозначают оксимную группу и радикал D обозначает метил,

и R обозначает радикал алкил, линейный или разветвленный, содержащий от 1 до 10 атомов углерода,

или одной из его солей присоединения фармацевтически приемлемой кислоты, или одного из его сложных эфиров или одной из солей присоединения фармацевтически приемлемой кислоты указанных сложных эфиров,

для получения лекарственного средства-цитопротектора, за исключением нейропротектора.

Согласно изобретению соли присоединений фармацевтически приемлемой кислоты могут, например, представлять собой соли, образованные с кислотами: соляной, бромистоводородной, азотной, серной, фосфорной, уксусной, муравьиной, пропионовой, бензойной, малеиновой, фумаровой, янтарной, винной, лимонной, щавелевой, глиоксалевой, аспарагиновой, алкансульфоновых, таких как кислоты метансульфоновые или этансульфоновые, арилсульфоновые, такие как бензолсульфоновые или пара-толуолсульфоновые, или карбоновые.

Согласно изобретению оксимная группа представляет собой син- и анти-изомеры, чистые или в смеси, связанные в направлении связи N-О по отношению к двойной связи С=N.

В соответствии с частной формой изобретения радикал R пригодных соединений формулы I предпочтительно является радикалом холестана формулы II

В соответствии с другими частными формами изобретения предпочтительно используются соединения формулы I, в которых Х и Y вместе обозначают кетогруппу или обозначают оксимную группу.

В соответствии с другими частными формами изобретения предпочтительно используются соединения формулы I, в которых В обозначает гидроксильный радикал и С и D, одинаковые или разные, обозначают атом водорода или радикал алкил, линейный или разветвленный, содержащий от 1 до 4 атомов углерода, или в которых В и С вместе обозначают кетогруппу и D обозначает радикал метил.

Особенно предпочтительно по изобретению используется по меньшей мере одно соединение формулы I, выбранное из

3,5-втор-4-норхолестан-5-оноксим-3-ола,

3,5-втор-4-норхолестан-5-оноксим-3-метилового спирта, или

3,5-втор-4-норхолестан-5-оноксим-3-диметилового спирта,

или одной из его солей присоединения фармацевтически приемлемой кислоты, или одного из его сложных эфиров или одной из солей присоединений фармацевтически приемлемой кислоты указанных сложных эфиров.

Представляющие интерес цитопротекторные свойства соединений формулы I определяют их использование для получения лекарственного средства-цитопротектора, более конкретно предназначенного для лечения или предупреждения некроза, и/или апоптоза, и/или некроптоза (противонекротические, и/или противоапоптотические, и/или противонекроптотические лекарственные средства), или заболеваний, таких как:

заболевания костей, суставов, соединительных тканей и хрящей,

мышечные заболевания,

кожные заболевания,

сердечно-сосудистые заболевания,

заболевания системы кровообращения,

гематологические и сосудистые заболевания,

легочные заболевания,

заболевания желудочно-кишечного тракта,

болезни печени,

заболевания поджелудочной железы,

нарушения обмена веществ,

болезни почек,

вирусные и бактериальные инфекции,

тяжелые интоксикации,

дегенеративные заболевания, связанные с синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИД);

нарушения, связанные со старением,

воспалительные заболевания,

аутоиммунные заболевания,

стоматологические заболевания,

офтальмологические болезни или нарушения,

болезни органов слуха,

болезни, связанные с митохондриями (митохондриальные патологии).

Изобретение также относится к защите клеток, тканей или трансплантированных органов как до, так и во время (взятие, транспортировка и/или реимплантация) или после трансплантации.

Преимущественно, соединения формулы I можно использовать для получения лекарственного средства, предназначенного для защиты клеток сердца (кардиопротектор), для защиты клеток печени (гепатопротектор) или лекарственного средства, предназначенного для лечения или предотвращения заболеваний, связанных с митохондриями.

В соответствии с изобретением, соединение формулы I предпочтительно присутствует в лекарственном средстве-цитопротекторе в физиологически эффективных дозах: указанные лекарственные средства содержат, в частности, эффективную цитопротекторную дозу по меньшей мере одного из соединений формулы I.

В качестве лекарственного средства соединения формулы I, их сложные эфиры, их соли присоединения фармацевтически приемлемых кислот, а также соли присоединения фармацевтически приемлемых кислот указанных сложных эфиров могут входить в состав лекарственных форм для введения через пищеварительный тракт или парентеральным путем.

