Способ усиления эффектов окрашивающих веществ и кондиционеров

Способ усиления эффектов окрашивающих веществ и кондиционеров

Иллюстрации

Показать все

Реферат

По настоящей патентной заявке испрашивается приоритет предварительной патентной заявки Соединенных штатов No. 60/721329, поданной 28 сентября 2005 г.

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение относится к области личной гигиены и, в частности, ухода за волосами и кожей. Более конкретно, изобретение относится к способу усиления эффектов традиционных и нетрадиционных окрашивающих веществ, кондиционеров и других средств с благоприятным действием с помощью применения закрепителя на основе пептидов.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Кондиционеры и окрашивающие вещества для волос и кожи являются хорошо известными и общеупотребительными продуктами личной гигиены. Основной проблемой с существующими в настоящее время кондиционерами и неокислительными окрашивающими веществами является отсутствие у них требуемой стабильности для длительных эффектов. Окислительные красители для волос обеспечивают устойчивую окраску, однако окислительные средства, которые они содержат, могут вызывать повреждение волос. Для улучшения стойкости композиций для ухода за волосами и кожей разработаны кондиционеры для волос, окрашивающие вещества для волос и другие средства с благоприятным действием на основе пептидов (Huang et al., публикация находящейся одновременно на рассмотрении и в совместном владении патентной заявки США No.2005/0050656 и публикация патентной заявки США No. 2005/0226839). Описаны также солнцезащитные средства на основе пептидов (Buseman-Williams et al., публикация находящейся одновременно на рассмотрении и в совместном владении патентной заявки США No. 2005/0249682; и Lowe et al., публикация находящейся одновременно на рассмотрении и в совместном владении патентной заявки США No. 60/737042). Средства с благоприятным действием на основе пептидов получают присоединением специфической пептидной последовательности, обладающей высокой аффинностью связывания с волосами или кожей, к средству с благоприятным действием, такому как кондиционирующее или окрашивающее средство. Пептидная часть связывается с волосами или кожей, таким образом крепко присоединяя средство с благоприятным действием. Эти средства с благоприятным действием на основе пептидов обеспечивают улучшенную стойкость, но требуют присоединения связывающего пептида к средству с благоприятным действием.

Пептиды с высокой аффинностью связывания для волос идентифицировали с использованием способов скрининга фагового дисплея (Huang et al., выше; Estell et al. WO 0179479; Murray et al., публикация патентной заявки США No. 2002/0098524; Janssen et al., публикация патентной заявки США No. 2003/0152976; и Janssen et al., WO 04048399). Кроме того, опубликованы полученные эмпирически пептиды, связывающиеся с волосами и кожей, основанные на положительно заряженных аминокислотах (Rothe et., WO 2004/000257).

Comwell et al. (патент США No. 6551361) описывают способ уменьшения потери окраски для волос, обработанных окислительным красителем для волос, включающий в себя контактирование волос либо до, либо после обработки волос окислительным красителем для волос с органическим аминосоединением, таким как основные аминокислоты, мочевина, гуанидин и их соли или смеси. Однако в данном описании не описано применение конкретных связывающихся с волосами или кожей пептидов или конъюгатов, содержащих связывающиеся с волосами или связывающиеся с кожей пептиды, присоединенные к средству с благоприятным действием, в качестве закрепителей для окрашивающих веществ и кондиционеров.

Проблемой, подлежащей разрешению, таким образом, является предоставление альтернативных способов увеличения стойкости кондиционеров и окрашивающих веществ для волос и кожи, являющихся простыми и легкими для выполнения.

Заявители обратились к указанной проблеме посредством открытия, что эффекты традиционных и нетрадиционных окрашивающих веществ, кондиционеров и других средств с благоприятным действием усиливают применением закрепителя на основе пептидов.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение относится к новым закрепителям на основе пептидов, применимых для улучшения стойкости традиционных и нетрадиционных окрашивающих веществ, кондиционеров, и других средств с благоприятным действием для волос и кожи. Закрепители по изобретению представляют собой короткие пептиды, выбранные по их способности специфически связываться с волосами или кожей. Эти связывающиеся с волосами пептиды (HBP) или связывающиеся с кожей пептиды (SBP) применяют вместе с окрашивающим веществом, кондиционером или каким-либо другим средством с благоприятным действием для волос или кожи.

