Закрытый контейнер, содержащий активированный полипептид фактора vii, способы его получения и набор и способ применения набора

Закрытый контейнер, содержащий активированный полипептид фактора vii, способы его получения и набор и способ применения набора

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к закрытому контейнеру, содержащему композицию активированного полипептида фактора VII в количестве в диапазоне 2,5-90 мг на 1 мл объема контейнера. Изобретение также относится к разным способам получения подобных закрытых контейнеров, набору, включающему подобные контейнеры, и способу применения этого набора.

Предшествующий уровень техники

Доказано, что фактор VII, который вовлечен в систему свертывания крови, является полезным терапевтическим агентом при лечении ряда патологических состояний. Таким образом, существует увеличивающаяся потребность в препаратах, содержащих активированные полипептиды фактора VII, которые являются фармацевтически приемлемыми и проявляют постоянную и предопределенную клиническую эффективность. Для определенных терапевтических применений необходимо вводить довольно большое количество активированного полипептида фактора VII, например порядка 40 мкг/кг веса тела или даже больше.

Общепринятая имеющаяся в продаже композиция полученного рекомбинантным путем полипептида фактора VII НовоСэвен® (NovoSeven®, Novo Nordisk A/S, Дания) представлена, например, в виде флакона (объем контейнера около 3,0 мл), содержащего 1,2 мг рекомбинантного фактора VIIa человека, 5,84 мг NaCl, 2,94 мг CaCl₂×2H₂O, 2,64 мг GlyGly, 0,14 мг полисорбата 80 и 60,0 мг маннита. Данный продукт перед применением восстанавливают 2,0 мл воды для инъекций (WFI) до рН 5,5, таким образом получая концентрацию полипептида фактора VII приблизительно 0,6 мг/мл.

Для терапевтических применений, когда необходимо вводить большие количества (например, 10-20 мг) активированного полипептида фактора VII (например, полученного рекомбинантным путем фактора VIIa человека), неудобно использовать препарат, подобный композиции НовоСэвен®, так как требуется вводить довольно большой объем (например, 15-30 мл), обычно путем инъекции.

Таким образом, существует потребность в жидких фармацевтических продуктах, а также высушенных сублимацией фармацевтических продуктах для последующего восстановления, содержащих активированный полипептид фактора VII, в которых относительно большое количество активированного полипептида фактора VII находится в определенном объеме контейнера, в результате чего объем, который вводят, в основном в ходе инъекции, причиняет минимум неудобства для конечного потребителя.

WO 03/055512 А1 раскрывает жидкую водную композицию, содержащую (1) полипептид фактора VII; (2) агент, пригодный для поддержания рН в диапазоне от приблизительно 4,0 до приблизительно 8,0; (3) агент, выбранный из списка: соль кальция, соль магния или их смесь; где концентрация (3) составляет по меньшей мере 15 мМ. По-видимому, изобретение, раскрытое в этой международной патентной заявке, применимо для полипептидов фактора VII в разных концентрационных диапазонах, включая интервал концентраций от приблизительно 0,1 мг/мл до приблизительно 10 мг/мл.

WO 2004/000347 А1 раскрывает между прочим композицию, которая при растворении в воде содержит полипептид фактора VII (от 0,6 до 10 мг/мл), хлорид кальция (от 5 до 20 мМ), NaCl (0-50 мМ), глицилглицин (0-15 мМ), L-гистидин (0-20 мМ), маннит (20-40 мг/мл), сахарозу (5-20 мг/мл), метионин (0-1 мг/мл), полоксамер 188 (0,5-3 мг/мл) при рН в пределах от 5,0 до 7,0.

WO 2004/082708 А1 раскрывает жидкую водную фармацевтическую композицию, содержащую полипептид фактора VII (0,1-10 мг/мл) и буферный агент, пригодный для поддержания рН в диапазоне от приблизительно 5,0 до приблизительно 9,0; где молярное отношение не связанных в комплекс ионов кальция (Са²⁺) к полипептиду фактора VII составляет меньше 0,5.

WO 2004/112828 А1 раскрывает жидкую водную композицию, содержащую (1) полипептид фактора VII; (2) агент, пригодный для поддержания рН в диапазоне от приблизительно 4,0 до приблизительно 8,0; (3) агент, выбранный из списка: соль кальция, соль магния или их смесь; где концентрация (3) составляет менее 15 мМ; и (4) модификатор ионной силы; где ионная сила композиции составляет по меньшей мере 200 мМ. По-видимому, изобретение, раскрытое в международной патентной заявке, применимо для полипептидов фактора VII в разных концентрационных диапазонах, включая интервал концентраций от приблизительно 0,1 мг/мл до приблизительно 10 мг/мл.