Лекарственные средства по изобретению могут дополнительно содержать по меньшей мере один другой терапевтически активный ингредиент, независимо от того, обладает ли он активностью в отношении той же самой или другой патологии, для одновременного, раздельного или распределенного во времени применения, в частности, при лечении пациента с одной из указанных выше патологий.

В соответствии с изобретением, соединение формулы I можно использовать в лекарственном средстве в смеси с одним или несколькими инертными эксципиентами или наполнителями, т.е. фармацевтически неактивными и нетоксичными. В качестве примера можно назвать солевые, физиологические, изотонические, буферные растворы и т.д., пригодные для фармацевтического применения и известные специалисту. Композиции могут содержать один или несколько агентов или наполнителей, выбранных из диспергаторов, растворителей, стабилизаторов, консервантов и т.д. Агентами или наполнителями, пригодными для использования в составах (жидких, и/или для инъекций, и/или твердых), являются, в частности, метилцеллюлоза, гидроксиметилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза, циклодекстрины, полисорбат 80, маннит, желатин, лактоза, растительные или животные масла, камедь и т.д. Композициям может быть придана форма суспензий для инъекций, гелей, масел, таблеток, суппозиториев, порошков, желатиновых капсул, капсул и т.д., возможно при помощи галеновых форм или устройств, обеспечивающих длительное и/или замедленное высвобождение. Для этого вида составов преимущественно используют такой агент, как целлюлозу, карбонаты или крахмалы.

Введение можно осуществлять любым известным специалисту способом, предпочтительно перорально или путем инъекции, обычно внутрибрюшным, интрацеребральным, межоболочечным, внутривенным, интраартериальным или внутримышечным путем. Предпочтительным является пероральное введение. При длительном лечении предпочтительным является сублингвальное, пероральное или чрескожное введение.

Для инъекций соединения обычно находятся в форме жидких суспензий, которые можно вводить при помощи шприцов или путем перфузий, например. Конечно, расход и/или инъецированная доза или вводимая доза могут подбираться специалистом в зависимости от пациента, патологии, способа введения и т.д. Разумеется, повторные введения могут проводиться в сочетании с другими активными ингредиентами и/или любым наполнителем, приемлемым в фармацевтическом плане (буферные растворы, растворы солевые, изотонические, в присутствии стабилизаторов и т.д.).

Изобретение пригодно для млекопитающих, более конкретно для человека.

Главным образом, суточная доза соединения является минимальной дозой для достижения требуемого терапевтического эффекта. Дозы соединений, описанных выше, и, например, 3,5-втор-4-норхолестан-5-оноксим-3-ола составляют главным образом от 0,001 до 100 мг на кг в день для человека.

В случае необходимости, суточная доза может вводиться в два, три, четыре, пять, шесть и более приемов в день или в виде нескольких полудоз, вводимых с соответствующими интервалами в течение дня.

Выбранное количество будет зависеть от многих факторов, в частности, от способа введения, продолжительности введения, момента введения, скорости вывода соединения, от одного или нескольких веществ, используемых в комбинации с соединением, от возраста, веса и физического состояния пациента, а также от его анамнеза и от любых других данных, известных в медицине.

Назначение лечащего врача может начинаться с доз, которые меньше, чем те, которые обычно применяются, затем эти дозы постепенно повышаются с тем, чтобы лучше контролировать появление возможных побочных эффектов.

Композиции по изобретению, в частности фармацевтические композиции или лекарственные средства, могут содержать по меньшей мере одно соединение формулы I, такое как описано выше, или одну из его солей присоединения фармацевтически приемлемой кислоты, или один из его сложных эфиров или одну из его солей присоединения фармацевтически приемлемой кислоты указанных сложных эфиров.

Фармацевтические композиции по изобретению могут содержать дополнительно по меньшей мере один терапевтический активный ингредиент для одновременного, раздельного или распределенного во времени применения, более конкретно, при лечении пациентов, страдающих одной из указанных выше патологий.

Фармацевтические композиции по изобретению могут преимущественно содержать один или несколько эксципиентов или инертных наполнителей, т.е. фармацевтически неактивных и нетоксичных.

