Средство для профилактики и лечения офтальмологических заболеваний и способ его получения

Средство для профилактики и лечения офтальмологических заболеваний и способ его получения

Реферат

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и медицине, а именно к средствам для профилактики и лечения офтальмологических заболеваний в виде раствора для инстилляции в глаз.

В последние годы отмечается рост ишемических заболеваний глаз, что связано с дефицитом гемодинамики и реологическими нарушениями крови регионального и системного характера, с распространением атеросклероза, гипертонической болезни, ишемической болезни сердца, сахарного диабета. Имеется тесная взаимосвязь между поражением различных звеньев системы кровообращения и механизмами развития ишемии. В результате развития ишемического состояния в тканях глаз происходит усиление процессов перекисного окисления липидов и накопление гидроперекисей, оказывающих повреждающее воздействие на структуры глаза. Последствиями гипоксии могут быть снижение уровня АТФ и энергетический дефицит клеток, ферментопатия, активизация гликолиза, ацидоз вследствие накопления пирувата и лактата, угнетение антиоксидантной системы и усиление перекисных процессов, повышение концентрации ионов кальция в клетках, ведущее к нарастанию ишемии, нарушение функции сосудистого эндотелия и ауторегуляции кровообращения, нарушение аксоплазматического транспорта в нейронах, образование нейротоксинов.

2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат (этилметилгидроксипиридина сукцинат, мексидол) - антиоксидант, обладающий также антигипоксическим, мембранопротекторным, стресспротекторным, ноотропным, ретинопротекторным и анксиолитическим действием. Действие 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцината обеспечивается ингибированием свободнорадикального окисления липидов клеточных мембран и модулированием синтеза простагландинов, повышением активности антиоксидантных ферментов организма, повышением содержания полярных фракций липидов и снижением соотношения холестерин/фосфолипиды, модулированием активности ферментов и рецепторных комплексов мембран клеток мозга и крови (эритроцитов и тромбоцитов), а также активацией энергосинтезирующих функций митохондрий (Смирнова И.Н. и др. 2006, Глыбочко П.В. и др., 2009). Доказана эффективность 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцината в комплексном лечении заболеваний глаз дегенеративно-дистрофического характера, таких как глаукома и дистрофия сетчатки (Малышев В.Е. и др. 2006).

2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат предложено использовать в комплексной терапии больных с отечной формой диабетической макулоретинопатии (Пат. RU 2367386 С1, опубл. 20.09.2009), больных, страдающих глаукомной оптической нейропатией (Пат. RU 2284192 С1, опубл. 27.09.2006), в комплексной терапии дистрофических и сосудистых заболеваний глаз (Пат. RU 2367388 С1, опубл. 20.09.2009), для лечения пре- и пролиферативной диабетической ретинопатии (Пат. RU 2283647 С1, опубл. 20.09.2006).

В вышеперечисленных случаях 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат используют в виде раствора для внутривенного и внутримышечного введения. Однако в случае использования 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцината для лечения патологии глаз более оправдано и удобно использование его в виде глазных лекарственных форм.

Известно средство для профилактики и лечения офтальмологических заболеваний, содержащее 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, в виде геля (Пат. RU 2359658 С1, опубл. 27.06.2009). Однако недостатками применения глазных гелей являются такие побочные эффекты, как преходящее нарушение остроты зрения, неравномерное распределение геля по слизистой оболочке глаза, что может сопровождаться ощущением инородного тела в глазу, а также инстилляция геля может быть неудобна для пациентов.