WO 2005/016365 A1 раскрывает жидкую водную фармацевтическую композицию, содержащую по меньшей мере 0,01 мг/мл полипептида фактора VII (1); буферный агент (2), пригодный для поддержания рН в диапазоне от приблизительно 5,0 до приблизительно 9,0, и по меньшей мере один стабилизирующий агент (3), включающий фрагмент -C(=N-Z¹-R¹)-NH-Z²-R² (например, бензамидин или аргинин). По-видимому, изобретение, раскрытое в международной патентной заявке, применимо для полипептидов фактора VII в разных концентрационных диапазонах, включая интервал концентраций 0,01-20 мг/мл.

Несмотря на то что некоторые предшествующие патентные заявки заявителя охватывают возможность применения соответствующего изобретения для жидких растворов полипептида фактора VII в довольно широком диапазоне концентраций, в их демонстрационных примерах не исследовали верхнюю область таких пределов концентраций, также ни в одной предшествующей патентной заявке не раскрыт или предвосхищен закрытый контейнер, содержащий относительно большое количество активированного полипептида фактора VII. Считается, что это обусловлено общепринятым суждением, что степень расщепления полипептида фактора VII, в частности расщепления тяжелой цепи, будет существенно увеличиваться с увеличением концентрации полипептида фактора VII независимо от общих мер, применяемых с целью уменьшить автокаталитическое расщепление активированного полипептида фактора VII, и что высокая степень расщепления будет давать продукты, которые будут неприемлемы для большинства терапевтических применений.

Кроме того, считается, что то обстоятельство, что промышленный продукт предшествующего уровня техники содержит относительно большие количества кальция, может стать неразрешимым, когда будут необходимы большие количества активного компонента (полипептида фактора VII) для лечения особых состояний. Поэтому большие количества кальция могут потребовать высокие концентрации полипептида фактора VII в маленьком объеме.

Для того чтобы получить закрытый контейнер с высоким содержанием активированного полипептида фактора VII на единицу объема контейнера, требуется высококонцентрированный раствор очищенного активированного полипептида фактора VII, который можно дозировать в контейнер. До настоящего времени это считалось затруднительным или даже невозможным, так как активированный полипептид фактора VII представляет собой сериновую протеазу, которая обладает аутопротеолитической активностью, что означает, что белок катализирует свое расщепление (см., например, "The Use of RP-HPLC for measuring activation and cleavage of rFVIIa during purification" (Использование ОФ-ВЭЖХ для измерения возбуждения и расщепления rFVIIa в процессе очистки), 1. Mollerup et al., Biotechnol. Bioeng., том 48 (1995), 501-505 и "Studies on coagulation factor VIIa autoproteolysis and formation of degradation products" (Исследования аутопротеолиза коагулирующего фактора VIIa и образования продуктов расщепления), Т.В.Hansen et al., доклад представлен в ACS (2003)). Разрушение происходит в результате расщепления на С-концевой стороне Lys38, Arg290 и Arg315. В ходе расщепления белок ослабляет свою кровоостанавливающую функцию и таким образом свой терапевтический эффект. Скорость расщепления пропорциональна концентрации активированного полипептида фактора VII во втором порядке, как указано ниже:

-d[FVIIa]/dt=k[FVIIa]²,

где [FVIIa] представляет собой концентрацию активированного полипептида фактора VII.

Это означает, что если концентрацию активированного полипептида фактора VII увеличить, например, в 10 раз, то скорость расщепления, как ожидается, увеличится в 100 раз.

Другая сложность концентрирования активированного полипептида фактора VII заключается в его растворимости, это означает, что активированный полипептид фактора VII начнет выпадать в осадок, когда достигнет определенной концентрации в том или ином буфере.

Краткое описание изобретения

В настоящее время данные изобретатели неожиданно обнаружили, что действительно возможно получить подходящий фармацевтический продукт (например, флакон, карпулу и т.п.) с соответствующим большим количеством активированного полипептида фактора VII, поскольку степень автокаталитического расщепления, в особенности расщепления тяжелой цепи, активированных полипептидов фактора VII можно уменьшить при соответствующем подборе условий, и что степень расщепления будет ниже ожидаемой.

Таким образом, первый аспект настоящего изобретения относится к закрытому контейнеру, включающему композицию активированного полипептида фактора VII (1), к указанному контейнеру, содержащему активированный полипептид фактора VII в диапазоне 2,5-90 мг на 1 мл объема контейнера.

Второй аспект настоящего изобретения относится к способам получения закрытого контейнера, содержащего активированный полипептид фактора VII.

Третий аспект настоящего изобретения относится к набору, включающему (1) закрытый первый контейнер, содержащий твердую фармацевтическую композицию активированного полипептида фактора VII, и (2) второй контейнер, содержащий жидкий водный растворитель для указанной твердой фармацевтической композиции, где первый контейнер включает композицию, содержащую активированный полипептид фактора VII в диапазоне 2,5-90 мг на 1 мл объема первого контейнера.

