Композиции, вызывающие специфический ответ цитотоксических т-лимфоцитов, включающие лимфо-аблативное соединение и молекулу, содержащую антигенные последовательности и нацеленную на специализированные антиген-презентирующие клетки

Композиции, вызывающие специфический ответ цитотоксических т-лимфоцитов, включающие лимфо-аблативное соединение и молекулу, содержащую антигенные последовательности и нацеленную на специализированные антиген-презентирующие клетки

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область изобретения

Данное изобретение относится к фармацевтической композиции, вызывающей специфический ответ цитотоксических Т-лимфоцитов (цТЛ) против по меньшей мере одного Т-клеточного эпитопа в организме млекопитающего, которая включает

- первое соединение, вызывающее лимфопению,

- в качестве второго соединения - молекулу, обладающую селективной аффинностью к специализированным антиген-презентирующим клеткам (АПК), где указанная молекула связана с указанным Т-клеточным эпитопом; и

- возможно, фармацевтически приемлемый носитель.

Изобретение также относится к фармацевтической композиции, включающей

- первое соединение, вызывающее лимфопению,

- в качестве второго соединения - молекулу, обладающую селективной аффинностью к АПК, где указанная молекула связана с по меньшей мере одним Т-клеточным эпитопом антигена, полученного из инфекционного агента; и

- возможно, фармацевтически приемлемый носитель в виде комбинированного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения в лечении и/или предупреждении инфекционных заболеваний пациентов.

Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, включающим

- первое соединение, вызывающее лимфопению,

- в качестве второго соединения - молекулу, обладающую селективной аффинностью к АПК, где указанная молекула связана с по меньшей мере одним Т-клеточным эпитопом антигена, полученного из злокачественной клетки, диспластически измененной клетки, опухолевой или раковой клетки; и

- возможно, фармацевтически приемлемый носитель в виде комбинированного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения в лечении и/или предупреждении соответственно злокачественных патологий, клеточной дисплазии, опухолевых процессов или рака у пациентов.

Предшествующий уровень техники

Общепризнано, что противораковые препараты обладают способностью ускорять приобретение противоопухолевого иммунитета у носителей опухоли. На различных моделях опухолей животных и у пациентов с прогрессирующей меланомой (2-4) и прогрессирующей почечной карциномой (7) было продемонстрировано, что противораковые препараты, такие как циклофосфамид (1-7), L-PAM4 (8), 1,3-бис(2-хлороэтил)-1-нитрозомочевина (9), винбластин (10), флударабин и блеомицин (11) усиливают развитие опосредованных Т-клетками противоопухолевых ответов.

Исследования механизмов, по которым противораковые препараты усиливают приобретение Т-зависимого иммунитета, обеспечивающего эрадикацию опухоли у носителей опухоли обнаружили, что химиотерапия вызывает сдвиг в цитокинном профиле: от противовоспалительных цитокинов (таких как фактор роста опухоли-β (TGF-β) и интерлейкин-10), обладающих ингибиторной активностью в отношении образования цТЛ, в сторону провоспалительных цитокинов (например, фактора некроза опухолей-α (ФНО-α), интерферона-γ (ИФН-γ) и гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (ГМ-КСФ)), который способствует развитию клеточного противоопухолевого иммунитета.

В частности, флударабин является иммуносупрессирующим пуриновым аналогом, который применялся в основном в лечении лимфопролиферативных заболеваний низкой степени злокачественности (12). Повторяющиеся циклы терапии флударабином вызывают глубокое истощение Т-клеток, особенно CD4+ Т-клеток (13). В отличие от других иммуносупрессирующих цитотоксических лекарственных средств, таких как циклофосфамид, флударабин вызывает апоптоз лимфоцитов как в делящихся клетках, так и в клетках, находящихся в фазе G0-G1 клеточного цикла. Такая не зависящая от клеточного цикла активность может быть отнесена на счет подавления лекарственным препаратом сигналов от STAT1 (от англ. Signal Transducer and Activator of Transcription) (14).

До настоящего времени иммунотерапия рака и хронических инфекционных заболеваний имела ограниченный успех. В данной заявке изобретатели показывают, что комбинация лимфо-аблативных лекарственных препаратов с вакцинами на основе рекомбинантых белков показывают гораздо более многообещающие результаты.

Поскольку лимфо-аблативные лекарственные препараты убивают лимфоциты (вызывают апоптоз) или делают их неактивными (анергичными), можно предположить, что они будут снижать эффективность вакцин, доставляющих антигены к специализированным антиген-презентирующим клеткам.