Соединения формулы I, используемые по изобретению, можно синтезировать путем взаимодействия соединения формулы III

в которой R имеет значения, указанные выше, которое подвергают взаимодействию

или

с метиламином, затем гидроксиламином для получения соединения формулы I, в которой R имеет значения, указанные выше, Х и Y обозначают вместе оксимную группу, В обозначает вместе с С кетогруппу и D обозначает метиламинную группу,

или

метилирования до получения соединения формулы IV

в которой R имеет значения, указанные выше, которое подвергают действию защитного агента кетонной группы в положении 5 для получения соединения формулы V

в которой R имеет значения, указанные выше, которое,

или

вводят во взаимодействие с метиллитием, затем подвергают действию агента для снятия защиты с кетонной группы в положении 5, затем вводят во взаимодействие с гидроксиламином для получения соединения формулы I, в которой R имеет значения, указанные выше, Х и Y обозначают вместе оксимную группу, В обозначает гидроксильную группу и С и D обозначают линейные или разветвленные алкильные радикалы с 1-4 атомами углерода,

или

омыляют, затем подвергают взаимодействию с соединением формулы H₃C-NH-OCH₃, затем проводят взаимодействие с метиллитием для получения соединения формулы VI

в котором восстанавливают кетонную группу, затем подвергают действию агента для снятия защиты с кетонной группы в положении 5, затем подвергают взаимодействию с гидроксиламином для получения соединения формулы I, в которой R имеет значения, указанные выше, Х и Y обозначают вместе оксимную группу, В обозначает гидроксильную группу и С обозначает линейный или разветвленный алкильный радикал с 1-4 атомами углерода, возможно замещенный, и D обозначает атом водорода,

или

восстанавливают до получения соединения формулы VII

в которой R имеет значения, указанные выше, В обозначает гидроксильную группу и С и D обозначают атом водорода, которое,

или

подвергают воздействию окислительного агента до получения соединения формулы VIII

в которой R имеет значения, указанные выше, из которого получают основание Шиффа, затем восстанавливают, после чего подвергают действию агента для снятия защиты с кетонной группы в положении 5, затем вводят во взаимодействие с гидроксиламином для получения соединения формулы I, в которой R имеет значения, указанные выше, Х и Y обозначают вместе оксимную группу, В обозначает метиламинную группу и С и D обозначают атом водорода,

или

подвергают действию агента для снятия защиты с кетонной группы в положении 5, затем вводят во взаимодействие с амином, выбранным из гидроксиламина, метилгидроксиламина и карбоксиметилгидроксиламина для получения соединения формулы I, в которой R имеет значения, указанные выше, Х и Y обозначают вместе соответственно оксимную, метилоксимную и карбоксиметилоксимную группу, В обозначает гидроксильную группу и С и D обозначают атом водорода,

и выделяют и, если требуется, превращают в соль соединения формулы I или этерифицируют их, выделяют их, затем, если требуется, превращают их в соль.

В предпочтительных условиях осуществления описанного выше способа

- взаимодействие соединения формулы III с метиламином проводят в присутствии связывающего вещества, активирующего кислотную группу, такую как ВОР (бензотриазол-1-илокси-три(диметиламин)фосфония гексафторфосфат) или TBTU (2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония тетрафторборат) преимущественно в присутствии основания, такого как N-метилморфолин, в частности, в пригодном растворителе, таком как дихлорметан или диметилформамид. Предпочтительно взаимодействие проводят в присутствии EDCI (1-этил-3(3'-диметиламинопропил)карбодиимид) в ассоциации с 4-диметиламинопиридином в дихлорметане, причем смесь взбалтывают при комнатной температуре в течение 24 часов. Далее продукт растворяют предпочтительно в пиридине, после чего добавляют от 5 до 7, в частности, 6 эквивалентов гидроксиламинхлоргидрата;

- метилирование соединения формулы III проводят путем взаимодействия с метанолом в присутствии тионилхлорида, предпочтительно растворяя кислоту формулы II в соответствующем объеме смеси, содержащей 70% метанола и 30% дихлорметана. Охлаждают до 0°С и вводят по каплям 3 эквивалента тионилхлорида. Перемешивают затем в течение 2 часов при комнатной температуре. В этом соединении защита кетонной группы осуществляется предпочтительно путем растворения продукта в избыточном количестве, например 10 эквивалентах триметилортоформата и достаточном объеме этиленгликоля с последующим добавлением безводной п-толуолсульфоновой кислоты;