Четвертый аспект настоящего изобретения относится к способу получения готовой к применению жидкой водной фармацевтической композиции активированного полипептида фактора VII из набора, как определено здесь, к способу, в ходе которого смешивают твердую фармацевтическую композицию первого контейнера с по меньшей мере фракцией жидкого водного растворителя второго контейнера, чтобы получить готовую к применению жидкую водную фармацевтическую композицию активированного полипептида фактора VII.

Чертёж показывает оптическую плотность ОП₆₀₀ как функцию концентрации FVIIa (мг/мл).

Подробное описание изобретения

Как упоминалось выше, по настоящему изобретению предложен закрытый контейнер, включающий композицию активированного полипептида фактора VII (1), указанный контейнер, содержащий активированный полипептид фактора VII в диапазоне 2,5-90 мг на 1 мл объема контейнера.

Термин «закрытый» означает, что содержимое контейнера отделено от внешней среды. Таким образом, контейнер обычно создается так, чтобы необходимо было сломать пломбу или необходимо было удалить крышку перед тем, как содержимое контейнера станет доступно. В предпочтительных воплощениях контейнер является водо- и газонепроницаемым, например контейнер является также воздухонепроницаемым, чтобы воздух и влага не могли проникнуть внутрь контейнера и тем самым вызвать разрушение содержимого. Свободный объем контейнера может быть заполнен инертным газом. Инертный газ можно выбрать из группы, состоящей из азота, аргона и т.п.

Контейнер (например, флакон, карпулу или картридж (такой как карпула или картридж для ручки-аппликатора)) обычно изготавливают из стекла или пластмассы, в особенности стекла, возможно закрывают резиновой прокладкой или другими закрывающими устройствами, позволяющими проникнуть внутрь с сохранением целостности фармацевтической композиции. В одном воплощении контейнер представляет собой флакон, карпулу или картридж, помещенный в запечатанный пакет, например запечатанный пластиковый пакет, такой как ламинированный (например, покрытый металлом (таким как алюминий) пластиковый пакет). В интересном варианте материал внутренней стенки контейнера выбран из стекла с кремниевым покрытием, стекла с силиконовым покрытием, полимеров нециклических олефинов, циклоолефиновых полимеров и сополимеров циклоолефинов / линейных олефинов, например, как раскрыто в более ранней заявке заявителя WO 2004/103398.

При использовании здесь термин «продукт» относится к контейнеру, включающему композицию активированного полипептида фактора VII. То есть термин «продукт» обычно является имеющимся в продаже продуктом, таким как флакон, карпула или картридж, содержащий композицию активированного полипептида фактора VII.

Термин «композиция» относится к твердой или жидкой смеси, которая включает активированный полипептид фактора VII и возможно одну или более добавок, например буферы, стабилизирующие агенты, модификаторы тоничности и т.п. (см. ниже).

Активированный полипептид фактора VII является таким, как определено ниже.

Предполагают, что термин «мл объема контейнера» относится к внутреннему объему рассматриваемого контейнера, выраженному в миллилитрах (мл), то есть к объему пространства контейнера, где находится полипептид фактора VII. Объем закрытого (например, запечатанного) контейнера можно определить наиболее точно, как объем свободного пространства соответствующего закрытого и пустого контейнера, то есть объем контейнера, не занятый пробкой, пломбой или подобным. Например, общепринятая имеющаяся в продаже композиция полученного рекомбинантным путем полипептида фактора VII НовоСэвен® (Novo Nordisk A/S, Дания) выпускается в виде флаконов трех разных размеров, (1) 4,3 мл ± 0,5 мл объема, (2) 7,1 мл ± 0,5 мл объема и (3) 13,5 мл ± 1,0 мл объема. В этих флаконах пробки занимают 0,44 мл объема контейнера, то есть свободное пространство соответствующих закрытых и пустых контейнеров составляет (1) 3,86 мл ± 0,5 мл, (2) 6,66 мл ± 0,5 мл и (3) 13,06 мл ± 1,0 мл.

Контейнер обычно содержит активированный полипептид фактора VII в диапазоне 2,5-90 мг, например в диапазоне 2,5-75 мг или в диапазоне 4-90 мг, на 1 мл объема контейнера. В некоторых воплощениях контейнер содержит 4-60 мг на 1 мл объема, например 4-50 мг на 1 мл объема, или 5-25 мг на 1 мл объема, или 6-15 мг на 1 мл объема. В других воплощениях контейнер содержит 2,5-60 мг на 1 мл объема, например 2,5-50 мг на 1 мл объема, или 2,5-40 мг на 1 мл объема, или 2,5-30 мг на 1 мл объема. Для некоторых терапевтических применений контейнер может содержать 4-15 мг на 1 мл объема, или 6-40 мг на 1 мл объема, или 10-30 мг на 1 мл объема, или 25-60 мг на 1 мл объема.