В частности, аденилатциклаза (CyaA) Bordetella pertussis обладает способностью доставлять свой каталитических домен в цитозоль эукариотических клеток (15). Таким образом, эпитопы CD4+ и CD8+ Т-клеток, помещенные в каталитический сайт CyaA, подвергаются процессингу и презентируются молекулами главного комплекса гистосовместимости МНС (от англ. Major Histocompatibility Complex) II и I класса, соответственно, на поверхности антиген-презентирующих клеток (АПК; (16)).

Более того, было показано, что CyaA специфически связывается с интегрином αMβ2 (CD11b/CD18; (17)), и таким образом обеспечивает таргетинг, т.е. выполнение Т-клеточными эпитопами роли мишеней для субпопуляции CD11b+ дендритных клеток (18).

Иммунизация мышей рекомбинантной CyaA, несущей определенные Т-клеточные эпитопы, приводила к индукции выраженных Т-цитотоксических ответов, полной защиты на летальное введение вируса и вызывала эффективный профилактический и терапевтический противоопухолевый иммунитет (19-21).

Несмотря на большое количество многообещающих результатов на доклиническом уровне, внедрение в клиническую практику адоптивной клеточной иммунотерапии встречает множество трудностей. По данным Rosenberg (22), объективный уровень ответа в иммунотерапевтических исследованиях у больных раком остается ниже 3%, а наилучшие результаты получают при использовании технологий лечения на основе аутологичного адоптивного переноса клеток. Такой подход является трудоемким, дорогостоящим и трудным для безопасного введения во всеобщее употребление. Таким образом, представляет интерес уточнение на доклиническом уровне подходов к улучшению адоптивной клеточной иммунотерапии.

Сущность изобретения

Изобретение относится к способу, вызывающему у млекопитающих специфический ответ Т-цитотоксических лимфоцитов (цТЛ) против по меньшей мере одного Т-клеточного эпитопа, причем этот способ включает введение нуждающемуся млекопитающему

- соединения, вызывающего лимфопению и

- молекулы, обладающей селективной аффинностью к специализированным антиген-презентирующим клеткам (АПК), которая содержит чужеродный антиген, несущий по меньшей мере один указанный Т-кпеточный эпитоп.

В воплощении изобретение относится к способу, вызывающему терапевтический иммунный ответ у млекопитающих, страдающих хроническим инфекционным заболеванием или злокачественной клеточной патологией, дисплазией, опухолевым процессом или раком, и способ включает введение нуждающимся пациентам

- композиции, включающей соединение, вызывающее лимфопению и

- композиции, включающей молекулу с селективной аффинностью к специализированным антиген-презентирующим клеткам (АПК), несущей антиген соответственно инфекционного агента или злокачественной клетки, диспластически измененной клетки, опухолевой или раковой клетки.

В дополнительном воплощении изобретение относится к фармацевтической композиции, вызывающей у млекопитающих специфичный ответ цитотоксических Т-лимфоцитов (цТЛ) против по меньшей мере одного Т-клеточного эпитопа, или вызывающей терапевтический иммунный ответ у млекопитающего, страдающего хроническим инфекционным заболеванием или злокачественной клеточной патологией, дисплазией, опухолевым процессом или раком, где указанная композиция включает

- соединение, вызывающее лимфопению

- молекулу с селективной аффинностью к специфическим антиген-презентирующим клеткам (АПК), которая связана с по меньшей мере одним указанным Т-клеточным эпитопом или которая связана с антигеном соответственно инфекционного агента или злокачественной клетки, диспластически измененной клетки, опухолевой или раковой клетки и

- возможно, фармацевтически приемлемый носитель.

В дополнительном воплощении изобретение относится к набору реагентов, вызывающих у млекопитающих специфический ответ цитотоксических Т-лимфоцитов (цТЛ) против по меньшей мере одного Т-клеточного эпитопа или вызывающих терапевтический иммунный ответ у млекопитающих, страдающих хроническим инфекционным заболеванием или злокачественной клеточной патологией, дисплазией, опухолевым процессом или раком, где указанный набор реагентов включает

- композицию, включающую соединение, вызывающее лимфопению и

- композицию, включающую молекулу, обладающую селективной аффинностью к специализированным антиген-презентирующим клеткам (АПК), включающую чужеродный антиген, несущий по меньшей мере один указанный Т-клеточный эпитоп, несущую антиген соответственно инфекционного агента или злокачественной клетки, диспластически измененной клетки, опухолевой или раковой клетки.

