Устойчивая пероральная фармацевтическая композиция, содержащая агонисты рецепторов тиреоидных гормонов

Устойчивая пероральная фармацевтическая композиция, содержащая агонисты рецепторов тиреоидных гормонов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям. В частности, однако без исключений, оно относится к стратегиям составления композиций для стабилизации фармакологически активных ингредиентов фармацевтических композиций.

Для многих фармакологически активных средств предпочтительным является пероральный путь введения. Однако для того, чтобы такие средства достигали кровотока пациента, они должны обычно подвергаться воздействию содержимого, по меньшей мере, верхней части желудочно-кишечного тракта (т.е. желудка и тонкой кишки). Определенные средства чувствительны к кислотной среде желудка. Такая чувствительность обычно приводит к опосредованному кислотой гидролизу средства. Известно, что композиции, содержащие такие гидролитически чувствительные средства, обеспечиваются энтеросолюбильным покрытием. Такое покрытие в целом включает кислотный полимер, который является по существу незаряженным и нерастворимым при низком рН (т.е. в желудке), но ионизированным и более растворимым при более высоких величинах рН (т.е. после прохождения в тонкую кишку).

Соединение 1А, имеющее структуру:

Соединение 1А

описано в документе WO 01/60784 (название IUPAC 3-[[3,5-Дибром-4-[4-гидрокси-3-(1-метилэтил)фенокси]фенил]амино]-3-оксипропаноевая кислота). Соединение 1А и серия родственных соединений описаны в качестве агонистов рецепторов гормонов щитовидной железы, в частности рецептора TRβ. Такие соединения должны использоваться при лечении или профилактики заболеваний, связанных с метаболической дисфункцией, или которые зависят от экспрессии гена, регулирующего трийодтиронин (Т₃). Такие заболевания включают, например, ожирение, гиперхолестеринемию, атеросклероз, сердечные аритмии, депрессию, остеопороз, гипотиреоз, подагру, рак щитовидной железы, а также глаукому и застойную сердечную недостаточность.

При проведении работы по разработке препаративной формы, содержащей соединение 1А, заявители неожиданно обнаружили, что в соединении происходила нежелательная трансформация. Происходило получение продукта реакции, содержащего нитро (-NO₂) группу в орто-положении относительно гидроксильной группы на фенольном кольце (т.е. левом кольце, как изложено выше). После исследования было обнаружено, что этот продукт реакции имел измененные свойства по сравнению с не трансформированным соединением 1А, включая, к удивлению, возможность генотоксичности. После дальнейшего исследования было обнаружено, что продукт реакции мог образовываться in vivo после перорального введения. Поэтому заявители решили исследовать способ, ведущий к получению нитрованного продукта реакции, с целью ингибирования его образования после перорального введения.

Известно (например, из документа Oldrieve et al., Chem. Res. Toxicol. 1998, 11, 1574), что определенные флавоноидные соединения способны ингибировать нитрование тирозина или образование продуктов деаминирования оснований из оснований ДНК, которое происходит в кислотных условиях в присутствии нитрита. Было показано, что нитрование гидроксифенилуксусной кислоты и белков в присутствии нитрита и пероксида водорода в слюне человека in vitro может ингибироваться определенным типом восстановителя (Takahama et al., Arch. Oral Biol. 2003, 48, 679). Однако эти документы не дают возможность специалисту в данной области прогнозировать, могут ли такие реакции нитрования происходить с другими соединениями, такими как структурно отличными агонистами рецепторов тиреоидных гормонов, иллюстрируемых соединением 1А. Кроме того, они не указывают на то, что такие реакции могут иметь значение in vivo, и не предполагают прогноз возможных свойств (т.е. генотоксичности) таких нитрованных продуктов реакции.

В предшествующем уровне техники не раскрыто или не высказано предположение, что соединения, связывающие рецепторы тиреоидных гормонов, такие как указанное выше соединение 1А, могут превратиться в потенциально токсичные продукты реакции после перорального введения, не идет речь о том, как может произойти такое превращение, ни о том, как можно разрешить такую проблему.

Поэтому целью настоящего изобретения является предоставление фармацевтических композиций, при которых ослабляется указанная выше проблема нитрования определенных связывающих рецепторы тиреоидных гормонов рецепторы после перорального введения.