Наиболее близким к предлагаемому изобретению являются глазные капли, рекомендуемые для применения при использовании контактных линз (Пат. RU 2292222 С1, опубл. 27.01.2007), содержащие натрия хлорид, буферный раствор в виде боратного буфера в виде натрия тетраборнокислого или кислоты борной, консервант, водорастворимый полимер и воду, при следующем соотношении компонентов, мас.%: натрия хлорид 0,3-0,8, буфер боратный, фосфатный или нитратный 0,15-2,0, трилон Б или натрия бензоат или бензалконий хлорид 0,005-0,5, полиэтиленгликоль или хеалон 0,05-0,2, водорастворимый антиоксидант из группы эмоксипина, мексидола, олифена, этадена, декспантенола 0,05-5,0 и вода до 100. Недостатком данного решения является то, что мексидол (2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат) используется в качестве антиоксиданта и без стабилизации он окисляется в процессе хранения в первую очередь, что обусловливает пожелтение раствора, увеличение содержания посторонних примесей и в конечном итоге приводит к невозможности стандартизации по содержанию мексидола и несоответствию требованиям нормативной документации. Капли рекомендованы как увлажняющее средство при использовании глазных линз. Процесс получения капель не описан.

Задачей изобретения является создание средства, содержащего 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, для местного применения в виде глазных капель для профилактики и лечения офтальмологических заболеваний, не обладающих местно-раздражающими свойствами, удобных в использовании и стабильных при хранении.

Поставленная задача решается созданием средства в виде глазных капель, при следующем содержании компонентов в мас.%

2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат	0,5-5,0%
лубрикант поливинилпирролидон	0,5-4,0%
фосфатный буфер	0,5-5,0%
антиоксидант, выбранный из группы, включающей натрия
метабисульфит, натрия сульфит, или натрия тиосульфат	0,01-0,2%
консервант	0,01-0,2%
натрия хлорид	0,1-0,8%
воду для инъекций	до 100%

Способ получения средства реализуется следующим образом: консервант смешивают с водой для инъекций при температуре 80-90°С и перемешивают до полного растворения. После охлаждения до температуры 25-40°С к раствору добавляют рассчитанные количества антиоксиданта, изотонирующего агента и буфера, затем добавляют лубрикант и перемешивают до получения прозрачного раствора. В последнюю очередь в раствор вводят 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат. Раствор фильтруют и разливают во флаконы. При необходимости проводят стерилизацию.

В частности для стерилизации могут быть использованы стерильная фильтрация или термическая стерилизация паром под давлением.

Нами установлено, что порядок смешивания ингредиентов имеет существенное значение для обеспечения стабильности 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцината. Он имеет высокий окислительно-восстановительный потенциал и легко окисляется, с чем, например, связано его использование в качестве антиоксиданта (Пат. RU 2292222 С1, опубл. 27.01.2007). Однако для обеспечения фармакологической активности 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцината, такой как ингибирование свободнорадикального окисления липидов клеточных мембран, модулирование синтеза простагландинов, повышения активности антиоксидантных ферментов организма и т.п., необходима его защита от окисления в процессе приготовления, хранения. Опытным путем установлено, что существенным фактором для обеспечения стабильности композиции при хранении является введение в ее состав антиоксиданта, в качестве которого предлагаются натрия метабисульфит, натрия сульфит или натрия тиосульфат.

Авторам заявляемого изобретения удалось создать современную лекарственную форму для профилактики и лечения офтальмологических заболеваний в виде глазных капель на основе 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцината, обеспечивающую наиболее эффективное усвоение активного компонента, входящего в состав лекарственной композиции.

Разработка состава и технологии глазных капель проводилась с учетом требований к препаратам, инсталлируемым в конъюнктивальную полость: 1) стерильность, 2) прозрачность, 3) изотоничность, 4) изогидричность, 5) стабильность.

Использование в составе композиции 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцината в концентрации 0,5-5,0 мас.% обеспечивает терапевтическую активность и хорошую переносимость препарата. Увеличение его концентрации свыше указанного предела нежелательно и приводит к изменению изотоничности и изогидричности раствора, а также экономически не оправдано.

В состав глазных капель введен лубрикант поливинилпирролидон, который позволяет повысить комфортность применения глазных капель, обладает увлажняющим действием, обеспечивает равномерное распределение препарата по слизистой оболочке глаза, улучшает биологическую доступность действующего вещества и снижает возможное раздражающее действие (BASF Pharma Ingredients, 2001). Молекулярная масса используемого поливинилпирролидона может быть самая различная.