В дополнительном воплощении изобретение относится к способу предупреждения или лечения инфекций млекопитающих, где агент, ответственный за указанную инфекцию, экспрессирует специфический антиген, содержащий по меньшей мере один Т-клеточный эпитоп, и указанный способ включает введение нуждающимся пациентам композиции, включающей

- соединение, вызывающее лимфопению и

- молекулу, обладающую селективной аффинностью к специфическим антиген-презентирующим клеткам (АПК), включающую чужеродный антиген, несущий по меньшей мере один указанный Т-клеточный эпитоп, включающую указанный антиген, специфичный для указанного агента, ответственного за указанную инфекцию, или по меньшей мере один Т-клеточный эпитоп, содержащийся в указанном антигене.

В дополнительном воплощении изобретение относится к способу предупреждения или лечения рака у млекопитающих, особенно рака дыхательных и пищеварительных путей, при котором опухолевые клетки экспрессируют белок человеческого раково-эмбринонального антигена (СЕА), и указанный способ включает введение нуждающемуся пациенту

- композиции, содержащей поликлональные анти-лимфоцитарные или антитимоцитарные антитела кролика или лошади (АТГ), вызывающие лимфопению и, в дополнение,

- композиции, включающей рекомбинантную аденилатциклазу, несущую участок A3-B3 белка человеческого СЕА.

В дополнительном воплощении изобретение относится к способу предупреждения или лечения рака, вызванного HPV у млекопитающих, при котором опухолевые клетки экспрессируют онкоген Е7 HPV, и указанный метод включает введение нуждающимся пациентам

- композиции, содержащей поликлональные АТГ кролика или лошади, вызывающие лимфопению, а затем

- композиции, включающей рекомбинантную аденилатциклазу, несущую онкоген Е7 HPV.

Краткое описание графических материалов

Фигура 1 (пример 1): SDS-электрофорез в ПААГ рекомбинантных белков СЕА.

Три микрограмма очищенных белков разделяли в полиакриламидном геле (ПААГ) с градиентом от 4% до 15% и окрашивали Кумасси синим. Дорожка 1, CyaA дикого типа; дорожка 2, CyaA - CEA_A3B3; дорожка 3, CyaAΔ-CEA_A3B3; дорожка 4, CEA_A3B3.

Фигура 2 (пример 1): Асимметричный ответ Th1, вызванный двукратной иммунизацией рекомбинантными белками СЕА.

После первичной иммунизации путем внутривенного введения 50 мкг рекомбинантных белков СЕА через 7 и 14 дней проводили реиммунизацию путем интрадермального введения 10 мкг аналогичного материала. Клетки, продуцирующие СЕА-специфичный интерферон-γ, идентифицировали с помощью проточной цитометрии (FACS) и внутриклеточного окрашивания на цитокины спустя 7 дней после последней иммунизации. Результаты представлены как медиана процентного соотношения CD4+ и CD8+ клеток, экспрессирующих интерферон-γ (n=3) после рестимуляции. Фоновые результаты, полученные на нестимулированных спленоцитах, вычитали.

Фигура 3 (пример 1): Истощение лимфоцитов периферической крови, вызванное иммуносупрессивным лечением.

Кинетический анализ числа лимфоцитов в периферической крови после интраперитонеального введения 200 мг/кг/день флударабина в течение 6 последовательных дней или после однократного интраперитонеального введения 20 мг/кг АТГ (верхняя левая панель). Три другие панели отображают кинетический анализ процентного содержания CD4+, CD8+ и В220+ лимфоцитов в периферической крови после вышеописанного иммуносупрессивного лечения.

Фигура 4 (пример 1): Увеличение выраженности СЕА-специфичного ответа Th1 как результат иммуносупрессии и двукратной иммунизации.

За 10 дней до двукратной иммунизации рекомбинантными белками СЕА животным проводилось иммуносупрессивное лечение на основе флударабина или АТГ. Клетки, продуцирующие СЕА-специфичныий интерферон-γ, идентифицировали с помощью проточной цитометрии (FACS) и внутриклеточного окрашивания на цитокины через 7 дней после последней иммунизации. Результаты представлены как медиана процентного соотношения CD4+ и CD8+ клеток, экспрессирующих интерферон-γ (n=3) после рестимуляции. Фоновые результаты, полученные на нестимулированных спленоцитах, вычитали.

Фигура 5 (пример 1): Повышение медианы выживаемости после двукратной иммунизации CyaA-CEA_A3B3 в результате или до лимфоаблации.

За 5 дней до подкожной инъекции 2×10⁴ клеток B16F0-CEA-GFP животным проводилось иммуносупрессивное лечение на основе флударабина или АТГ. (А) Через 3 дня после инъекции опухолевых клеток животным проводили двукратную иммунизацию рекомбинантными белками СЕА. Затем начинали регулярный мониторинг роста опухоли. Мышей забивали согласно требованиям санитарных норм. Приведены кривые выживаемости. Животные из контрольной группы (Контроль) не подвергались иммуносупрессии. (В) Так же, как в А, но иммунотерапию проводили через 5 дней после инъекции опухолевых клеток.

