2464276 - Улучшенные нанотела против фактора некроза опухоли-альфа

Улучшенные нанотела против фактора некроза опухоли-альфа

Иллюстрации

Показать все

Настоящее изобретение относится к иммунологии и биотехнологии. Предложено нанотело против фактора некроза опухоли-альфа (TNF-альфа), которое включает 4 каркасные области FR и 3 HCDR. Описаны варианты полипептида на основе нанотела, каждый из которых способен связываться с TNF-альфа. Один из вариантов таких полипептидов содержит по меньшей мере одно нанотело, направленное против сывороточного альбумина человека. Описаны соответствующие кодирующие нуклеиновые кислоты. Раскрыты также: клетка-хозяин для экспрессии нанотела и клетка-хозяин для экспрессии полипептида, каждая из которых содержит соответствующую нуклеиновую кислоту; способ получения нанотела и способ получения полипептида на его основе, где каждый из способов использует соответствующую клетку. Описано применение нанотела для получения лекарственного средства и фармацевтическая композиция против TNF-альфа. Использование изобретения обеспечивает новые нанотела к TNF-альфа с повышенным сродством, стабильностью и пригодностью к получению в мультивалентном формате и пониженной иммуногенностью, что может найти применение в медицине для профилактики, лечения, диагностики заболеваний, опосредованных активностью TNF-альфа. 12 н. и 68 з.п. ф-лы, 62 ил., 47 табл., 65 пр.

Реферат

Текст описания приведен в факсимильном виде.

1. Нанотело против TNF-альфа, включающее 4 каркасных области (FR1-FR4) и 3 гипервариабельных участка (CDR1-CDR3), в котором:A) i) CDR1 содержит аминокислотную последовательность DYWMY;ii) CDR2 содержит аминокислотную последовательность EINTNGLITKYPDSVKG; иiii) CDR3 содержит содержит аминокислотную последовательность SPSGFN;илиB) i) CDR1 содержит аминокислотную последовательность, которая имеет, по меньшей мере, 80% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью DYWMY, где изменения представляют собой консервативные замены;ii) CDR2 содержит аминокислотную последовательность, которая имеет, по меньшей мере, 80% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью EINTNGLITKYPDSVKG, где изменения представляют собой консервативные замены; иiii) CDR3 содержит аминокислотную последовательность, которая имеет, по меньшей мере, 80% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SPSGFN, где изменения представляют собой консервативные замены,причем указанное нанотело имеет значение ЕС50 лучше чем 5 нМ в основанном на клетках анализе с использованием клеток KYM.

2. Нанотело по п.1, в котором CDR1 содержит аминокислотную последовательность DYWMY.

3. Нанотело по п.1, в котором CDR2 содержит аминокислотную последовательность EINTNGLITKYPDSVKG.

4. Нанотело по п.1, в котором CDR3 содержит аминокислотную последовательность SPSGFN.

5. Нанотело по п.1, в котором:CDR1 содержит аминокислотную последовательность DYWMY; и CDR3 содержит аминокислотную последовательность SPSGFN; илиCDR1 содержит аминокислотную последовательность DYWMY; и CDR2 содержит аминокислотную последовательность EINTNGLITKYPDSVKG; илиCDR2 содержит аминокислотную последовательность EINTNGLITKYPDSVKG; и CDR3 содержит аминокислотную последовательность SPSGFN.

6. Нанотело по п.1, в котором CDR1 содержит аминокислотную последовательность DYWMY; и CDR3 содержит аминокислотную последовательность SPSGFN.

7. Нанотело по п.1, в котором CDR1 содержит аминокислотную последовательность DYWMY; CDR2 содержит аминокислотную последовательность EINTNGLITKYPDSVKG и CDR3 содержит аминокислотную последовательность SPSGFN.

8. Нанотело по любому из пп.1-7, в котором:CDR1 имеет одно отличие в аминокислотной последовательности от аминокислотной последовательности DYWMY, причем указанное отличие представляет собой консервативную аминокислотную замену;CDR2 имеет одно или два отличия в аминокислотной последовательности от аминокислотной последовательности EINTNGLITKYPDSVKG, причем указанное(ые) отличие(я) представляет(ют) собой консервативную(ые) аминокислотную(ые) замену(ы); и/илиCDR3 имеет одно отличие в аминокислотной последовательности от аминокислотной последовательности SPSGFN, причем указанное отличие представляет собой консервативную аминокислотную замену.