Изотонирование состава с помощью натрия хлорида и введение буфера осуществлено с целью создания комфортной для клеток конъюнктивы среды, не вызывающей их повреждения или чувства жжения в глазу. Используется фосфатный буфер (калия, и/или натрия фосфаты, и/или натрия гидрофосфат, и/или калия дигидрофосфат) как наиболее соответствующий жидким средам организма.

Опытным путем нами установлено, что введение в состав средства консерванта необходимо для создания стабильной в течение длительного срока (не менее 2 лет) композиции 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцината в виде капель, а также с учетом многократного их использования после вскрытия упаковки, способствующего микробной контаминации. В качестве консерванта могут быть использованы офтальмологически приемлемые консерванты, такие как нипагин, нипазол, цетримид, бензалкония хлорид и др.

Возможность реализации заявляемого изобретения показана, но не ограничена, в примерах конкретного выполнения.

Пример 1. Состав композиции, содержащий в качестве лубриканта коллидон VA64 (мас.%):

В подходящем сосуде с мешалкой, термостатируемом при 80-90°С, в 92,9 мл воды для инъекций растворяют 0,1 г нипагина. Полученный раствор охлаждают до температуры 25°С, добавляют 0,3 г натрия хлорида, 0,1 г натрия метабисульфита, 1,5 г натрия гидрофосфата, 0,1 г калия дигидрофосфата, перемешивают, добавляют 3,0 г коллидона VA64, перемешивают до получения прозрачного раствора. В последнюю очередь добавляют 2,0 г 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцината. После фильтрования получают слегка опалесцирующий раствор с рН около 5,6. Проводят розлив в стеклянные флаконы объемом 5 мл с последующей стерилизацией в автоклаве при температуре 100°С в течение 30 минут. Получают 19 флаконов (с учетом потерь) по 5 мл глазных капель, содержащих 2% 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцината.

Пример 2. Состав композиции, содержащий в качестве лубриканта коллидон 25 (мас.%):

В реакторе с мешалкой в 93,95 л воды для инъекций при темературе 80-90°С растворяют 0,05 кг нипазола. Раствор охлаждают до температуры 30°С, добавляют 0,3 кг натрия хлорида, 0,1 кг натрия сульфита, 1,5 кг натрия гидрофосфата, 0,1 кг калия дигидрофосфата, перемешивают до растворения, затем добавляют 2,0 кг коллидона 25, перемешивают до получения прозрачного раствора. В последнюю очередь растворяют 2,0 кг 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцината. После фильтрования получают прозрачный раствор с рН около 5,5. Проводят розлив в стеклянные флаконы объемом 5 мл с последующей стерилизацией в автоклаве при температуре 100°С в течение 30 минут. Получают 18800 флаконов (с учетом потерь) глазных капель, содержащих 2% 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцината.

Пример 3. Состав композиции, содержащий в качестве лубриканта коллидон 25 и пропиленгликоль (мас.%):

В 93,4% воды для инъекций растворяют 0,1% нипагина в подходящем сосуде с мешалкой, термостатируемом при 80-90°С. Полученный раствор охлаждают, добавляют 0,8% глюкозы, 0,1% натрия метабисульфита, 1,5% натрия гидрофосфата, 0,1% калия дигидрофосфата, перемешивают, затем добавляют 1,5% коллидона 25 и 0,5% пропиленгликоля, перемешивают до получения прозрачного раствора. В последнюю очередь добавляют 1,5% 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцината. После фильтрования получают прозрачный раствор с рН около 5,5.