Соответственно, первый аспект настоящего изобретения предоставляет фармацевтическую композицию, подходящую для перорального введения, включающую:

(i) соединение формулы I:

Формула I

где:

Z представляет Н или альтернативную группу, способную быть замещенной NO₂ посредством реакции нитрования на основе нитрита;

R₁ выбран из водорода, галогена, трифторметила или алкила из 1 до 6 атомов углерода или циклоалкила из 3 до 7 атомов углерода;

Х представляет кислород (-О-), серу (-S-), карбонил (-СО-), метилен (-СН₂-) или -NH-;

R₂ и R₃ являются одинаковыми или различными и представляют водород, галоген, алкил из 1-4 атомов углерода или циклоалкил из 3-6 атомов углерода, причем, по меньшей мере, один из R₂ и R₃ не является водородом;

R₄ представляет водород или низший алкил;

А представляет кислород (-О-), метилен (-СН₂-), -CONR₅-, -NR₅- или -NR₅CO-;

R₅ представляет H или низший алкил;

R₆ представляет карбоновую кислоту (-СО₂Н), или ее сложный эфир, или ее пролекарство;

Y представляет -(CH₂)_n, где n=0, 1, 2, 3, 4 или 5, и где одна или несколько из CH₂ групп может быть необязательно замещена галогеном, или Y представляет -С=С-, которая может быть цис или транс; и

R₇ представляет водород или алканоильную или ароильную группу, или другую группу, способную к биопревращению для генерирования свободной фенольной структуры (где R₇ = H);

включая все его стереоизомеры или его фармацевтически приемлемую соль или сложный эфир;

(ii) по меньшей мере, один фармацевтически приемлемый эксципиент; и

(iii) энтеросолюбильное покрытие.

Соединения формулы I , в частности, можно применять в качестве агонистов рецепторов тиреоидных гормонов. В частности, многие такие соединения проявляют повышенную активность на рецепторе TRβ (а не TRα).

Композиция по первому аспекту изобретения основана на удивительной находке заявителей в результате указанных выше исследований, что нитропродукт реакции соединения 1А образуется после перорального введения посредством реакции нитрования на основе нитрита. Реакция нитрования на основе нитрита требует для своего протекания умеренно низкого рН (примерно 2). Путем обеспечения композиции энтеросолюбильным покрытием (т.е. покрытием, которое остается интактным в кислотной среде желудка и растворяется только после прохождения композиции в тонкую кишку, где рН ближе к нейтральному), реакция нитрования значительно ингибируется. Присутствие энтеросолюбильного покрытия предотвращает воздействие на фармакологически активное соединение формулы I кислотной среды желудка, посредством этого предотвращая образование нитритного реагента вблизи указанного активного соединения. Поэтому следствием энтеросолюбильного покрытия является то, что после перорального введения соединения формулы I реакция нитрования ослабляется. Следует подчеркнуть, что мотивация заявителей понять и попытаться ослабить реакцию нитрования привела к неожиданному получению нитрированного продукта реакции соединения 1А во время работы по разработке препаративной формы. Такая реакция нитрования также происходит у других соединений формулы (I), включая, например, соединение GC-1, показанное ниже. Если бы этот нитрированный продукт реакции не был выявлен, не было бы причины определять его потенциальную генотоксичность. Конечно, без знания потенциальной токсичности (или других нежелательных свойств) такого продукта реакции не было бы побуждения предпринять попытку предотвращения его образования.

Применимость настоящего изобретения не ограничивается стабилизацией соединения 1А. Скорее, все соединения в соответствии с данным первым аспектом изобретения должны приобрести некоторую степень стабилизации посредством ослабления реакции нитрования, которая склонна к протеканию после перорального введения. Нитрование любого соединения формулы I может привести к изменениям фармакологического и/или токсикологического профилей соединения или равным образом может воздействовать на его фармакокинетику. Нитропродукты реакции таких соединений могут быть потенциально генотоксичными. В определенных случаях можно также предотвратить дополнительные реакции в кислотной среде (например, освобождение анилина, который сам является потенциально генотоксичным). Кроме того, могут также происходить реакции нитрования в не первичном (например, правом, как представлено выше) кольце при низком рН посредством электрофильного ароматического замещения. Энтеросолюбильное покрытие также ингибирует или предотвращает образование этих нитропродуктов реакции. В любом случае способность регулировать и/или предотвращать такие химические модификации соединений формулы I будет в целом полезным инструментом для специалиста, составляющего препаративную форму.