Композиция активированного полипептида фактора VII может находиться либо в солюбилизированной форме, например в виде водного раствора или суспензии, либо в сухой форме, например в лиофилизированной форме.

Композиция в солюбилизированной форме

В одном воплощении активированный полипептид фактора VII находится в солюбилизированной форме, например в водном растворе. Предпочтительно водный раствор активированного полипептида фактора VII представляет собой жидкую фармацевтическую композицию, в частности готовую к применению фармацевтическую композицию активированного полипептида фактора VII.

Под термином «водный раствор» понимают, что активированный полипептид фактора VII солюбилизирован в растворителе, который главным образом состоит из воды, то есть органические растворители составляют самое большее 5%, в частности самое большее 2%, композиции.

Чтобы сделать водный раствор пригодным для непосредственного парентерального введения млекопитающему, такому как человек, обычно требуется, чтобы значение рН композиции поддерживалось в приемлемых пределах, таких как от приблизительно 5,0 до приблизительно 9,0. Для того чтобы обеспечить подходящее значение рН при данных условиях, фармацевтическая композиция обычно содержит буферный агент (2), пригодный для поддержания рН в диапазоне от приблизительно 5,0 до приблизительно 9,0. С дополнительной целью сделать водный раствор более стабильным при хранении и манипуляциях, раствор предпочтительно имеет рН в интервале 5,0-7,0. Предпочтительно рН находится в интервале 5,8-6,5 или в интервале 5,5-6,2, с особым предпочтением для рН в интервале 5,8-6,2.

Термин «буферный агент» охватывает те агенты или комбинации агентов, которые поддерживают рН раствора в приемлемом диапазоне от приблизительно 5,0 до приблизительно 9,0, в частности от приблизительно 5,0 до приблизительно 6,5, например в диапазоне 5,8-6,5 или в диапазоне 5,5-6,2, в особенности в диапазоне 5,8-6,2. В одном воплощении рН композиции сохраняется от приблизительно 5,0 до приблизительно 6,5, от приблизительно 5,0 до приблизительно 6,0, от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,5, от приблизительно 6,2 до приблизительно 6,5, или от приблизительно 5,7 до приблизительно 6,2, или от приблизительно 5,2 до приблизительно 5,7.

В одном воплощении буферный агент (2) представляет собой по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из кислот и солей MES, PIPES, ACES, BES, TES, HEPES, TRIS, гистидина, имидазола, глицина, глицилглицина, глицинамида, фосфорной кислоты, уксусной кислоты (например, ацетата натрия или кальция), молочной кислоты, глутаровой кислоты, лимонной кислоты, винной кислоты, яблочной кислоты, малеиновой кислоты и янтарной кислоты. Следует понимать, что буферный агент может включать смесь двух или более компонентов, где смесь будет обеспечивать значение рН в установленном диапазоне. В качестве примеров можно привести уксусную кислоту и ацетат натрия и т.п.

Концентрацию буферного агента выбирают таким образом, чтобы поддерживать предпочтительный рН раствора. В разных воплощениях концентрация буферного агента находится в интервале 1-100 мМ, в интервале 1-50 мМ, в интервале 1-25 мМ или в интервале 2-20 мМ.

В дополнение к трем обязательным компонентам (полипептид FVII, растворитель, буферный агент) жидкая водная фармацевтическая композиция может содержать дополнительные компоненты, полезные для получения, разработки, стабильности или введения композиции.

Для того чтобы улучшить стабильность водного раствора, также возможно включить один или более стабилизирующих агентов (3), например один или более стабилизирующих агентов, выбранных из солей кальция и солей магния (3а); и/или один или более стабилизирующих агентов на основе двухвалентного металла первого переходного периода (3б), где указанный металл выбран из группы, состоящей из металлов первого переходного периода в степени окисления +II, за исключением цинка; и/или один или более стабилизирующих агентов (3в), содержащих фрагмент-C(=N-Z¹-R¹)-NH-Z²-R², где Z¹ и Z² независимо друг от друга выбраны из группы, состоящей из -O-, -S-, -NR⁴- и одинарной связи, где R^H выбран из группы, состоящей из водорода, C_1-4-алкила, арила и арилметила, и R¹ и R² независимо друг от друга выбраны из группы, состоящей из водорода, возможно замещенного C_1-6-алкила, возможно замещенного С_2-6-алкенила, возможно замещенного арила, возможно замещенного гетероциклила, или Z² и R² являются такими, как определено выше, и -C=N-Z¹-R¹ образует часть гетероциклического кольца, или Z¹ и R¹ являются такими, как определено выше, и -C-NH-Z²-R² образует часть гетероциклического кольца, или -C(=N-Z¹-R¹)-NH-Z²-R² образует гетероциклическое кольцо, где -Z¹-R¹-R²-Z²- является бирадикалом.