Фигура 6 (пример 2): SDS-электрофорез в ПААГ рекомбинантных белков СЕА.

Три микрограмма очищенных белков разделяли в полиакриламидном геле (ПААГ) с градиентом от 4% до 15% и окрашивали Кумасси синим. Дорожка 1, CyaA-HPV16E7Δ; дорожка 2, CyaA-CEA_A3B3; дорожка 3, CyaAΔ-CEA_A3B3; дорожка 4, СЕА His-tag.

Фигура 7 (пример 2): Ответ Th1, вызванный иммунизацией рекомбинантными белками СЕА.

После первичной иммунизации путем внутривенного введения эквимолярного количества указанных рекомбинантных белков (50 мкг для CyaA, 19,2 мкг для СЕА His-tag) в присутствии 10 мкг CpG, через 7 и 14 дней проводили реиммунизацию путем интрадермального введения 10 мкг аналогичного материала (3,8 мкг для СЕА His-tag) и 2 мкг CpG. Через 7 дней после последней иммунизации помощью анализа ELISpot ex vivo с использованием 1 мкг/мл пептидного пула (pepscan) СЕА идентифицировали CD8+ клетки, продуцирующие СЕА-специфичный интерферон-γ. Результаты представлены как медиана числа колоний, вырабатывающих интерферон-γ, SFC (n=3).

Фигура 8 (пример 2): Истощение лимфоцитов периферической крови, вызванное иммуносупрессивным лечением.

Кинетика числа лимфоцитов (CD4+, CD8+, CD49d+ и В220+) в периферической крови после интраперитонеального введения 100 мг/кг/день флударабина в течение 6 дней или после однократного интраперитонеального введения 20 мг/кг АТГ. Контрольным животным вводили PBS или 20 мг/кг нормальной кроличьей сыворотки (НКС).

Фигура 9 (пример 2): Увеличение выраженности СЕА-специфичного ответа Th1 как результат иммуносупрессии и двукратной иммунизации.

За 7 дней до двукратной иммунизации рекомбинантными белками СЕА животным проводилось иммуносупрессивное лечение на основе АТГ или флударабина. После первичной иммунизации путем внутривенного введения эквимолярного количества рекомбинантных белков (50 мкг для CyaA, 19,2 мкг для СЕА His-tag) в присутствии 10 мкг CpG через 7 и 14 дней проводили реиммунизацию путем интрадермального введения 10 мкг аналогичного материала (3,8 мкг для СЕА His-tag) и 2 мкг CpG. Через 7 дней после последней иммунизации помощью анализа ELISpot ex vivo с использованием 1 мкг/мл пептидного пула СЕА *** идентифицировали CD8+ клетки, продуцирующие СЕА-специфичный интерферон-γ. Результаты представлены как медиана числа колоний, вырабатывающих интерферон-γ, SFC (n=2).

Фигура 10 (пример 2): Повышение медианы выживаемости после двукратной иммунизации CyaA-CEA_A3B3 в результате или до лимфоаблации.

Инокуляцию опухоли проводили путем введения 5×10⁵ клеток Мса32А. Через 3 дня проводили иммуносупрессивное лечение на основе флударабина или АТГ. Контрольные животные получали нормальную кроличью сыворотку. Через 10 дней после инъекции опухолевых клеток (через 7 дней после иммуносупрессии) животным проводили двукратную иммунизацию рекомбинантными белками. После первичной иммунизации путем внутривенного введения эквимолярного количества указанных рекомбинантных белков (50 мкг для CyaA, 19,2 мкг для СЕА His-tag) в присутствии 10 мкг CpG через 7 дней проводили реиммунизацию путем интрадермального введения 10 мкг аналогичного материала (3,8 мкг для СЕА His-tag) и 2 мкг CpG. Затем начинали регулярный мониторинг роста опухоли. Мышей забивали согласно требованиям санитарных норм. Приведены кривые выживаемости.

Подробное описание изобретения.

Авторы изобретения обнаружили, что потенциирующий эффект лимфо-аблативных агентов, таких как антитимоцитарный иммуноглобулин (АТГ) или флударабин, способствующий приобретению терапевтического иммунитета пациентом, существенно усиливается, если антиген (антигены), входящий в состав препарата, при введении in vivo направляются к специализированным антиген-презентирующим клеткам (АПК).