Композиции в соответствии с первым аспектом изобретения обеспечивают возможность высвобождения соединений формулы I из композиции только после того, как оно прошло из желудка в кишечник, и в этот момент энтеросолюбильное покрытие начинает растворяться и/становиться проницаемым. Однако поскольку рН в кишечнике недостаточно низкий для того, чтобы в какой-либо значительной степени происходило нитрование на основе нитрита, нитрование соединений формулы I после перорального введения значительно ослабляется.

Используемый в настоящем документе термин «алканоил» отдельно или как часть другой группы обозначает алкил, связанный с карбонильной группой. Используемый в настоящем документе термин «ароил» отдельно или как часть другой группы обозначает арил, связанный с карбонильной группой. Пока нет других указаний, используемый в настоящем документе термин «алкил» или «алк» отдельно или как часть другой группы включает и прямо- и разветвленноцепочечные углеводороды, содержащие 1-12 атомов углерода в нормальной цепи, предпочтительно, 1-4 атома углерода (в этом случае можно использовать термин «низший алкил»), такой как метил, этил, пропил, изопропил, бутил, трет-бутил, или изобутил, пентил, гексил, изогексил, гептил, 4,4-диметилпентил, октил, 2,2,4-триметилпентил, нонил, децил, ундецил, додецил. Используемый в настоящем документе термин «арил» отдельно или как часть другой группы относится к моноциклическим и бициклическим ароматическим группам, содержащим 6-10 атомов углерода в кольцевой части (такой как фенил или нафтил, содержащий 1-нафтил и 2-нафтил), и может быть необязательно замещен через имеющиеся атомы углерода 1, 2 или 3 группами, выбранными из водорода, галоида, алкила, галоидалкила, алкокси, галоидалкокси, алкенила, трифторметила, трифторметокси, алкинила, гидрокси, амино, нитро, циано и/или карбоксила или его сложного алкилового эфира. Пока нет других указаний, используемый в настоящем документе термин «циклоалкил» отдельно или как часть другой группы включает насыщенные циклические углеводородные группы или частично ненасыщенные (содержащие 1 или 2 двойные связи) циклические углеводородные группы, содержащие одно кольцо, и всего от 3 до 7 атомов углерода, предпочтительно, 3-6 атомов углерода, образуя кольцо, которое включает циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклопентенил и циклогексенил. Используемый в настоящем документе термин «галоген» или «галоид» отдельно или как часть другой группы относится к хлору, брому, фтору и йоду, а также CF₃, причем предпочтительны хлор или бром.

Альтернативную группу, способную к замещению NO₂, посредством реакции нитрования на основе нитрита, можно, например, выбрать из галоида (например, йод-, хлор-, бром- или фтор-, при предпочтительном первом из них) и псевдогалогенов (например, SCN, OCN, NCS, NCO и N₃).

Энтеросолюбильное покрытие предпочтительно образовано с использованием любого имеющегося в продаже полимера, полученного для такого назначения. В качестве примеров таких полимеров можно указать полимеры на основе акрилатов, метакрилатов или их сополимеров (таких как диапазон полимеров энтеросолюбильного покрытия, поступающих в продажу под названием Eudragit®) от компании Degussa/Roehm), ацетатфталата поливинила, ацетатфталата целлюлозы, ацетатсукцината гидроксипропилметилцеллюлозы, фталата гидроксипропилметилцеллюлозы, ацетатсукцината гидроксметилцеллюлозы и карбоксиметилэтилцеллюлозы. В определенном варианте осуществления энтеросолюбильное покрытие включает сополимер метакриловой кислоты-этилакрилата. Составляющие мономеры такого сополимера могут присутствовать в соотношении 1:1. Энтеросолюбильное покрытие также предпочтительно содержит глянцующий компонент, такой как тальк. Также может быть включен обеспечивающий преимущество пластификатор. Подходящим пластификатором является триэтилцитрат.

