Вакцина против salmonella

Вакцина против salmonella

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к вакцинации животных против Salmonella, в частности к вакцинации животных/птиц. Настоящее изобретение также включает наборы и применения иммуногенных композиций или вакцин против Salmonella.

Уровень техники

Salmonella spp. представляют собой факультативные внутриклеточные патогены, вызывающие локализованные или системные инфекции, в дополнение к хроническому бессимптомному состоянию носительства. Они имеют глобальное значение для экономики и здравоохранения. Тиф птиц и пуллороз у домашней птицы продолжают вызывать экономические потери в тех странах, где промышленное птицеводство продолжает интенсифицироваться и где обычным является содержание птиц на открытом воздухе. Также увеличивается количество серотипов, которые вызывают гастроэнтерит у людей. Затраты или нецелесообразность модернизации гигиенических мер или терапии вместе с усиливающимися проблемами устойчивости к антибиотикам указывают на то, что более привлекательной в качестве вспомогательного средства к существующим мерам контроля становится вакцинация домашней птицы (Zhang-Barber L. et al., Vaccine, 1999, 17(20-21): 2538-45).

Salmonella является одной из главных причин пищевых инфекций у людей. По заключению Комиссии по зоонозам (European Commission: Trends and sources of zoonotic infections in animals, feed, food and man in the European Union and Norway in 2003) в 15 странах-участницах Евросоюза и Норвегии в 2003 г. сообщалось о 135546 случаев сальмонеллеза у людей.

Птицеводство, в особенности в Европе и в Соединенных Штатах Америки, находится под усиленным контролем органов здравоохранения и потребителей для снижения рисков заражения людей бактериями Salmonella, источником которых являются домашние птицы, и в частности сальмонеллезом (ослабление патогенов и НАССР в США, Директива Совета ЕС 92/117/ЕЕС в Евросоюзе).

Так как Salmonella инфицирует многие популяции животных (например, млекопитающих, птиц), всегда существует риск заболевания сальмонеллезом, вне зависимости от страны, времени года или технологии обработки пищи.

Зоонозные факторы Salmonella spp. желудочно-кишечной инфекции у людей лечили доступными антибактериальными средствами. С начала 1990-х годов появились штаммы Salmonella, устойчивые к широкому спектру антибактериальных средств, что сделало лечение инфекции менее эффективным и повысило у людей риск заражения желудочно-кишечной инфекцией, вызываемой Salmonella spp.

Как и в предыдущие годы, доминировала Salmonella enterica, подвид enterica, серовар Enteritidis (Salmonella Enteritidis), вызывающая 61,8% (2002: 67,1%) всех зарегистрированных случаев в Евросоюзе и Норвегии. Заболеваемость в отдельных странах колебалась от 87,9% в Австрии до 33,3% во Франции. Salmonella enterica, подвид enterica, серовар Typhimurium (Salmonella Typhimurium), занимала второе место, вызывая 16,5% всех случаев заболевания. Заболеваемость в отдельных странах колебалась от 5,8% в Австрии до 28,7% в Ирландии. Как и в предыдущие годы, вслед за Salmonella Enteritidis и Salmonella Typhimurium большинство случаев было вызвано Salmonella enterica, подвид enterica, серовар Virchow (Salmonella Virchow); Salmonella enterica, подвид enterica, серовар Infantis (Salmonella Infantis) и Salmonella enterica, подвид enterica, серовар Hadar (Salmonella Hadar). Каждый из этих сероваров вовлечен менее чем в 1% всех зарегистрированных случаев.

Основным источником заражения является заражение при употреблении в пищу яиц и мяса домашней птицы. Снижения таких рисков достигают с помощью комбинации методов, применяемых на всем протяжении этапов производства яиц и мяса, таких как оптимальное ведение сельского хозяйства, гигиенические технологии и вакцинация.

Законодательство сообщества в отношении гигиены питания и надзора за зоонозами включает целый ряд положений, которые стремятся контролировать и предупреждать загрязнение продуктов питания бактериями Salmonella. Полагают, что меры для уменьшения распространенности Salmonella в живых организмах являются одним из наиболее эффективных способов снижения загрязнения пищевых продуктов и количества случаев сальмонеллеза у людей.

В 2003 г. было опубликовано новое Европейское законодательство в отношении зоонозов; Регламент 2160/2003 обеспечивает систему нормативов для подавления патогенов в пищевой цепи, в основном для популяций животных, и осуществление национальных планов контроля для выполнения этих нормативов. Первичной мишенью является Salmonella spp., в частности серовары, которые, как полагают, имеют важное значение для здравоохранения. Нормативы в различных популяциях животных повышаются в следующем порядке: племенные стада Gallus gallus, курицы-несушки, бройлеры, индюки и свиньи, забиваемые на мясокомбинатах. Вплоть до настоящего времени нормативы были установлены только для племенных стад Gallus gallus (Регламент 1003/2005); норматив был установлен как 1%, что означает, что в конце 2009 г. максимальный процент стад, позитивных на Salmonella Enteritidis, Salmonella Typhimurium, Salmonella Infantis, Salmonella Hadar и Salmonella Virchow на уровне Евросоюза составит 1%.

