Способ дифференциальной диагностики hbv- и hcv-инфекции у пациентов с циррозом печени

Способ дифференциальной диагностики hbv- и hcv-инфекции у пациентов с циррозом печени

Реферат

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, гепатологии.

Известен способ диагностики вирусной этиологии поражения печени путем полимеразной цепной реакции (ПЦР), которая позволяет документировать наличие в крови вирусных антигенов. Недостатком данного метода является то, что даже при использовании конкурентных, в том числе и импортных, тест-систем примерно у 1/5 больных вирусная этиология поражения печени остается неверифицированной. При хронической патологии (в том числе и при циррозе печени) антиген вирусных гепатитов находится в крови непостоянно. Наблюдается его выброс из места персистенции кратковременно, импульсами, содержание вирусного антигена в крови низкое [3, 4]. Поэтому бывает очень трудно подтвердить и дифференцировать вирусную этиологию цирроза печени только с помощью метода ПЦР без использования дополнительных биохимических и серологических методов диагностики. Кроме того, подтверждение вирусной этиологии поражения печени с помощью ПЦР требует применения дорогостоящей аппаратуры и реактивов, то есть недоступно для широкого круга больных [5,6].

Известен также способ серологической диагностики вирусной этиологии цирроза печени с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) на маркеры вирусных гепатитов: HB_sAg, HB_eAg, anti-HB_e, anti-HB_c IgM, anti-HB_c IgG, anti-HCV IgM, anti-HCV IgG. Однако внедрение молекулярно-биологических методов диагностики позволило выделить множество генотипов и субтипов вируса гепатита С (HCV), мутантные штаммы вируса гепатита В (HBV), которые не определяются с помощью ИФА. Общеизвестно, что приблизительно у 15% пациентов с хроническим заболеванием печени вирусной этиологии в крови не определяются серологические маркеры [3, 4, 6].

Наиболее близким к предлагаемому (прототип) [7] является способ диагностики вирусной этиологии поражения печени путем исследования сыворотки крови. В образце сыворотки крови определяют относительное содержание фракций фосфолипидов, выделяют показатель относительного содержания лизофосфатидилхолина и при определенном его уровне диагностируют вирусную этиологию поражения печени.

Основной недостаток прототипа [7] в том, что в эксперименте не принимали участие пациенты с циррозом печени. Соответственно, на данной группе больных методика не была отработана. Кроме того, способ диагностики вирусной этиологии поражения печени не позволяет дифференцировать между собой хроническое поражение печени при HBV- и HCV-инфекции. Применение метода в практической медицине ограничено, так как требует достаточно большого количества времени для выполнения данных тестов для одного пациента, наличия специальной аппаратуры.

Задача изобретения - разработка критериев диагностики вирусной этиологии поражения печени при циррозах.

Для решения поставленной задачи в способе дифференциальной диагностики HBV- и HCV-инфекции у пациентов с циррозом печени определяют в одном и том же образце сыворотки крови показатели коагуляционного гемостаза такие, как антитромбин-III и плазминоген.

Для пациентов с циррозом печени вирусной этиологии HBV характерны следующие одновременные значения показателей: антитромбин-III - 60-80%, плазминоген - 45-55%.

У больных с циррозом печени вирусной этиологии HCV выявлены: антитромбин-III - 50-59%, плазминоген - 56-65%.

Новым в предлагаемом способе является:

1) использование комбинации показателей лабораторных тестов, изменение каждого из которых характерно для поражения печени при хронической HBV- и HCV-инфекции у больных с циррозом печени;

2) разработаны и предложены уровни одновременного содержания показателей коагуляционного гемостаза, при которых диагностируют вирусную (HBV; HCV) этиологию цирроза печени.

Значения показателей подобраны опытным путем.