Соответственно изобретение относится к способу применения средства с благоприятным действием для волос, включающему в себя стадии:

a) получения средства с благоприятным действием для волос, обладающего аффинностью для волос;

b) получения композиции, содержащей связывающийся с волосами пептид;

c) нанесения средства с благоприятным действием и композиции, содержащей связывающийся с волосами пептид, на волосы на время, достаточное для связывания с волосами средства с благоприятным действием для волос и связывающегося с волосами пептида.

Необязательно, композицию, содержащую связывающийся с волосами пептид, можно наносить повторно по необходимости. В альтернативном варианте осуществления способы по изобретению могут включать в себя также полимерный закрепитель для дополнительного усиления связывания средства с благоприятным действием с волосами.

Подобным образом, изобретение относится к способу применения средства с благоприятным действием для кожи, включающему в себя стадии:

a) получения средства с благоприятным действием для кожи, обладающего аффинностью для кожи;

b) получения композиции, содержащей связывающийся с кожей пептид;

c) нанесения средства с благоприятным действием и композиции, содержащей связывающийся с кожей пептид, на кожу на время, достаточное для связывания с кожей средства с благоприятным действием для кожи и связывающегося с кожей пептида.

Кроме того, изобретение относится к композиции окрашивающего вещества для волос, содержащей окрашивающее вещество для волос и связывающийся с волосами пептид, а также к кондиционирующей композиции для волос, содержащей кондиционер для волос и связывающийся с волосами пептид. Подобным образом, изобретение относится к кондиционирующей композиции для кожи, содержащей кондиционер для кожи и связывающийся с кожей пептид, а также к композиции окрашивающего вещества для кожи, содержащей окрашивающее вещество для кожи и связывающийся с кожей пептид.

В частном варианте осуществления изобретение относится к связывающемуся с волосами пептиду, выбранному из группы, состоящей из SEQ ID NO:16, 17, 18, 19, 20, и 21.

ОПИСАНИЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

Различные варианты осуществления по изобретению можно более полно понять из следующего подробного описания и сопутствующих описаний последовательностей, составляющих часть этого описания.

Следующие последовательности согласуются с 37 C.F.R. 1.821-1.825 ("Requirements for Patent Applications Containing Nucleotide Sequences and/or Amino Acid Sequence Disclosures - the Sequence Rules") и соответствуют стандарту ST.25 (1998) Всемирной организации интеллектуальной собственности (WIPO) и требованиям к спискам последовательностей EPO и PCT (Правила 5.2 и 49.5(a-bis), раздел 208 и дополнение C административной инструкции). Символы и формат, применяемые для данных по нуклеотидной и аминокислотной последовательности, удовлетворяют требованиям правил, изложенных в 37 C.F.R. §1.822.

SEQ ID NO:1-6 и 53-62 представляют собой аминокислотные последовательности связывающихся с волосами пептидов.

SEQ ID NO:7 и 63-74 представляют собой аминокислотные последовательности связывающихся с кожей пептидов.

SEQ ID NO:8-12 представляют собой аминокислотные последовательности полученных эмпирически связывающихся с волосами и кожей пептидов.

SEQ ID NO:13-15 представляют собой аминокислотные последовательности пептидных спейсеров.

SEQ ID NO:16-21 представляют собой аминокислотные последовательности мультикопийных связывающихся с волосами пептидов.

SEQ ID NO:22 представляет собой аминокислотную последовательность случайным образом синтезированного пептида.

SEQ ID NO:23 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты кодирующей области для мультикопийного связывающегося с волосами пептида HC77607.

SEQ ID NO: 24 представляет собой аминокислотную последовательность пептида TBP1.

SEQ ID NO:25-29 представляют собой последовательности нуклеиновой кислоты для олигонуклеотидов, используемых для получения гена TBP1, как описано в примере 5.

SEQ ID NO:30 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты синтетического фрагмента ДНК TBP1.

SEQ ID NO:31-36 представляют собой последовательности нуклеиновой кислоты для олигонуклеотидных праймеров, используемых для получения экспрессирующей плазмиды pINK1, как описано в примере 5.

SEQ ID NO:37 представляет собой аминокислотную последовательность пептида TBP101, описанного в примере 5.

SEQ ID NO:38 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующей последовательности для INK101.

SEQ ID NO:39 представляет собой аминокислотную последовательность пептида TBP101-DP, как описано в примере 5.