- взаимодействие соединения формулы V с метиллитием предпочтительно проводят в безводном ТГФ, затем, после охлаждения примерно до -45°С, вводят по каплям избыточное количество метиллития. Снятие защиты с диоксолана, блокирующего кетонную группу в положении 5, проводят в ацетоне в присутствии серной кислоты. Предпочтительно, его проводят в диоксане в присутствии смеси вода/уксусная кислота 1/1. Оксим кетона преимущественно получают следующим образом:

- омыление соединения формулы V проводят при помощи едкого натра, предпочтительно в диоксане. Вводят, в частности, примерно 2 эквивалента водного раствора едкого натра. Этот продукт вводят во взаимодействие с соединением формулы H₃C-NH-OCH₃, например, в присутствии связующего вещества, активирующего кислотную группу, такую как ВОР или TBTU в присутствии основания, такого как N-метилморфолин в соответствующем растворителе, таком как дихлорметан или диметилформамид. Предпочтительно, его проводят в присутствии EDCI в ассоциации с гидроксибензотриазолом, добавляя по каплям триэтиламин в растворитель. Этот продукт вводят во взаимодействие с метиллитием в атмосфере аргона в соответствии с протоколом, описанным выше, затем кетонную группу в положении 3 восстанавливают борогидридом натрия. Полученный продукт затем подвергают снятию защиты с кетонной группы в положении 5 и вводят во взаимодействие с гидроксиламином в соответствии с протоколом, описанным выше;

- восстановление соединения формулы V для получения соединения формулы VII проводят предпочтительно при помощи гидрида алюминийлития, в частности, суспендируя его в тетрагидрофуране. Проводят гидролиз с осторожностью путем добавления раствора сульфата натрия;

- окисление соединения формулы VII проводят при помощи пиридиния хлорохромата. Из этого продукта получают основание Шиффа, которое мгновенно восстанавливается, в частности, путем растворения в атмосфере аргона, предпочтительно в этаноле в присутствии триэтиламина, метиламинхлоргидрата и тетраизопропоксида титана с последующим введением борогидрида натрия. Снятие защиты с кетонной группы в положении 5, а также взаимодействие с гидроксиламином проводят в описанных выше условиях.

Нижеследующие примеры иллюстрируют настоящую заявку, не ограничивая ее.

ПРИМЕРЫ

Время удерживания выражено ниже в минутах и сотых минуты.

Метод жидкостной хроматографии, применяемый в отношении продуктов, в целом следующий:

Колонка: Macherey-Nagel-Nucleosil® 300-6 C4 -150×4,6 мм

Градиент: вода (+0,05% трифторуксусная кислота)/ацетонитрил (+0,05% трифторуксусная кислота)

t=0 мин: 60% ацетонитрил, 40% Н₂О

t=6 мин: 100% ацетонитрил, 0% Н₂О

t=11 мин: 100% ацетонитрил, 0% Н₂О

t=13 мин: 60% ацетонитрил, 40% Н₂О

t=15 мин: 60% ацетонитрил, 40% Н₂О.

Условия ионизации масс-спекрометрометра следующие:

температура источника: 250°С

напряжение конуса: 50 V

напряжение капиллярной трубки: 3kV

Rf lens: 0,3V

Пример 1: синтез 3,5-втор-4-норхолестан-5-оноксим-3-метиламида

Стадия А: сначала в колбу вводят 250 мг 3,5-втор-4-норхолестан-5-оноксим-3-оевой кислоты, 38 мг метиламинхлоргидрата, 250 мг EDCl, 100 мг DMAP и 2,5 мл дихлорметана. Раствор перемешивают в течение 24 часов при комнатной температуре, затем реакционную среду разбавляют дихлорметаном и промывают 10%-ным раствором бикарбоната натрия. Органическую фазу сушат над сульфатом магния, затем концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают флэш-хроматографией (СH₂Cl₂/МеОH 95/5). Получают 176 мг 3,5-втор-4-норхолестан-5-он-3-метиламида с выходом 68%.