Векторные вакцины, направленно воздействующие на специализированные антиген-представляющие клетки (АПК), такие как макрофаги, нейтрофилы и дендритные клетки, обладают преимуществом селективно доставлять антигены к этим АПК благодаря специфичной аффинности связывания АПК с факторами на клеточной поверхности, что приводит к усилению антиген-специфичного Т-клеточного ответа (хелперного и/или цитотоксического). Однако в комбинации с лимфо-аблативными соединениями такой эффект, как правило, недостижим, поскольку целевая популяция лимфоцитов подвергается воздействию указанных лимфо-аблативных соединений, сокращается или становится анергичной (нефункциональной).

Авторы изобретения продемонстрировали, что в случае, когда антиген в условиях in vivo направляется к АПК с помощью белкового вектора, аденилатциклазы (CyaA), имеющей высокую аффинность к молекуле CD11b (специфичной для таких АПК, как дендритные клетки, макрофаги, а также нейтрофилы), неожиданно происходит гораздо более сильная индукция цТЛ по сравнению с тем, если бы АТГ-опосредованное лимфо-аблативное лечение не проводилось. Такой эффект оказался неожиданным.

Авторы изобретения показали, что при АТГ-опосредованном лимфо-аблативном лечении такая более сильная индукция цТЛ ассоциирована с их способностью лучше предотвращать рост опухоли in vivo.

Авторы изобретения также показали, что флударабин-опосредованное лимфо-аблативное лечение также подавляет рост опухоли. Такая особенность облегчает способность иммунотерапии с применением CyaA более эффективно предотвращать рост опухоли in vivo.

Кроме того, авторы изобретения показали, что такое усиление связано не только с использованием иммуно-аблативных соединений, таких как АТГ или флударабин, но и со способностью векторов на основе CyaA нацеливаться на CD11b, и может быть экстраполировано на другие АПК-нацеленные системы, такие как белки теплового шока. Данный вывод основан на следующих 3 причинах:

1. Вектор CyaA с делецией участка, связывающего CD11b на АПК, не направлялся к АПК, и являлся не только менее активным, чем исходный вектор CyaA, но и не усиливал в значительной степени индукцию иммунного ответа против встроенного чужеродного антигена (CEA_A3B3), когда экспериментальные животные предварительно получали иммунодепрессанты: УСИЛЕНИЕ (ИММУННОГО ОТВЕТА) БЛАГОДАРЯ CD11b-НАПРАВЛЯЮЩИМ СВОЙСТВАМ вакцины.

2. Антиген СЕА в отсутствие молекулы, имеющей селективную аффинность к АПК, в сочетании с CpG или с Poly-ICLC или с Монофосфорилом А, вызывает выраженный иммунный ответ, направленный против СЕА, в зависимости от способа определения иммуногенности. Напротив, когда подопытные животные предварительно получали иммунодепрессанты, индукция иммунного ответа против чужеродного антигена (СЕА) значительно не усиливалась: ОТСУТСТВИЕ УСИЛЕНИЯ (ИММУННОГО ОТВЕТА) АДЪЮВАНТОМ, НЕ НАЦЕЛЕННЫМ НА СПЕЦИФИЧЕСКИЕ КЛЕТКИ.

3. Результаты предварительных исследований позволили предположить, что сопоставимого потенциирования иммунного ответа можно добиться при использовании белка теплового шока Hsp65 (от англ. Heat Shock Protein), гибридизованного с CEA_A3B3. Белковый вектор Hsp65, несущий A3B3, направляется к АПК за счет распознавания Toll-подобных рецепторов (TLR4, Toll-Like Receptors) на поверхности: УСИЛЕНИЕ (ИММУННОГО ОТВЕТА) БЛАГОДАРЯ АПК-НАПРАВЛЯЮЩИМ СВОЙСТВАМ вакцины.

Таким образом, в одном аспекте данное изобретение относится к фармацевтической композиции, вызывающей специфичный ответ цитотоксических Т-лимфоцитов (цТЛ) против по меньшей мере одного Т-клеточного эпитопа в организме млекопитающего, включающей

- первое соединение, вызывающее лимфопению,

- в качестве второго соединения - молекулу, обладающую селективной аффинностью к специализированным антиген-презентирующим клеткам (АПК), где указанная молекула связана с указанным Т-клеточным эпитопом; и

- возможно, фармацевтически приемлемый носитель.