SEQ ID NO:40 и 41 представляют собой последовательности нуклеиновой кислоты для олигомеров, используемых для сайт-направленного мутагенеза плазмиды pINK101, как описано в примере 5.

SEQ ID NO:42 представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты плазмиды pINK101-DP.

SEQ ID NO: 43 представляет собой аминокислотную последовательность пептида IBT3.

SEQ ID NO:44, 45 и 48-51 представляют собой последовательности нуклеиновой кислоты олигонуклеотидов, используемых для сайт-направленного мутагенеза, как описано в примере 5.

SEQ ID NO:46 и 47 представляют собой последовательности нуклеиновой кислоты праймеров, используемых для амплификации фрагмента фермента кетостероид-изомеразы, как описано в примере 5.

SEQ ID NO:52 представляет собой аминокислотную последовательность связывающегося с волосами пептида с добавленным к C-концу остатком цистеина.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение относится к способу усиления эффектов окрашивающих веществ, кондиционеров и других средств с благоприятным действием с использованием связывающихся с волосами или кожей пептидов в качестве закрепителя. Изобретение является применимым, поскольку способ можно использовать для окрашивания или кондиционирования волос и кожи, обеспечивая увеличенную стойкость по сравнению с общепринятыми способами.

Здесь используют следующие определения, к которым следует обращаться для интерпретации формулы и описания изобретения.

Термин «изобретение» или «настоящее изобретение» в рамках изобретения является неограничивающим термином и не предназначен для обозначения какого-либо отдельного варианта осуществления конкретного изобретения, но охватывает все возможные варианты осуществления, как описано в описании и формуле изобретения.

«HBP» обозначает связывающийся с волосами пептид.

«SBP» обозначает связывающийся с кожей пептид.

«HCA» обозначает кондиционер для волос.

«SCA» обозначает кондиционер для кожи.

«BA» обозначает средство с благоприятным действием.

Термин «пептид» относится к двум или более аминокислотам, соединенным друг с другом пептидными связями или модифицированными пептидными связями.

Термин «связывающийся с волосами пептид» относится к пептидным последовательностям, связывающимся с волосами с высокой аффинностью. Связывающиеся с волосами пептиды по изобретению обладают длиной от приблизительно 7 аминокислот до приблизительно 50 аминокислот, более предпочтительно от приблизительно 7 аминокислот до приблизительно 25 аминокислот, наиболее предпочтительно от приблизительно 7 до приблизительно 20 аминокислот.

Термин «связывающийся с кожей пептид» относится к пептидным последовательностям, связывающимся с кожей с высокой аффинностью. Связывающиеся с кожей пептиды по изобретению обладают длиной от приблизительно 7 аминокислот до приблизительно 50 аминокислот, более предпочтительно от приблизительно 7 аминокислот до приблизительно 25 аминокислот, наиболее предпочтительно от приблизительно 7 до приблизительно 20 аминокислот.

Термин «средство с благоприятным действием» представляет собой общий термин, который относится к средству, обеспечивающему косметический или профилактический эффект при нанесении на кожу или волосы. Средства с благоприятным действием, как правило, включают в себя кондиционеры, окрашивающие вещества, отдушки, отбеливатели, солнцезащитные средства и т.п. вместе с другими веществами, общепринятыми в индустрии личной гигиены.

Термин «волосы» в рамках изобретения относится к волосам, бровям и ресницам человека.

Термин «кожа» в рамках изобретения относится к коже человека или заменителям кожи человека, таким как кожа свиньи, Vitro-Skin® и EpiDerm™. Кожа в рамках изобретения как поверхность тела, будет, как правило, содержать слой эпителиальных клеток и может, кроме того, содержать слой эндотелиальных клеток.

Термины «присоединение» и «присоединенный» в рамках изобретения относятся к любой химической связи и включают в себя как ковалентные, так и нековалентные взаимодействия.

Термин «строгость» применительно к отбору связывающихся с волосами и связывающихся с кожей пептидов по настоящему изобретению относится к концентрации элюирующего средства (как правило, детергента), используемого для элюирования пептидов из волос или кожи. Более высокие концентрации элюирующего средства обеспечивают более строгие условия.

Термин «комплекс пептид-волосы» обозначает структуру, содержащую пептид, связанный со стержнем волоса посредством участка связывания на пептиде.

Термин «комплекс пептид-кожа» обозначает структуру, содержащую пептид, связанный с кожей посредством участка связывания на пептиде.