Анализ

ЯМР-1Н (СDCl₃): соответствует

Время удерживания: 4 мин 42 сотых

Обнаруженные пики масс-спектрометрии: [M+H]+=418; [2M+H]+=835

Стадия В: далее в колбу вводят 50 мг 3,5-втор-4-норхолестан-5-он-3-метиламида, 50 мг гидроксиламинхлоргидрата в 1 мл пиридина. Перемешивают в течение 16 часов при комнатной температуре, затем реакционную среду концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток обрабатывают смесью СH₂Cl₂/Н₂О; органическую фазу отделяют, промывают водой, сушат над безводным сульфатом магния, затем концентрируют при пониженном давлении. Получают 40,6 мг 3,5-втор-4-норхолестан-5-оноксим-3-метиламида, выход 78%.

Анализ

ЯМР-1Н (СDCl₃): соответствует

Время удерживания: 3 мин 70 сотых

Обнаруженные пики масс-спектрометрии: [M+H]+=433; [2M+H]+=865

Пример 2: синтез 3,5-втор-4-норхолестан-5-он-3-диметилового спирта

Стадия А: в колбе растворяют 10,5 г 3,5-втор-4-норхолестан-5-он-3-оевой кислоты в 378 мл метанола и 146 мл дихлорметана. Охлаждают до 0°С и вводят по каплям 5,7 мл тионилхлорида. Затем перемешивают в течение 2 часов при комнатной температуре. Реакционную среду концентрируют при пониженном давлении, выпаривают совместно с толуолом, затем с дихлорметаном. Получают 10,3 г сложного 3,5-втор-4-норхолестан-5-он-3-метилового эфира, выход 94%. Продукт используют как таковой без очистки.

ЯМР-1Н (СDCl₃): соответствует

Время удерживания: 4 мин 69 сотых

Обнаруженные пики масс-спектрометрии: [M+H]+=419; [2M+H]+=785

Стадия В: в колбе растворяют 9,62 г сложного 3,5-втор-4-норхолестан-5-он-3-метилового эфира в 25 мл триметилортоформата и 53 мл этиленгликоля. Затем вводят 400 г (2,3 моля) п-толуолсульфоновой кислоты, после чего перемешивают в течение 1 ночи при комнатной температуре. В реакционную среду вводят этилацетат; промывают 10% раствором гидрогенкарбоната натрия. Органическую фазу отделяют, сушат над безводным сульфатом магния и концентрируют при пониженном давлении. Получают 9,95 г сложного 3,5-втор-4-норхолестан-5,5(этилендиокси)-3-метилового эфира, выход 93%. Продукт используют как таковой без очистки.

ЯМР-1Н (СDCl₃): соответствует

Время удерживания: 5 мин 76 сотых

Обнаруженные пики масс-спектрометрии: [M+H]+=463

Стадия С: в колбе растворяют 300 мг сложного 3,5-втор-4-норхолестан-5,5(этилендиокси)-3-метилового эфира в 5 мл безводного ТГФ. Среду охлаждают до -45°С, затем вводят по каплям 1,36 мл раствора метиллития 1,6М в простом эфире. Перемешивают в течение 30 минут при -45°С. Вводят несколько капель метанола в реакционную среду и доводят до комнатной температуры. Обрабатывают в 20 мл простого диэтилового эфира и промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия, затем насыщенным раствором хлорида натрия. Органическую фазу сушат над сульфатом магния, затем концентрируют при пониженном давлении. Получают 295 мг 3,5-втор-4-норхолестан-5,5(этилендиокси)-3-диметилового спирта (РМ=462), выход 98%.

Время удерживания: 5 мин 76 сотых

Обнаруженные пики масс-спектрометрии: [M-(СН₂ОН-СН₂ОН+Н₂О)+Н]+]=401

Стадия D: в колбу вводят 6 мл смеси вода/уксусная кислота 1/1 и 295 мг 3,5-втор-4-норхолестан-5,5(этилендиокси)-3-диметилового спирта, нагревают с обратным холодильником в течение 1 часа 30 мин. После охлаждения реакционную среду разбавляют этилацетатом, промывают насыщенным раствором натрия хлорида, затем насыщенным раствором бикарбоната натрия. Наконец, органическую фазу сушат над сульфатом магния и концентрируют при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищают флэш-хроматографией (петролейный эфир/этилацетат 8/2). Получают 180 мг 3,5-втор-4-норхолестан-5-он-3-диметилового спирта, выход 68%.