Соли кальция и соли магния (3а)

В одном воплощении стабилизирующий агент включает по меньшей мере один агент, выбранный из солей кальция и солей магния, в особенности из солей кальция.

Примерами солей кальция являются хлорид кальция, ацетат кальция, глюконат кальция, левулинат кальция или их смесь.

Примерами солей магния являются хлорид магния, ацетат магния, сульфат магния, глюконат магния, левулинат магния, магниевые соли сильных кислот или их смесь.

Концентрация (3а) в водном растворе предпочтительно составляет по меньшей мере 15 мМ, например по меньшей мере 25 мМ, так по меньшей мере 50 мМ, по меньшей мере 100 мМ, по меньшей мере 200 мМ, по меньшей мере 400 мМ или по меньшей мере 800 мМ.

В предпочтительных воплощениях стабилизирующий агент (3а) выбран из хлорида кальция, ацетата кальция, хлорида магния, ацетата магния, сульфата магния или их смеси; и модификатором ионной силы (4) является хлорид натрия или смесь хлорида натрия и по меньшей мере одного дополнительного модификатора ионной силы (кроме того см. ниже).

Стабилизирующий агент на основе двухвалентного металла первого переходного периода (3б)

В другом воплощении стабилизирующий агент (3) включает по меньшей мере один металлсодержащий агент (3б), где указанный металл выбран из группы, состоящей из металлов первого переходного периода в степени окисления +II.

Предполагают, что при использовании здесь термин «металлы первого переходного периода в степени окисления +II» охватывает титан, ванадий, хром, марганец, железо, кобальт, никель и медь.

Несмотря на то что титан и ванадий могут находиться в водных средах в степени окисления +II, обычно выбирают металл(ы) из хрома, марганца, железа, кобальта, никеля и меди. Иллюстрирующими примерами металлсодержащих агентов (3б), соответствующих этим металлам, являются хлорид хрома (II), хлорид марганца (II), хлорид железа (II), хлорид кобальта (II), хлорид никеля (II) и хлорид меди (II). Следует понимать, что металлсодержащий агент (3б) может включать два или более металлов, например два или более металлов первого переходного периода. Таким образом, в некоторых случаях два или более вышеупомянутых агентов можно использовать в комбинации.

Пока самыми многообещающими металлами являются медь и марганец. Иллюстрирующими примерами соответствующих металлсодержащих агентов (3б) являются хлорид меди (II) и хлорид марганца (II).

Концентрация металлсодержащего агента (или агентов) (3б) обычно составляет по меньшей мере 1 мкМ. Желательная (или необходимая) концентрация обычно зависит от выбранного металлсодержащего агента (или агентов), точнее от сродства к связыванию выбранного металла в степени окисления +II с полипептидом фактора VII.

В разных воплощениях металлсодержащий агент (3б) находится в концентрации по меньшей мере 5 мкМ, по меньшей мере 25 мкМ, по меньшей мере 50 мкМ, по меньшей мере 100 мкМ, по меньшей мере 200 мкМ, по меньшей мере 400 мкМ, по меньшей мере 500 мкМ, по меньшей мере 800 мкМ, по меньшей мере 900 мкМ, по меньшей мере 1000 мкМ, по меньшей мере 5 мМ, по меньшей мере 25 мМ, по меньшей мере 50 мМ, по меньшей мере 100 мМ, по меньшей мере 200 мМ, по меньшей мере 400 мМ, по меньшей мере 800 мМ, по меньшей мере 900 мМ или по меньшей мере 1000 мМ.

В разных воплощениях молярное соотношение между металлсодержащим агентом (3) (Ме2+) и полипептидом FVII (агент (3б): FVII) составляет больше 0,5, больше 1, больше 2, больше 4, больше 5, больше 10, больше 25, больше 100, больше 150, так, например, в интервале 0,5-250, таком как 0,5-150, 0,5-100, 0,5-25,1-250,1-100, 1-25, 1-10.

В одном конкретном воплощении металлом металлсодержащего агента (3б) является медь, и концентрация указанного агента составляет по меньшей мере 5 мкМ, например по меньшей мере 10 мкМ или по меньшей мере 15 мкМ.

В другом конкретном воплощении металлом металлсодержащего агента (3б) является марганец, и концентрация указанного агента составляет по меньшей мере 100 мкМ, например по меньшей мере 500 мкМ или по меньшей мере 1 мМ.