Термин «комплекс пептид-субстрат» относится либо к комплексу пептид-волосы, либо к комплексу пептид-кожа.

Термин «наночастицы» определяют здесь как частицы со средним диаметром частиц между 1 и 500 нм. Предпочтительно средний диаметр частиц составляет между 1 и 200 нм. В рамках изобретения «размер частиц» и «диаметр частиц» обладают одинаковым значением. Наночастицы включают в себя в качестве неограничивающих примеров металлические, полупроводниковые, полимерные или другими органические или неорганические частицы.

Термин «аминокислота» относится к основной химической структурной единице белка или полипептида. Следующие аббревиатуры используют для обозначения конкретных аминокислот:

Аминокислота	Трехбуквенная аббревиатура	Однобуквенная аббревиатура
Аланин	Ala	A
Аргинин	Arg	R
Аспарагин	Asn	N
Аспарагиновая кислота	Asp	D
Цистеин	Cys	C
Глутамин	Gln	Q
Глутаминовая кислота	Glu	E
Глицин	Gly	G
Гистидин	His	H
Изолейцин	Ile	I
Лейцин	Leu	L
Лизин	Lys	K
Метионин	Met	M
Фенилаланин	Phe	F
Пролин	Pro	P
Серин	Ser	S
Треонин	Thr	T
Триптофан	Trp	W
Тирозин	Tyr	Y
Валин	Val	V

«Ген» относится к фрагменту нуклеиновой кислоты, экспрессирующему конкретный белок, включающему регуляторные последовательности, предшествующие кодирующей последовательности (5'-некодирующие последовательности) и следующие за ней (3'-некодирующие последовательности). «Нативный ген» относится к гену, как он обнаружен в природе, с его собственными регуляторными последовательностями. «Химерный ген» относится к любому гену, который не является нативным геном, содержащему регуляторные и кодирующие последовательности, вместе не обнаруженные в природе. Соответственно, химерный ген может содержать регуляторные последовательности и кодирующие последовательности, полученные из различных источников, или регуляторные последовательности и кодирующие последовательности, полученные из одного и того же источника, но расположенные иначе, чем это встречается в природе. «Чужеродный» ген относится к гену, в норме не обнаруживаемому в организме-хозяине, но введенному в организм-хозяин посредством переноса генов. Чужеродные гены могут включать в себя нативные гены, введенные в неприродный организм, или химерные гены.

«Синтетические гены» можно собирать из олигонуклеотидных структурных элементов, химически синтезированных с использованием способов, известных специалистам в данной области. Эти структурные элементы лигируют и гибридизуют для получения фрагментов гена, которые затем собирают химически для конструирования целого гена. «Химически синтезированный» по отношению к последовательности ДНК означает, что составляющие нуклеотиды собирают in vitro. Можно выполнять ручной химический синтез ДНК с использованием общепринятых способов или можно выполнять автоматический химический синтез с использованием одного из ряда коммерчески доступных аппаратов. Соответственно, гены можно адаптировать для оптимальной экспрессии гена на основании оптимизации нуклеотидной последовательности, чтобы отражать предпочтение кодонов клетки-хозяина. Специалисты в данной области принимают во внимание вероятность успешной экспрессии гена, если использование кодонов смещено в сторону кодонов, предпочтительных для хозяина. Определение предпочтительных кодонов можно основывать на исследовании генов, полученных из клетки-хозяина, для которых доступна информация о последовательности.

Термин «фаг» или «бактериофаг» относится к вирусу, инфицирующему бактерии. Измененные формы можно использовать для целей настоящего изобретения. Предпочтительный бактериофаг получен из фага «дикого типа», называемого M13. Система M13 может расти внутри бактерии, так что она не разрушает инфицированную ею клетку, но заставляет ее постоянно производить новые фаги. Он является одноцепочечным ДНК-фагом.

Термин «фаговый дисплей» относится к экспонированию функциональных чужеродных пептидов или малых белков на поверхности частиц бактериофага или фагмиды. Полученный способами генетической инженерии фаг можно использовать для представления пептидов в качестве фрагментов его природных поверхностных белков. Посредством популяций фагов с различными последовательностями генов можно получить пептидные библиотеки.

«ПЦР», или «полимеразная цепная реакция», представляет собой способ, используемый для амплификации специфических фрагментов ДНК (патенты США No. 4683195 и 4800159).