ЯМР-1Н (СDCl₃): соответствует

Время удерживания: 5 мин 08 сотых

Обнаруженные пики масс-спектрометрии: [M+H]+=419; [M-Н₂О+H]+=401, [2M+H]+=837

Пример 3: синтез 3,5-втор-4-норхолестан-5-оноксим-3-диметилового спирта

В колбу вводят 1 г соединения из примера 2, 1 г гидроксиламинхлоргидрата в 53 мл пиридина и несколько мл дихлорметана для растворения кетона. Перемешивают в течение 16 часов при комнатной температуре, затем реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток обрабатывают смесью СH₂Cl₂/Н₂О; органическую фазу отделяют, промывают водой, сушат над безводным сульфатом магния и концентрируют при пониженном давлении. Получают 814 мг 3,5-втор-4-норхолестан-5-оноксим-3-диметилового спирта, выход 78%.

Анализ

ЯМР-1Н (СDCl₃): соответствует

Время удерживания: 5 мин 09 сотых

Обнаруженные пики масс-спектрометрии: [M+H]+=434; [2M+H]+=867

Пример 4: синтез 3,5-втор-4-норхолестан-5-оноксим-3-метилового спирта

Стадия А: в колбу вводят 2 г 3,5-втор-4-норхолестан-5,5(этилендиокси)-3-диметилового спирта в 26 мл диоксана. Добавляют 8,6 мл раствора едкого натра 1N. Реакционную среду нагревают с обратным холодильником в течение 1 часа 30 мин и диоксан выпаривают при пониженном давлении. Полученный раствор подкисляют путем введения раствора соляной кислоты 1N до получения рН 1 и экстрагируют 2 раза толуолом. Органические фазы объединяют, сушат над безводным сульфатом магния и концентрируют при пониженном давлении. Получают 1,92 г 3,5-втор-4-норхолестан-5,5(этилендиокси)-3-оевой кислоты с выходом 99%, которую используют без дополнительной обработки на следующей стадии.

Стадия В: в колбу 1,9 г 3,5-втор-4-норхолестан-5,5(этилендиокси)-3-оевой кислоты вводят в 30 мл дихлорметана. В этот раствор вводят 1,06 г EDCI, 743 мг HOBT, 537 мг хлоргидрата N,O-диметилгидроксиламина, затем 1,37 мл триэтиламина по каплям. Перемешивают при комнатной температуре в течение 16 часов. В реакционную среду вводят смесь СH₂Cl₂/Н₂О и экстрагируют 3 раза дихлорметаном. Органические фазы объединяют, сушат над безводным сульфатом магния и концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают флэш-хроматографией (СH₂Cl₂/этилацетат 8/2). Получают 1,46 г 3,5-втор-4-норхолестан-5,5(этилендиокси)-3(N,N-метоксиметил)амида с выходом 70%.

ЯМР-1Н (СDCl₃): соответствует

Время удерживания: 5 мин 31 сотая

Обнаруженные пики масс-спектрометрии: [M+H]+=492

Стадия С: в колбу в атмосфере аргона вводят 1,4 г 3,5-втор-4-норхолестан-5,5(этилендиокси)-3(N,N-метоксиметил)амида в 20 л безводного тетрагидрофурана и охлаждают до 0°С. Затем вводят по каплям 3,38 мл раствора метиллития 1,6М в простом эфире. Реакционную среду перемешивают в течение 3 часов 40 минут при 0°С, затем по каплям вводят раствор 0,72 мл концентрированной соляной кислоты в 7,28 мл воды. Тетрагидрофуран выпаривают при пониженном давлении; полученный водный раствор подщелачивают путем добавления едкого натра 1N до получения рН 10. Экстрагируют простым диэтиловым эфиром; органические фазы объединяют, сушат над безводным сульфатом магния и концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают флэш-хроматографией (петролейный эфир/этилацетат 9/1). Получают 930 г 3,5-втор-4-норхолестан-5,5(этилендиокси)-3-метилкетона с выходом 73%.

ЯМР-1Н (СDCl₃): соответствует

Время удерживания: 5 мин 65 сотых

Обнаруженные пики масс-спектрометрии: [M+H]+=403

Стадия D: в колбу вводят 119 мг 3,5-втор-4-норхолестан-5,5(этилендиокси)-3-метилкетона со стадии С в 1,5 мл метанола. Охл