Стабилизирующий агент бензамидин / аргинин-типа (3в)

В еще другом воплощении стабилизирующий агент включает по меньшей мере один агент (3в), содержащий фрагмент -C(=N-Z¹-R¹)-NH-Z²-R², где Z¹ и Z² независимо друг от друга выбраны из группы, состоящей из -О-, -S-, -NR^H- и одинарной связи, где R^H выбран из группы, состоящей из водорода, C_1-4-алкила, арила и арилметила, и R¹ и R² независимо друг от друга выбраны из группы, состоящей из водорода, возможно замещенного C_1-6-алкила, возможно замещенного С_2-6-алкенила, возможно замещенного арила, возможно замещенного гетероциклила, или Z² и R² являются такими, как определено выше, и -C=N-Z¹-R¹ образует часть гетероциклического кольца, или Z¹ и R¹ являются такими, как определено выше, и -C-NH-Z²-R² образует часть гетероциклического кольца, или -C(=N-Z¹-R¹)-NH-Z²-R² образует гетероциклическое кольцо, где -Z¹-R¹-R²-Z² - является бирадикалом.

Полагают, что термин «С_1-6-алкил» охватывает ациклические и циклические насыщенные углеводородные остатки, которые имеют 1-6 углеродных атомов и которые могут быть линейными или разветвленными. Конкретными примерами являются метил, этил, н-пропил, изопропил, циклопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, циклопропилметил, н-пентил, изопентил, н-гексил и т.п. Подобным образом термин «C_1-4-алкил» охватывает ациклические и циклические насыщенные углеводородные остатки, которые имеют 1-4 углеродных атомов и которые могут быть линейными или разветвленными.

Также полагают, что термин «С_2-6-алкенил» охватывает ациклические и циклические углеводородные остатки, которые имеют 2-6 углеродных атомов и содержат одну ненасыщенную связь, которые могут быть линейными или разветвленными. Примерами С_2-6-алкенильных групп являются винил, аллил, бут-1-ен-1-ил, бут-2-ен-1-ил, пент-1-ен-1-ил и гекс-1-ен-1-ил.

Под термином «возможно замещенный» в отношении C_1-6-алкильных и С_2-6-алкенильных групп понимают, что рассматриваемая группа может быть замещена один или несколько раз, предпочтительно 1-3 раза, группой(ами), выбранной из группы, состоящей из гидрокси, С_1-6-алкокси (т.е. С_1-6-алкил-окси), С_2-6-алкенилокси, оксо (образуя кето или альдегидную функциональную группу), арила, арилокси, арилкарбонила, гетероциклила, гетероциклилокси, гетероциклилкарбонила, амино, моно- и ди(С_1-6-алкил)амино, галогена, где любой арил или гетероциклил может быть замещен, как особо описано ниже, для возможно замещенных арила и гетероциклила.

«Галоген» включает фтор, хлор, бром и йод.

Предполагают, что при использовании здесь термин «арил» обозначает полностью или частично ароматическое карбоциклическое кольцо или кольцевую систему, такую как фенил, нафтил, 1,2,3,4-тетрагидронафтил, антрацил, фенантрацил, пиренил, бензопиренил, флуоренил и ксантенил, среди которых фенил является предпочтительным примером.

Предполагают, что термин «гетероциклил» обозначает насыщенное, частично ненасыщенное, частично ароматическое или полностью ароматическое карбоциклическое кольцо или кольцевую систему, где один или более атомов углерода заменены на гетероатомы, например атомы азота (=N- или -NH), серы (-S-) и/или кислорода (-О-). Примерами подобных гетероциклильных групп являются оксазолил, оксазолинил, оксазолидинил, изоксазолил, изоксазолинил, изоксазолидинил, оксадиазолил, оксадиазолинил, оксадиазолидинил, тиазолил, изотиазолил, пирролил, пирролинил, пирролидинил, имидазолил, имидазолинил, имидазолидинил, пиразолил, пиридинил, пиразинил, пиридазинил, пиперидинил, кумарил, фурил, хинолил, бензотиазолил, бензотриазолил, бензодиазолил, бензоксозолил, диазолил, диазолинил, диазолидинил, триазолил, триазолинил, триазолидинил, тетразол и т.п. Предпочтительными гетероциклильными группами являются 5-, 6- или 7-членные моноциклические группы, такие как изоксазолил, изоксазолинил, оксадиазолил, оксадиазолинил, пирролил, пирролинил, диазолил, диазолинил, триазолил, триазолинил, имидазолил, имидазолинил и т.п.

Предполагают, что термин «гетероциклическое кольцо» означает кольцо, соответствующее тому, что определено под «гетероциклилом».

Под термином «возможно замещенный» в отношении терминов «арил», «гетероциклил» и «гетероциклическое кольцо» понимают, что рассматриваемая группа может быть замещена один или несколько раз, предпочтительно 1-3 раза, группой(ами), выбранной из гидрокси-группы (которая, когда находится в енольной системе, может быть представлена и в таутомерной кето-форме), C_1-6-алкила, С_2-6-алкенила, фенила, бензила, C_1-6-алкокси, оксо-группы (которая может быть представлена в таутомерной енольной форме), карбокси, C_1-6-алкоксикарбонила, C_1-6-алкилкарбонила, амино, моно- и ди(С_1-6-алкил)амино, дигалоген-С_1-4-алкила, тригалоген-С_1-4-алкила и галогена. Наиболее характерными примерами заместителей являются гидроксил, С_1-4-алкил, фенил, бензил, С_1-4-алкокси, оксо, амино, моно- и диметиламино и галоген.