Пример 4. Состав композиции, содержащий в качестве лубриканта коллидон 17PF (мас.%):

В асептических условиях в подходящем сосуде с мешалкой, термостатируемом при 80-90°С, в 93,9% воды для инъекций растворяют 0,1% нипагина. Полученный раствор охлаждают, добавляют 0,15% натрия хлорида, 0,1% натрия метабисульфита, 1,8% натрия гидрофосфата, 0,1% калия дигидрофосфата, перемешивают, затем добавляют 2,0% коллидона 17PF, перемешивают до получения прозрачного раствора. В последнюю очередь добавляют 2,5% 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцината. Последовательно проводят предварительную фильтрацию через фильтры с диаметром пор 0,80 мкм и стерилизующую фильтрацию через фильтры с диаметром пор 0,22 мкм. После фильтрования получают прозрачный раствор с рН около 5,3. Розлив осуществляют в стерильные полимерные флаконы объемом 5 мл.

Пример 5. Изучение биологической доступности 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцината из глазных капель in vitro методом диализа:

Высвобождение 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцината из глазных капель, приготовленных по примеру 1 и 2, определяли на тестере для проверки растворимости «Erweka» серии DT 600 (Германия). Для каждого опыта брали количество исследуемого образца, эквивалентное 20 мг 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцината.

Для изучения высвобождения в условиях моделирования местного применения на слизистую глаза использовали метод диализа: корзинку затягивали пленкой для диализа с размером пор 12-14 кDa, в корзинку помещали исследуемый образец. Эксперимент проводили при температуре 37±1°С, скорость вращения корзинки 100 об/мин, среда растворения - вода. Для количественного анализа использовали метод прямой спектрофотометрии в УФ-области.

На чертеже представлены кривые высвобождения 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцината (мексидола) в условиях моделирования местного применения.

Кривые высвобождения 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцината носят линейный характер. Введение в состав глазных капель поливинилпирролидонов различной молекулярной массы позволяет ускорить высвобождение 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцината. Константы скорости растворения, рассчитанные методом наименьших квадратов, составили: для глазных капель с коллидоном VA64 - 0,7087 мин^-1; для глазных капель с коллидоном 25 - 0,6603 мин^-1; для 2% раствора 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцината в воде - 0, 6169 мин^-1.

Линеаризация кривых высвобождения 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцината в координатах: количество лекарственного вещества, перешедшего в раствор, - корень квадратный от времени, позволяет предположить, что высвобождение происходит путем диффузии, скорость высвобождения описывается теоретической моделью Higuchi.

Пример 6. Оценка раздражающего действия in ovo:

Оценивали раздражающее действие глазных капель, содержащих 2% 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцината с использованием в качестве лубриканта коллидона VA64 (состав по примеру 1) и коллидона 25 (состав по примеру 2).

Раздражающее действие оценивали с помощью теста на хорионаллантоисной оболочке куриного эмбриона (ХЕТ-КАМ тест) в соответствии с Методическими указаниями по оценке раздражающего действия фармакологических веществ (Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Москва. 2000. - С.87-89).

Для исследования использовали развивающиеся эмбрионы яиц домашних кур породы "Хайсекс браун" в возрасте 10 дней. Яйца выдерживали в инкубаторе при температуре 37,8°С и относительной влажности 62,5%. Перед опытом инкубированные яйца выдерживали в течение 24 часов в стационарном положении тупым концом вверх, за сутки до опыта, их переносили из инкубатора в термостат (37,8°С). На подготовленную хориоаллантоисную оболочку наносили по 0,3 мл исследуемого раствора. Наблюдение за состоянием оболочки под каплей осуществляли в течение 100 секунд через бинокулярный стереоскопический микроскоп (Лабостеми-4 зум). Регистрация производилась каждые 10 секунд фотографированием оболочки под каплей с помощью специализированной цветной телевизионной камеры (Зенит ТВК-МИ-01С), соединенной с бинокулярным микроскопом.

В качестве критерия раздражающего действия использовали показатель воздействия на хориоаллантоисную оболочку в течение 100 секунд.

Классификация веществ по степени раздражения приведена в таблице 1.