При циррозе печени обычно наблюдается хронический синдром диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови (ДВС-синдром), который далеко не всегда приводит к существенному ухудшению микроциркуляции. Однако отсутствие клиники тромбозов не доказывает отсутствия ДВС, поскольку известно, что нормально функционирующие механизмы организма, в частности ретикулоэндотелиальная система, могут справляться с большим количеством непрерывно образующегося фибрина и других промежуточных продуктов свертывания. В процессе развития ДВС-синдрома неуклонно прогрессирует снижение уровня в плазме основных физиологических антикоагулянтов - антитромбина III и протеина С. Они расходуются на блокирование активированных факторов свертывания, причем для инактивации каждой молекулы любого из факторов утилизируется по одной молекуле антитромбина III или протеина С. Поэтому снижение этих антикоагулянтов при ДВС обгоняет депрессию факторов свертывания крови и является одним из наиболее важных сдвигов в системе гемокоагуляции. Оценка этих нарушений имеет большое клиническое значение, поскольку депрессия антитромбина III до 75% и ниже является фактором тромбогенности, отражает тяжесть ДВС-синдрома. Аналогичным образом расходуются компоненты фибринолитической системы - плазминоген и его активаторы [1, 2].

Существенные признаки проявили в заявляемой совокупности новые свойства, явным образом не вытекающие из уровня техники и неочевидные для специалиста. Идентичной совокупности признаков в проанализированной научно-медицинской и патентной литературе не обнаружено. Предлагаемый в качестве изобретения способ может быть широко использован в практическом здравоохранении для повышения точности диагностики и качества лечения.

Исходя из вышеизложенного, следует считать предлагаемый способ соответствующим условиям патентоспособности "Новизна", "Изобретательский уровень", "Промышленная применимость".

Способ осуществляется следующим образом.

Забор венозной крови у больных проводили однократно натощак в объеме 10 мл. Уровни плазминогена и антитромбина-III в сыворотке крови определяют с использованием хромогенных субстратов.

Принцип определения антитромбина-III основан на его способности в разведенной исследуемой плазме в присутствии гепарина быстро инактивировать тромбин. Остаточная активность тромбина определяется по скорости гидролиза хромогенного субстрата фотометрически. Регистрировали изменение оптической плотности на биохимическом фотометре при длине волны 405 нм после добавления уксусной кислоты. Перед проведением анализа исследуемую плазму разводили, смешивая в пробирке 0,05 мл плазмы с 3,0 мл физиологического раствора хлорида натрия и 0,05 мл буфера. Результаты анализа выражали в процентах к норме.

Принцип определения плазминогена: при добавлении стрептокиназы к разведенному образцу исследуемой плазмы образуется плазминоген-стрептокиназный комплекс, который обладает способностью расщеплять хромогенный субстрат. Скорость гидролиза нитроанилиновой связи хромогенного субстрата зависит от концентрации в образце плазминогена. Регистрируют изменения оптической плотности на спектрофотометре при длине волны 405 нм после добавления уксусной кислоты. Перед проведением анализа 0,05 мл исследуемой плазмы смешивали в пробирке с 1,0 мл буфера. Результаты анализа выражали в процентах к норме.

Критерии включения:

1. мужчины и женщины от 25 до 65 лет (50 человек) с подтвержденным диагнозом цирроза печени с помощью инструментальных методов исследования (ультразвуковое исследование органов брюшной полости, эзофагогастродуоденоскопия, статическая сцинтиграфия печени);

2. определение антигенов вирусов и антител к ним методом ИФА; рибонуклеиновой (РНК) и дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) вирусов гепатитов методом ПЦР при HBV- и HCV-инфекциях.

Критерии исключения:

1. Пациенты с сопутствующей очаговой патологией печени не вирусного генеза.

2. Пациенты с декомпенсированными сердечно-сосудистыми заболеваниями, онкологическими заболеваниями внепеченочной локализации.

3. Пациенты в стадии декомпенсации цирроза печени.