Стандартные способы рекомбинантной ДНК и молекулярного клонирования, используемые в рамках изобретения, хорошо известны в данной области и описаны в Sambrook, J., Fritsch, E. F. and Maniatis, T., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1989) (далее в этом документе «Maniatis»); и в Silhavy, T. J., Bennan, M. L. and Enquist, L. W., Experiments with Gene Fusions, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1984); и в Ausubel, F. M. et al., Current Protocols in Molecular Biology, published by Greene Publishing Assoc, and Wiley-Interscience (1987).

Изобретение относится к способу усиления эффектов окрашивающих веществ, кондиционеров и других средств с благоприятным действием с использованием связывающихся с волосами или кожей пептидов в качестве закрепителя. Связывающиеся с волосами и кожей пептиды обладают аффинностью связывания для волос или кожи соответственно, и их можно идентифицировать с использованием комбинаторных способов, таких как фаговый дисплей, или можно получить эмпирически. Кроме того, в качестве закрепителя можно использовать конъюгаты, содержащие связывающийся с волосами или кожей пептид, присоединенный к средству с благоприятным действием. В способе по изобретению закрепитель на основе пептидов можно использовать либо одновременно с применением средства с благоприятным действием, либо после применения средства с благоприятным действием, либо перед применением средства с благоприятным действием, чтобы закрепить средство с благоприятным действием на волосах или коже.

Идентификация связывающихся с волосами и связывающихся с кожей пептидов

Связывающиеся с волосами пептиды (HBP) и связывающиеся с кожей пептиды (SBP), как определено здесь, представляют собой пептидные последовательности, которые специфически связываются с высокой аффинностью с волосами или кожей соответственно. Связывающиеся с волосами или кожей пептиды не обладают специфической аффинностью для средства с благоприятным действием, однако они могут неспецифически взаимодействовать с некоторыми средствами с благоприятным действием, в частности со средствами, являющимися полярными. Связывающиеся с волосами и связывающиеся с кожей пептиды по изобретению имеют длину от приблизительно 7 аминокислот до приблизительно 50 аминокислот, более предпочтительно от приблизительно 7 аминокислот до приблизительно 25 аминокислот, наиболее предпочтительно от приблизительно 7 до приблизительно 20 аминокислот. Подходящие связывающиеся с волосами или кожей пептиды можно отбирать с использованием способов, хорошо известных в данной области, или можно получать эмпирически.

Связывающиеся с волосами или связывающиеся с кожей пептиды можно получать случайным образом и затем отбирать с помощью специфического образца волос или кожи на основании их аффинности связывания с интересующим субстратом, как описано Huang et al. в публикации, находящейся одновременно на рассмотрении и в совместном владении патентной заявки США No.2005/0050656, содержание которой приведено здесь в качестве ссылки. Получение библиотек случайных пептидов хорошо известно, и его можно осуществлять множеством способов, включая бактериальный дисплей (Kemp, D. J.; Proc. Natl. Acad. Sc/. USA 78(7):4520-4524 (1981), и Helfman et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80(1):31-35, (1983)), дрожжевой дисплей (Chien et al., Proc Natl Acad Sci USA 88(21):9578-82 (1991)), комбинаторный твердофазный синтез пептидов (патент США No. 5449754, патент США No. 5480971, патент США No. 5585275, патент США No.5639603), и способ фагового дисплея (патент США No. 5223409, патент США No. 5403484, патент США No. 5571698, патент США No. 5837500). Способы получения таких библиотек биологических пептидов хорошо известны в данной области. Примерные способы описаны в Dani, M., J. of Receptor & Signal Transduction Res., 21 (4):447-468 (2001), Sidhu et al., Methods in Enzymology 328:333-363 (2000), Kay et al., Combinatorial Chemistry & High Throughput Screening, Vol. 8:545-551 (2005), и Phage Display of Peptides and Proteins, A Laboratory Manual, Brian K. Kay, Jill Winter, and John McCafferty, eds.; Academic Press, NY, 1996. Кроме того, библиотеки для фагового дисплея коммерчески доступны в таких компаниях, как New England Biolabs (Beverly, MA).