Композиция с энтеросолюбильным покрытием предпочтительно составляется так, что высвобождается 5% или менее соединения формулы I, предпочтительнее, оно по существу совсем не высвобождается, по меньшей мере, через 1 час, предпочтительнее, через 2 часа, наиболее предпочтительно, через 3 часа, когда высвобождение измеряется в аппарате II для определения растворения по Фармакопее США или в 900 мл, или в 500 мл имитированной желудочной жидкости или 0,1 N HCl при 37ºС при скорости перемешивания 50 оборотов в минуту. В предпочтительных вариантах осуществления, высвобождается, по меньшей мере, 80%, предпочтительно, по меньшей мере, 90%, предпочтительнее, по меньшей мере, 95% и наиболее предпочтительно, по существу все соединение формулы I, предпочтительно, в пределах 1 часа, предпочтительнее, в пределах 45 минут, когда измерение проводится в забуференной среде с рН 6,8 (например, имитированной кишечной жидкости с рН 6,8).

В некоторых обстоятельствах может быть предпочтительно, чтобы инертное покрытие было предоставлено между той частью композиции, которая содержит соединение формулы I, и энтеросолюбильным покрытием (iii). Энтеросолюбильные покрытия обычно составлены из кислотных полимеров и, следовательно, по самой их природе могут привести к вредным изменениям в определенных активных ингредиентах. Вставленное инертное покрытие (изготовленное, например, из производного целлюлозы, такого как гидроксипропилцеллюлоза или гидроксипропилметилцеллюлоза) имеет тенденцию ингибировать такие взаимодействия. Инертное покрытие, конечно, должно быть растворимым (или диспергируемым иным образом) в кишечной среде для обеспечения возможности высвобождения соединения формулы I.

Используемый в настоящем документе термин «энтеросолюбильное покрытие» предназначен для включения покрытий, наносимых на композицию/лекарственную форму (например, таблетку), в случае, если лекарственная форма приготовлена существенно другим образом, и покрытий, наносимых на промежуточных стадиях изготовления лекарственной формы. Таким образом, включены композиции, в которых соединение формулы I составлено с эксципиентами в гранулы, которые затем покрываются энтеросолюбильным покрытием перед дальнейшей переработкой, такой как прессование в таблетки или заполнение в капсулы, например желатиновые капсулы. В равной степени, для получения композиций в соответствии с первым аспектом изобретения для определенных соединений формулы I может использоваться подход, такой как описанный в документе WO 00/22909, хотя он менее предпочтителен. При таком подходе комплексы между фармакологически активными ингредиентами и относительно гидрофобными карбоновыми кислотами (например, С₉-С₃₀ алифатическими карбоновыми кислотами) получают совместным осаждением из раствора регулировкой рН.

В определенных соединениях формулы I Х представляет кислород или -СН₂-. Альтернативно, или в дополнение, А может представлять -NH-, -O-, -CH₂- или -CONR₅-. В некоторых предпочтительных соединениях формулы I, R₁ представляет изопропил, йод- или Н. В дополнение или альтернативно, может быть предпочтительно, чтобы R₂ и R₃ каждый независимо представляли галоген или алкил. В таком случае R₂ и R₃ предпочтительно каждый независимо представляют Cl, Br, I или метил. В определенных предпочтительных вариантах осуществления R₂ = R₃. Особенно предпочтительно, R₂ = R₃ = Br или Cl.

В соединениях формулы I R₄ предпочтительно представляет Н или метил, при особенно предпочтительном Н.

В определенных соединениях формулы I Y представляет -(CH₂)_n- и n=1 или 2. Альтернативно или в дополнение, А может представлять -NR₅CO-, причем R₅ представляет Н. В особенно предпочтительных соединениях формулы I Y представляет -(CH₂)_n- при n=1, А представляет NHCO или CONH и R₆ представляет COOH или соответствующую солевую, сложноэфирную или пролекарственную форму COOH.

Соединение (i) в выбранных вариантах осуществления настоящего изобретения может иметь формулу, выбранную из следующих:

или его фармацевтически приемлемую соль или сложный эфир.

Как было бы понятно специалисту в данной области, описанная выше реакция нитрования привела бы к введению нитрогруппы в самое нижнее положение левого бензольного кольца, как представлено в приведенных выше структурах, или в орто- положении относительно ОН. Соответственно, хотя в большинстве случаев замещенной группой был бы Н, предусмотрены также альтернативные группы, способные быть замещенными посредством реакции нитрования на основе нитрита, например группа йод-, находящаяся в орто-положении относительно фенольной гидроксильной группы. Заявители показали, что это легко достижимая реакция, хотя она протекает медленнее, чем замещение водорода.