Таблица 1
Класс	Наблюдаемая картина
5-й класс, очень сильная	Коагуляция и лизис сосудов мелких и средних, множественные кровоизлияния и тромбоз с остановкой кровотока
4-й класс, сильная	Тромбоз в мелких сосудах с остановкой кровотока и мелкие точечные кровоизлияния по всей обработанной поверхности. Гиперемия
3-й класс, умеренная	Покраснение оболочки, замедление тока крови и тромбоз в отдельных капиллярах
2-й класс, слабая	Сужение сосудов без остановки или с временной остановкой кровообращения в отдельных капиллярах
1-й класс, отсутствие воздействия	Не нарушенная прозрачная тонкая оболочка с нормально функционирующей сетью кровеносных сосудов и капилляров

Результаты исследования по определению степени раздражения хориоаллантоисной оболочки (М±m) приведены в таблице 2

Таблица 2
Образец	Среднее значение наблюдаемой степени раздражения по 10 временным точкам M±m, n=15
Глазные капли по примеру 1	1,7±0,05
Глазные капли по примеру 2	1,5±0,10

Исходя из данных, полученных в ходе эксперимента на хориоаллантоисной оболочке, можно сделать вывод о том, что глазные капли с 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинатом не оказали выраженного влияния на целостность сосудов разного диаметра и их тонус. Согласно классификации веществ по степени раздражения исследуемые образцы относятся к классу 1 и 2, что позволяет сделать вывод о том, что глазные капли с 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцината не относятся к раздражающим веществам.

Пример 7. Оценка раздражающего действия в тесте Драйзера:

Оценивали раздражающее действие глазных капель, приготовленных по примеру 1 и 2.

Для исследования использовали калифорнийских кроликов-самцов в возрасте 14 месяцев массой 2,5-3 кг.

За 10 минут до начала эксперимента животных фиксировали в индивидуальном посадочном домике. Оба глаза подвергались тщательному осмотру и промывались стерильной водой для инъекций комнатной температуры с помощью пипетки. Исследуемый раствор наносили однократно в объеме 0,1 мл непосредственно на роговицу одного глаза кролика с помощью дозатора, препятствуя вытеканию, другой глаз оставался интактным.

Регистрация состояния переднего отдела глаза осуществлялась методом осмотра в проходящем свете и фотографирования интактного глаза кролика и подопытного глаза кролика через 15 и 30 минут после нанесения исследуемого раствора.

Раздражающее действие исследуемого вещества комплексно оценивалось по следующим наблюдаемым изменениям:

1. Плотность и протяженность помутнения роговицы;

2. Степень воспаления радужной оболочки;

3. Покраснение конъюнктивы;

4. Отек;

5. Выделения.

Было принято обозначать степень поражения тканей передней доли глаза с помощью системы рангов: от 0 до 5. Самой слабой степени поражения присваивался ранг, равный 1. Ранг, равный 0, - отсутствие поражения.

Средние значения наблюдаемой степени раздражения в каждой временной точке приведены в таблице 3.

Таблица 3
Образец	Среднее значение наблюдаемой степени раздражения в каждой временной точке, М±m, n=5	Среднее значение наблюдаемой степени раздражения по всем временным точкам, М±m
Глазные капли по примеру 1	0 мин	0,0±0,0
15 мин	0,28±0,1	0,13±0,04
30 мин	0,12±0,06
Глазные капли по примеру 2	0 мин	0,0±0,0
15 мин	0,24±0,09	0,10±0,04
30 мин	0,12±0,06

Исследуемые растворы глазных капель оказывали слабо выраженное действие на конъюнктиву, которое выражалось легким покраснением и отечностью, проходящим к 30 минуте эксперимента. Раздражающего действия на роговицу и радужную оболочку глаза кролика не обнаружено.

Пример 8. Оценка стабильности глазных капель

Оценивали стабильность композиций, приготовленных по примерам 2 и 4.

Стабильность оценивали визуально при хранении в условиях повышенной (40°С) и пониженной (4°С) температур, а также при хранении в естественных условиях (20°С). Исследуемые глазные капли в течение эксперимента оставались прозрачными, количество действующего вещества не изменялось. Срок хранения составляет не менее 2 лет.