Предпочтительно, первое соединение способно вызывать транзиторное истощение Т-клеток. Более предпочтительно, первое соединение выбрано из группы, состоящей из поликлональных антилимфоцитарных и антитимоцитарных иммуноглобулинов (АТГ), таких как антилимфоцитарные и антитимоцитарные иммуноглобулины (АТГ) кролика или лошади, пуриновые, пиримидиновые аналоги, алкилирующие агенты, моноклональные и поликлональные антитела, способные вызывать периферическое и/или центральное истощение Т, В и NK лимфоцитов. Это может быть флударабин или циклофосфамид. Антитела, способные вызывать истощение лимфоцитов, выбраны из группы, состоящей из анти-CD8, анти-CD4, анти-CD25, анти-CD3 и анти-CD52 моноклональных антител.

В частном воплощении молекула, обладающая селективной аффинностью к АПК, выбрана из группы, состоящей из аденилатциклаз, белков теплового шока (HSP), шигатоксина и LAG-3 (от англ. Lymphocyte-activating gene - 3, ген активации лимфоцитов - 3). Предпочтительно, аденилатциклаза получена из Bordetella pertussis, HSP выбран из группы, состоящей из hsp65 и hsp70, указанные hsp65 и hsp70 получены предпочтительно из Mycobacterium bovis, а указанный шигатоксин получен из Shigella dysenteriae.

В предпочтительном воплощении фармацевтическая композиция согласно данному изобретению также содержит адъювант. Адъюванты хорошо известны специалистам в данной области и могут применяться в данном изобретении индифферентно. Предпочтительно им может быть лиганд Toll-подобного рецептора (TLR) класса 3 (например, poly-ICLC), лиганд TLR-9 (например, CpG) или лиганд TLR-4 (например, монофосфорил-А), и более предпочтительно, адъювант CpG с последовательностью SEQ ID №16, где основаниями является фосфоротиоат. Указанный адъювант предпочтительно находится в растворе со вторым соединением.

В дальнейшем предпочтительном воплощении молекула, обладающая селективной аффинностью к АПК, ковалентно связана с по меньшей мере одним указанным Т-клеточным эпитопом. Предпочтительно, молекула, обладающая селективной аффинностью к АПК, и указанный по меньшей мере один Т-кпеточный эпитоп являются полипептидами, которые закодированы в последовательностях ДНК, полученных с помощью технологий рекомбинантных ДНК.

В фармацевтической композиции согласно изобретению указанный Т-клеточный эпитоп принадлежит антигену, происходящему из инфекционного агента или злокачественной клетки, диспластически измененной клетки, опухолевой или раковой клетки. Предпочтительно, инфекционный агент выбран из группы, состоящей из вируса папилломы человека (HPV), вируса иммунодефицита человека (HIV), вируса гепатита В (HVB), вируса гепатита С (HCV), Chlamydia trachomatis или Mycobacterium tuberculosis. Также предпочтительно, антиген, происходящий из злокачественной клетки, диспластически измененной клетки, опухолевой или раковой клетки, выбран из группы, состоящей из раково-эмбрионального антигена (СЕА), антигена меланомы MAGE-A3, теломеразы (TERT), онкогена Е7 вируса папилломы человека (HPV) и проапоптотического белка Р53.

Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, как описано выше, для применения в качестве профилактической или терапевтической вакцины.

В предпочтительном воплощении млекопитающим является человек.

Фармацевтическая композиция согласно изобретению предпочтительно предназначена для внутримышечного, внутривенного, внутридермального, кожного, подкожного, интраперитонеального, орального введения или введения в слизистую.

Изобретение также относится к фармацевтической композиции, включающей

- первое соединение, вызывающее лимфопению,

- в качестве второго соединения - молекулу, обладающую селективной аффинностью к АПК, где указанная молекула связана с по меньшей мере одним Т-клеточным эпитопом антигена, полученного из инфекционного агента; и

- возможно, фармацевтически приемлемый носитель, в виде комбинированного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения в лечении и/или предупреждении инфекционных заболеваний пациентов.

В предпочтительном воплощении комбинированного препарата первое соединение вводится перед введением второго соединения. Предпочтительно, второе соединение находится в растворе с адъювантом. Предпочтительно, адъювант представляет собой лиганд Toll-подобного рецептора (TLR), выбранный из группы, состоящей из лигандов TLR 3 класса, таких как poly-ICLC, лигандов TLR 9 класса, таких как CpG и лигандов TLR 4 класса, таких как монофосфорил-А.

Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, включающим

- первое соединение, вызывающее лимфопению,

- в качестве второго соединения - молекулу, обладающую селективной аффинностью к АПК, где указанная молекула связана с по меньшей мере одним Т-клеточным эпитопом антигена, полученного из злокачественной клетки, диспластически измененной клетки, опухолевой или раковой клетки; и

- возможно, фармацевтически приемлемый носитель в виде комбинированного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения в лечении и/или предупреждении соответственно злокачественных патологий, клеточной дисплазии, опухолевых процессов или рака у пациентов.