Что касается специалистов по разведению животных, то Регламент 1091/2005 запрещает использование антибактериальных средств в качестве мер контроля в отношении Salmonella, в то время как применение вакцин одобрено и рекомендовано. Заключения и рекомендации Научно-исследовательской экспертной группы по биологической опасности по запросу Комиссии в отношении использования вакцин для контроля за Salmonella у домашней птицы (The EFSA Journal (2004) 114, 1-74) в значительной степени благоприятствуют применению вакцин для контроля за Salmonella на уровне ферм. В частности, заключения экспертной комиссии в числе прочих состоят в следующем.

- Основа успешного контроля за инфекциями Salmonella на фермах домашних птиц состоит в хорошем ведении сельского хозяйства и методах гигиены (включая все аспекты защиты кормов, птиц, ведения хозяйства, чистки и дезинфекции, контроля за грызунами и т.д.), а также в тестировании и удалении позитивных животных из производства. Вакцинацию цыплят рассматривают как меру повышения устойчивости птиц против воздействия Salmonella и снижения выделения микроорганизмов.

- Существуют экспериментальные данные и некоторые результаты эксплуатационных наблюдений, согласно которым сниженный уровень экскреции с фекалиями и системной инвазии микроорганизмами Salmonella у вакцинированных птиц приведет к уменьшению заражения столовых яиц и окружающей среды.

- Если программа контроля нацелена на производителей кур-несушек/бройлеров или кур-несушек, а частота заболеваний в стаде высока, то для снижения выделения микроорганизмов и заражения яиц может быть полезной вакцинация. Если частота заболеваний в стаде низкая, то вакцинация может быть не такой полезной, но все еще может быть использована в качестве одной из профилактических мер для поддержания низкой заболеваемости.

Существуют более чем 2000 сероваров бактерий Salmonella.

В соответствии с классификацией Кауфмана и Уайта (http://en.wikipedia.org/wiki/Kauffman-White_classification) допускают серологические разновидности рода Salmonella, чтобы отличать их друг от друга. Эта схема дифференцирует изоляты путем определения поверхностных антигенов, которые производятся бактериями. В первую очередь определяют «О» тип антигенов. «О» антигены являются полисахаридами, ассоциированными с липополисахаридом внешней мембраны бактерий. После определения группы «О» антигенов определяют «Н» антиген. «Н» антигены представляют собой белки, ассоциированные с бактериальным жгутиком. Сальмонеллы существуют в двух фазах: подвижной фазе и неподвижной фазе. Их также относят к специфической и неспецифической фазам. В зависимости от фазы, в которой обнаруживают сальмонеллу, продуцируются различные «Н» антигены. Патогенные штаммы Salmonella typhi несут дополнительный антиген «Vi», называемый так из-за повышенной вирулентности штаммов, которые производят этот антиген, который ассоциирован с бактериальной капсулой.

В соответствии с классификацией Кауфмана и Уайта устанавливают "O" - группы сероваров сальмонеллы.

Против заселения цыплят бактериями Salmonella группы С была разработана аттенуированная вакцина на основе Salmonella Hadar с делениями генов cya/crp и на основе Salmonella Hadar с делецией гена phoP (Roland К. et al., Avian Dis., 2004, 48(3): 445-52). Хотя вариант с делениями генов суа/crp вызывал повышенный уровень антитела в сыворотке крови, он не обеспечивал иммунный ответ, направленный против заселения бактериями Salmonella Hadar.

Chacana et al. (Chacana P.A. et al., Avian Dis., 2006, 50(2): 280-3) показали, что аттенуированная вакцина против Salmonella может вызвать перекрестный иммунитет против представителей одной и той же серогруппы схемы Кауфмана-Уайта. Против тифа птиц применяли иммунитет, обеспеченный с помощью TAD Salmonella vac E, аттенуированной вакцины на основе Salmonella Enteritidis. Три группы кур-несушек вакцинировали с помощью различных протоколов вакцинации, начиная с первого дня жизни, и затем инфицировали их с помощью 2×10⁵ КОЕ вирулентного штамма Salmonella Gallinarum или на 28-й неделе, или на 52-й неделе жизни. Оценивали смертность, выделение микроорганизмов с фекалиями или инвазию органов бактериями Salmonella Gallinarum. Вакцина на основе Salmonella Enteritidis была способна вызывать перекрестный иммунитет в отношении Salmonella Gallinarum, обоих штаммов D-группы сальмонеллы в соответствии с классификацией Кауфмана-Уайта. На 28-й неделе куры, вакцинировованные тремя пероральными дозами или двумя пероральными дозами совместно с подкожно-введенной дозой, были защищены вакциной. Однако на 52-й неделе, если куры были инфицированы через 36 недель после завершающей иммунизации, вакцина не обеспечивала защиту.