9. Нанотело по п.1, в котором CDR1 представляет собой аминокислотную последовательность DYWMY.

10. Нанотело по п.1, в котором CDR2 представляет собой аминокислотную последовательность EINTNGLITKYPDSVKG.

11. Нанотело по п.1, в котором CDR3 представляет собой аминокислотную последовательность SPSGFN.

12. Нанотело по п.1, в котором:CDR1 представляет собой аминокислотную последовательность DYWMY иCDR3 состоит из аминокислотной последовательности SPSGFN; илиCDR1 представляет собой аминокислотную последовательность DYWMY иCDR2 состоит из аминокислотной последовательности EINTNGLITKYPDSVKG; илиCDR2 представляет собой аминокислотную последовательность EINTNGLITKYPDSVKG и CDR3 состоит из аминокислотной последовательности SPSGFN.

13. Нанотело по п.1, в котором CDR1 представляет собой аминокислотную последовательность DYWMY и CDR3 представляет собой аминокислотную последовательность SPSGFN.

14. Нанотело по п.1, в котором CDR1 представляет собой аминокислотную последовательность DYWMY, CDR2 представляет собой аминокислотную последовательность EINTNGLITKYPDSVKG и CDR3 представляет собой аминокислотную последовательность SPSGFN.

15. Нанотело по п.1, которое представляет собой гуманизированное нанотело.

16. Нанотело по п.1, которое представляет собой нанотело класса GLEW, в котором аминокислотную последовательность в положениях 44-47 согласно номенклатуре Kabat выбирают из группы, состоящей из GLEW, GVEW, EPEW, GLER, DQEW, DLEW, GIEW, ELEW, GPEW, EWLP, GPER, GLER, и ELEW.

17. Нанотело по п.1, которое дополнительно содержит аргининовый остаток (R) в положении 103.

18. Нанотело по п.1, которое имеет, по меньшей мере, 80% идентичности последовательности с одной из аминокислотных последовательностей, выбранных из SEQ ID NO:52 (TNF1), 76 (TNF13), 77 (TNF14), 95 (TNF29) или 96 (TNF30).

19. Нанотело по п.1, которое имеет, по меньшей мере, 90% идентичности последовательности с одной из аминокислотных последовательностей, выбранных из SEQ ID NO:52 (TNF1), 76 (TNF13), 77 (TNF14), 95 (TNF29) или 96 (TNF30).

20. Нанотело по п.1, которое имеет, по меньшей мере, 95% идентичности последовательности с одной из аминокислотных последовательностей, выбранных из SEQ ID NO:52 (TNF1), 76 (TNF13), 77 (TNF14), 95 (TNF29) или 96 (TNF30).

21. Нанотело по п.1, которое имеет, по меньшей мере, 99% идентичности последовательности с одной из аминокислотных последовательностей, выбранных из SEQ ID NO:52 (TNF1), 76 (TNF13), 77 (TNF14), 95 (TNF29) или 96 (TNF30).

22. Нанотело по п.1, которое дополнительно содержит лейциновый остаток (L) в положении 108.

23. Нанотело по п.1, выбранное из группы, состоящей из TNF13 (SEQ ID NO:76), TNF14 (SEQ ID NO:77), TNF29 (SEQ ID NO:95) и TNF30 (SEQ ID NO:96).

24. Нанотело по п.1, представляющее собой нанотело TNF30 (SEQ ID NO:96)

25. Нанотело по п.1, которое представляет собой гуманизированный вариант негуманизированного нанотела против TNF-альфа, причем указанное негуманизированное нанотело против TNF-альфа имеет следующие каркасные последовательности: FR1: SEQ ID NO:130; FR2: SEQ ID NO:198; FIG: SEQ ID NO:266; и FR4: SEQ ID NO:334.

26. Нанотело по п.25, которое направлено против того же эпитопа на тримере TNF-альфа, что и нанотело TNF1 (SEQ ID NO:52).

27. Нанотело по п.1, которое направлено против того же эпитопа на тримере TNF-альфа, что и нанотело TNF1 (SEQ ID NO:52).

28. Нанотело по п.1, которое направлено против того же эпитопа на тримере TNF-альфа, что и нанотело TNF3 (SEQ ID NO:60).

29. Нанотело по п.1, которое представляет собой гуманизированный вариант нанотела TNF1 (SEQ ID NO:52).