Когда соединение формулы I присутствует в форме сложного эфира, то предпочтителен его сложный алкиловый эфир. Когда соединение формулы I присутствует в форме фармацевтически приемлемой соли, то, когда соединение имеет, по меньшей мере, один основный центр, такие соли могут включать кислотно-аддитивные соли, например, с сильными неорганическими кислотами, такими как минеральные кислоты, например серная кислота, фосфорная кислота и/или хлористоводородная кислота, с сильными органическими карбоновыми кислотами, такими как алканкарбоновыми кислотами из 1-4 атомов углерода, которые являются незамещенными или замещенными, например, галогеном, например уксусная кислота, такими как насыщенные или ненасыщенные дикарбоновые кислоты, например щавелевая, малоновая, янтарная, фумаровая, фталевая или терфталиевая кислота, такими как гидроксикарбоновые кислоты, например аскорбиновая, гликолевая, молочная, яблочная, винная или лимонная кислота, такими как аминокислоты (например, аспарагиновая или глутаминовая кислота или лизин или аргинин), или бензойной кислотой, или с сульфоноорганическими кислотами, такими как (С₁-С₄)алкил, или арилсульфоновыми кислотами, которые являются незамещенными или замещенными, например, галогеном, например метансульфоновая кислота или п-толуолсульфоновая кислота.

Могут также образовываться соответствующие кислотно-аддитивные соли, имеющие, при желании, дополнительно присутствующий основный центр.

Когда соединение формулы I имеет, по меньшей мере, одну кислотную группу (например, СООН), оно может также образовывать соли с основаниями. Подходящие соли с основаниями представляют собой, например, соли металлов, такие как соли щелочных металлов или щелочноземельных металлов, например соли натрия, калия или магния, или соли с аммиаком или органическим амином, таким как морфолин, тиоморфолин, пиперидин, пирролидин, моно-, ди- или три-низший алкиламин, например этил, трет-бутил, диэтил, диизопропил, триэтил, трибутил или диметилпропиламин, или моно-, ди- или тригидрокси низший алкиламин, например моно-, ди- или триэтаноламин. Кроме того, могут образовываться соответствующие внутренние соли.

Предпочтительные соли соединений формулы I, которые включают основную группу, включают моногидрохлорид, гидросульфат, метансульфонат, фосфат или нитрат. Предпочтительные соли соединений формулы I, которые включают кислотную группу, включают соли натрия, калия и магния и фармацевтически приемлемые органические амины.

Конечно, соединения (i) могут быть при желании сольватированы, например, в настоящем изобретении могут использоваться гидраты.

В определенных вариантах осуществления первого аспекта изобретения композиция также включает антиоксидант. Такие варианты осуществления основаны на неожиданной находке заявителей в результате указанных выше исследований, что нитропродукт реакции соединения 1А образуется после перорального введения посредством реакции на основе нитрита, которая опосредована свободными радикалами. Заявители также определили, что не биариловое простое эфирное соединение GC-1, также описанное выше, легко становится нитрованным в физиологически релевантных условиях. Включение антиоксиданта в композицию по первому аспекту изобретения ингибирует образование свободных радикалов и/или «тушит» образующиеся свободные радикалы, вследствие чего ослабляется любая реакция нитрования, которая происходит, несмотря на энтеросолюбильное покрытие.

Антиоксидант является предпочтительно растворимым в воде. Такие антиоксиданты включают аскорбиновую кислоту, фумаровую кислоту, яблочную кислоту, пропионовую кислоту или соль любой из указанных кислот, монотиоглицерин, метабисульфит калия, бисульфит натрия, сульфит натрия и метабисульфит натрия. Предпочтительным антиоксидантом является аскорбиновая кислота или ее натриевая соль, которая, как было обнаружено, оказывает особенно значительные ингибирующие эффекты на реакцию нитрования.

Альтернативно, антиоксидант может быть нерастворим в воде. Такой антиоксидант можно выбрать из α-токоферола, аскорбилпальмитата, бутилированного гидроксианизола, бутилированного гидрокситолуола, этилолеата и пропилгаллата.

Хотя это и несущественно, может быть предпочтительно, чтобы соединение (i) и антиоксидант (ii) были по существу однородно смешаны. Это помогает обеспечению того, что после любого контакта соединения (i) с нитритом (и/или азотистой кислотой, и/или любым содержащим азот и кислород видом свободных радикалов) более вероятно, что антиоксидант будет находиться вблизи такого контакта и, следовательно, сможет лучше ослабить любую реакцию нитрования, которая может произойти.