Из-за огромного количества сероваров Salmonella существует необходимость в вакцинах, направленных на бактерии Salmonella, которые способны вызывать защитный иммунный ответ против более чем одного серовара Salmonella и/или против более чем одной группы в соответствии с классификацией Кауфмана-Уайта.

Раскрытие изобретения

Соответственно, настоящее изобретение относится к стратегии вакцинации, которая основана, по меньшей мере, на одном первичном введении аттенуированной иммуногенной композиции или вакцины на основе Salmonella и, по меньшей мере, одном бустерном введении аттенуированной иммуногенной композиции или вакцины на основе Salmonella. Эта стратегия вакцинации полезна для профилактики переноса гомологичных или гетерологичных Salmonella у вакцинированных субъектов.

Целью этого изобретения также является предоставление способов применения иммуногенных композиций или вакцин для предупреждения заражения птиц гомологичными и/или гетерологичными Salmonella, в которых проводят, по меньшей мере, одно первичное введение аттенуированной иммуногенной композиции или вакцины на основе Salmonella птицам перед, по меньшей мере, одним бустерным введением инактивированной иммуногенной композиции или вакцины на основе Salmonella, которое осуществляют спустя несколько недель, в частности от 2 недель до 18 недель после единственного или первичного введения.

Целью этого изобретения также является предоставление способов применения иммуногенных композиций или вакцин для предупреждения переноса гомологичных или гетерологичных Salmonella у птиц, в которых проводят, по меньшей мере, одно первичное введение аттенуированной иммуногенной композиции или вакцины на основе Salmonella группы D птицам перед, по меньшей мере, одним бустерным введением инактивированной иммуногенной композиции или вакцины на основе Salmonella группы В и Salmonella группы D, которое осуществляют спустя несколько недель, в частности от 2 недель до 18 недель, после единственного или первого первичного введения. Примеры Salmonella групп В и D предоставлены в этом документе.

Целью этого изобретения также является предоставление наборов для вакцинации птиц, включающих, по меньшей мере, два флакона и листок-вкладыш с инструкциями по введению, первый флакон, содержащий иммуногенную композицию или вакцину на основе аттенуированной Salmonella, и второй флакон, содержащий иммуногенную композицию или вакцину на основе инактивированной Salmonella. Необязательно могут быть включены дополнительные флаконы, которые включают иммуногенную композицию или вакцину на основе аттенуированной Salmonella для многократного введения при первичной иммунизации, и/или флаконы, включающие иммуногенную композицию или вакцину на основе инактивированной Salmonella для многократного бустерного введения.

Следует отметить, что в этом описании и, в частности, в формуле изобретения такие термины, как "включает", "включали", "включающие" и т.п., могут иметь значение, которое относится к закону о патентах США; например, они могут означать "охватывает", "охватывали", "охватывающие" и т.п.; а такие термины, как "состоящий в основном из" и "состоит в основном из", имеют значение, которое приписывает им закон о патентах США, например в них допускается присутствие элементов, которые не были точно перечислены, но в них исключены элементы, которые обнаружены в предшествующем уровне техники или которые затрагивают основные или новые характеристики изобретения.

Эти и другие воплощения раскрыты или очевидны, или охвачены подробным описанием изобретения, приведенным ниже.

Краткое описание фигур

Приведенное ниже описание, которое дано в виде примеров и которое не предназначено ограничить изобретение описанными специфическими воплощениями, следует понимать в связи с прилагаемыми фигурами, которые включены сюда путем отсылки:

фигура 1 иллюстрирует процент повторной локализации штаммов Salmonella для экспериментального заражения в селезенках цыплят через 4-7 дней после заражения;

фигура 2 иллюстрирует средние цифры штаммов Salmonella для экспериментального заражения в слепой кишке цыплят через 4-7 дней после заражения и стандартные отклонения.

Для фигуры 1 и фигуры 2 "Control" («контроль») представляет собой невакцинированную контрольную группу, соответствующую G.00; "L+K" является группой, вакцинированной дважды, первый раз вакциной на основе аттенуированной Salmonella и второй раз вакциной на основе инактивированной Salmonella, соответствующей G.01; "Killed» («убитая») - группа, вакцинированная только вакциной на основе инактивированной Salmonella, соответствующая G.02.