30. Полипептид, который способен связываться с TNF-альфа, который содержит, по меньшей мере, одно нанотело по любому из пп.1-29.

31. Полипептид, который способен связываться с TNF-альфа по п.30, который, по существу, состоит только из одного нанотела по любому из пп.1 -29.

32. Полипептид, который способен связываться с TNF-альфа по п.30, который содержит два нанотела по любому из пп.1-29.

33. Полипептид, который способен связываться с TNF-альфа по п.32, который содержит два нанотела TNF 30 (SEQ ID NO:96).

34. Полипептид, который способен связываться с TNF-альфа по п.32 или 33, который после связывания с тримером TNF способен ингибировать или снижать перекрестное сшивание рецептора TNF, которое опосредуется указанным тримером TNF, и/или сигнальную трансдукцию, которая опосредуется таким перекрестным сшиванием рецептора.

35. Полипептид, который способен связываться с TNF-альфа по п.32 или 33, который способен к внутримолекулярному связыванию, по меньшей мере, с двумя сайтами связывания рецепторов TNF на тримере TNF.

36. Полипептид, который способен связываться с TNF-альфа по п.32, в котором два нанотела против TNF-альфа непосредственно связаны друг с другом.

37. Полипептид, который способен связываться с TNF-альфа по п.32, в котором два нанотела против TNF-альфа связаны друг с другом посредством линкера.

38. Полипептид, который способен связываться с TNF-альфа по п.37, в котором линкер представляет собой аминокислотную последовательность.

39. Полипептид, который способен связываться с TNF-альфа по п.38, в котором линкер представляет собой аминокислотную последовательность, которая содержит, по меньшей мере, 14 аминокислот.

40. Полипептид, который способен связываться с TNF-альфа по п.38, в котором линкер представляет собой аминокислотную последовательность, которая содержит, по меньшей мере, 17 аминокислот.

41. Полипептид, который способен связываться с TNF-альфа по п.37, в котором линкер представляет собой аминокислотную последовательность, которая содержит, по меньшей мере, 20-40 аминокислот.

42. Полипептид, который способен связываться с TNF-альфа по любому из пп.39-41, в котором линкер содержит глициновые и сериновые остатки.

43. Полипептид, который способен связываться с TNF-альфа по п.32, который содержит полипептид TNF 7 (SEQ ID NO:73), в котором оба нанотела TNF 1 были гуманизированы.

44. Полипептид, который способен связываться с TNF-альфа по п.32, который содержит полипептид TNF 55 (SEQ Ю NO: 419) или TNF 56 (SEQ ID NO:420).

45. Полипептид, который способен связываться с TNF-альфа по п.30, который дополнительно пегилирован.

46. Полипептид, который способен связываться с TNF-альфа, который содержит, по меньшей мере, одно нанотело по любому из пп.1-29 и, по меньшей мере, одно нанотело, направленное против сывороточного альбумина человека.

47. Полипептид, который способен связываться с TNF-альфа по п.46, в котором, по меньшей мере, одно нанотело, направленное против сывороточного альбумина человека, имеет CDR последовательности, имеющиеся в ALB 8 (SEQ ID NO:102).

48. Полипептид, который способен связываться с TNF-альфа по п.32, который содержит два нанотела по любому из пп.1-29 и который дополнительно содержит, по меньшей мере, одно нанотело, направленное против сывороточного альбумина человека.

49. Полипептид, который способен связываться с TNF-альфа по п.48. в котором два нанотела против TNF-альфа связаны непосредственно с нанотелом, направленным против сывороточного альбумина человека.

50. Полипептид, который способен связываться с TNF-альфа по п.48, в котором два нанотела против TNF-альфа связаны с нанотелом, направленным против сывороточного альбумина человека, посредством линкера.

51. Полипептид, который способен связываться с TNF-альфа по п.50, в котором линкер представляет собой аминокислотную последовательность.

52. Полипептид, который способен связываться с TNF-альфа по п.50 или 51, в котором линкер представляет собой аминокислотную последовательность, которая содержит 3-40 аминокислот.

53. Полипептид, который способен связываться с TNF-альфа по п.50 или 51, в котором линкер представляет собой аминокислотную последовательность, которая содержит 5-15 аминокислот.

54. Полипептид, который способен связываться с TNF-альфа по п.50 или 51, в котором линкер содержит глициновые и сериновые остатк

Улучшенные нанотела против фактора некроза опухоли-альфа

Патент 2464276