В соответствии со вторым аспектом настоящего изобретения предоставляется фармацевтическая композиция, подходящая для перорального введения и включающая:

(i) соединение формулы I, или его фармацевтически приемлемую соль, или его сложный эфир, как описано выше;

(ii) по меньшей мере, один антиоксидант; и

(iii) по меньшей мере, один фармацевтически приемлемый эксципиент.

В предпочтительных вариантах осуществления второго аспекта изобретения композиция представляет собой твердую композицию. Предпочтительные признаки соединения формулы I, описанные в отношении первого аспекта изобретения, также применимы в отношении второго аспекта (и, в случае целесообразности, тех других аспектов, которые описаны ниже).

Композиция по второму аспекту изобретения предпочтительно также включает энтеросолюбильное покрытие. Энтеросолюбильное покрытие может быть таким, как описано в связи с первым аспектом изобретения.

В третьем аспекте настоящее изобретение кроме того, предоставляет способ стабилизации фармацевтической композиции, подходящей для перорального введения, причем фармацевтическая композиция включает:

(i) соединение формулы I, или его фармацевтически приемлемую соль, или его сложный эфир, как описано выше;

(ii) по меньшей мере, один фармацевтически приемлемый эксципиент;

причем способ включает обеспечение композиции энтеросолюбильным покрытием.

В еще одном аспекте изобретение предоставляет в фармацевтической композиции, подходящей для перорального введения, содержащей соединение формулы I, или его фармацевтически приемлемую соль, или его сложный эфир, как описано выше, применение энтеросолюбильного покрытия или антиоксиданта и/или энтеросолюбильного покрытия, и антиоксиданта для снижения или предотвращения нитрования указанного соединения.

Настоящее изобретение также предоставляет композицию в соответствии с изобретением для применения при лечении.

Настоящее изобретение также предоставляет применение композиции в соответствии с изобретением при изготовлении лекарственного средства для предотвращения, ингибирования или лечения заболевания, связанного с нарушением метаболизма, или которое зависит от экспрессии гена, регулируемого трийодтиронином (T₃). Заболевание можно выбрать из ожирения, гиперхолестеринемии, дислипидемии, атеросклероза, сердечных аритмий, депрессии, остеопороза, гипотиреоза, подагру, рака щитовидной железы, а также глаукомы и застойной сердечной недостаточности.

Аналогичным образом, настоящее изобретение также предоставляет способ профилактики, ингибирования или лечения заболевания, связанного с нарушением метаболизма, или которое зависит от экспрессии гена, регулируемого трийодтиронином (T₃), причем способ включает введение композиции в соответствии с изобретением субъекту, нуждающемуся в такой профилактике, ингибировании или лечении.

В применении и способе, описанных выше, лекарственное средство или композицию можно ввести с интервалами между введениями от 30 минут до одного месяца. Предпочтительнее, интервал между введениями составляет от одного до семи дней, еще предпочтительнее, от одного до трех дней. Обычный диапазон доз для соединений (i), вводимых взрослому человеку, должен был бы составлять от примерно 1 мкг до примерно 2000 мкг в день. Для многих соединений (i) суточная доза составляла бы менее чем 300 мкг. Предпочтительно, доза соединения (i) составляет от примерно 1 мкг до примерно 200 мкг в день, предпочтительнее, от примерно 1 до примерно 100 мкг в день. Например, соединение (i) можно вводить одной дозой, двумя дозами, тремя дозами или четырьмя дозами в день. Предпочтительно, количество соединения (i) на единицу дозы композиции составляет от 1 до 200 мкг, предпочтительнее, от 1 до 100 мкг, предпочтительнее, 1, 5, 10, 20, 25 или 50 мкг. Например, количество соединения (i) на единицу дозы композиции может составлять от 10 до 100, например от 20 до 80, обычно от 25 до 50 мкг.

Композиция в соответствии с первым или вторым аспектом изобретения может также включать еще один фармакологически активный ингредиент, выбранный из гиполипидемических средств, противодиабетических средств, антидепрессантов, ингибиторов резорбции костной ткани, средств, подавляющих аппетит и/или средств против ожирения.