Кроме того факта, что R¹ и R² независимо друг от друга могут быть выбраны из группы, состоящей из водорода, возможно замещенного C_1-6-алкила, возможно замещенного С_2-6-алкенила, возможно замещенного арила, возможно замещенного гетероциклила, также возможно, что часть фрагмента -C(=N-Z¹-R¹)-NH-Z²-R² может быть частью гетероциклического кольца, тогда как другая часть фрагмента имеет значение, установленное для Z¹, Z², R¹ и R², соответственно. В некоторых интересных воплощениях -C=N-Z¹-R¹ может образовывать часть гетероциклического кольца, выбранного из группы, состоящей из 1,2-диазолового кольца, изоксазолового кольца, 1,2,4-триазолового кольца и 1,2,4-оксадиазолового кольца, или -C-NH-Z²-R² может образовывать часть гетероциклического кольца, выбранного из группы, состоящей из 1,2-диазолинового кольца, изоксазолинового кольца, 1,2,4-триазолинового кольца и 1,2,4-оксадиазолинового кольца. Подобные гетероциклические кольца могут быть замещены, как описано выше.

В некоторых воплощениях по меньшей мере один R¹ и R² представляет собой водород, например оба являются водородами. Кроме того, в некоторых воплощениях, которые можно сочетать с упомянутыми ранее воплощениями, по меньшей мере один Z¹ и Z² является одинарной связью, например оба являются одинарными связями. В конкретных воплощениях R¹ и R² оба являются водородами, и Z¹ и Z² оба являются одинарными связями.

Считается, что фрагмент -C(=N-Z¹-R¹)-NH-Z²-R² особенно важен для стабилизирующего эффекта стабилизирующего агента (3в). В частности считается, что фрагмент -C(=N-Z¹-R¹)-NH-Z²-R² имитирует аргининовую группу субстрата полипептида фактора VII.

В более конкретных воплощениях стабилизирующий агент (3в) является по меньшей мере одним, выбранным из группы, состоящей из амидиновых соединений, содержащих фрагмент -C(=N-Z¹-R¹)-NH-Z²-R², и гуанидиновых соединений, содержащих фрагмент >N-C(=N-Z¹-R¹)-NH-Z²-R².

В некоторых воплощениях стабилизирующий агент (3в) представляет собой по меньшей мере одно амидиновое соединение, выбранное из группы, состоящей из бензамидинов, содержащих фрагмент -C₆H₄-C(=N-Z¹-R¹)-NH-Z²-R², где C₆H₄ обозначает возможно замещенное бензольное кольцо, из которых бензамидин (R¹ и R² являются водородами, и Z¹ и Z² являются одинарными связями) составляет конкретное воплощение.

В других конкретных воплощениях этого бензамидины содержат фрагмент >N-C₆H₄-C(=N-Z¹-R¹)-NH-Z²-R², где С₆Н₄ обозначает возможно замещенное бензольное кольцо, т.е. о-амино-бензамидин, м-амино-бензамидин или п-амино-бензамидин, из которых п-амино-бензамидины, такие как п-амино-бензамидин, являются на данный момент самыми многообещающими.

Дополнительные иллюстрирующие примеры п-амино-бензамидинов являются такими, как раскрыто Aventis в ЕР 1162194 А1, см. в частности те, которые определены в пунктах 1-6 формулы изобретения и в параграфах [0009]-[0052], и в ЕР 1270551 А1, см. в частности пункты 1 и 2 формулы изобретения и параграфы [0010]-[0032].

В другом воплощении стабилизирующий агент (3в) представляет собой по меньшей мере одно гуанидиновое соединение, выбранное из группы, состоящей из гуанидиновых соединений, содержащих фрагмент - CH₂-NH-C(=N-Z¹-R¹)-NH-Z²-R². Примерами гуанидиновых соединений являются соединения, выбранные из группы, состоящей из аргинина, производных аргинина и пептидов из 2-5 аминокислотных остатков, содержащих по меньшей мере один аргининовый остаток. Аргинин составляет конкретное воплощение.

Термин «производные аргинина», как считают, охватывает гомологи аргинина, функционализированные на N-конце аргинины (например, N-метилированные и N-ацилированные (например, ацетилированные) производные), функционализированные на С-конце аргинины (например, С-амидированные, С-алкиламидированные и С-алкилированные производные) и их комбинации.