Разработанные композиции капель могут быть легко получены, легко стерилизованы, не обладают раздражающим действием, хорошо подходят для применения в офтальмологической практике, обеспечивают равномерное высвобождение 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцината в течение двух часов.

Использованная литература

1. Смирнова И.Н. Федорова Т.Н., Танашян М.М. и др. Клиническая эффективность и антиоксидантная активность мексидола при хронических цереброваскулярных заболеваниях. / Нервные болезни. 2006. - №1. - URL: http://www.neurology.ru/professional/an_1_2006_33.pdf

2. Малышев В.Е., Сальникова О.И. Опыт применения препарата «мексидол» в комплексном амбулаторном лечении больных с заболеванием глаз дегенеративно-дистрофического характера. / БЭБиМ. - 2006. - приложение 1. - URL: http://medi.rn/doc/a070156.htm Дата обращения 02.09.10.

3. Коллидон^®. Поливинилпирролидон для фармацевтической промышленности. / BASF Pharma Ingredients. // пер. с англ. и под ред. К.В.Алексеева - 2001, 6-изд. - Калининград: ФГУИПП «Янтарный сказ». - 310 с.

4. Пат. RU 2359658 С1 Средство для профилактики и лечения офтальмологических заболеваний. / Глушенко И.А., Глушенко А.В., Глушенко О.И. - заявл. 22.02.08 - опубл. 27.06.09.

5. Пат. RU 2367386 С1 Способ лечения отечной формы диабетической макулоретинопатии. / Братко В.И., Черных В.В., Лысиков А.Г. и др.; заявл. 17.06.08 - опубл. 20.09.09.

6. Пат. RU 2284192 С1 Способ лечения глаукомной оптической нейропатии. / Братко В.И., Черных В.В., Лукашина Н.С. и др.; заявл. 01.04.05 - опубл. 27.09.06.

7. Пат. RU 2367388 С1 Способ лечения сосудистых и дистрофических заболеваний глаз. / Ласточкина Е.К., Чехова Т.А. - заявл. 17.06.08 - опубл. 20.09.09.

8. Пат. RU 2283647 C1 Способ лечения пре- и пролиферативной диабетической ретинопатии. / Сорокин Е.Л., Смолякова Г.П., Сипина Ю.В. - заявл. 14.01.05 - дата публ. заявки 20.06.06.

9. Пат. RU 2292222 C1 Глазные капли при использовании контактных линз. / Герасимов Р.А., Герасимов П.Р., Жукова Т.Д. - заявл. 22.08.2005 - опубл. 27.01.2007.

1. Средство для местного применения в виде глазных капель, содержащее активное вещество, натрия хлорид, буфер, консервант и воду для инъекций, отличающееся тем, что дополнительно содержит антиоксидант, выбранный из группы, включающей натрия метабисульфит, натрия сульфит или натрия тиосульфат, лубрикант поливинилпирролидон, в качестве активного вещества содержит 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат, в качестве буфера фосфатный буфер, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат	0,5-5,0%
лубрикант поливинилпирролидон	0,5-4,0%
фосфатный буфер	0,5-5,0%
антиоксидант	0,01-0,2%
консервант	0,01-0,2%
натрия хлорид	0,1-0,8%
вода для инъекций	до 100%

2. Способ получения средства по п.1, отличающийся тем, что включает в себя следующие стадии:а) приготовление раствора консерванта в воде для инъекций при температуре 80-90°С, охлаждение полученного раствора до 25-40°С;б) растворение в охлажденном растворе антиоксиданта, натрия хлорида и буфера;в) растворение лубриканта при постоянном перемешивании до получения прозрачного раствора;г) введение 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцината в полученный раствор вспомогательных веществ при постоянном перемешивании;д) фильтрование полученного раствора и розлив во флаконы.

3. Способ получения по п.2, отличающийся тем, что для стерилизации могут быть использованы стерильная фильтрация или термическая стерилизация паром под давлением.