В предпочтительном воплощении комбинированого препарата первое соединение вводится перед введением второго соединения. Предпочтительно, второе соединение находится в растворе с адъювантом. Предпочтительно, адъювант представляет собой лиганд Toll-подобного рецептора (TLR), выбранный из группы, состоящей из лигандов TLR 3 класса, таких как poly-ICLC, лигандов TLR 9 класса, таких как CpG, и лигандов TLR 4 класса, таких как монофосфорил-А.

Предпочтительно, фармацевтическая композиция согласно изобретению применяется для лечения и/или предупреждения рака, при котором раковые клетки экспрессируют белок СЕА, предпочтительно рака дыхательных и пищеварительных путей, где первое соединение представляет собой поликлональный АТГ кролика или лошади, а второе соединение представляет собой аденилатциклазу, несущую А3-B3 участок человеческого белка СЕА.

В другом предпочтительном воплощении фармацевтическая композиция согласно изобретению применяется для лечения и/или предупреждения рака, при котором раковые клетки экспрессируют белок СЕА, такой как белок человеческого СЕА, предпочтительно, рака дыхательных и пищеварительных путей, где первое соединение представляет собой флударабин, а второе соединение представляет собой аденилатциклазу, несущую участок А3-В3 белка человеческого СЕА.

В другом предпочтительном воплощении фармацевтическая композиция согласно изобретению применяется для лечения и/или предупреждения рака, вызванного HPV, при котором раковые клетки экспрессируют онкоген Е7 HPV, где первое соединение представляет собой поликлональный АТГ кролика или лошади, а второе соединение представляет собой рекомбинантную аденилатциклазу, несущую онкоген Е7 HPV.

В альтернативном варианте фармацевтическая композиция согласно изобретению применяется для лечения и/или предупреждения рака, вызванного HPV, при котором раковые клетки экспрессируют онкоген Е7 HPV, где первое соединение представляет собой флударабин, а второе соединение представляет собой рекомбинантную аденилатциклазу, несущую онкоген Е7 HPV.

Изобретение также относится к способу индукции у млекопитающего специфичного ответа цитотоксических Т-лимфоцитов против по меньшей мере одного Т-клеточного эпитопа, способ включает введение млекопитающему

- соединения, вызывающего лимфопению и

- молекулы, обладающей селективной аффинностью к специализированным антиген-презентирующим клеткам (АПК), которая содержит чужеродный антиген, несущий по меньшей мере один указанный Т-клеточный эпитоп.

Согласно данному изобретению указанный Т-клеточный эпитоп может являться Т-клеточным эпитопом антигена, полученного из инфекционного агента или злокачественной клетки, диспластически измененной клетки, опухолевой или раковой клетки.

Согласно данному изобретению, соединение, вызывающее лимфопению, и молекула, обладающая селективной аффинностью к специализированным антиген-презентирующим клеткам (АПК), включающая чужеродный антиген, несущий по меньшей мере один указанный Т-кпеточный эпитоп, могут быть введены пациенту одновременно, раздельно или последовательно, предпочтительно при последовательном введении пациенту указанного соединения и указанной молекулы, указанное соединение, вызывающее лимфопению, может быть введено перед введением указанной молекулы с селективной аффинностью к специализированным антиген-презентирующим клеткам (АПК), включающей чужеродный антиген, несущий по меньшей мере один указанный Т-клеточный эпитоп.

Согласно данному изобретению, при одновременном введении пациенту соединения, вызывающего лимфопению, и молекулы с селективной аффинностью к специализированным антиген-презентирующим клеткам (АПК), включающей чужеродный антиген, несущий по меньшей мере один указанный Т-клеточный эпитоп, указанные соединение и молекула могут быть введены в одной и той же или в различных композициях.

В другом воплощении данное изобретение относится к способу выработки терапевтического иммунного ответа в организме млекопитающего, страдающего хроническим инфекционным заболеванием или злокачественной клеточной патологией, дисплазией, опухолевым процессом или раком, и способ включает введение нуждающимся пациентам

- композиции, включающей соединение, вызывающее лимфопению и

- композиции, включающей молекулу с селективной аффинностью к специализированным антиген-презентирующим клеткам (АПК), включающей чужеродный антиген, несущий по меньшей мере один указанный Т-клеточный эпитоп, несущей антиген соответственно инфекционного агента или злокачественной клетки, диспластически измененной клетки, опухолевой или раковой клетки.