Как упоминалось выше, один ключевой фрагмент стабилизирующих агентов представляет собой -C(=N-Z¹-R¹)-NH-Z²-R². Другие части стабилизирующего агента также могут быть важны, в особенности в отношении оптимизации стабилизирующего эффекта и переносимости пациентом. Обычно стабилизирующий агент имеет формулу Y-C(=N-Z¹-R¹)-NH-Z²-R², где Y представляет собой органический радикал. Радикал Y обычно выбирают так, чтобы улучшить эффективность стабилизирующего эффекта. Также радикал Y может содержать один или более дополнительных фрагментов формулы -C(=N-Z¹-R¹)-NH-Z²-R².

Молекулярная масса стабилизирующего агента обычно составляет самое большее 1000 Да, например самое большее 500 Да.

Концентрация стабилизирующего агента (или агентов) (3в) обычно составляет по меньшей мере 1 мкМ. Желательная (или необходимая) концентрация обычно зависит от выбранного стабилизирующего агента (или агентов), точнее от сродства к связыванию выбранного стабилизирующего агента с полипептидом фактора VII.

В разных воплощениях стабилизирующий агент (3в) находится в концентрации по меньшей мере 5 мкМ, по меньшей мере 10 мкМ, по меньшей мере 20 мкМ, по меньшей мере 50 мкМ, по меньшей мере 100 мкМ, по меньшей мере 150 мкМ, по меньшей мере 250 мкМ, по меньшей мере 500 мкМ, по меньшей мере 1 мМ, по меньшей мере 2 мМ, по меньшей мере 4 мМ, по меньшей мере 5 мМ, по меньшей мере 8 мМ, по меньшей мере 9 мМ, по меньшей мере 10 мМ, по меньшей мере 15 мМ, по меньшей мере 20 мМ, например в диапазоне 20-2000 мкМ, в диапазоне 50-5000 мкМ, в диапазоне 0,1-10 мМ, в диапазоне 0,2-20 мМ или в диапазоне 0,5-50 мМ.

В разных воплощениях молярное соотношение между стабилизирующим агентом (3) и полипептидом FVII (агент (3в): FVII) составляет больше 0,1, больше 0,5, больше 1, больше 2, больше 5, больше 10, больше 25, больше 100, больше 250, больше 1000, больше 2500 или больше 5000, так, например, в интервале 0,1-10000, 0,1-5000, 0,1-2500, 0,1-1000, 0,1-250, 0,1-100, 0,1-25, 0,1-10, 0,5-10000, 0,5-5000, 0,5-2500, 0,5-1000, 0,5-250, 0,5-100, 0,5-25, 0,5-10, 1-10000, 1-5000, 1-2500, 1-1000, 1-250, 1-100, 1-25, 1-10, 10-10000, 10-5000, 10-250, 1000-10000 или 1000-5000.

В одном воплощении стабилизирующий агент (3в) представляет собой бензамидин, и концентрация указанного агента составляет по меньшей мере 0,5 мМ, например по меньшей мере 2 мМ, хотя исследовано, что замещенные бензамидины могут быть более действенными, по этой причине их можно добавлять в более низких концентрациях.

В одном воплощении стабилизирующий агент (3в) представляет собой аргинин, и концентрация указанного агента составляет по меньшей мере 2 мМ, например по меньшей мере 10 мМ,

Следует понимать, что вышеупомянутые стабилизирующие агенты (3а), (3б) и (3в) можно применять в комбинации.

Другие добавки

Кроме того, композиция также может содержать модификатор тоничности (5).

Используемый здесь термин «модификатор тоничности» включает агенты, которые вносят вклад в осмоляльность раствора. Модификатор тоничности (5) включает по меньшей мере один агент, выбранный из группы, состоящей из средних солей, аминокислот, пептидов из 2-5 аминокислотных остатков, моносахаридов, дисахаридов, полисахаридов и сахарных спиртов. В некоторых воплощениях композиция содержит два или более подобных агентов в комбинации.

Под «средней солью» подразумевают соль, которая не является ни кислотой, ни основанием при растворении в водном растворе.

В одном воплощении по меньшей мере один модификатор тоничности (5) является средней солью, выбранной из групп, состоящих из солей натрия, солей калия, солей кальция и солей магния, таких как хлорид натрия, хлорид калия, хлорид кальция, ацетат кальция, глюконат кальция, левулинат кальция, хлорид магния, ацетат магния, глюконат магния и левулинат магния.

В дополнительном воплощении модификатор тоничности (5) включает хлорид натрия в сочетании с по меньшей мере одним агентом, выбранным из группы, состоящей из хлорида кальция, ацетата кальция, хлорида магния и ацетата магния.

В еще дополнительном воплощении модификатор тоничности (5) является по меньшей мере одним агентом, выбранным из группы, состоящей из хлорида натрия, хлорида кальция, сахарозы, глюкозы и маннита.

В разных воплощениях модификатор тоничности (5) находится в концентрации по меньшей мере 1 мМ, по меньшей мере 5 мМ, по меньшей мере 10 мМ, по меньшей мере 20 мМ, по меньшей мере 50 мМ, по меньшей мере 10