Дополнительные фармакологически активные ингредиенты имеют тенденцию оказывать аддитивные или синергические эффекты с соединениями (i) с тем, чтобы усилить их метаболические эффекты.

В описанных выше композициях, содержащих антиоксидант, количество антиоксиданта может варьироваться в очень широком диапазоне. Предпочтительно, присутствует, по меньшей мере, 0,0001 ммоль антиоксиданта, например, 0,0005 ммоль. Предпочтительнее, по меньшей мере, 0,01 ммоль. Количество антиоксиданта может, например, составлять от 0,0001 до 15 ммоль, например от 0,0005 до 10 ммоль, обычно от 0,01 до 4 ммоль на дозу композиции.

Как будет детальнее описано ниже, средний человек проглатывает примерно 0,1 ммоль слюнного нитрита в час. Присутствие указанных выше количеств антиоксиданта в композиции должно обеспечить полезный стабилизирующий эффект для соединения (i), даже если композиция по изобретению находится в желудке в течение относительно продолжительного периода.

В еще одном аспекте, настоящее изобретение предоставляет комбинированное лекарственное средство, подходящее для перорального введения, включающее:

(1) первую фармацевтическую композицию, включающую соединение формулы I, или его фармацевтически приемлемую соль, или его сложный эфир, как описано выше; и

(2) вторую фармацевтическую композицию, включающую, по меньшей мере, один антиоксидант,

где каждая из первой и второй фармацевтических композиций содержит, по меньшей мере, один фармацевтически приемлемый эксципиент и где первую и вторую фармацевтические композиции можно вводить одновременно, последовательно или отдельно.

Комбинированное лекарственное средство по настоящему изобретению использует преимущество того обстоятельства, что для осуществления стабилизации соединения (i) антиоксидант должен только присутствовать, когда образец вступает в контакт с кислотой и источником нитрита. При условии, что две композиции комбинированного лекарственного средства вводятся через такой короткий интервал времени, что периоды их нахождения в желудке перекрываются, соединение (i) должно обладать, по меньшей мере, некоторой степенью стабилизации против реакции нитрования. Эти композиции или, по меньшей мере, первая композиция представляют собой предпочтительно твердые композиции.

Далее изобретение будет подробно описано только за счет примеров и со ссылкой на прилагаемые чертежи, на которых:

на Фиг.1 показана серия стандартных следов ВЭЖХ соединения 1А в присутствии различных концентраций его продукта 5'-нитрореакции и

Фиг.2 иллюстрирует способ изготовления таблеток с энтеросолюбильным покрытием, содержащих соединение 1А.

Как указано выше, во время разработки соединения 1А было определено, что образование продукта 5'-нитрореакции происходило по абиотическому (т.е. не ферментному) пути. Было определено, что токсикологические свойства продукта нитрореакции были изменены в релевантной степени, по сравнению с материнским соединением. Поэтому было важно определить, как происходила реакция нитрования, и разработать подходы для борьбы или предотвращения этого in vivo.

Пример 1 - Генотоксичность продукта реакции соединения 1А

1.1. Введение

Во время разработки препаративной формы соединения 1А в виде капсул по 25 мкг в нескольких партиях наблюдалась ранее не выявленная примесь; примесь составляла в диапазоне от 0,8 до 1,2% материнского соединения. Эта примесь была идентифицирована в виде нитроаналога, далее именуемого как продукт реакции 1В.

Поэтому была идентифицирована теоретическая возможность образования in vivo этой примеси/продукта реакции. Следовательно, этот предполагаемый продукт реакции тестировали на генотоксическую активность в стандартном наборе исследований Международной конференции по гармонизации (ICH).

Этот пример резюмирует исследования генотоксичности, проведенные с продуктом реакции 1В, и относится к данным по клиническим воздействиям этой примеси/продукта реакции.

1.2. Генотоксичность

1.2.1. Продукт реакции 1В

1.2.1.1. Исследовательский анализ Ames

Продукт реакции 1В испытывали в двойных культурах в присутствии и отсутствие метаболической активации S-9. Изделия положительного контроля испытывали в двойных культурах и получали в DMSO (диметилсульфоксиде), за исключением азида натрия, который растворяли в воде. Отрицательные контроли (с носителем) испытывали в повторениях пяти культур.