Осуществление изобретения

Настоящее изобретение относится к способам применения иммуногенных композиций или вакцин на животных/птицах для повышения иммунного ответа, по меньшей мере, против одной гетерологичной Salmonella, в которых животному/птице проводят, по меньшей мере, одно первичное введение аттенуированной иммуногенной композиции или вакцины, включающей фармацевтически или ветеринарно-приемлемый эксципиент, разбавитель или среду, и, по меньшей мере, один аттенуированный серовар Salmonella одной из Salmonella, перед, по меньшей мере, одним бустерным введением инактивированной иммуногенной композиции или вакцины, включающей фармацевтически или ветеринарно-приемлемый эксципиент, разбавитель или среду, и, по меньшей мере, один аттенуированный серовар Salmonella одной из Salmonella, с интервалом в несколько недель, в частности с интервалом от 2 недель до 18 недель. Аттенуированная Salmonella и инактивированная Salmonella могут происходить из одного и того же серовара или из различных сероваров. Гетерологичная Salmonella представляет собой бактерию, отличающуюся от тех, которые применяют в иммуногенных композициях или вакцинах, которые вводят при первичной иммунизации или во время бустерного введения, например бактерию Salmonella другого серовара или другой группы Salmonella в соответствии с классификацией Кауфмана-Уайта.

Способы предмета изобретения можно применять на животных/птицах для того, чтобы создать перекрестный иммунитет у животных/птиц против заболевания, вызываемого, по меньшей мере, одной гетерологичной бактерией Salmonella, и/или для того, чтобы предупредить носительство, по меньшей мере, одной гетерологичной бактерии Salmonella у животных/птиц.

Способы настоящего изобретения также можно применять на животных/птицах для того, чтобы уменьшить количество бактерий Salmonella С-группы в селезенке и/или в слепой кишке инфицированных животных/птиц, в частности чтобы уменьшить количество бактерий Salmonella С1-группы и бактерий Salmonella С2-группы в селезенке и/или в слепой кишке инфицированных животных/птиц или чтобы уменьшить количество бактерий Salmonella В-группы и бактерий Salmonella С-группы в селезенке и/или в слепой кишке инфицированных животных/птиц. Примеры бактерий Salmonella С-групп представлены в этом документе.

Термин «иммуногенная композиция» относится к любой композиции, способной после инъецирования животному/птице вызывать или стимулировать иммунный ответ против Salmonella.

Термин «вакцинная композиция» или «вакцина» относится к любой композиции, способной после инъецирования животному, в частности животному/птице, вызывать или стимулировать защитный иммунный ответ против заболеваний, вызываемых бактериями Salmonella и/или вызывать или стимулировать защитный иммунный ответ для того, чтобы предупредить или уменьшить носительство бактерий Salmonella у животных, в частности у животных/птиц.

Режим первичной бустерной иммунизации включает, по меньшей мере, одно первичное введение и, по меньшей мере, одно бустерное введение с применением, по меньшей мере, одного общего полипептида, антигена, эпитопа или иммуногена. Вакцина, применяемая при первичном введении, может отличаться по своей природе от той вакцины, которую применяют позже для бустерного введения. Первичное введение может включать одно или несколько введений. Сходным образом, бустерное введение может включать одно или несколько введений.

Способы изобретения включают, по меньшей мере, одно первичное введение и, по меньшей мере, одно бустерное введение животному, предпочтительно птице, эффективного количества иммуногенной композиции или вакцины в соответствии с изобретением. Животное может быть самцом или самкой. Это введение может быть, в частности, сделано с помощью внутримышечной (IM), внутрикожной (ID) или подкожной (SC) инъекции или с помощью интраназального или перорального введения, где пероральное введение включает, но не ограничивается только этим, введение пищи или питьевой воды, гелей или распыляемых растворов.

Фармацевтически или ветеринарно-приемлемые эксципиенты, разбавители или среды могут быть водой, водой для инъекции, солевым раствором или буфером. К аттенуированной иммуногенной композиции или вакцине можно добавлять стабилизатор, такой как глицерин, раствор глюцидов, например раствор сахарозы.