Пример №1. Больная А., 57 лет, направлена в инфекционное отделение с диагнозом: цирроз печени вирусной этиологии (HBV), стадия компенсации. Диагноз подтверждался данными гепатосцинтиграфии, ультразвукового исследования (УЗИ). В крови были обнаружены маркеры к вирусному гепатиту В, а также выявлена положительная ПЦР ДНК HBV. Показатели коагулограммы: антитромбин-III - 62%, плазминоген - 51%.

В данном клиническом случае проведенное исследование показателей плазменного гемостаза выявило их соответствие таковым при циррозе печени вирусной этиологии (HBV), что подтвердило выставленный ранее диагноз.

Пример №2. Больной К., 48 лет, поступил в инфекционное отделение с диагнозом цирроза печени неуточненной этиологии. При обследовании пациента (УЗИ органов брюшной полости, статическая гепатосцинтиграфия, ИФА на маркеры вирусных гепатитов, ПЦР) был диагностирован цирроз печени вирусной этиологии HCV в стадии субкомпенсации. При исследовании свертывающей системы крови выявлены: антитромбин-III - 53%, плазминоген - 56%. Таким образом, данные развернутой коагулограммы не противоречили полученным ранее клиническим и параклиническим данным.

Способ разработан на основе определения в одном и том же образце сыворотки крови уровня таких показателей коагуляционного гемостаза, как антитромбин-III и плазминоген, у больных с циррозами печени вирусной этиологии и сравнения их с показателями аналогичных фракций у здоровых лиц. Данные по содержанию показателей в сыворотке крови получены от 50 больных с вирусным циррозом печени и 15 здоровых лиц. Результаты исследования изложены в таблице 1.

Таблица 1.
Вид цирроза печени (ЦП)	Антитромбин-III (75-140%)	Плазминоген (75-140%)
ЦП вирусной этиологии HBV	60-80	45-55
ЦП вирусной этиологии HCV	50-59	56-65

Техническим результатом являются разработанные критерии дифференциальной диагностики вирусной этиологии поражения печени при циррозах. Данный способ апробирован на 50 больных с циррозом печени вирусной этиологии и позволяет дифференцировать цирроз печени HBV-этиологии от цирроза печени HCV-этиологии.

Использование предлагаемого изобретения позволяет врачу повысить информативность диагностики, а благодаря этому и качество лечения больных с циррозом печени. Грамотное назначение противовирусных препаратов позволяет снизить патогенное влияние вирусов гепатитов и, таким образом, продлить жизнь пациенту.

Источники информации

1. Долгов В.В., Свирин П.В. Лабораторная диагностика нарушений гемостаза. М.: Триада, 2005, с.41-67, 135-139.

2. Ивашкин В.Т., Маевская М.В. Алкогольно-вирусные заболевания печени. М.: Литтерра, 2007, с 118-131.

3. Майер Г.П. Гепатит и последствия гепатита. М.: ГЭОТАР-Медицина; 2004, с.491-503.

4. Соринсон С.Н. Вирусные гепатиты. СПб: Медицина, 1998, с.128-133.

5. Левитан Б.Н., Дедов А.В. 50-летний опыт клинического изучения цирроза печени. Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и проктологии, 2002, №1, с.76-79.

6. Хазанов А.И., Плюснин С.В., Васильев А.П., Павлов А.И. Алкогольные и вирусные циррозы печени у стационарных больных (1996-2005 гг.): распространенность и исходы. Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и проктологии, 2007, №2, с.19-26.

7. Патент РФ №2184964: Способ диагностики вирусной этиологии поражения печени, Макаров В.К., опубл. 07.2002.

Способ дифференциальной диагностики HBV- и HCV-инфекции у больных циррозом печени путем исследования сыворотки крови, отличающийся тем, что в одном и том же образце сыворотки крови определяют содержание уровня антитромбина-III и плазминогена и при одновременных значениях уровня: антитромбина-III 60-80%, плазминогена 45-55% диагностируют цирроз печени вирусной этиологии HBV, при значениях уровня антитромбина-III 50-59%, плазминогена 56-65% выявляют цирроз печени вирусной этиологии HCV.