Согласно данному изобретению, композиция, включающая соединение, вызывающее лимфопению, и композиция, включающая молекулу с селективной аффинностью к специализированным антиген-презентирующим клеткам (АПК), включающую чужеродный антиген, несущий по меньшей мере один указанный Т-клеточный эпитоп, могут быть введены пациенту одновременно, раздельно или последовательно, предпочтительно при последовательном введении пациенту указанного соединения и указанной молекулы, указанное соединение, вызывающее лимфопению, вводится перед введением указанной молекулы с селективной аффинностью к специализированным антиген-презентирующим клеткам (АПК), включающей чужеродный антиген, несущий по меньшей мере один указанный Т-клеточный эпитоп.

Согласно данному изобретению, при одновременном введении пациенту соединения вызывающего лимфопению, и композиции, содержащей молекулу с селективной аффинностью к специализированным антиген-презентирующим клеткам (АПК), включающую чужеродный антиген, несущий по меньшей мере один указанный Т-клеточный эпитоп, указанные композиции могут быть введены в одной и той же или в различных композициях.

Согласно данному воплощению указанным млекопитающим может быть человек.

В следующем воплощении данное изобретение относится к фармацевтической композиции, вызывающей у млекопитающих специфичный ответ цитотоксических Т-димфоцитов (цТЛ), направленный против по меньшей мере одного Т-клеточного эпитопа, или вызывающей терапевтический иммунный ответ у млекопитающего, страдающего хроническим инфекционным заболеванием или злокачественной клеточной патологией, дисплазией, опухолевым процессом или раком, где указанная композиция включает

- соединение, вызывающее лимфопению и

- молекулу с селективной аффинностью к специализированным антиген-презентирующим клеткам (АПК), связанную с указанным Т-клеточным эпитопом или связанную с антигеном соответственно инфекционного агента или злокачественной клетки, диспластически измененной клетки, опухолевой или раковой клетки и

- возможно, фармацевтически приемлемый носитель.

В следующем воплощении данное изобретение относится к набору реагентов для выработки у млекопитающих специфичного ответа цитотоксических Т-лимфоцитов (цТЛ) против по меньшей мере одного Т-клеточного эпитопа или вызывающих терапевтический иммунный ответ у млекопитающих, страдающих хроническим инфекционным заболеванием или злокачественной клеточной патологией, дисплазией, опухолевым процессом или раком, где указанный набор реагентов включает

- композицию, включающую соединение, вызывающее лимфопению и

- композицию, включающую молекулу с селективной аффинностью к специализированным антиген-презентирующим клеткам (АПК), включающую чужеродный антиген, несущий по меньшей мере один указанный Т-клеточный эпитоп, несущую антиген соответственно инфекционного агента или злокачественной клетки, диспластически измененной клетки, опухолевой или раковой клетки.

Согласно данному изобретению, фармацевтическая композиция или набор могут быть вакциной.

Согласно данному изобретению, композиция может быть разработана для внутримышечного, внутривенного, внутридермального, кожного, подкожного, интраперитонеального, орального введения или введения в слизистую.

Согласно данному изобретению, молекула, обладающая селективной аффинностью к специализированным антиген-презентирующим клеткам (АПК), включающая чужеродный антиген, несущий по меньшей мере один указанный Т-клеточный эпитоп, состоит из молекулы с селективной аффинностью к специализированным антиген-презентирующим клеткам (АПК), которая может быть ковалентно связана с указанным антигеном, несущим по меньшей мере один Т-клеточный эпитоп.

Согласно данному изобретению, молекула, обладающая селективной аффинностью к специализированным антиген-презентирующим клеткам (АПК), и указанный антиген, несущий по меньшей мере один Т-клеточный эпитоп, могут быть полипептидами, которые кодируются последовательностями ДНК, полученными с помощью технологии рекомбинантной ДНК.

Согласно данному изобретению, соединение, вызывающее лимфопению, может быть соединением, способным вызывать транзиторное истощение Т-клеток.

Согласно данному изобретению, соединение, вызывающее лимфопению, может быть выбрано из группы, состоящей из АТГ и флударабина.

Согласно данному изобретению, молекула, обладающая селективной аффинностью к специализированным антиген-презентирующим клеткам, может быть выбрана из группы, состоящей из аденилатциклазы (CyaA), белков теплового шока (HSP), шигатоксина и LAG-3.

В воплощении изобретение касается способа применения вектора аденилатциклазы (CyaA), выделенной из Bordetella pertussis, где вектор CyaA при применении в комбинации с лимфо-аблативными соединениями имеет улучшенные характеристики в качестве векторной вакцины по сравнению с вакцинами, не нацеленными на специализированные антиген-презентирующие клетки.

В воплощении изобретение касается фармацевтической композиции вещества, состоящего из ингредиента, вкл