Аттенуированная иммуногенная композиция или вакцина, применяемая при первичном введении, в соответствии со способами настоящего изобретения включает фармацевтически или ветеринарно-приемлемый эксципиент, разбавитель или среду и, по меньшей мере, одну аттенуированную бактерию Salmonella. Аттенуированную бактерию Salmonella можно выбирать из группы, состоящей из бактерий Salmonella D-группы и Salmonella В-группы, предпочтительно среди D-группы, состоящей из Salmonella Enteritidis, Salmonella Panama, Salmonella Dublin, Salmonella Gallinarum, Salmonella Pullorum, и среди В-группы, состоящей из Salmonella Typhimurium, Salmonella Braenderup, Salmonella Agona, Salmonella Bredeney, Salmonella Heidelberg, Salmonella Indiana, Salmonella Saint-Paul, Salmonella Brandenburg. В предпочтительном воплощении аттенуированная иммуногенная композиция или вакцина, применяемая при первичном введении, в соответствии со способами настоящего изобретения включает фармацевтически или ветеринарно-приемлемый эксципиент, разбавитель или среду и, по меньшей мере, одну аттенуированную бактерию Salmonella D-группы. В другом предпочтительном воплощении аттенуированная иммуногенная композиция или вакцина, применяемая при первичном введении, в соответствии со способами настоящего изобретения включает фармацевтически или ветеринарно-приемлемый эксципиент, разбавитель или среду и, по меньшей мере, одну аттенуированную бактерию Salmonella В-группы. В другом предпочтительном воплощении аттенуированная иммуногенная композиция или вакцина, применяемая при первичном введении, в соответствии со способами настоящего изобретения включает фармацевтически или ветеринарно-приемлемый эксципиент, разбавитель или среду и, по меньшей мере, одну аттенуированную бактерию Salmonella D-группы и, по меньшей мере, одну аттенуированную бактерию Salmonella В-группы. В наиболее предпочтительном воплощении аттенуированная иммуногенная композиция или вакцина, применяемая при первичном введении, в соответствии со способами настоящего изобретения включает фармацевтически или ветеринарно-приемлемый эксципиент, разбавитель или среду и аттенуированную Salmonella Enteritidis. В другом наиболее предпочтительном воплощении аттенуированная иммуногенная композиция или вакцина, применяемая при первичном введении, в соответствии со способами настоящего изобретения включает фармацевтически или ветеринарно-приемлемый эксципиент, разбавитель или среду и аттенуированную Salmonella Enteritidis и аттенуированную Salmonella Typhimurium.

Примеры различных групп в соответствии с классификацией Кауфмана-Уайта включают группы А, В, С 1-3, D, E 1-4, F, G, Н и I, примеры которых представлены ниже.

Например, А-группа включает Salmonella enterica, подвид enterica, серовар Paratyphi A (Salmonella Paratyphi A), Salmonella Paratyphi А вариант durazzo.

Некоторые аттенуированные вакцины на основе Salmonella и некоторые инактивированные вакцины на основе Salmonella имеются в продаже.

Патенты США U.S. Patent Nos. 7,045.122; 6,923,957; 6,905,691; 6,605,285; 5,843,426; 5,733,760; 5,424,065; 5,389,368 и 6,592,869 имеют отношение к вакцинам на основе Salmonella, включающим аттенуированные и инактивированные вакцины.

Вид Salmonella может быть рационально аттенуирован путем введения в геном определенных нереверсивных мутаций для того, чтобы получить штаммы живой вакцины. Идентифицированы некоторые гены, которые при мутировании аттенуируют Salmonellae. В частности, штаммы сальмонеллы, несущие нереверсивные мутации в генах, вовлеченных в метаболический путь биосинтеза предшественников хоризматов, создают прекрасные пероральные вакцины, вызывающие сильные гуморальные, местные и клеточные иммунные реакции в организме-хозяине (Chatfield S.N. et al., Vaccine, 1989, 7(6): 495-8; Chatfield S.N. et al., FEMS immunol. Med. Microbiol., 1993, 7(1): 1-7), это касается и генов aro метаболического пути биосинтеза ароматических соединений (ЕР-В1-0322237) и мутантов регулятора транскрипции RfaH бактерий Salmonella Typhimurium, которые выгодны в качестве аттенуированных пероральных вакцин против сальмонеллеза у мышей (Nagy G. et al., Infect. Immun., 2006, 74(10): 5914-25).

Бактерии Salmonella можно аттенуировать с помощью модификации структуры генома бактерий, например путем делеции части гена Salmonella, путем вставки гетерологичной нуклеотидной последовательности в ген Salmonella и/или путем замены части гена Salmonella на гетерологичную нуклеотидную последовательность. Возможно аттенуировать Salmonella путем введения мутаций, которые (i) обеспечивают ауксотрофность, (ii) затрагивают метаболизм сахаров и биосинтез липополисахаридов или (iii) воздействуют на некоторые общие способы устройства регуляторных генов, необходимых для полного проявления вирулентности.