Предпочтительным способом получения пептидов случайным образом является получение посредством фагового дисплея. Фаговый дисплей представляет собой способ отбора in vitro, в котором пептид или белок генетически сливают с белком оболочки бактериофага, получая в результате экспонирование слитого пептида на поверхности фагового вириона, в то время как ДНК, кодирующая слитый белок, находится внутри вириона. Эта физическая связь между экспонированным пептидом и ДНК, кодирующей его, позволяет скрининг большого числа вариантов пептидов, каждый из которых связан с соответствующей последовательностью ДНК посредством простого способа отбора in vitro, названного «биопэннинг». В его наиболее простой форме биопэннинг проводят посредством инкубации пула экспонированных на фагах вариантов с интересующей мишенью, иммобилизованной на планшете или бусине, отмывки несвязавшегося фага и элюции специфически связавшегося фага посредством разрушения связывающих взаимодействий между фагом и мишенью. Затем элюированный фаг амплифицируют in vivo и процесс повторяют, получая в результате пошаговое обогащение фагового пула в пользу последовательностей с наиболее прочным связыванием. После 3 или более циклов отбора/амплификации, отдельные клоны характеризуют секвенированием ДНК.

Конкретно, связывающиеся с волосами или кожей пептиды можно отбирать с использованием следующего способа. Подходящую библиотеку пептидов получают с использованием описанных выше способов или библиотеку закупают у коммерческого поставщика. После получения библиотеки пептидов библиотеку приводят в контакт с соответствующим количеством тестового субстрата, конкретно образца волос или кожи. Библиотеку пептидов растворяют в подходящем растворе для контакта с образцом. Тестовый образец можно суспендировать в растворе или можно иммобилизовать на планшете или бусине. Предпочтительным раствором является забуференный водный солевой раствор, содержащий поверхностно-активное вещество. Подходящим раствором является Трис-солевой буфер (TBS) с 0,5% Tween® 20. Раствор дополнительно можно перемешивать любым способом, чтобы увеличивать скорость переноса массы пептидов к тестовому субстрату, таким образом уменьшая время, требуемое для достижения максимального связывания.

При контакте ряд полученных случайным образом пептидов будет связываться с тестовым субстратом с формированием комплекса пептид-субстрат (т.е. комплекса пептид-волосы или пептид-кожа). Несвязавшийся пептид можно удалить отмывкой. После удаления всего несвязавшегося материала пептиды, обладающие различной степенью аффинности связывания для тестового субстрата, можно фракционировать избирательными отмывками в буферах, обладающих различной строгостью. Увеличение строгости используемого буфера увеличивает требуемую силу связи между пептидом и тестовым субстратом в комплексе пептид-субстрат.

Множество веществ можно использовать, чтобы менять строгость буферного раствора для отбора пептидов, включая в качестве неограничивающих примеров кислый pH (1,5-3,0); основной pH (10-12,5); высокие концентрации соли, такой как MgCl₂ (3-5 M) и LiCl (5-10 M); воду; этиленгликоль (25-50%); диоксан (5-20%); тиоцианат (1-5 M); гуанидин (2-5 M); мочевину (2-8 M); и различные концентрации различных поверхностно-активных веществ, таких как SDS (додецилсульфат натрия), DOC (дезоксихолат натрия), Nonidet P-40, Triton X-100, Tween® 20, где Tween®20 является предпочтительным. Эти вещества можно получить в буферных растворах, включая в качестве неограничивающих примеров Трис-HCl, Трис-солевой буфер, Трис-борат, Трис-уксусную кислоту, триэтиламин, фосфатный буфер и глицин-HCl, где Трис-солевой буфер является предпочтительным.

Следует учитывать, что пептиды, обладающие увеличенной аффинностью для тестового субстрата, можно элюировать посредством повторения процесса отбора с использованием буферов с увеличивающейся строгостью. Элюированные пептиды можно идентифицировать и секвенировать любыми способами, известными в данной области.