Продукт реакции 1В проявил цитотоксичность в отношении к каждому из испытанных штаммов S.typhimurium и Е.coli. Цитотоксичность в диапазоне от минимальной до выраженной была очевидна на основании уменьшения среднего количества ревертантов и/или снижения плотности бактериальной фоновой популяции. По сравнению с отрицательными контролями, количества гистидин⁺ ревертантов были повышены в обработанных продуктом реакции 1В культурах штамма ТА100 соответственно в присутствии и отсутствие активации S-9. Как ожидалось, наблюдалось значимое увеличение количества гистидин⁺ и триптофан⁺ ревертантов в культурах, обработанных соединениями положительного контроля.

В заключение, продукт реакции IB проявил положительную реакцию в данном исследовании.

1.2.1.2. Цитогенетическое исследование на первичных лимфоцитах человека

Цитогенетическое исследование in vitro выполняли для изучения способности продукта реакции IB вызывать хромосомные аберрации в культивированных лимфоцитах человека. На основании результатов поиска диапазона цитотоксическости концентрации от 5 до 30 мкг/мл были выбраны для оценки при 24-часовом воздействии без активации метаболических ферментов и концентрации от 2,5 до 20 мкг/мл были выбраны для 5-часового воздействия при вызванной Aroclor-1254 метаболической активации печени крыс (фракции S9).

При 5-часовом воздействии продукта реакции IB в присутствии метаболической активации S-9 происходило статистически значимое увеличение частоты хромосомных аберраций. При самой высокой концентрации, 20 мкг/мл, частота хромосомных аберраций составила 10,5%, по сравнению с 2,5% для контроля носителя, а снижение митотического показателя составило приблизительно 51%.

При 24-часовом воздействии продукта реакции IB в отсутствие метаболической активации S-9 происходило статистически значимое увеличение частоты хромосомных аберраций. При самой высокой концентрации, 40 мкг/мл, частота хромосомных аберраций составила 7,5%, по сравнению с 2,5% для контроля носителя, а снижение митотического показателя составило приблизительно 48%.

Как ожидалось, положительный контроль в каждом испытании вызывал статистически значимые увеличения частот поврежденных метафаз. Таким образом, была продемонстрирована достоверность этого анализа.

В заключение, продукт реакции IB был кластогенным для делящихся лимфоцитов человека при тестировании в максимальных концентрациях, рекомендуемых международными инструкциями для цитогенетических исследований in vitro.

1.2.1.3. Исследование микроядер у мышей после перорального введения продукта реакции IB

Продукт реакции IB оценивали в анализе микроядер костного мозга мышей для определения его генотоксического потенциала in vivo. Группам мышей перорально вводили последовательные дозы 1000, 1500 или 2000 мг/кг продукта реакции IB (т.е. до максимального уровня дозы, требуемого международными предписывающими инструкциями уполномоченных организаций ICH и OECD). Образцы костного мозга бедренной кости брали у вех животных приблизительно через 24 часа после введения последней дозы для оценки имеющих микроядра полихроматических эритроцитов (MN-PCE).

Ни одно животное не погибло во время исследования, и не наблюдались связанные с препаратом клинические признаки. Не наблюдалась токсичность в отношении костного мозга, по данным измерения значимого уменьшения полихроматических эритроцитов (PCE). Частоты MN-PCE были статистически увеличены при 1000 и 1500 мг/кг.

В заключение, у мышей были обнаружены независимые от дозы положительные реакции.

1.3. Клиническое воздействие продукта реакции IB

После перорального введения одиночных доз соединения 1А людям-добровольцам продукт реакции IB можно было выявить в плазме. Аналогичным образом, в испытании, в котором субъекты получали ежедневные дозы соединения 1А в течение двух недель, продукт реакции IB можно было выявить у нескольких субъектов.

В заключение, после введения соединения 1А людям в плазме можно было выявить потенциально мутагенный нитропродукт реакции 1В. Это происходит даже в случае, если введение проводится в течение относительно короткого периода (например, 14 дней, как указано выше). Потенциальные генотоксины обычно не зависят от дозы по их мутагенным эффектам, и, следовательно, присутствие даже низких уровней продукта реакции IB имеет клиническое значение. Кроме того, соединения формулы I обычно следует вводить в течение длительного периода времени, и, следовательно, предотвращение образования нитропродуктов реакции имеет первостепенное значение, если следует избегать потенциальных генотоксических эффектов, возник