Например, аттенуированные бактерии Salmonella могут быть бактериями, включающими для аттенуации, по меньшей мере, одну дрейф-мутацию метаболизма устойчивости к стрептомицину или рифампицину (ЕР-В1-0642796), такими как аттенуированный штамм Salmonella Enteritidis Sm 24/Rif 12/Ssq (ЕР-В1-0642796), штамм Salmonella Enteritidis, аттенуированный с помощью первой мутации в регуляторном участке гена phoP, вызывающего конститутивную экспрессию гена под контролем указанного участка, и второй мутации в гене pag или prg (ЕР-В1-0563311); штамм Salmonella Enteritidis, аттенуированный с помощью нереверсивной мутации в гене htrA (US-A-5.804.194); аттенуированный штамм Salmonella, который демонстрирует ауксотрофность в отношении одного или нескольких факторов роста, выбираемых из группы, состоящей из фенилаланина, тирозина, триптофана и парааминобензойной кислоты, так что он не способен расти на минимальной среде в отсутствие указанного одного или нескольких факторов роста (US-A-6,231,871), как, например, штамм Salmonella Typhimurium STM-1, депонированный в Австралийские правительственные аналитические лаборатории под кодом доступа N93/43266 (US-A-6,231,871); ауксотрофные мутанты Salmonella Enteritidis, полученные путем N-метил-N'-нитро-N-нитрозогуанидинового мутагенеза, такие как штамм Е 3/49, штамм 1/37, штамм С7/1, штамм С7/2, штамм С7/18, штамм С7/19, штамм Е1/23, штамм Е1/25, штамм Е2/7, штамм Е3/44 и штамм Е3/51 (Martin G. et al., Berl. Münch. Tierärztl. Wschr., 1996, 109(10): 325-9); аттенуированный штамм Salmonella Typhimurium, несущий нереверсивную мутацию в каждом из двух дискретных генов aro метаболического пути биосинтеза ароматических соединений, таких как aroA и aroC, aroA и aroD, aroA и aroE (EP-B1-0322237); аттенуированный штамм Salmonella Enteritidis, генетически определенное производное гена aroC (штамм LVR02, смотри Betancor L. et al., Vet. Microbiol., 2005, 107(1-2): 81-9); и аттенуированный штамм Salmonella Typhimurium, имеющий мутацию, которая инактивирует ген, выбираемый из: hupA, dksA, rfaY, sipC или clpB (WO-A1-98/02523).

Аттенуирующие мутации также можно получать путем вставки транспозона. Например, транспозон в мутанте EZ870 вводят в нуклеотидную последовательность Salmonella Enteritidis, которая гомологична (98,4% идентичных пар оснований в перекрывающейся области 188 п.о.) гену spiC Salmonella Typhimurium (код доступа U51927, Ochman Н., Soncini F.C. Solomon F. and Groisman E.A., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93, 7800-7804, 1996). Генетически модифицированный штамм Salmonella enteritidis EZ870 имеет номер депонирования LMGP-18484 в Коллекции культур BCCM/LMG Laboratorium voor Microbiologie, Ledeganckstraat 35, B-9000 Gent, Belgium (WO-A-99/37759).

Инактивированная иммуногенная композиция или вакцина, применяемая при бустерном введении, в соответствии со способами настоящего изобретения включает фармацевтически или ветеринарно-приемлемый эксципиент, разбавитель или среду и, по меньшей мере, одну инактивированную Salmonella. Инактивированную Salmonella можно выбирать из группы, состоящей из Salmonella Е-группы, Salmonella D-группы, Salmonella С-группы и Salmonella В-группы, предпочтительно из группы, состоящей из Salmonella E1-группы, Salmonella Е4-группы, Salmonella D-группы, Salmonella С1-группы, Salmonella С2-группы, Salmonella С3-группы и Salmonella В-группы, и более предпочтительно из El-группы, состоящей из Salmonella Anatum, из Е4-группы, состоящей из Salmonella Senftenberg, из D-группы, состоящей из Salmonella Enteritidis, Salmonella Panama, Salmonella Dublin, Salmonella Gallinarum, Salmonella Pullorum, из С1-группы, состоящей из Salmonella Infantis, Salmonella Mbandaka, Salmonella Livingstone, Salmonella Virchow, salmonella Ohio, salmonella Montevideo, Salmonella Tennessee, Salmonella Rissen, из С2-группы, состоящей из Salmonella Hadar, Salmonella Newport, Salmonella Kottbus, из C3-группы состоящей из Salmonella Kentucky, Salmonella Albany и из В-группы, состоящей из Salmonella Typhimurium, Salmonella Braenderup, Salmonella Agona, Salmonella Bredeney, Salmonella Heidelberg, Salmonella Indiana, Salmonella Saint-Paul, Salmonella Brandenburg.