В одном варианте осуществления можно использовать следующий способ для получения связывающихся с волосами или связывающихся с кожей пептидов по настоящему изобретению. Библиотеку полученных комбинаторно фагов-пептидов приводят в контакт с интересующим тестовым субстратом для получения комплексов фаг-пептид-субстрат. Комплекс фаг-пептид-субстрат отделяют от не входящих в комплекс пептидов и несвязанного субстрата и связанные фаги-пептиды из комплексов фаг-пептид-субстрат элюируют из комплекса, предпочтительно посредством обработки кислотой. Затем элюированные фаги-пептиды идентифицируют и секвенируют. Для идентификации последовательностей пептидов, которые связываются с одним субстратом, но не с другим, например пептидов, которые связываются с волосами, но не с кожей, или пептидов которые связываются с кожей, но не с волосами, можно добавить стадию вычитательного пэннинга. Конкретно, библиотеку полученных комбинаторно фагов-пептидов сначала приводят в контакт с не являющимся мишенью субстратом, чтобы удалить фаги-пептиды, которые с ним связываются. Затем несвязавшиеся фаги-пептиды приводят в контакт с желаемым субстратом и продолжают вышеуказанный способ. Альтернативно, библиотеку полученных комбинаторно фагов-пептидов можно приводить в контакт с не являющимся мишенью и желаемым субстратом одновременно. Затем комплексы фаг-пептид-субстрат отделяют от комплексов фаг-пептид-не являющийся мишенью субстрат и продолжают способ, описанный выше, для желаемых комплексов фаг-пептид-волосы или фаг-пептид-кожа.

Альтернативно, для выделения пептидов с более высокой аффинностью для волос или кожи можно использовать модифицированный способ скрининга фагового дисплея. При модифицированном способе комплексы фаг-пептид-субстрат формируют, как описано выше. Затем эти комплексы обрабатывают буфером для элюции. Можно использовать любой из буферов для элюции, описанных выше. Предпочтительно буфер для элюции представляет собой кислый раствор. Затем оставшиеся устойчивые к элюции комплексы фаг-пептид-субстрат используют для прямой инфекции бактериальной клетки-хозяина, такой как E. coli ER2738. Инфицированные клетки-хозяева выращивают в подходящей культуральной среде, такой как среда LB (Лурия-Бертани), и эту культуру распределяют по агару, содержащему подходящую культуральную среду, такую как среда LB с IPTG (изопропил β-D-тиогалактопиранозид) и S-Gal™. После роста отбирают бляшки для выделения ДНК и секвенирования для идентификации пептидных последовательностей с высокой аффинностью связывания для интересующего субстрата. Альтернативно, можно использовать ПЦР для идентификации устойчивых к элюции фагов-пептидов по модифицированному способу скрининга фагового дисплея, описанному выше, посредством проведения ПЦР непосредственно на комплексах фаг-пептид-субстрат с использованием соответствующих праймеров, как описано Janssen et al. в публикации патентной заявки США No. 2003/0152976, приведенной здесь в качестве ссылки.

Устойчивые к шампуню связывающиеся с волосами пептиды можно отбирать с использованием модифицированного способа биопэннинга, как описано O'Brien et al. в публикации, находящейся одновременно на рассмотрении и в совместном владении патентной заявки США No. 2006/0073111, приведенной здесь в качестве ссылки. Сходным образом, устойчивые к кондиционеру для волос связывающиеся с волосами пептиды и устойчивые к композиции для ухода за кожей связывающиеся с кожей пептиды можно идентифицировать с использованием способов, описанных Wang et al. (находящаяся одновременно на рассмотрении и в совместном владении патентная заявка США No. 11/359163) и Wang et al. (находящаяся одновременно на рассмотрении и в совместном владении патентная заявка США No. 11/359162) соответственно. В этих способах либо исходную библиотеку фаговых пептидов растворяют в интересующей среде (т.е. в среде шампуня, в среде кондиционера для волос или в среде композиции для ухода за кожей) - для контактирования с субстратом, либо комплекс фаг-пептид-субстрат после его формирования после контакта субстрата с библиотекой фаговых пептидов, как описано выше, приводят в контакт с интересующей средой. Затем проводят способ биопэннинга, как описано выше. Среда шампуня, среда кондиционера для волос или среда композиции для ухода за кожей может представлять собой концентрированный коммерческий продукт или его разведение.

Подходящие связывающиеся с волосами пептиды и связывающиеся с кожей пептиды можно получить с использованием способов, описанных здесь. Кроме того, можно использовать любой известный связывающийся с волосами или связывающийся с кожей пептид, такой как пептиды, описанные Huang et al., (публикация находящейся одновременно на рассмотрении и в совместном владении патентной заявки США No.2005/0050656 и публикация патентной заявки США No. 2005/0226839), Estell et al. (WO 0179479); Murray et al., (публикация патентной заявки США No. 2002/0098524); Janssen et al., (публикация патентной заявки США No. 2003/0152976); Janssen et al., (WO 04048399), O'Brien et al. (публикация находящейся одновременно на рассмотрении и в совместном владении патентной заявки США No. 2006/0073111), Wang et al. (находящаяся одновременно на рассмотрении и в совместном владении патентная заявка США No. 11/359163) и Wang et al. (находящаяся одновременно на рассмотрении и в совместном владении патентная заявка США No. 11/359162), все из которых приведены здесь в качестве ссылки. Неограничивающие примеры подходящих связывающихся с волосами и связывающихся с кожей пептидов приведены в таблице 1.