В предпочтительном воплощении инактивированная иммуногенная композиция или вакцина, применяемая при бустерном введении, в соответствии со способами настоящего изобретения включает фармацевтически или ветеринарно-приемлемый эксципиент, разбавитель или среду и, по меньшей мере, одну инактивированную Salmonella В-группы и, по меньшей мере, одну инактивированную Salmonella D-группы. В другом предпочтительном воплощении инактивированная иммуногенная композиция или вакцина, применяемая при бустерном введении, в соответствии со способами настоящего изобретения включает фармацевтически или ветеринарно-приемлемый эксципиент, разбавитель или среду и, по меньшей мере, одну инактивированную Salmonella В-группы, по меньшей мере, одну инактивированную Salmonella С-группы и, по меньшей мере, одну инактивированную Salmonella D-группы. В наиболее предпочтительном воплощении инактивированная иммуногенная композиция или вакцина, применяемая при бустерном введении, в соответствии со способами настоящего изобретения включает фармацевтически или ветеринарно-приемлемый эксципиент, разбавитель или среду и инактивированную Salmonella Typhimurium и инактивированную Salmonella Enteritidis. В другом наиболее предпочтительном воплощении инактивированная иммуногенная композиция или вакцина, применяемая при бустерном введении, в соответствии со способами настоящего изобретения включает фармацевтически или ветеринарно-приемлемый эксципиент, разбавитель или среду и инактивированную Salmonella Typhimurium и инактивированную Salmonella Enteritidis и, по меньшей мере, одну инактивированную Salmonella С2-группы. В другом наиболее предпочтительном воплощении инактивированная иммуногенная композиция или вакцина, применяемая при бустерном введении, в соответствии со способами настоящего изобретения включает фармацевтически или ветеринарно-приемлемый эксципиент, разбавитель или среду и инактивированную Salmonella Typhimurium и инактивированную Salmonella Enteritidis и, по меньшей мере, одну инактивированную Salmonella C2-группы и, по меньшей мере, одну инактивированную Salmonella C1-группы.

Salmonella можно химически инактивировать путем обработки инактивирующими агентами, такими как формальдегид, этиленимин, производные этилениминамида (например, этиленимина), пропиленимин, Р-пропиолактон, тимеросал, ацетон или термоинактивация. В предпочтительном воплощении инактивирующий агент является формальдегидом.

В определенных аспектах предпочтительные способы применения иммуногенных композиций или вакцин на животных/птицах в соответствии с изобретением включают, по меньшей мере, одно первичное введение аттенуированной иммуногенной композиции или вакцины, включающей фармацевтически или ветеринарно-приемлемый эксципиент, разбавитель или среду и, по меньшей мере, одну аттенуированную Salmonella D-группы, которые вводят животному/птице перед, по меньшей мере, одним бустерным введением инактивированной иммуногенной композиции или вакцины, включающей фармацевтически или ветеринарно-приемлемый эксципиент, разбавитель или среду, по меньшей мере, одну инактивированную Salmonella В-группы и, по меньшей мере, одну инактивированную Salmonella D-группы, с интервалом в несколько недель, например с интервалом от 2 недель до 18 недель. В специфическом воплощении такого предпочтительного способа аттенуированные бактерии Salmonella D-группы представляют собой Salmonella Enteritidis, инактивированные бактерии Salmonella В-группы представляют собой Salmonella Typhimurium и инактивированные бактерии Salmonella D-группы представляют собой Salmonella Enteritidis.

Другие предпочтительные способы применения иммуногенных композиций или вакцин на животных/птицах в соответствии с изобретением включают, по меньшей мере, одно первичное введение аттенуированной иммуногенной композиции или вакцины, включающей фармацевтически или ветеринарно-приемлемый эксципиент, разбавитель или среду и, по меньшей мере, одну аттенуированную Salmonella D-группы, которые вводят животному/птице перед, по меньшей мере, одним бустерным введением инактивированной иммуногенной композиции или вакцины, включающей фармацевтически или ветеринарно-приемлемый эксципиент, разбавитель или среду, по меньшей мере, одну инактивированную Salmonella В-группы, по меньшей мере, одну инактивированную Salmonella С2-группы и, по меньшей мере, одну инактивированную Salmonella D-группы, с интервалом в несколько недель, в частности с интервалом от 2 недель до 18 недель. В специфическом воплощении этого предпочтительного способа аттенуированные бактерии Salmonella D-группы представляют собой Salmonella Enteritidis, инактивированные бактерии Salmonella В-группы представляют собой Salmonella Typhimurium, инактивированные бактерии Salmonella D-группы представляют собой Salmonella Enteritidis и инактивированные бактерии Salmonella С2-группы представляют собой Salmonella Hadar.