Альтернативно, пептидные последовательности, связывающиеся с волосами и кожей, можно получать эмпирически посредством конструирования пептидов, содержащих положительно заряженные аминокислоты, которые могут связываться с волосами и кожей посредством электростатического взаимодействия, как описано Rothe et al. (WO 2004/000257). Эмпирически полученные связывающиеся с волосами и кожей пептиды содержат от приблизительно 7 аминокислот до приблизительно 50 аминокислот и содержат по меньшей мере приблизительно 40 молярных % положительно заряженных аминокислот, таких как лизин, аргинин и гистидин. Наиболее предпочтительными являются пептидные последовательности, содержащие трипептидные мотивы, такие как HRK, RHK, HKR, RKH, KRH, KHR, HKX, KRX, RKX, HRX, KHX и RHX, где X может представлять собой любую природную аминокислоту, но наиболее предпочтительно выбранную из аминокислот с нейтральными боковыми цепями, таких как глицин, аланин, пролин, лейцин, изолейцин, валин и фенилаланин. Кроме того, следует понимать, что пептидные последовательности должны отвечать другим функциональным требованиям для окончательного использования, включая растворимость, вязкость и совместимость с другими компонентами в составляемом продукте, и таким образом, будут меняться согласно необходимому применению. В некоторых случаях пептид может содержать вплоть до 60 молярных % аминокислот, не включающих в себя гистидин, лизин или аргинин. Подходящие эмпирически полученные связывающиеся с волосами и связывающиеся с кожей пептиды включают в себя в качестве неограничивающих примеров, SEQ ID NO: 8-12 (см. таблицу 1).

Может также являться благоприятным использовать смесь различных связывающихся с волосами или связывающихся с кожей пептидов. Пептиды в смеси необходимо выбирать так, чтобы не существовало взаимодействий между пептидами, уменьшающих благоприятный эффект. Специалист в данной области может определить подходящие смеси связывающихся с волосами или связывающихся с кожей пептидов с использованием общепринятых экспериментов. Кроме того, может являться желательным соединить два или более связывающихся с волосами пептидов или связывающихся с кожей пептидов вместе либо непосредственно, либо через спейсер, чтобы усилить взаимодействие пептида с субстратом. Способы получения композиций из множества пептидов и подходящих спейсеров описаны ниже. Неограничивающие примеры даны в таблице 1.

Получение связывающихся с волосами и кожей пептидов

Связывающиеся с волосами и кожей пептиды по настоящему изобретению можно получать с использованием общепринятых способов синтеза пептидов, хорошо известных в данной области (см., например, Stewart et al., Solid Phase Peptide Synthesis, Pierce Chemical Co., Rockford, IL, 1984; Bodanszky, Principles of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, New York, 1984; и Pennington et al., Peptide Synthesis Protocols, Humana Press, Totowa, NJ, 1994). Кроме того, многие компании предлагают услуги синтеза пептидов по заказу.

Альтернативно, пептиды по настоящему изобретению можно получать с использованием способов рекомбинантной ДНК и молекулярного клонирования. Гены, кодирующие связывающиеся с волосами или связывающиеся с кожей пептиды, можно получать в гетерологичных клетках-хозяевах, в частности в клетках хозяев-микроорганизмов, как описано Huang et al. (публикация патентной заявки США No. 2005/0050656), и как проиллюстрировано в примере 5 здесь. Пептиды, полученные посредством рекомбинантной ДНК и молекулярного клонирования, могут дополнительно содержать остаток пролина (P) на N-конце и, необязательно, остаток аспарагиновой кислоты (D) на C-конце. Эти дополнительные остатки происходят от использования участков расщепления DP для отделения желаемой пептидной последовательности от пептидных меток, используемых для стимулирования формирования телец включения, и между тандемными повторами пептидных последовательностей.

Средства с благоприятным действием для волос

Любое подходящее средство с благоприятным действием для волос, известное в данной области, можно использовать в спосо