Другие предпочтительные способы применения иммуногенных композиций или вакцин на животных/птицах в соответствии с изобретением включают, по меньшей мере, одно первичное введение аттенуированной иммуногенной композиции или вакцины, включающей фармацевтически или ветеринарно-приемлемый эксципиент, разбавитель или среду и, по меньшей мере, одну аттенуированную Salmonella D-группы, которые вводят животному/птице перед, по меньшей мере, одним бустерным введением инактивированной иммуногенной композиции или вакцины, включающей фармацевтически или ветеринарно-приемлемый эксципиент, разбавитель или среду, по меньшей мере, одну инактивированную Salmonella В-группы, по меньшей мере, одну инактивированную Salmonella С1-группы, по меньшей мере, одну инактивированную Salmonella С2-группы и, по меньшей мере, одну инактивированную Salmonella D-группы, с интервалом в несколько недель, например с интервалом от 2 недель до 18 недель. В специфическом воплощении этого предпочтительного способа аттенуированные бактерии Salmonella D-группы представляют собой Salmonella Enteritidis, инактивированные бактерии Salmonella В-группы представляют собой Salmonella Typhimurium, инактивированные бактерии Salmonella D-группы представляют собой Salmonella Enteritidis, инактивированные бактерии Salmonella С2-группы представляют собой Salmonella Hadar и инактивированные бактерии Salmonella С1-группы представляют собой Salmonella Virchow и/или Salmonella Infantis.

Другие предпочтительные способы применения иммуногенных композиций или вакцин на животных/птицах в соответствии с изобретением включают, по меньшей мере, одно первичное введение аттенуированной иммуногенной композиции или вакцины, включающей фармацевтически или ветеринарно-приемлемый эксципиент, разбавитель или среду и, по меньшей мере, одну аттенуированную Salmonella D-группы и, по меньшей мере, одну аттенуированную Salmonella В-группы, которые вводят животному/птице перед, по меньшей мере, одним бустерным введением инактивированной иммуногенной композиции или вакцины, включающей фармацевтически или ветеринарно-приемлемый эксципиент, разбавитель или среду, по меньшей мере, одну инактивированную Salmonella В-группы и, по меньшей мере, одну инактивированную Salmonella D-группы, с интервалом в несколько недель, например с интервалом от 2 недель до 18 недель. В специфическом воплощении этого предпочтительного способа аттенуированные бактерии Salmonella D-группы представляют собой Salmonella Enteritidis, аттенуированные бактерии Salmonella В-группы представляют собой Salmonella Typhimurium, инактивированные бактерии Salmonella В-группы представляют собой Salmonella Typhimurium и инактивированные бактерии Salmonella D-группы представляют собой Salmonella Enteritidis.

Другие предпочтительные способы применения иммуногенных композиций или вакцин на животных/птицах в соответствии с изобретением включают, по меньшей мере, одно первичное введение аттенуированной иммуногенной композиции или вакцины, включающей фармацевтически или ветеринарно-приемлемый эксципиент, разбавитель или среду и, по меньшей мере, одну аттенуированную Salmonella D-группы и, по меньшей мере, одну аттенуированную Salmonella В-группы, которые вводят животному/птице перед, по меньшей мере, одним бустерным введением инактивированной иммуногенной композиции или вакцины, включающей фармацевтически или ветеринарно-приемлемый эксципиент, разбавитель или среду, по меньшей мере, одну инактивированную Salmonella В-группы, по меньшей мере, одну инактивированную Salmonella С2-группы и, по меньшей мере, одну инактивированную Salmonella D-группы, с интервалом в несколько недель, в частности с интервалом от 2 недель до 18 недель. В специфическом воплощении этого предпочтительного способа аттенуированные бактерии Salmonella D-группы представляют собой Salmonella Enteritidis, аттенуированные бактерии Salmonella В-группы представляют собой Salmonella Typhimurium, инактивированные бактерии Salmonella В-группы представляют собой Salmonella Typhimurium, инактивированные бактерии Salmonella D-группы представляют собой Salmonella Enteritidis и инактивированные бактерии Salmonella С2-группы представляют собой Salmonella Hadar.

Другие предпочтительные способы применения иммуногенных композиций или вакцин на животных/птицах в соответствии с изобретением включают, по меньшей мере, одно первичное введение аттенуированной иммуногенной композиции или вакцины, включающей фармацевтически или ветеринарно-приемлемый эксципиент, разбавитель или среду и, по меньшей мере, одну аттенуированную Salmonella D-группы и, по меньшей мере, одну аттенуированную Salmonella В-группы, которые вводят животному/птице перед, по меньшей мере, одним бустерным введением инактивированной иммуногенной композиции или вакцины, включающей фармацевтически или ветеринарно-приемлемый эксципиент, разбавитель или среду, по меньшей мере, одну инактивированную Salmonella В-группы, по меньшей мере, одну инактивированную Salmonella С1-группы, по меньшей мере, одну инактивированную Salmonella С2-группы и, по меньшей мере, одну инактивированную Salmonella D-группы, с интервалом в несколько недель, например с интервалом от 2 недель до 18 недель. В специфическом воплощении этого предпочтительного способа аттенуированные бактерии Salmonella D-группы представляют собой Salmonella Enteritidis, аттенуированные бактерии Salmonella В-группы представляют собой Salmonella Typhimurium, инактивированные бактерии Salmonella В-группы представляют собой Salmonella Typhimurium, инактивированные бактерии Salmonella D-группы представляют собой Salm